Cistanche'nin Serbest Radikaller Üzerindeki Etkisinin Araştırılması

Daha fazla bilgi için:Ali.ma@wecistanche.com

İkinci Bulut Ormanı Eski Zhang Hongjing

Şu anda, makinenin bağışıklık fonksiyonundaki düşüşün yaşlanma ile ilgili olduğuna inanılıyor. Çalışmaya dayanarakcistanchefarelerin hümoral ve hücresel bağışıklık fonksiyonlarını güçlendirebilir ve d-galaktozun neden olduğu yaşlanma modeline karşı savaşabilir, ayrıca ilacın fareler üzerindeki etkisini inceledik. Ozon solunması<. 3)="" induces="" strong="" antagonistic="" effects="" of="" aging="" and="" aging="" caused="" by="" strong="">serbest radikallervücutta. İlaç grubundaki farelerin kemilüminesans ekspresyon oranı arttı, SOD Artan canlılık "Plazma, diz çökme ve uyluk dokularındaki lipid peroksit içeriği ve koridor dokularının MAOB canlılığı azaldı; farklı doz grupları arasında doz-etki ilişkisi vardı. - farelerin subakut yaşlanmaya karşı yaşlanma etkisi,cistanchefarelerde bağışıklık fonksiyonunun geliştirilmesi.cistanchebağışıklık fonksiyonunu artırabilir, vücudun anti-stres yeteneğini geliştirebilir ve hasarını almak veya dolaylı olarak ortadan kaldırmak uygundur.serbest radikallervücuda. , 1WMAO-B'nin canlılığını engeller. Yaşlanmayı geciktirmenin etkisini elde etmek için. Bu deney, uygulanması için deneysel bir temel sağlar.cistancheyaşlanma karşıtı ve bazı yaşlılık hastalıklarının tedavisinde.

Serbest radikallerin faydaları ve yan etkileri için tıklayın

1 Malzeme ve yöntemler

1.1 Malzeme

1.1.1 İlaç ve reaktifler:cistancheDeserticola YC Ma 3 kez suda kaynatıldı, kaynatmalar birleştirildi, uygun bir hacme konsantre edildi ve belirli bir miktar etanol ilave edildi. 24 saat bekletildikten sonra süzüldü. Süzüntü, alkolsüz hale gelinceye kadar buharlaştırıldı. Yüzde 0%0,25 ~0%0,5 konsantrasyon kullanmadan önce buharlı suyla hazırlayın. ml, yaklaşık lg) ham ilaçlar içerir. Luminol (luminol), ®National E Merck şirket ürünleri Huang Howling Oksidasyon 88 (HO), Hipokromatik Uluyan (HX), standart tetra etoksi propan, hepsi Sigma Şirketin ürünü, tuz, benzalkonyum, Changzhou Guangming Biyokimyasal Araştırma Enstitüsü; sikloheksan, Shanghai Reaktif No. 1'den bir ürün; Tiobarbitürik asit, Shanghai Reaktif No. 2, Luzhan'dan bir ürünSüperoksitdismutaz, Şanghay Çin Bilimler Akademisi Biyokimyasal Ürünler Enstitüsü Ürünleri.

cistanche

1.1. 2 Cihaz Beckman LS-98OO33 yalnızca sıvı sintilasyon sayımı, Shimadzu RF-540 floresan spektrofotometre, 752 ultraviyole ızgaralı spektrofotometre-G1-20Yüksek hızlı soğutmalı santrifüj, CPS-1A ultrasonik pulverizatör.

1.1.3 Jiangsu Deney Hayvanları Merkezi tarafından sağlanan, 20±2 g ağırlığında, 2 aylık Hayvan ICR fareleri.

1.2 yöntemi

Fareler, kontrol (Q ortamına girmeyin), model ve ilaç grubu, her biri 10 fare, kısıtlama olmaksızın hızlı su yiyen olarak ayrıldı. İlaç grubu iki doz grubuna ayrıldı, Cilt 2, Sayı 7, 1994, Chinese Journal of Chinese Materia Medicacistancheözü100 ve 200 mg/kg (20 ve 4Qg/kg ham ilaçlara eşdeğer) sırasıyla beslendi. Kontrol grubuna ve model grubuna her gün eşit hacimde normal salin verildi. Uygulama grubuna ve model grubuna O, ortam (0.9 X 10-^Oaft derecesi), sürekli 2. Gün verildi. Her parmak suşunun testi, deneyin 21. gününde gerçekleştirilmiştir.

1. 2.1 Dayanıklılık testi Yukarıdaki grupların her birindeki fareleri 40cm ve 12±l su derinliğine koyun. Water®L kabında, fareler için yüzme süresi olan dibe çökene ve hareket etmeyene kadar zamanlamaya başlayın.

   
   

1.2.2 Isınma testi Fare önce 15'e ayarlanır. Suda 2 dakika yüzün ve ardından tam donma süresini gözlemlemek için 15P'lik bir dondurucuya girin.

1.2.3 Atmosferik hipoksi tolerans testi Küçük glüteni, sodyum-kireç ile doldurulmuş 250 ml'lik geniş ağızlı bir şişeye koyun ve kapatıldıktan sonra her gruptaki farelerin hayatta kalma süresini kaydedin.

1.2.4 Beyin B tipi monoamin oksidazın (MACXB) belirlenmesi Literatür sözlü yöntemine göre, farelerin tüm beynini alın, uygun miktarda önceden soğutulmuş 0.2mol/L fosfat tamponu (PH7.4) ekleyin. ), homojenat ve ultrason (24kC) 30sr1000r/dk, 0C 30dk aralıklarla toplam iki kez 3 kez ezin, süpernatant 17000r/dk, 4C 30dk, süpernatantı atın ve çökeltiyi alın ve uygun bir miktar kullanın. .2mo(/L PH7.4) Asit tamponlanır ve ham fermentasyon solüsyonu yapmak için yeniden süspanse edilir. Uygun miktarda ham fermentasyon solüsyonu alın, 16mmol/L benzamidin 0.3ml ekleyin, yukarıdaki fosfat tamponunu 3mL'yi tamamlamak için kullanın ve fosforik asit tamburu kullanın 3ml tampon solüsyonu boş bir tüp olarak kullanılır. Tüm test tüpleri 37°C'ye yerleştirilir. 3 saat su banyosunda çalkalayın, çıkarın, reaksiyonu sonlandırmak için yüzde 6 peroksi asit ekleyin, ardından 3 m [sikloheksan, karıştırmak için çalkalayın, 1000 r/dk'da 1 dakika santrifüjleyin, ve onu alın Berrak solüsyonun absorbansı 242 nm'de ölçülür ve Çin amin eklenmeden önce boş tüp sıcak tutulmalıdır. Protein bulanıklığı, standart protein olarak buzağı serum albümini ile Folin-fenol yöntemiyle belirlenir. Bir enzim aktivite birimi ve bir enzim aktivite birimi 37P olarak tanımlanır ve 0.01/3 saat absorbans değişikliği ile enzim miktarını üretir.'

1. 2. 5 Serumsüperoksitdismutaz(SOD) aktivite tayini (5 u I, fare serumu 10M, ışıldayan karışıma eklendi (0, 1mmol/L luminol ve 0.1mmol/L hipoksantin ile karıştırıldı) 980'de", 37C'de 20 dakika inkübatörde bekletilir.Çıkarıldıktan sonra reaksiyonu başlatmak için Huang Guanyin oksidaz ilave edilir.Beckman LS~98OO sıvı flaş ortamında, 1 dakika sonundaki lüminesans sayısı derecesine göre hesaplanır. tek foton algılama.Birim olarak Com kullanılır.Lüminesans engelleme oranı, alt serum grubu boş olarak hesaplanır.Ayrıca, standartsüperoksitdismutasyonkonsantrasyon (apsis) ve lüminesans engelleme oranı (koordinat), daha önce olduğu gibi standart protein içeriği belirlemesi olarak kullanılır. 1. 2.6 Plazma, Beyin ve Karaciğerde Lipid Peroksit (LPO) Tayini ④ 50 kutu fare plazması alın, karaciğeri ve beyni homojenleştirin (0.2mol/L fosfat tamponu pH7.4 kullanın) , bir homojenizatörde Yüzde 10 konsantrasyonda) her 50 atada bir, l/24mol/L sülfürik asit 4ml, yüzde 1 Fosforik asit 0,5ml ekleyin, karıştırın ve 5 dakika yerleştirin, 1000r/mm'de 10 dakika santrifüjleyin, ve süpernatantı aspire etti. Çökeltiye 2ml l/24mol/L sülfürik asit ve 0.3ml %10 kalsiyum fosfat ekleyin, iyice karıştırın, 1000r/dk'da santrifüjleyin ve çökeltiye 1ml dirençli korkak su ekleyin, bir süspansiyon oluşturmak için iyice karıştırın, ekleyin. kırık barbital Asit reaktifi 1ml, 95'te. Bir yağ banyosunda 14 için soğutulduktan sonra, 5ml n-butanol ekleyin, iyice karıştırın *100Or/dk santrifüjleme 10mtn, n-butanol fazını alın ve RF'de floresan yoğunluğunu ölçün{{ 33}}OS spektrofotometresi (uyarma dalga boyu 515mn, emisyon uzunluğu 553nm), Ek olarak, standart bir eğri olarak standart tetra etoksi propan ve bağıl floresan yoğunluğunu kullanın.

   
   

2. 

2 sonuç

2.1 Serbest radikaller tarafından yaralanan farelerin dayanıklılık testi üzerindeki etkisi

Model grubundaki farelerin yüzme süresi, kontrol grubuna göre önemli ölçüde daha kısa iken, uygulama grubunun yüzme süresi daha uzun sürdü ve yüksek doz grubu kontrol grubuna benzerdi (Tablo 1).

Tablo 1: Etkisicistancheserbest mezar yaralanması fare modelinin yüzme dayanıklılık testi üzerine

2.2 Isınma yeteneği üzerindeki etkisi

Model grubundaki fareler, düşük sıcaklıklarda hızlı donar ve kontrol grubuna göre süre daha kısadır, iki dozluk grupların donma süresi ise daha kısadır.cistanchesadece model grubundan daha uzun değil, aynı zamanda kontrol grubundan daha uzun olduğunu göstermektedir.cistanchesadece anti-serbest radikal hasar etkisine sahip olmakla kalmaz, aynı zamanda belirgin etkileri de vardır. Soğuktan sıcak tutma yeteneğini artırın (Tablo 2).

Tablo 2: etkisicistancheSenhan'ın farelerde serbest iyi yaralanma modelindeki yeteneği üzerine

2.3 Atmosfer basıncında hipoksiye dayanma yeteneği üzerindeki etki

uygulanmasından sonracistanche, fareler normal basınç ve hipoksi altında hayatta kaldı.cistancheSenhan'ın serbest tür yaralanması fare modelinin yeteneği üzerindeki etkisi, model grubundan önemli ölçüde daha uzun ve ayrıca kontrol grubundan daha yüksekti, bu da şunu gösteriyor:cistanchefarelerin hipoksiye toleransını artırabilir. Kuvvet (Tablo 3)

Tablo 3:cistanche's serbest radikal hasarının fare modeli

2.4 MAO-B'nin canlılığı üzerindeki etkisi

O inhalasyonundan sonra, model grubun beyin dokusu MAO-B aktivitesi, muadil grubunkinden önemli ölçüde daha yüksekti ve uygulama grubunun MAO-B aktivitesinin artışı önemli ölçüde inhibe edildi.

Tablo 4: Etkisicistancheserbest mezar yaralanmalı fare modelinde 1SB tipi monoamin oksit asma (MAO~B) aktivitesi üzerine

2. 5 SOD canlılığı üzerindeki etkisi

Model grubundaki serumun kemilüminesans inhibisyon hızı, diğer gruplara göre önemli ölçüde daha düşüktü ve SOD aktivitesi önemli ölçüde azaldı. İlaç grubunun SOD aktivitesi önemli ölçüde arttı ve yüksek doz grubu kontrol grubundan daha yüksekti (aşağıdaki tablo 5'e bakınız).

Tablo 5: Model serumusüperoksitdismutaz (SOD) aktivitesi en gürültülüdür2.6 Lipid peroksit (ZLPO) içeriği üzerindeki etki

2.6 Model grubunun plazma, karaciğer ve beyin dokusundaki lipid peroksit (LFO) içeriği, uygulamadan sonra önemli ölçüde arttı ve LPO içeriği önemli ölçüde azaldı. Büyük doz ve doz grubu, beyin dokusundaki LPO'yu kontrol grubu düzeyine indirmişti (Tablo 6).

Tablo 6: Bir fare serbest radikal hasarı modelinde et Axun'un plazma, karaciğer ve lipid peroksit (LPO) seviyeleri üzerindeki etkisi

3 Tartışma

Yaşlanma, yaşam sürecinde olumlu bir olgudur. Anavatanın geleneksel tıbbı, yaşlanma karşıtı yıllarda zengin deneyim ve ilaç kaynakları biriktirmiştir. Son yıllarda, yerli bilim adamları geleneksel Çin tıbbından etkili yaşlanma karşıtı ilaçlar bulmaya odaklandılar. Şu anda, vücut yaşlanmasının serbest radikal teorisine giderek daha fazla bakılmaktadır. Rağmenserbest radikallernormal koşullar altında vücutta üretilir, doku hücreleri SOD ve diğer anti-oksijen toksisite enzim sistemlerinin sürekli uzaklaştırılması nedeniyle korunur. Oa güçlü bir oksitleyicidir. , Vücutta serbest radikal reaksiyonunu başlatabilir. Oksijenin aşırı solunması oksijen oluşumuna neden olur.serbest radikallervücuttaki anti-tolerans stel sisteminin süpürme kabiliyetini aşan, nükleik asitlere, proteinlere, amino asitlere, karbonhidratlara ve lipit bileşiklerine zarar vererek hücrelerin oluşumuna ve işlevine zarar vererek yaşlanmaya yol açan ⑶. Bu deney, oksijen7 solunduktan sonra, farelerin fiziksel gücünün, sıcak tutma yeteneğinin ve hipoksiye toleransının, yaşlı hayvanların fizyolojik işlev düşüşü performansına benzer şekilde azaldığını göstermektedir. Genç farelerin d uyarımı aldıktan sonra yaşlanma modeline neden olabileceğini gösteriyor.cistancheyukarıdaki göstergelerdeki değişiklikleri önemli ölçüde iyileştirmiştir.

Süperoksitserbest radikallervücutta kısa bir süre bulunur ve esas olarak SOD tarafından elimine edilir. Genel olarak, SOD aktivitesi ölçülerek veya seviyesi yansıtılır. Doğal olarak yaşlanan farelerin ve serbest radikal hasarlı farelerin vücudundaki çeşitli antioksidanlar azalır, Sod aktivitesi azalır, böylece süpürme yeteneği azalırserbest radikaller, lipid peroksitlerin içeriğinde bir artışa yol açar. Beyindeki B tipi monoamin oksidazın (MA0-B) aktivitesi yaşla birlikte artar. MAOB, merkezi hipotalamusta yaşlanan biyolojik saatin ana kontrolüdür. Clockwork yaşlanma ile yakından ilişkilidir. ⑴. MA0-B'nin bu deneysel model grubundaki farelerin beyinlerindeki aktivitesi, yaşlanan hayvanlarınkiyle tutarlı biyokimyasal değişiklikler göstererek artmıştır.