G Protein Eşli Reseptör 17 Tarafından Uyarılan Glikoz ve Lipid Metabolizmasının Yeniden Düzenlenmesi Susturma, Oligodendrosit Progenitörlerinin Miyelinizan Hücrelere Geçişini Sağlar Ⅱ

3. Sonuçlar

3.1. Farklılaşan OPC'lerde GPR17 Susturma, Lipit ve Glikoz Metabolizmasında Yer Alan Genlerin İfadesini Önemli Ölçüde Değiştirdi

OL farklılaşması sırasında GPR17 ekspresyonundan önemli ölçüde etkilenen biyolojik süreçleri vurgulamak için, sıçan OPC'lerini sıçan GPR17'ye özgü SMART havuzu siRNA'ları ile transfekte ederek ekspresyonuna müdahale ettik. qRT-PCR (Şekil S1) ile başarılı GPR17 yıkımını doğruladıktan sonra, GPR17-susturulmuş ve kontrol OPC'lerinde 30.584 fare transkriptinin bir mikrodizi analizini gerçekleştirdik ve farklı biyoinformatik araçlarla diferansiyel olarak eksprese edilen genleri (DEG'ler) analiz ettik. İlk olarak, bir yol zenginleştirme analizi yapmak ve önemli ölçüde etkileneceği tahmin edilen süreçleri belirlemek için Meta-Core tarafından 640 DEG incelenmiştir. Bu analiz, halihazırda GPR17 işlevi [37] ile bağlantılı olduğu gösterilmiş olan mTOR sinyalinin ve OPC olgunlaşması ile ilgili olduğu bilinen "" gibi diğer süreçlerin değiştirilmesini önerdi.hücre iskeleti yeniden şekillenmesi" Ve"lipid metabolizmasının düzenlenmesi" (Tablo 1).

artı

Kemik Büyümesi İçin Cistanche'yi Öğrenmek İçin Buraya Tıklayın

Tablo 1. MetaCore yazılımı, GPR17 susturulmasından sonra DEG'ler üzerinde bir yol zenginleştirme analizi yapmak için kullanılmıştır. Tablo, analizden kaynaklanan en önemli yolları, ilişkili genlerin sayısını ve veri setinde yer alan ortak genleri göstermektedir.

Ardından, bir sorgu veri kümesine kıyasla önemli benzerlikler ve farklılıklar içeren derlenmiş IPA veri kümelerini otomatik olarak tanımlayan bir analiz eşleştirmesi gerçekleştirmek için Yaratıcılık yolu analizi (IPA) aracı kullanıldı. Bu analiz, veri setimizdeki (Tablo S1) 38 genin ekspresyon değişikliklerinin, değiştirilmiş yağ asidi sentezi (Şekil 1) ile ilişkili olduğunu göstererek, GPR17 ekspresyonu ile lipid metabolizması arasındaki öngörülen bağlantıyı güçlendirir. Bunların arasında GPR17 susturma, LXR'nin (karaciğer X reseptörü alfa, Şekil 2'de NR1H3 ve Tablo S1'de, oksisterollere yanıt veren bir nükleer reseptör) ve SREBP1'in (sterol düzenleyici element bağlayıcı protein 1, Şekil 1'de ve Tablo S1'de SREBF1) yukarı regülasyonunu indüklemiştir. yağ asidi ve kolesterol sentezinde kilit oyuncular. Veri setimizde, PDH (piruvat dehidrojenaz), Ldha (laktat dehidrojenaz alfa) ve Pdk1 (piruvat dehidrojenaz kinaz 1) dahil olmak üzere birkaç değiştirilmiş genin, glikoz metabolizması ve Krebs döngüsü ile ilişkili olduğunu gözlemledik; Bu metabolik süreçlerin düzenlenmesinde GPR17 reseptörü. Buna göre, DEG'ler üzerinde yapılan bir gen ontolojisine dayalı zenginleştirme analizi (ToppGene suite), "monokarboksilik asit metabolik süreci"nin (GO:{{20}}032787, p-) değiştiğini ortaya çıkardı. değer: 0,02), "sinir sistemi gelişiminin düzenlenmesi" (GO:0051960, p-değeri: 0,033) ve "sfingolipid metabolik süreçler" (GO:0006665, p-değeri) gibi CNS gelişimi ve hücre metabolizması ile ilgili diğer süreçlerin ötesinde : 0,043) (Şekil 2; tam liste Tablo S2'de).

Küresel olarak, bu değişiklikler, GPR17 susturmasının, lipit ve glikoz homeostazının transkripsiyonel düzenlemesinde yer alan birkaç genin yanı sıra miyelin üretimi için kolesterol ve lipitlerin kullanılmasında yer alan birkaç geni ayarlayarak, hücreleri miyelinasyona yönlendirmek için bir tetikleyici görevi görebileceğini düşündürmektedir.

Şekil 1. Yaratıcılık yolu analiz aracı (IPA, Qiagen), veri setini analiz etmek ve veri setindeki diferansiyel olarak eksprese edilen genlerin modeline göre arttığı veya azaldığı tahmin edilen hastalıkları ve biyolojik süreçleri keşfetmek için kullanıldı. Bu analizden, veri kümemizde diferansiyel olarak ifade edilen lipid senteziyle ilgili genleri içeren Şekildeki şemayı tahmin ettik (p-değeri=9.67 × 10−4). Bu genlerin tam adları, göreceli kat değişikliği (log2 oranı) ile birlikte Tablo S1'de rapor edilmiştir. Kırmızı, yukarı regüle edilmiş genlerde; yeşil, aşağı regüle edilmiş genlerde

Şekil 2. Toppgene paketi, DEG'lerde GO tabanlı zenginleştirme analizi için kullanılmıştır. Resim, GPR17 susturma tarafından potansiyel olarak değiştirilen merkezi sinir sistemi ve hücre metabolizması ile ilgili bazı önemli biyolojik süreçleri göstermektedir. Mavi çubuklar, her terimle ilişkili toplam genleri gösterir; kırmızı çubuklar, her terim için veri kümemizle ortak olan genleri gösterir. Bu analizden kaynaklanan biyolojik süreçlerin tam listesi ve ilgili p-değerleri Tablo S2'de rapor edilmiştir.

3.2. İn Vitro OPC Farklılaşması Sırasında Metabolomik Analiz

GPR17 ekspresyonu ile belirli metabolik yolların aktivasyonu arasındaki ilişkiyi değerlendirmek için, fizyolojik olgunlaşmaları sırasında kültürlenmiş OPC'lerin metabolomik bir analizini yaptık. OPC'ler bir farklılaşma ortamında tutuldu ve daha sonra OL olgunlaşmasının değişen aşamalarına karşılık gelen dört farklı zaman noktasında (farklılaşmada 0, 1, 3 ve 5 gün sonra, DID) parçalandı. Buna paralel olarak, tüm deneylerde olgunlaşmanın beklenen zamanlamayla gerçekleştiğini değerlendirmek için OPC'ler GPR17 ve MBP için kültürlendi ve boyandı. Sonuçlar, GPR17-eksprese eden hücrelerin sayısının 3 DID'de maksimuma ulaştığını ve daha sonra 5 DID'de bazal seviyelere geri döndüğünü, oysa MBP-pozitif hücrelerin sayısının olgunlaşma sırasında kademeli olarak arttığını (Şekil 3a) gösterdi. önceki sonuçlar [37]. OPC metabolomik değerlendirmesi, glikoliz, pentoz fosfat yolu, Krebs döngüsü, yağ asidi oksidasyonu ve bunların kofaktörlerinde yer alan enerjik metabolitlere odaklanarak, daha önce tarif edildiği gibi [38] sıvı kromatografi-tandem kütle spektrometrisi (LC-MS/MS) ile gerçekleştirilmiştir. NADH, NAD plus , NADPH, NADP plus , ATP, ADP, AMP, amino asitler ve bazı türevleri. Analiz edilen dört zamanlı noktaların metabolomik profilleri Şekil 3b'de rapor edilmiştir. 0 gününde, Krebs döngüsüne ait ve/veya onunla bağlantılı birkaç metabolitin (ör. süksinat, malat, alfa-Ketoglutarat, glutamat, aspartat, alanin ve prolin) seviyeleri, gelen hücrelerden beklendiği gibi daha yüksekti. oldukça çoğalan bir durumdan (Şekil 3c). Ara aşamalarda (DID 1'den 3'e kadar), OPC'ler, yağ asidi ve kolesterol sentezinde yer alan moleküllerde belirgin bir artış gösterdi. Buna göre, kolesterol ve yağ asitlerinin öncüsünü temsil eden asetil-CoA (Şekil 3c) ve yağ asidi sentezinin spesifik bir ara maddesi olan malonil-CoA seviyelerinde artış gözlemledik. DID 5'te, serbest hücre içi glikozda önemli bir artışa paralel olarak birkaç asil-karnitin ve amino asit seviyesinde artış gözlemledik (Şekil 3c). Ayrıca 0 gününden DID 5'e kadar azalan AMP ve ADP seviyeleri ve DID 1 ile DID 3 arasında ATP'de geçici bir artış gözlemledik. Bu veriler, 0 gününden DID 3'e karşılık gelen GPR17'nin maksimum ifadesine ulaştığı geçici pencerede, OPC'ler kolesterol ve yağ asidi biyosentezini sürdürmek için esas olarak glikoz ve amino asitleri kullandı. DID 5'te, artan asil-karnitin seviyeleri ile vurgulandığı gibi, OPC'ler muhtemelen yağ asidi kullanımına dayanır. Birlikte, bu veriler, fizyolojik farklılaşma sırasında OPC'lerin, olgun miyelinleştirici OL'ler haline gelmek için enerjik metabolizmalarını aşamalı olarak yeniden düzenlediğini gösterir.

3.3. İn Vitro OPC Olgunlaşması Sırasında GPR17 Susturmanın Ardından Metabolomik Analiz

GPR17 reseptörünün hücre farklılaşması sırasında meydana gelen enerji metabolik değişikliklerini yönlendirmedeki katkısını ortaya çıkarmak için karıştırılmış bir RNA alan kontrol OPC'leri ile karşılaştırmalı olarak GPR17- susturulmuş OPC'ler üzerinde metabolomik çalışmalar yaptık. İlk önce GPR17 sessizleştirmesinin OPC olgunlaşması üzerindeki etkisini GPR17 ve MBP için immünofloresan boyama ile inceledik. Beklendiği gibi, reseptör susturulmasından sonra GPR17 boyamasında 3 DID'de açıkça görülebilen bir azalma bulduk. Ayrıca hem 3 DID'de (gösterilmemiştir) hem de 5 DID'de (Şekil S2) olgun MBP-pozitif OL'lerin sayısında belirgin bir artış gözlemledik. Buna paralel olarak, beş zaman noktasında (0, farklılaşmada 1, 2, 3 ve 5 gün, DID) ayrıntılı qPCR analizi yapıldı ve kontrol OPC'lerinde 1 DID'den sonra GPR17 ifadesinde güçlü bir artış ortaya çıktı, 2 DID'den sonra önemli seviyelere ulaşan, MBP ifadesinde 5 DID'ye kadar ilerleyici bir artış ve erken belirteç NG2'de önemli bir azalma (Şekil 4a). Tersine, GPR17 susturulmasından sonra (Şekil 4b), GPR17 mRNA, DID1'de daha düşük seviyelere ulaştı ve ardından istikrarlı bir şekilde düşük kaldı, MBP ifadesi daha da arttı ve NG2 daha da azaldı. Şekil 4c'de her zaman noktasında GPR17-susturulmuş ve kontrol OPC'lerindeki NG2 ve MBP ifadesinin doğrudan karşılaştırması gösterilmektedir. Birlikte ele alındığında, bu sonuçlar, bu deneysel koşullar altında OPC'lerde GPR17 susturmasının farklılaşma sürecini hızlandırdığını göstermektedir. Ardından, seçilen beş zaman noktasında LC-MS/MS ile OPC metabolomikleri gerçekleştirildi. Her bir zaman noktasında GPR17-susturulmuş ve kontrol OPC'lerinden elde edilen metabolomik verilerin karşılaştırılması, GPR17 susturmasından önemli ölçüde etkilenen metabolitleri belirlememizi sağladı

Şekil 3. (a) Grafik, farklılaşma sırasında GPR17 plus ve MBP plus hücrelerinin yüzdesindeki değişiklikleri göstermektedir. grup başına n=3; Tukey testi ile tek yönlü ANOVA. * p < 0.05, ** p < 0.01) (b) Isı haritası, 0, 1'de durdurulan her bir numunedeki metabolit bolluğunu gösterir. , 3 veya 5 DID. Analiz edilen metabolitlerin bolluğu, koyu maviden (çok düşük bolluk) koyu kahverengiye (çok yüksek bolluk) kadar değişen bir kromatik ölçekle temsil edilir. n=4–5 grup başına. (c) Koşullar arasında önemli ölçüde farklı bolluğa sahip metabolitler (farklılaşmada 0, 1, 3 ve 5 gün, DID; Fisher's LSD testi ile tek yönlü ANOVA).

DID 1'de (Şekil 5a), önemli değişiklikler bulamadık. DID 2'de (Şekil 5b), Krebs döngüsünün bazı metabolitlerinde (malat, fumarat sitrat) önemli bir artış, serbest karnitin (CO), asetil-karnitin(C2), propiyonil-karnitin(C3: 0), butiril-karnitin (C4:0), valeril-karnitin (C5:0), hekzadekanoil-karnitin (C16:0ve glikozda önemli bir azalma , laktat, kreatin ve ornitin Yağ laktat ve kreatinde azalma ve propiyonil-karnitin (C3) artışı DID3'te de gözlemlendi (Şekil 5c) DID 5'te (Şekil 5d) yine de serbest karnitinde bir artış bulduk ( CO), asetilkarnitin (C2), propiyonil-karnitin (C3:0), bütiril-karnitin (C4:{{30}}), valeril-karnitin (C5:0) )tetradekanoil-karnitin (C14:0), heksadekanoil-karnitin (C16:0), oktadekanoil-karnitinC18:0), oktadekanoil-karnitin (C18:1), orijinal olarak daha fazla gözlenene benzer farklılaşmış hücreler (bkz. Şekil 3), dihidroksiaseton-3-fosfat/gliseraldehit3-fosfat (DHAP/GAP), fumarat ve sitratta artış ve asetil-CoA, Met-SOkreatin, taurin ve karnosin.

Şekil 4. GPR17 susturmanın OPC olgunlaşması üzerindeki etkisi. GPR17 (yeşil), NG2blue) ve MBP'nin (kırmızı) ekspresyon seviyeleri, kontrol koşullarında farklılaşma sırasında (karıştırılmış RNA ile transfekte edilmiş hücreler ve GPR17 susturulmasından sonra (b) gerçek zamanlı PCR ile değerlendirildi ve T{{ 6}} ({7}} olarak ayarlanmıştır). n Her zaman noktası için=6. Tukey çoklu karşılaştırma testleri ile tek yönlü ANOVA (a): ** p < {{10} }.001'e Karşı DID 0-2-3-5, @ p < 0.05'e Karşı DID 3-5; ## p < 0.01'e karşı gün 0; SSS p < {{30}}.001'e karşı DID{ {21}}; (b): *** p < 0.001 Vs. DID 0-2-3-5, @@@ p < 0 .001 - 0. gün, # p < 0,05, ### p < 0,001 - 0.S p < 0,05, SS p < 0,01, SSS p < 0,001 V. DID 5. (C) Her zaman noktasında GPR17-susturulmuş OPC'ler ve kontrol OPC'lerinde (0'a ayarlı) NG2 ve MBP ifadesi. Katlama değişikliği (FC), LOG,(FC) olarak rapor edildi. Bir örnek t-testi, * p < 0,05, * p < 0,01 *** p < 0,001 - kontrol OPC'lerinde göreli DID.

Şekil 5. OPC'lerde GPR17 susturmasının neden olduğu metabolik değişiklikler. (a-d) GPR17 susturulmasından sonra her bir metabolitin bolluğu, ilgili kontrol örneğindekine göre normalleştirildi. Ortaya çıkan kat değişiklikleri, her bir zaman noktası için bir volkan grafiği oluşturmak için kullanıldı (farklılaşmada 1, 2, 3, 5 gün). Noktalı yatay çizginin üzerindeki noktalar, istatistiksel olarak anlamlı bir değişiklik gösteren metabolitleri temsil eder (Fisher's LSD, FDR tarafından düzeltilmiştir; p.adj < 0.1). Yeşil renkte, GPR17 susturulmasından sonra daha düşük ifadeye sahip metabolitler, kırmızıda daha yüksek ifadeye sahip olanlar. n Her grup için=7–9. DID: farklılaşmadaki günler.

3.4. GPR17, OPC Olgunlaşması Sırasında Laktat Salınımını Modüle Eder

Yukarıda açıklanan metabolomik sonuçlara dayalı olarak, GPR17 susturma işleminin hücre içi laktat düzeylerini düşürdüğü bulundu. Bu azalmanın laktat metabolizmasındaki genel bir düşüşü mü yoksa bu metabolitin artan bir salınımını mı yansıttığını değerlendirmek için hücre lizatlarındaki ve ilgili ortamdaki seviyelerini farklı zaman noktalarında ölçtük. Şekil 6'da gösterildiği gibi, kontrol koşullarında hücre içi laktat, DID 2'de (Şekil 6a) (GPR17 reseptörü ifadesi de maksimum olduğunda) en yüksek bolluğa ulaştı ve ardından hücreler olgunlaştığında azaldı. Bunun yerine, GPR17'nin susturulmasından sonra hücre içi laktat artışı ortadan kalktı ve seviyeleri farklılaşmaya doğru daha da azaldı. Gerçekten de, her zaman noktasında GPR17-susturulmuş OPC'lerdeki laktat seviyelerinin kontrol OPC'lere karşı karşılaştırılması, DID 2 ve 3'teki seviyelerinde bir azalmayı vurguladı (Şekil 6b). Hücre dışı laktat, farklı kinetikleri izleyerek kontrol koşullarında DID 2-3-5'de DID 1'e kıyasla önemli bir azalma gösterirken, GPR17-susturulmuş OPC'lerde sabit bir şekilde yüksek kaldı ve ardından DID 5'te önemli ölçüde azaldı (Şekil 6c) ). Bununla birlikte, iki deneysel koşul arasındaki farklı zaman noktalarındaki laktat seviyeleri karşılaştırıldığında, GPR17'nin susturulması fizyolojik azalmayı engelledi,artan laktat varlığıDID 2 ve 3'teki ortamda (Şekil 6d),artan bir salınım önermek.

Şekil 6. OPC'lerde GPR17 susturma, laktat metabolizmasını değiştirir. (a) Kontrol koşullarında (yeşil çizgi) OPC olgunlaşması sırasında ve GPR17 susturulmasından sonra (turuncu çizgi) laktat bolluğu. Grup başına n=7–9. Tukey'nin çoklu karşılaştırma testi ile tek yönlü ANOVA. * p < 0.05, ** p < 0.01'e karşı DID2 CTL; §§ p < 0.01, §§§ p < {{30}}.001 - DID1 siGPR17 (b ) GPR17 susturulmasından sonraki laktat seviyeleri, her zaman noktasında (n=7–9) kontrol numunelerine (1'e ayarlı) göre normalleştirildi. ** p < 0.01; bir örnek t-testi. GPR17-susturulmuş ve kontrol OPC'lerinden şartlandırılmış ortam, metabolomik analiz için kullanılan aynı kültürden toplandı. Ortamdaki laktat seviyeleri, LC-MS/MS ile değerlendirildi. (c) Kontrol koşullarında (yeşil çizgi) OPC olgunlaşması sırasında ve GPR17 susturulmasından sonra (turuncu çizgi) hücre dışı boşlukta laktat bolluğu. Tukey'nin çoklu karşılaştırma testi ile tek yönlü ANOVA. ** p < 0,01, *** p < 0,001 - DID1 CTL; § p < 0,05 ve DID5 siGPR17. (d) GPR17 susturulmasından sonra hücre dışı laktat seviyeleri, her bir zaman noktasında kontrol numunelerine (1'e ayarlanmış) karşı normalleştirildi. * p < 0,05; ** p < 0.01; bir örnek t-testi. Kontrol (e,g) ve GPR17-susturulmuş (f,h) OPC'lerde MCT1 inhibisyonunun etkisi, inhibitörle tedavi edilen örneklerde MBP'nin ifadesi ile ilgili kontrollerin (araçla tedavi edilen) karşılaştırması analiz edilerek değerlendirilmiştir. , farklılaşmanın 3. ve 5. günlerinde. Grup başına n=6.

sağlayan mekanizmalardan biriOPC'ler laktat salabilirmonokarboksilat taşıyıcı MCT1 yoluyladır. Ayrıca, son araştırmalar, OPC'lerin hücre döngüsünü ve farklılaşmasını teşvik eden MCT reseptörleri yoluyla hücre dışı laktatı alabildiğini bildirmiştir [39]. Bu nedenle, GPR17 susturma tarafından indüklenen artan laktat salınımına MCT1 aracılık edip edemeyeceğini ve bunun aynı koşullarda OPC olgunlaşması üzerinde gözlenen etkiden kısmen sorumlu olup olmadığını merak ettik (Şekil 4). Bu amaçla, OPC'leri normal farklılaşma sırasında ve GPR17 susturulmasından sonra seçici bir MCT1 inhibitörü olan AR-C155858 ile tedavi ettik. Beklendiği gibi, laktat salınımı her iki koşulda da başarılı bir şekilde inhibe edildi (Şekil S3). MCT1 inhibisyonunun farklı deneysel koşullarda OPC olgunlaşması üzerindeki etkisi, MBP'nin ekspresyon seviyeleri analiz edilerek değerlendirildi. İstatistiksel anlamlılığa (p=0.07) yakın olan, MBP'nin gen ifadesinde ılımlı bir azalma, yalnızca GPR17 için spesifik siRNA ile transfekte edilmiş numunelerde bulunmuştur (Şekil 6e–h); ancak, kontrol RNA (siNEG) ile transfekte edilen numunelerde önemli bir varyasyon ortaya çıkmadı. Bu sonuçlar, GPR17 aşağı regülasyonunun aracılık ettiği hücre dışı laktattaki artışın, OPC'lerin olgunlaşmasını teşvik ettiğini göstermektedir; ancak MBP azalmasının küçük boyutu, bu metabolitin sürece dahil olan tek faktör olmadığını gösterir.

3.5. OPC Olgunlaşması Sırasında GPR17 Susturma İşleminden Sonra Lipidomik Analiz

GPR17'nin susturulmasından sonraki transkriptomik analizin sonuçları, işlevi ile miyelinin ana bileşenleri olan lipitlerin ve kolesterolün sentetik yolları arasındaki potansiyel bağlantıyı da vurguladı. GPR17'nin lipid metabolizmasındaki rolünü daha fazla araştırmak için, 0 gününe kıyasla farklılaşmanın 2, 3 ve 5. gününden sonra GPR17-susturulmuş OPC'lerin lipidomik analizine LC-MS/MS uyguladık. Analiz edilen lipitlerin listesi, göreceli kat değişiklikleri ve p değerleri Tablo S4'te rapor edilmiştir. Deney gruplarında en bol bulunan iki lipit sınıfı, yağ asitleri ve diasil-fosfatidilkolin (PCaa) ailesiydi. Kontrol OPC'lerinin farklılaşması sırasında, herhangi bir lipid sınıfının bolluğunda önemli bir değişiklik bulamadık. Bunun yerine, GPR17-susturulmuş OPC'ler, kontrol OPC'lere kıyasla, özellikle DID 3 ve 5'te, değişen serbest yağ asitleri, seramidler, asil-alkil-fosfatidilkolin (PCae) ve fosfatidilinositol (PI) bolluğuna doğru bir eğilim gösterdi. ancak sadece diasil-fosfatidiletanolamin (PEaa) ve sfingomyelin (SM) istatistiksel olarak anlamlı bir değişiklik gösterdi (Şekil 7).

Şekil 7. OPC farklılaşması sırasında GPR17 susturmasının neden olduğu lipidik sınıf bolluğundaki değişiklikler. Farklı zaman noktalarında kontrol koşullarında her bir lipid sınıfının bolluğu rapor edilir (a)GPR17 susturulmasından sonra her bir lipid sınıfının kinetiği analiz edildi: (b) yağ asitleri, (C) seramidler(d) LizoPC (lizofosfatidil-kolinler), (e) LizoPE (lizofosfatidiletanolaminler), (f) PCaa(diasil-fosfatidil-kolinler), (g) PCae (asil-alkil-fosfatidil-kolinler), (h) PEaa (di-asilfosfatidil-etanolaminler), (i) PEae (asil-alkil-fosfatidil-etanolaminler), (i) PI (fosfatidilinositoller), (k) PS (fosfatidil-serinler), (D SM (sfingomyelinler). n=5 her grup için. Kinetik: İki yönlü ANOVA ardından Tukey çoklu karşılaştırma testi siGPR17: İki yönlü ANOVA ardından Sidak çoklu karşılaştırma testi * p.adi < 0.05, ** p.adi < 0.01.

GPR17-susturulmuş ve kontrollerden elde edilen lipidomik verilerin her bir zaman noktasında karşılaştırılması, GPR17 susturulmasından önemli ölçüde etkilenen lipitleri belirlememizi sağladı. 2 DID'den sonra önemli bir değişiklik bulunmadı (veriler gösterilmemiştir). 3 DID'den sonra, GPR17-susturulmuş OPC'lerde diasilfosfatidilkolin (PCaa) C40:4 daha az boldu ve diasil-fosfatidiletanolaminPEaa) C34:3 daha fazlaydı (Şekil 8a). 5 günlük farklılaşmanın ardından GPR17 susturma, lipit bolluğunda birkaç değişikliğe yol açtı: birkaç diasil-PC ve diasil-PE'nin azalması ve sfingomiyelin (SM) C18:1 ve SM ile birlikte birkaç plazmalojende (asil alkil-PC) eş zamanlı bir artış (OH) C16:1 (Şekil 8b). Bu veriler, GPR17'nin aşağı regülasyonunun, miyelin ana bileşeninin PC ve PE olarak lipit profilini değiştirdiğini göstermektedir.

Şekil 8.OPC'lerde GPR17 susturmasının neden olduğu lipidomik değişiklikler. (a,b) GPR17 susturulmasından sonra her bir lipidin bolluğu, ilgili kontrol örneğindekine göre normalleştirildi. Ortaya çıkan kat değişiklikleri, her bir zaman noktası için bir volkan grafiği oluşturmak için kullanıldı (farklılaşmada 3, 5 gün). Noktalı yatay çizginin üzerindeki noktalar, istatistiksel olarak anlamlı bir değişiklik gösteren metabolitleri temsil eder (Fisher's LSD, FDR tarafından düzeltilmiştir; p.adj < 0.1). GPR17 susturulmasından sonra yeşil renkte, daha düşük ifadeye sahip lipidler, kırmızıda daha yüksek ifadeye sahip olanlar. Grup başına n=5.

Daha fazlasını iste:

E-posta:wallence.suen@wecistanche.com

Whatsapp/Tel: artı 86 15292862950

MAĞAZA:

https://www.xjcistanche.com/cistanche-shop