Akut Böbrek Hasarlı Bir Fare Modelinde Oridonin'in Makrofajla İlgili Enflamasyonun Bastırılması Yoluyla Renoprotektif Etkisi
Mar 17, 2022
GİRİİŞ
Akut hastalığın önemli bir özelliğiböbrek hasarı(AKI) ani düşüşBöbrek fonksiyonu. Toplumda yaygın endişe uyandıran küresel bir sağlık sorunudur. İstatistiklere göre, dünya genelinde her yıl yaklaşık 13,3 milyon insan AKI'den muzdarip olup, bunların yüzde 85'i gelişmekte olan ülkelerde olup, bu da 1,7 milyon insanı öldürecektir.1,2) Özellikle, AKI tek bir hastalık değildir ve bir komplikasyon olabilir. birden fazla hastalığın. Normalde sepsis, şok, iskemi-reperfüzyon ve zehirlenmeden kaynaklanabilir. Uzun süreli gelişimden sonra, bu hastalık kronik hale gelme eğilimindedir.böbrek hastalığı,konjestif kalp yetmezliği ve son dönemböbrek hastalığı.3–5) Özetle, ABH çok büyük bir ekonomik yüke neden olabilir ve hastalar üzerindeki psikolojik ve fiziksel yükü fiilen artıracaktır.böbrekiskemi-reperfüzyon şu anda ABH'nin en yaygın nedeni olarak kabul edilmektedir ve genellikle travma, cerrahi rezeksiyon veyaböbrek nakli. Makrofajlar, AKI progresyonunda önemli bir rol oynayan anahtar inflamatuar hücrelerden biridir. Mincle esas olarak miyeloid hücrelerde ve nötrofillerde, özellikle makrofajlarda eksprese edilir. Antifungal bağışıklıkta önemli bir oyuncu olan yüksek oranda tutulan bir C-tipi lektin alanına sahiptir. Mincle başlangıçta Matsumoto tarafından lipopolisakkarit (LPS) olarak doğrulandı - nükleer faktör-kappaB'yi (NF-κB) Kart9-Bcl10-MALT1 sinyali yoluyla aktive edebilen indüklenmiş bir protein, sonuç olarak doğal ve adaptif bağışıklık tepkilerini bağlamak için inflamatuar faktörlerin ekspresyonunu destekleyen etkili bir T yardımcı 1 (Th1) ve Th17 alt tiplerinin oluşumu.6) Son araştırmalar Mincle'ın hücrelerdeki her türlü anormal maddeyi tanıyabildiğini, hasarı algılayabildiğini buldu. ilgili sinyaller ve ardından ilgili yanıtlara yanıt verir. Örneğin Mincle, hasarlı hücrelerden her yerde bulunan, sitokinleri aktive eden ve indükleyen ve antijene özgü T hücre yanıtlarını tetikleyen, her yerde bulunan bir hücre içi metabolit olan -GlcCer'e bağlanabilir.7) Mincle, heterojen hücre ölümünü algılayan, endojen ligandı tanıyabilen bir reseptördür. Ölü hücreler tarafından salınan SAP130, inflamatuar sitokinlerin üretimini indükler ve hasarlı dokulara nötrofil infiltrasyonunu yönlendirir.8,9) Özellikle, Lan'in ekibi Mincle'ın M1 makrofajları üzerinde spesifik olarak indüklendiğini ve bu durumun inflamasyon fenotipinin korunmasında kilit bir rol oynadığını doğrulamaktadır. M1 makrofajlar.6) Bu nedenle, hedefe yönelik karıştırma tedavisi AKI hastalığının tedavisinde anahtar olabilir.
CISTANCH BÖBREK/BÖBREK FONKSİYONUNU İYİLEŞTİRECEK
Oridonin, anti-mikrobiyal, anti-tümör, anti-inflamatuar ve anti-fifibroz dahil olmak üzere çok çeşitli biyolojik fonksiyonlara sahip olan, Londra'dan çıkarılan kaurien iskeletli bir tetrasiklik dipeptit doğal bileşiktir. Birçok araştırma türü, bir dizi kanser hücre hattında bu doğal diterpenoidlerin anti-tümör potansiyelini ve mekanizmasını bildirmiştir.10,11) ve kanser önleyici ilaç olarak Oridonin'in şu anda şu anda kansere karşı ilaç olarak faz I klinik deneylerinden geçtiği doğrulanmıştır. Çin. Bununla birlikte, Oridonin'in rolüböbrek hastalığınadiren rapor edilir. Çeşitli araştırma türleri, Oridonin'in proteinüriyi veböbrek hasarıspontan lupus eritematozus fare modellerinde ve in vitro çalışmalar, Oridonin'in inflamatuar sitokinlerin salgılanmasını ve Oridonin ile tedaviden sonra LPS tarafından indüklenen inflamatuar yanıtı azaltabildiğini bulmuştur.12,13) Bu çalışmada, Oridonin'in potansiyelini ortaya çıkarmaya odaklandık. AKI tedavisinde ve altta yatan mekanizmasının makrofajlarda Mincle'ın inhibisyonu ile ilgili olup olmadığı. Bu çalışma, AKI terapötiklerinin taranması için güçlü kanıtlar sağlayabilir.
Anahtar Kelimeler:oridonin; akut böbrek hasarı (AKI); makrofaj; minik; iltihap; Böbrek fonksiyonu
MALZEMELER VE YÖNTEMLER HayvanlarOtuz altı erkek C57BL/6 faresi (8–10 haftalık) Beijing Vital River Laboratory Animal Technologies Co., Ltd.'den (Pekin, Çin) alındı ve sıcaklık kontrollü ve nemli bir ortama yerleştirildi. Southwest Tıp Üniversitesi Hayvan Deney Merkezi'nin kontrollü odası (sırasıyla 21.0 ± 2.0 derece ve yüzde 65 ± 5). Tüm fareler stokastik olarak üç gruba ayrıldı: Sham grubu, iskemi-reperfüzyon hasarı (IRI) model grubu (IRI grubu) ve Oridonin ile tedavi edilen IRI grubu (OR grubu) (15 mg/kg). Ameliyattan önce farelere intraperitoneal 45 mg/kg sodyum pentobarbital enjeksiyonu ile anestezi uygulandı. AKI fare modeli, çift taraflı kenetlenerek oluşturulmuştur.böbrek35 dakika boyunca arterler. Sham grubundaki farelere sadece 35 dakika karın boşluğuna maruz bırakılırken, OR grubundaki farelere ameliyattan sonra 3 gün boyunca sürekli olarak intragastrik olarak Oridonin uygulandı ve diğer gruplara kontrol olarak aynı hacimde salin verildi. Fareler, üçüncü günde intraperitoneal tuzlu su ile seyreltilmiş pentobarbital sodyum (200 mg/kg) enjeksiyonu ile ötenazi edildi. Tüm hayvan deney prosedürleri, Laboratuar Hayvanları Bakım Kılavuzuna (İzin Numarası 201812-55) göre yapılmıştır.
CISTANCH BÖBREK/BÖBREK YETMEZLİĞİNİ İYİLEŞTİRECEK
Kimyasallar ve tepkimelerOridonin (BP1041, saflık yüzde 95'e eşit veya daha büyük) Biopurify fitokimyasallar Ltd.'den (Chengdu, Çin) elde edildi. NF-KB, p-AKT ve indüklenebilir nitrik oksit sentaz (iNOS) antikorları, Cell Signaling Technology'den (Beverly, MA, ABD) satın alındı. Interleukin (IL)-1, tümör nekroz faktörü (TNF)-, Mincle, p-NF-κB ve AKT antikorları, Santa Cruz Biotechnology'den (Santa Cruz, CA, ABD) satın alındı. Toplam RNA ekstraksiyon kiti Tiangen Biochemical Technology (Beijing) Co., Ltd.'den (Pekin, Çin) elde edildi. Ters Transkripsiyon Kiti, Shanghai Promega Bioproducts Co., Ltd. (Shanghai, China) tarafından sağlanan Real-time PCR Kiti. LPS (Escherichia coli 055:B5) Sigma Chemical (St. Louis, MO, ABD) tarafından sağlandı. DNA transfeksiyon reaktifi Zeta Life'dan (Zeta Life, ABD) elde edildi.
Hücre Kültürü ve TransfeksiyonlarRAW264.7 hücreleri, Çin Bilimler Akademisi Hücre Bankasından (Şanghay, Çin) satın alındı ve Dulbecco'nun modifiye Eagle's ortamı (DMEM) yüksek glikoz ortamında yüzde 5 CO2 ortamında 37 derecede kültürlendi. Sindirim, hücreler yüzde 80 birleştiğinde büyüdüğünde gerçekleştirildi. Tüm deney, logaritmik büyüme fazı hücrelerini kullandı. Mincle'ın RAW264.7 hücrelerinde aşırı ekspresyonu, Mincle-aşırı ekspresyon plazmidinin (Genechem, Şangay, Çin) Zeta Life Advanced DNA transfeksiyon reaktifi ile hücrelere transfeksiyonu yoluyla gerçekleştirildi. Işık mikroskobu kullanılarak hücrelerin morfolojisi ve büyüme durumu gözlendi.
Hücre Sayma Kiti-8 (CCK-8) AnaliziÜç bin hücre, grup başına 6 replikat oyuğa sahip bir 96-kuyu plakasına ekildi. Daha sonra, hücreler 24 saat serumsuz bir ortamda aç bırakıldı, ardından 24 saat boyunca ilaç içeren bir ortamla işleme tabi tutuldu. Ardından, ortamı çıkardıktan sonra, her kuyuya 100 µL yüzde 10 CCK-8 reaktifi ekleyin ve 3 saat inkübe edin. Hücre hayatta kalma oranı, her bir kuyunun absorbans değerine göre hesaplandı.
Böbrek Fonksiyonunun DeğerlendirilmesiSerum kreatinin ve üre nitrojen düzeyi uygun kit (Jiancheng, Nanjing, Çin) kullanılarak ölçüldü. Değerler mmol/L serum olarak ifade edilir.
Hematoksilen-Eozin (H&E) ve Periyodik Asit-Schiff (PAS) Boyamatoplananböbrekdoku, 24 saat boyunca yüzde 4'lük paraformaldehit içine yerleştirildi ve daha sonra farklı konsantrasyonlardaki etanol çözeltilerine yerleştirildi ve gömmek için ksilen ve mum bloklarına yerleştirildi. Boyamadan önce, slaytlar 2 saat boyunca 60 derecelik bir fırına konuldu ve ardından mumu alındı ve yeniden hidratlandı. Bazı numuneler eozin ve hematoksilen pigmentleri ile boyanmış, diğer numunelere ayrı ayrı periyodik asit alkol ve Schiffdye solüsyonu eklenmiştir. Son olarak, bir mikroskop kamerasında gözlemlendi ve fotoğraflandı.
Enzim Bağlantılı İmmünosorbent Testi (ELISA)Hücre kültürü süpernatantındaki IL-1 , IL-6 ve TNF- düzeyi, ELISA kitleri kullanılarak ölçüldü (IL-1 : Neobioscience, EMC001b; IL-6: Neobioscience). , EMC004; TNF-: Neobioscience, 500850). Reaktif tedarikçisi tarafından sağlanan yönteme göre numune testi yapın ve standart eğriye göre her grubun konsantrasyon değerini hesaplayın.
CISTANCH BÖBREK/BÖBREK AĞRILARINI İYİLEŞTİRECEK
Batı lekesiTüm hayvan ve hücre numuneleri, buz üzerinde radyoimmünopresipitasyon deneyi (RIPA) tamponunda lize edildi ve karşılık gelen protein numunesini elde etmek için santrifüjlendi. Her numunenin protein konsantrasyonunu belirlemek için Coomassie parlak mavi tahlili kullanıldı ve jel, belirli miktarda protein numunesi ile çalıştırıldı. Her protein grubu, sodyum dodesil sülfat-poliakrilamid jel elektroforezi (SDS-PAGE) ile ayrıldı ve daha sonra poliviniliden diflorür (PVDF) zarına aktarıldı. Membran primer antikorlarla 4 derecede gece boyunca inkübe edildikten sonra sekonder antikorlar oda sıcaklığında 1 saat inkübe edildi. Bandın rengi, renk geliştirici bir çözümle geliştirildi ve bandın gri yoğunluğu Image J yazılımı ile hesaplandı.
Gerçek Zamanlı PCRToplam RNA, Tiangen kitinin çalıştırma talimatlarına göre elde edildi ve enzimsiz suda çözüldü. İlgili talimatlara göre, cDNA'yı sentezlemek için bir ters transkripsiyon kiti kullanıyoruz. RT-PCR reaksiyon koşulları şu şekilde gerçekleştirilmiştir: 37 derece 15 dakika, 95 derece 5 dakika ve ardından 40 döngü
10 dakika 95 derece, 15 saniye 95 derece ve 1 dakika 60 derece. Her bir genin nispi mRNA ekspresyon seviyesi, gliseraldehit-3-fosfat dehidrojenaz (GAPDH) ile ilgili olarak normalleştirildi. Primer dizileri Tablo 1'de gösterilmektedir.İmmünofloresan BoyamaRAW264.7 hücreleri yüzde 4 paraformaldehit içinde sabitlendi, daha sonra oda sıcaklığında (rt) sığır serum albümini ile bloke edildi ve karşılık gelen birincil antikorlarla gece boyunca 4 derecede inkübe edildi. Fosfat tamponlu salin (PBS) ile 3 kez yıkandıktan sonra hücreler, oda sıcaklığında 1 saat sekonder antikorlarla inkübe edildi. Çekirdek 4'-6-diamidino- 2-fenilindol (DAPI) ile boyandı. İmmünofloresan görüntüleri, Nikon Eclipse mikroskobu (Nikon, Tokyo, Japonya) ile yakalandı.İstatistiksel analizİstatistiksel analiz sonuçları ortalama ± standart sapma (SD) olarak sunulmuştur, Gruplar arası karşılaştırmalar tek yönlü ANOVA kullanılarak yapılmıştır, p< 0.05="" was="" considered="" significant.="" graphpad="" prism="" 7="" software="" was="" used="" to="" calculate="" data="" for="" statistical="">
SONUÇLAR
Oridonin Engellenmiş İskemi-Reperfüzyona Bağlı Böbrek Hasarı ve EnflamasyonOridonin'in ABH üzerindeki koruyucu etkisini değerlendirmek içinböbrekiskemi-reperfüzyon tarafından indüklenen, kan kreatinin, üre azotunu inceledik veböbrekHer gruptaki farelerin tübüler yaralanma indeksi, ayrıca böbrek dokusunda inflamatuar sitokinlerin ekspresyonu ve değerlendirildiböbrekH&E ve PAS boyama ile patoloji. Sonuç, AKI model grubunun serum kreatinin (Şekil 1a) ve üre nitrojen (Şekil 1b) seviyelerinin, üç gün boyunca sürekli Oridonin enjeksiyonu sırasında düştüğü şekilde gösterilmiştir. Buna uygun olarak, tübüler yaralanma indeksi, Oridonin'in tübüler nekrozu güçlü bir şekilde azalttığını göstermiştir.böbrekAKI fareleri (Şekil 1c). Gerçek zamanlı PCR sonuçları, Oridonin'in IL-1 , MCP-1 ve F4/80'in mRNA seviyelerini önemli ölçüde aşağı regüle ettiğini gösterdi.böbrekAKI model grubunun (Şekil 1d–f). Ayrıca, patolojik boyama ve immünofloresan sonuçları, Oridonin'in AKI farelerinde tübüler nekrozu (Şekil 1g) ve inflamatuar sitokinlerin protein seviyesini (Şekil 1h) önemli ölçüde azalttığını gösterdi, bu da böbrek hasarını etkili bir şekilde iyileştirdi ve Oridonin'in önemli bir anti-yaralanma olduğunu gösterdi. ve AKI modelinde anti-inflamatuar etkiler.
AKI Farelerinin Böbreğinde Oridonin Tarafından Engellenen Mincle/AKT/NF-κB Sinyal YoluOridonin'in terapötik mekanizmasını aydınlatmak içinböbrekinflamasyon, Oridonin uygulamasından sonra Mincle/AKT/NF-κB sinyalinin aktivasyonunu daha da inceledik. Western blot sonuçları, Oridonin müdahalesinin AKI'de inflamasyonla ilişkili proteinler IL-1 ve iNOS ekspresyonunu önemli ölçüde azaltabildiğini gösterdi.böbreklerve AKT ve NF-κB yolu proteinlerinin aktivasyonunu azaltmak (Şekil 2a-e), Oridonin'in IRI kaynaklı inflamasyonu inhibe edebileceğini gösterir.böbrekAKI'nin. Özellikle, Real-time PCR ve Western blot sonuçları, Oridonin'in Mincle'ın mRNA ve protein seviyelerini etkili bir şekilde azalttığını gösterdi.böbrekAKI modelinin (Şekil 2f, g). Mincle'ın yerini tespit etmek içinböbrek, her grupta immünofloresan gerçekleştirdik (Şekil 2h), sonuçlar Mincle'ınböbrekinterstitium ve makrofaj Marker F4/80 ile birlikte lokalize olup, Mincle'ın esas olarakböbrekmakrofajlar ve AKI'den sonra güçlü bir şekilde yukarı regüle edilir. İmmüno-FL floresan sonuçları ayrıca AKI'den sonra makrofajın önemli ölçüde arttığını gösterdi, bu da makrofajların AKI gelişiminde önemli rolünü ortaya koydu. Özellikle, Oridonin Mincle'ı önemli ölçüde inhibe ettiböbrekAKI farelerinin makrofajı. Yukarıdaki sonuçlar Oridonin'in gelişebileceğini göstermektedir.böbrekMincle/AKT/NF-κB sinyalini inhibe ederek inflamasyon ve yaralanma.
Oridonin, LPS Tarafından İndüklenen RAW264.7 Makrofaj Morfolojik Değişikliklerini Önemli Derecede Geri YüklediOridonin'in inflamatuar makrofajlar üzerindeki etkisini incelemek için, RAW264.7 hücrelerini uyarmak için LPS kullandık.inflamatuar hücre modeli. Oridonin'in kimyasal yapısı Şekil 3a'da gösterilmektedir. Bu nedenle, Oridonin'in toksisitesini RAW264.7 hücreleri üzerinde farklı konsantrasyonlarda test ettik. CCK8 sonuçları, konsantrasyon 5 uM olduğunda, Oridonin'in sonraki in vitro deneylerde kullanılan hücre morfolojisi (Şekil 3b) üzerinde önemli bir etkisinin olmadığını göstermektedir. Şaşırtıcı bir şekilde Oridonin'in, hücre içi vakuolleri azaltmak ve hücreleri daha katı hale getirmek de dahil olmak üzere, LPS ile indüklenen makrofaj morfolojisini (Şekil 3c) önemli ölçüde iyileştirdiğini bulduk.
Oridonin, LPS ile Uyarılmış RAW264.7'de Enflamatuar Faktörlerin Salgısını ve İfadesini BastırdıHücreler Oridonin'in LPS ile uyarılan RAW264.7 hücreleri üzerindeki anti-inflamatuar etkisini netleştirmek için, her hücre grubu tarafından salgılanan inflamatuar faktörleri ölçmek için gerçek zamanlı FL floresan PCR, ELISA ve immünofloresan kullandık. Sonuçlar, Oridonin'in LPS ile uyarılan hücrelerde IL-1, IL-6, TNF-, iNOS ve MCP-1 mRNA seviyelerini önemli ölçüde azalttığını gösterdi (Şekil 4a–e). Ayrıca, Oridonin ayrıca inflamatuar hücre modelindeki süpernatanda IL-1, IL-6 ve TNF- salgılanmasını ve ayrıca protein seviyelerini önemli ölçüde aşağı regüle etti. LPS ile uyarılan makrofajdaki inflamatuar sitokinler (Şekil 4i). Yukarıdaki sonuçlar, Oridonin'in makrofajlarda bariz bir anti-inflamatuar etkiye sahip olduğunu göstermektedir.
Oridonin, İnflamatuar Makrofajda Mincle/AKT/NF-κB Sinyal Yolunu İn Vitro Bloke EttiMincle, bir örüntü tanıma reseptörü olarak, makrofajla ilişkili inflamasyonu teşvik etmek için gereklidir.böbrekAKI'nin. Yukarıdaki hayvan deneyi sonuçları, Oridonin'in Mincle ekspresyonunu aşağı regüle edebildiğini gösterdi.böbrekAKI'nin. Bu nedenle, Oridonin'in LPS ile uyarılmış makrofaj enflamatuar modelinde Mincle'ın mRNA ve protein seviyesini azaltıp azaltamayacağını araştırdık. Western blot, immünofloresan ve gerçek zamanlı PCR'nin sonuçları, 5 uM Oridonin'in sadece mRNA ekspresyonunu önemli ölçüde azaltmakla kalmayıp (Şekil 5c), aynı zamanda Mincle'ın inflamatuar makrofajdaki protein seviyesini de aşağı regüle ettiğini gösterdi (Şekil 5a, b). , d). Ayrıca, Oridonin, LPS ile muamele edilmiş RAW264.7 hücrelerinde iNOS ve fosforile edilmiş-AKT ve NF-KB'nin protein seviyesini önemli ölçüde aşağı regüle etti.
Mincle'ın Aşırı Ekspresyonu, Oridonin'in LPS ile Uyarılmış RAW264.7 Hücresinde Enflamasyon Üzerindeki İnhibitör Etkisini Ortadan KaldırdıMincle'ın, Oridonin'in makrofajdaki inflamasyonu inhibe etmek için ana hedefi olup olmadığını belirlemek için Mincle ekspresyonunu yukarı regüle etmek için RAW264.7 hücrelerini Mincle aşırı ekspresyon plazmidi ile transfekte ettik. Real-time PCR ve Western blot sonuçlarına göre, RAW264.7 hücrelerinde Mincle'ın mRNA ve protein seviyelerinin transfeksiyondan sonra arttığı gösterilmiştir (Şekil 6a, b). Plazmit daha sonra Oridonin ile tedavi edilen iltihaplı hücrelere transfekte edildi ve sonuçlar Mincle ekspresyonunun bu grubun hücrelerinde de arttığını gösterdi (Şekil 6c, d). Vektör, hücrelerde negatif kontrol olarak transfekte edildi. Geri kazanım deneylerinin sonuçları, Mincle'ın Oridonin ile tedavi edilen enflamatuar makrofajda aşırı ekspresyonunun, bu iki proteinin fosforilasyon seviyesini artırarak AKT ve NF-KB'nin aktivasyonunu yukarı regüle ettiğini göstermiştir (Şekil 6d-g), bu da Oridonin'in makrofaj iltihabını inhibe ettiğini öne sürmüştür. Mincle ve aşağı akış AKT ve NF-κB sinyalini aşağı doğru düzenleyerek olabilir. Ayrıca, gerçek zamanlı PCR ve ELISA sonuçları, Mincle'ın aşırı ekspresyonunun Oridonin ile tedavi edilen inflamatuar makrofajda sitokinlerin ekspresyonunu ve salgılanmasını restore ettiğini gösterdi (Şekil 6h–l). Yukarıdaki sonuçlar, Oridonin'in Mincle/AKT/NF-κB sinyalini düzenleyerek makrofajlardaki iltihabı inhibe ettiğini göstermiştir.
TARTIŞMA
AKI, çeşitli etiyolojilerin ve patolojik mekanizmaların neden olduğu klinik bir sendromdur.böbrekiskemi-reperfüzyon hasarı kliniklerde sık görülen bir patofizyolojik süreçtir ve akutböbrek hasarı.14,15) İnflamatuvar yanıt, aşağıdakilerle ilgili karmaşık bir ağdır.böbrekmakrofajın önemli bir rol oynadığı parankimal hücreler ve yerleşik bağışıklık hücreleriböbrek hasarı.16) Bağışıklık mikroçevresindeki değişiklikler nedeniyle, makrofajlar, başlıca M1 ve M2 tiplerine ayrılan birkaç fenotipe polarize olacaktır. iNOS ifadesi M1 tipinin bir işaretidir. Hem in vivo hem de in vitro çalışmalar, model grubunda iNOS ifadesinin arttığını ve tedaviden sonra ifadenin azaldığını bulmuştur. Makrofaj kaynaklı C tipi lektin (Mincle), aktive edilmiş makrofajlar üzerinde eksprese edilen bir C tipi lektin reseptörüdür ve genetik olarak fare 6F2 ve insan kromozomu 12P31 üzerinde lokalizedir. Bazı araştırmalar, Mincle'ın patojenle ilişkili moleküler patern tanıma reseptörlerini tanıyarak doğuştan gelen bağışıklık tepkisinin başlatılmasına katıldığını bildirmiştir.17) Bazı deneysel çalışmalar, farelerde serebral iskemik yaralanmadan sonra, yaralı bölgede beyaz kan hücrelerinin artan infiltrasyonunun olduğunu bulmuştur. vasküler perfüzyon alanındaki nöronların kaybına yol açabilir ve Mincle'ın nakavt edilmesi önemli ölçüde
orta serebral arter tıkanıklığının neden olduğu iskemik hasarı yavaşlatır. Son araştırmalar, Mincle'ın ölümünü hissedebildiğini ortaya koyuyor.böbrek-glukosilseramid ile birleşen, inflamatuar yanıtı hızlandıran ve inflamasyonun ortadan kaldırılmasını geciktiren tübüler epitel hücreleri.18)böbrek hastalığıMincle'ın hem iskemi-reperfüzyon hem de sisplatin ile indüklenen AKI modellerinde yüksek oranda ifade edildiğini gösteren araştırma sonuçlarımızla aynıdır ve özellikle M1-tipi makrofajlarda ifade edilir. Özetle, hedeflenen Mincle çalışması, inflamatuar makrofajların neden olduğu ilgili hastalıklar için yeni bir tedavi olabilir. Çalışmamız, AKI fare modelinde Mincle ifadesinin arttığını buldu.
iskemi-reperfüzyon ile oluşturulur. İmmünofloresan ortak lokalizasyonunun sonuçlarına göre, Mincle esas olarakböbrekmodel grubu farelerin makrofajları ve Lan'ın araştırmasının sonuçlarıyla tutarlıdır. Mincle, özellikle Mincle-sky sinyalinin akut dönemde M1 makrofajlarının inflamatuar fenotiplerini desteklediği ve koruduğu M1 makrofajları üzerinde indüklenir.böbrek iltihabı.6) Mincle, mantarları ve diğer mikroorganizma formlarını veya aseptik tehlikeleri tanıyabilen C tipi lektin reseptörüne (CLR) aittir. Bağlayıcı protein CARD9 yoluyla inflamasyonu indüklerler, ardından CARD9-Bcl10 kompleksinin montajı ve tipik NF-κB düzenlemesi gelir. Düzenleyici bir ilişki var
NF-κB ve AKT proteini arasında.10,19) LPS ile uyarılan makrofajların inflamasyon çalışmasında, AKT ve NF-κB ekspresyonunun arttığı doğrulanmıştır. Daha sonra, Mincle'ın yüksek ekspresyonlu plazmitini ilaç müdahalesi ile tedavi edilen hücreye transfekte ettik ve sonuçlar AKT'nin sinyal yolunu ve NF-KB sinyal yolunun tekrar aktive olduğunu buldu. Mincle'ın bu yolun protein ekspresyonunu etkileyebileceği sonucuna varılabilir. Bununla birlikte, Mincle'ın bu iki sinyal yolunu nasıl yukarı regüle ettiği açık değildir ve rapor edilen araştırmanın söylediği gibi proteinin gökyüzü yolu yoluyla aktive edilip edilmediği açık değildir.
Oridonin, Orion'dan ekstrakte edilen doğal bir diterpenoid bileşiğidir ve anti-tümör, anti-inflamatuar ve nöroproteksiyon dahil olmak üzere çok çeşitli farmakolojik etkilere sahiptir. Oridonin'in nöroprotektif işlevi üzerine yapılan araştırmada, Wen'in ekibi, Oridonin'in bilişsel işlev bozukluğunu iyileştirmek için otofajiyi inhibe ederek insülin direncini bloke edebileceğini buldu.20) Lin'in ekibi, Oridonin'in nörooksidatif stresi ve diğer nöroprotektif etkileri azaltarak Parkinson hastalığına ve nöbetlere karşı koruyabildiğini buldu. 21) En kapsamlı çalışılan Oridonin'in antitümör etkisidir. Bir araştırma ekibi, güçlü anjiyogenez inhibe edici etki ve pro-apoptotik etki gösteren ve önemli bir anti-kanser etkisi gösteren küçük hücreli olmayan akciğer kanseri model fareleri tedavi etmek için ilacı solunabilir parçacıklar haline getirdi.22) Oridonin ayrıca bir anti-inflamatuar uygulayabilir. Efekt. Notch yolunu inhibe edebilir, makrofajların polarizasyonunu indükleyerek bir anti-inflamatuar fenotipe geçebilir ve otoimmün nörit başlangıcını baskılayabilir.23)
Ayrıca inflamatuar faktörlerin salgılanmasını ve indirgeyici oksidaz üretimini engelleyerek osteoartrit başlangıcını hafifletebilir.24) Bazı çalışmalar Oridonin'in çeşitli hastalıklar üzerinde de önemli etkileri olduğunu göstermiştir.böbrek hastalıkları. Çalışmalar Oridonin'in 5-fluorourasil (5-FU) ile antitümör etkileri uygulamak ve 5-FU'nun sitotoksisitesini artırmak için işbirliği yapabileceğini bildirmiştir.böbrekkanser hücreleri.25) Bu çalışmanın in vivo deney sonuçlarına göre, Oridonin, iskemi-reperfüzyon hasarı olan farelerde serum kreatinin üre azotunu önemli ölçüde azaltabilir ve patolojik hasarını önemli ölçüde azaltabilir. Sonuçlar ayrıca Oridonin'in, diyabetik nefropatide Oridonin müdahalesinin araştırma sonuçlarına benzer şekilde AKT ve NF-κB yolunun baskılanmasıyla ilgili inflamatuar aktiviteyi inhibe edebildiğini ve aynı anda inflamatuar sitokinlerin infiltrasyonunu ve geçiş ücretinin aktivitesini azaltabildiğini gösterdi. reseptör 4 (TLR4)/NF-KB sinyal yolu gibi.26) Yukarıdaki sonuçlar, Oridonin'in Mincle'ı inhibe edebileceğini ve AKT ve NF-KB yolu aktivitesini baskılayabileceğini ileri sürdü. In vitro deneylerde, bu yol göstergeleri LPS ile uyarılan makrofaj inflamasyon modelinde arttırıldı ve ayrıca Oridonin tarafından azaldı. Geri yükleme deneylerinin sonuçları, Mincle'ın Oridonin ile tedavi edilen enflamatuar makrofajda aşırı ekspresyonunun, AKT ve NF-κB sinyalleme aktivitelerini arttırdığını, bunun sonucunda Oridonin ile tedavi edilen hücrelerde inflamatuar sitokinlerin ekspresyonunun ve salgılanmasının yukarı regülasyonu ile sonuçlandığını gösterdi, bu da Oridonin'in inflamasyonu inhibe ettiğini gösterdi. makrofaj, Mincle ve AKT/NF-κB sinyalini baskılayarak olabilir
CISTANCH BÖBREK/BÖBREK ENFEKSİYONUNU İYİLEŞTİRECEK
İki taraflı iskemi-reperfüzyon, kontralateral nefrektomi ile tek taraflı IRI, sisplatin, difteri toksini, LPS, aristolokik asit veya folik asit dahil olmak üzere AKI hayvan modellerini oluşturmanın birçok yolu vardır. Ancak sisplatin enjeksiyonu klinik hastaları tam olarak simüle edemez. Difteri toksini enjeksiyonu ile indüklenen model, hastalığın ilerlemesini uzatma eğilimindedir.böbrek hastalığıesas olarak yol açabilecekböbrekfifibroz ve glomerüler sklerozun yanı sıra hafif tübüler hasar. Aristolokik asit nefropatisi tubulointerstisyel nefrittir ve folik asit aynı zamanda nefrotoksisite indükleyicisidir.böbrekfifibrozis, ancak bu ikisinin klinik insidansı düşüktür.27) IRI ile indüklenen akutböbrek hasarıyüksek morbidite, mortalite ve sağlık maliyetleri ile ilişkili küresel bir halk sağlığı sorunudur. Bu nedenle, akut bir yapı oluşturmak için iskemi-reperfüzyon kullanıyoruz.böbrekYaralanma fareleri modeli. Birkaç çalışma, farklı klempleme zamanları bildirmiştir.böbrekarter. Bir araştırma ekibi, ikili kenetlemek için bir IRI hayvan modeli kurduböbrek1 saat boyunca Sprague-Dawley (SD) sıçanlarının pedikülleri.28) Başka bir araştırma ekibi bilateral klemplendiböbrekWistar sıçanlarında bir reperfüzyon modeli hazırlamak için 45 dakika boyunca arterler. Ek olarak, bir model oluşturmak için 35 dakika boyunca bilateral renal pedikülleri klemplemek için C57BL/6J fareleri kullanılarak bir çalışma yapılmıştır.29) Önceki deneysel sonuçlara göre, bilateral renal pediküllerden sonra reperfüzyonun yeniden başlatıldığı bulunmuştur.böbrekarter 20 dakika klemplendi ve serum kreatinin üç gün sonra normal başlangıç düzeyine döndü. Bu nedenle, reperfüzyondan 35 dakika önce bilateral renal arterleri klemplemeyi seçtik ve serum kreatininindeki değişiklikler ameliyattan üç gün sonra stabildi. Operasyon sırasında, rengin değiştiğini gözlemleyebiliriz.böbrekneden olduğu pembeden açık kırmızıya değişir.böbrekarter vasküler iskemi. Klipsi 35 dakika sonra çıkardıktan sonra,böbreknormale döndüğünde IRI-AKI modeli oluşturulmuştur. Özetle, bu bulgu, Oridonin'in önemli bir anti-inflamatuar etkiye sahip olduğunu ve AKI'deki böbrekleri, esas olarak Mincle'ın inhibe edilmesini ve NF-κB ve AKT'nin aşağı akış sinyalinin aktivitesini içerebilen yaralanmadan koruyabildiğini göstermiştir. Bu çalışma, AKI'nin klinik tedavisi için seçenekler sunabilen AKI için yeni bir potansiyel Oridonin tedavisi mekanizması sunmaktadır.
