Bitkisel madde Acteoside tümör hücrelerini nasıl inhibe eder?

İletişim: Audrey Hu Whatsapp / hp: 0086 13880143964 E-posta:audrey.hu@wecistanche.com

SOYUT

Doğal ürünler aşırı yapısal çeşitlilik ile karakterize edilir ve bu nedenle yeni anti-tümör ajanların tanımlanması için eşsiz bir kaynak sunarlar. Burada, bitkisel maddeninakteosidLippia citriodora yapraklarından ileri fitokimyasal yöntemlerle izole edildiğinde, metastatik tümör hücrelerine karşı artmış sitotoksisite gösterilmiştir; çeşitli sitotoksik ajanlar ve sensitize kemodirençli kanser hücreleri ile sinerji içinde hareket etti.Acteosideherba cistanchce sitesindenfizyolojik hücresel bağlamlarda toksik değildi, oksidatif yükü arttırırken, proteostatik modüllerin aktivitesini etkiledi ve tümör hücre hatlarında matriks metalloproteinazları baskıladı. İntraperitoneal veya oral (içme suyu yoluyla) uygulamacistancheakteosid melanom fare modelinde tümörlerde antioksidan yanıtları yukarı regüle etti; ancak sadece intraperitoneal doğum tümör büyümesini baskıladı ve anti-tümör-reaktif immün yanıtları indükledi. Kütle-spektrometri tanımlama/kantitasyon analizleri intraperitoneal doğumunakteosidoral uygulamaya kıyasla önemli ölçüde daha yüksek sonuç verdi, bileşiğin plazmadaki konsantrasyonu ve tedavi edilen farelerin tümörleri, in vivo anti-tümör etkisinin uygulama yoluna ve tümörde elde edilen konsantrasyona bağlı olduğunu düşündürmektedir. Son olarak, moleküler modelleme çalışmaları ve enzimatik aktivite testleri, akteosidin protein kinaz C'yi inhibe ettiğini göstermiştir. kesin olarak, akteosit, yeni anti-tümör ajanlarının gelişimi için kimyasal bir iskele olarak umut vaat etmektedir.

Anahtar kelime -ler:Acteoside, Kanser, Doğal bileşik, Oksidatif stres, Proteostaz, İmmünomodülasyon

Cistanche anti-tümör, örnek almak için buraya tıklayın

1. Giriş

Karsinogenez, çeşitli hücre sinyal yolaklarının deregülasyonu ile karakterizedir ve artmış hücresel oksidatif, replikatif, metabolik, genotoksik ve proteotoksik stres ile ilişkilidir [1]. Bu stres fenotiplerini uyarlamak ve üstesinden gelmek için, malign hücreler, devam eden stresi bastırmayı veya (en azından) hafifletmeyi amaçlayan birkaç onkojenik olmayan yolu (onkogenler dışında) düzenler. Tümörigenez sırasında sıklıkla yukarı regüle edildiği tespit edilen çeşitli onkojenik olmayan yollar arasında, proteostaz ağının (PN) modülleri ve hücresel antioksidan yanıtlar bulunmaktadır [2,3].

PN'nin anahtar bileşenleri, iki ana bozunma makinesi, yani Otofaji-Lizozom yolu (ALP) ve Ubikitin-Proteazom Yolu (UPP), hücresel moleküler şaperonların ağı ile birliktedir. ALP esas olarak protein agregalarının ve hasarlı organellerin [4] parçalanmasında rol oynarken, UPP normal kısa ömürlü proteinleri ve tamir edilemez yanlış katlanmış veya katlanmamış proteinleri [5-8] bozar. 26Seukaryotik proteazom, 19S düzenleyici parçacıklarından (RP) ve 20 Skor parçacığından (CP) oluşur; ikincisi, namlu benzeri bir yapı oluşturan dört istiflenmiş heptamerik halkadan (α tipinin ikisini çevreleyen β tipinden ikisi) oluşur. Kimotripsin benzeri (BT-L), tripsin benzeri (T-L) ve kaspaz benzeri (C-L) proteazom peptidaz aktiviteleri sırasıyla β5, β2 ve β1 proteazomal alt birimlerinde bulunur [6]. Proteazom inhibitörleri Bortezomib (Velcade®; PS-341 olarak da adlandırılır) ve Carfifilzomib'in çeşitli hematolojik malignitelere karşı kanıtlanmış klinik etkinliği [9], kanser tedavisi için umut verici bir strateji olarak UPP'yi hedeflemenin "kavram kanıtı" nı sağlamıştır. Karsinogenez sırasında sıklıkla yukarı regüle edilen hücresel antioksidan savunma yolaklarının karmaşık ağı [3,10], antioksidan enzimlerin yanı sıra sitoprotektif genomik yanıtları harekete geçiren çeşitli transkripsiyon faktörlerini içerir; bunlar arasında çatal kafa kutusu O (Foxo) ve nükleer faktör eritroid 2 ile ilişkili faktör (Nrf-2) bulunur. Nrf-2, antioksidan ve faz II genlerinin ekspresyonunu uyardığı için hücrelerin oksidatif ve / veya ksenobiyotik hasara karşı korunmasında merkezidir [11-13].

Biz ve diğerleri yakın zamanda bu tümör bağımlılıklarını (yani, proteostatik modüller ve / veya antioksidan yanıt yolakları) hedeflemenin veya dönüştürülmüş bir genotip bağlamında hücresel ROS seviyelerinin arttırılmasının, tümör hücrelerinin seçici olarak öldürülmesi için potansiyel bir terapötik pencere sunduğunu öne sürdük [3,14]; destek olarak, kanser hücrelerinin hücresel ROS seviyelerini yukarı regüle eden küçük bir molekül tarafından seçici olarak öldürüldüğü bildirilmiştir [2]. Anti-tümör-reaktif immün yanıtların [15] aktivasyonunu da içeren kombinatoryal yaklaşımların, PN ve antioksidan yanıtları inhibe ederek ve / veya hücresel ROS seviyelerini yükselterek sunulan terapötik pencereyi en üst düzeye çıkarması beklenmektedir.

Çeşitli kaynaklardan (bitkiler, deniz organizmaları, mikroorganizmalar, vb.) gelen doğal ürünler (ekstraktlar veya saf bileşikler) (NP'ler), aşırı yapısal çeşitlilikleri ve kimyasal karmaşıklıkları nedeniyle anti-tümör ajanları olarak hareket etme yetenekleri ve ayrıca birkaç hücresel sinyal yolunu [16] pleiotropik olarak modüle ettikleri için taranmaktadır. Bildirildiğine göre, NP'ler anti-enflamatuar, anti-tümör ve / veya anti-metastatik yanıtları [16,17] aktive eder ve ayrıca çoklu ilaç direncinden [18,19] kaçınır. Bunlar arasında, fenolik bileşikler (feniletanoid glikozitler dahil), çeşitli insan hastalıklarının önlenmesinde ve / veya tedavisinde bildirilen rolleri nedeniyle önemli ilgi görmüştür.

Kusagin veya verbascoside [20] olarak da adlandırılan akteosit, birçok dikotiledondan izole edilmiş bir feniletanoid glikozittir. Bildirildiğine göre, akteosid antioksidan, antienflamatuar ve hücre apoptozu düzenleyici özellikler de dahil olmak üzere bazı ilginç biyolojik aktiviteler uygulamaktadır [21,22]. Bununla birlikte, potansiyel anti-tümör aktivitesi ele alınmamıştır. Burada, akteosidin memeli kanseri hücrelerine karşı artmış sitotoksisite gösterdiğini ve fizyolojik hücresel bağlamlarda belirgin toksik etkileri olmadığını bildiriyoruz. Ayrıca, akteosit, in vivo fare modelinde melanom tümör büyümesini baskıladı ve (diğerlerinin yanı sıra) anti-tümör-reaktif bağışıklık tepkilerini aktive etti.

anti-tümör cistanche ekstresi

2. Gereç ve yöntemler

2.1. Bitki materyali ve ekstraksiyonu

Kurutulmuş Lippia citriodora (Lamiaceae) yaprakları (4,5 kg) Atina, Yunanistan'daki yerel pazardan satın alındı. Yapraklar toz haline getirildi ve metanol (2 × 20 L) ile 12 saat boyunca mekanik karıştırma ile ekstrakte edildi. Metanolik ekstrakt kuruluğa buharlaştırıldı ve CH2Cl2 / MeOH 98/2 (15 L) karışımı ile yıkandı. Çözünmeyen kalıntı ayrıldı ve kurutuldu, yeşil-sarı bir toz (450 g) üretildi.

2.2. Akteozid ve UPLC-HRMS analizinin saflaştırılması

Yukarıda belirtilen kalıntının bir kısmı (10 g), hızlı bir santrifüj bölme kromatografisi (FCPC) aparatı (Kromaton, Fransa) kullanılarak karşı akım kromatografisine tabi tutulmuştur; bifazik çözücü sistem olarak 5/0.5/4.5 oranında bir EtOAc/EtOH/H2O karışımı kullanılmıştır. Toplanan fraksiyonlar İnce Tabaka Kromatografisine tabi tutuldu; Daha sonra kromatogramlar bir UV lambası (254 ve 365 nm) altında gözlemlendi ve metanol vanilin sülfat ile püskürtülerek ve ardından iki dakika ısıtılarak görselleştirildi. Yukarıda belirtilen işlemle toplam 2.1 g akteosid (saflık ≥% 90) izole edildi. Akteosidin tanımlanması nükleer manyetik rezonans (NMR) ve kütle spektrometresi (MS) spektrumları ile gerçekleştirilirken, saflığı UPLC-MS ve NMR analizi ile belirlendi; Ayrıntılar için bkz: Ek Gereç ve Yöntem.

2.3. Hücre çizgileri

İnsan akciğer embriyonik fibroblastları (IMR90 hücreleri) B16 ile birlikte. F1, B16. F10, YAC-1 ve WEHI-164 fare hücre hatları Amerikan Doku Kültürü Koleksiyonu'ndan (ATCC) elde edildi. U2 OS ve Sa OS insan osteosarkomu hücre hatları Prof. V. Gorgoulis (Tıp Fakültesi, Atina Ulusal ve Kapodistrian Üniversitesi, Yunanistan) tarafından nazikçe bağışlanırken, KH OS osteosarkom hücreleri ve kemodirençli osteosarkom hücre hatları [23] Dr. E. Gonos'un (Ulusal Yunan Araştırma Vakfı, Yunanistan) bağışıydı. Fare kanseri hücre hatları C5N ve A5, çok aşamalı bir fare derisi karsinogenez modeline [24,25] aittir ve Prof. A. Balmain (Kapsamlı Kanser Merkezi, Kaliforniya Üniversitesi, ABD) tarafından bağışlanmıştır. Kullanılan hücre hatlarının kültürleme koşulları Ek Gereç ve Yöntem bölümünde raporlanmaktadır.

Cistanche ekstraktının yararı: anti-kanser

2.4. Melanom fare modeli

Erkek C57BL/6 fareler (25-30 g ağırlık, 6-8 haftalık) Hellenic Pasteur Enstitüsü'nden elde edildi ve kontrollü sıcaklık (22 ° C) ve fotoperiyot (12 saat ışık: 12 saat karanlık) altında su ve yiyeceğe serbest erişim ile barındırıldı. Fareler deri altından 105 B16 ile aşılandı. F1 melanom hücreleri (100 μL PBS'de) ve rastgele 3 gruba (n = 5 / grup) atandı. Tümörler palpe edilebilir hale geldiğinde (11. gün) fareler iki yolla akteosid aldı; intraperitoneal (IP) (200 μL PBS'de seyreltilmiş 1 mg / fare; her gün uygulanan toplam 6 doz) veya içme suyu (OR) (2.5 mg / fare; art arda 13 gün boyunca toplam 13 doz) ile oral olarak. Kontrol farelerine PBS uygulandı. Tümör büyümesi her 2 günde bir, oluşan tümörlerin majör ve minör eksenleri dijital kumpas ile ölçülerek kaydedildi. Ölçümler şu formül kullanılarak tümör hacmine dönüştürüldü: tümör hacmi (cm3) = majör eksen × minör eksen2 × 0.5. 28. günde, hayvanlar servikal çıkık ile ötenazi yapıldı ve dalaklar aseptik olarak çıkarıldı. Deney benzer bulgularla üç kez tekrarlandı.

Splenositler ayrı ayrı homojenize edilmiş dalaklardan izole edildi ve hemen B16'ya karşı sitotoksisiteleri açısından test edildi. F1, YAC-1 ve WEHI-164 hücre hedefleri. Sitotoksisite, efektör hücre degranülasyonu sonucunda hücre yüzeyinde CD107 maruziyetinin saptanmasına dayanarak değerlendirildi. Splenositler (105 hücre / kuyu), 96 kuyucuklu U alt mikroplakalarındaki hedeflerle, 100: 1'lik bir efektörden hedef (E: T) oranında,% 5 CO2'de 37 ° C'de hedeflerle birlikte kültürlendi. FITC-konjuge anti-CD107a ve anti-CD107 b monoklonal antikorlar (25 μL / mL) ve monensin (6 μL / mL; hepsi BD Biosciences'tan) her bir kuyucuğa eklendi. Hücreler 6 saat sonra toplandı ve bir FACSCanto II flflow sitometresi kullanılarak analiz edildi. Buna paralel olarak, tümörler eksize edildi ve Suppl. Gereç ve Yöntemler'de açıklandığı gibi aşağı akış tahlilleri için işlendi.

cistanche ekstresi etkileri: anti-tümör ve kanser