Çin pharmacopoeia'da diferansiyel bileşenlere dayanan Cistanche Deserticola ve C. tubulofloris'in işaretleyici bileşenleri için farklı içerik sınırlarının önemi ⅱ

Soyut

Amaç:Diferansiyel bileşenleri incelemek ve Cistanche tubulosa ve C. Deserticola arasındaki içeriklerini karşılaştırmak ve Çin Pharmacopoeia'daki (2020 baskısı) iki bitki arasındaki işaretleyici bileşenleri için farklı içerik sınırlarının önemini analiz etmek. Yöntemler: Diferansiyel bileşenler, çok değişkenli istatistiksel analiz ile birleştirilmiş sıvı kromatografi spektrometresi ile tanımlandı ve diferansiyel bileşenlerin içeriği yüksek performanslı sıvı kromatografisi ile belirlendi. Bulgular: Diferansiyel bileşikler cistanosid A, izoakteosid, ekinakosid ve akteosid idi. Ekinakozit, her iki bitkide en yüksek içeriğe sahipti, bunu akteosid izledi. C. tubulosa'daki ekinakosid, akteosid ve izoakteosid içeriği C. deserticola'dan daha yüksekti (P<0.01), and no cistanoside A was detected in C. tubulosa. Conclusion: There are differences in the chemical composition between C. deserticola and C. tubulosa. Cistanoside A can be taken as a maker component in C. deserticola. Echinacoside and acteoside are the common components in both plants, and they are specified in the Chinese Pharmacopoeia (2020 edition) as the marker components in both plants. The different content limits for the two components between C. deserticola and C. tubulosa reflect the objectivity in the standard.

Anahtar Kelimeler: Cistanche Deserticola;Cistanche tubulosa; cistanosid A; izoakteosid;ekinakozit; aktosit

 

 

 

 

Cistanche DeserticolaOrobanchacea ailesinin bir bitkisi olan Cistanche Deserticola YC Ma veya Cistanche tubulosa (Schenk) Wight'ın pullu yaprakları olan kurutulmuş etli gövdedir [1]. "Çöl Ginseng" olarak bilinen tonik ve tıbbi bir besindir. Esas olarak iç Moğolistan, Ningxia, Gansu, Sincan ve diğer bölgelerde dağılmıştır [2]. Cistanche Deserticola doğada sıcaktır, tatlı tatlı ve tuzludur ve böbrek ve kalın bağırsak meridyenlerine girer. Karaciğeri ve böbreği beslemenin, özü ve kandan yararlanma ve bağırsakları nemlendirme ve bağırsak hareketlerini kolaylaştırma etkileri vardır. Böbrek yang eksikliği, iktidarsızlık ve infertilite, bel ve dizlerin ağrısı, tendonların ve kemiklerin zayıflığı ve kuru bağırsakların neden olduğu kabızlığı tedavi etmek için kullanılabilir [1]. Modern araştırmalar, çelik deserticola'nın ölçekli yaprakları ile esasen esas olarak feniletanoid glikozitler, iridoid eter terpenleri ve bunların glikozitleri, lignansları ve şekerleri gibi çeşitli kimyasal bileşenler içerdiğini göstermektedir [3]. Bunlar arasında feniletanoid glikozitler, yaşlanma karşıtı [4], antioksidan, anti-yorgunluk ve müshil [5] gibi farmakolojik etkilere sahip en önemli aktif bileşenlerdir.
Dünyada yaklaşık 20 tür Cistanche vardır ve ülkemde 5 tür vardır: Cistanche Deserticola, Cistanche Tubulosa, C. Salsa (Camey.) G.Beck, C. Sinensis G. Beck ve C. Salsa var. albiflora pf tu et zclou. Çin Halk Cumhuriyeti Farmakopesi'nin 2020 baskısı (bundan sonra "Çin farmakopesi" olarak anılacaktır) ilk iki türün orijinal Cistanche Deserticola türü olduğunu öngörmektedir [6].

Cistanche Deserticola

Çin Pharmacopoeia'nın 2005 baskısından önce, tek Cistanche Deserticola-türevi kökenli Cistanche Deserticola idi. Yurtiçi ve uluslararası pazarlardaki yüksek talep ve kaynak sıkıntısı nedeniyle, yasal köken olarak Cistanche tubulosa eklendi. Bununla birlikte, piyasadaki Cistanche Deserticola'nın iki kökeninin fiyatları çok farklıdır, Cistanche tubulosa fiyatı Cistanche Deserticola'nın sadece 1/4 ila 1/6'sıdır [7]. Bu iki kökenin bileşim ve farmakolojik etkilerindeki farklılıklar uzun süreli derinlemesine araştırma ve kullanıma değerdir. Malzeme türlerindeki farklılıklar açısından, Huang Xiongmei ve ark. [8] Cistancheside A'nın iki kökenin karakteristik spektrum çalışması yoluyla ana farklılaştırıcı bileşen olduğunu bulmuştur. Bileşen içeriğindeki fark açısından Gao Yan ve ark. [9], ekinakosidin verbaskoside içerik oranlarının ve cistanche deserticola ve cistanche tubulosa'daki izovalascoside içerik oranlarının ultra yüksek performanslı sıvı kromatografisi ile oldukça farklı olduğunu; Zhu Nigiang ve ark. [10] parmak izi analizi yoluyla, cistanche deserticola içindeki feniletanoid glikozitlerin içeriğinin, tubulosa'dan önemli ölçüde daha düşük olduğunu ve cistanche tubulosa'daki feniletanoid glikozitlerin içeriğinin iridoid glikozitlerinkinden önemli ölçüde daha yüksek olduğunu bulmuşlardır.
Araştırma grubumuz, Cistanche Deserticola ve Cistanche tubulosa arasındaki kimyasal bileşen tiplerindeki farklılıkları karşılaştırmak için çok değişkenli istatistiksel analiz ile kombine sıvı kromatografisi-kütle spektrometrisi kullandı, diferansiyel belirteçleri belirledi ve cistanche dütozunun kökenini belirlemek için bir referans sağlamak için klinik pratiğinin rasyonel tübülozunun kökeni. Ek olarak, iki orijinal cistanches'in farmakopesi indeksi bileşenlerinin (ekinakozit ve verbascosid) içeriğindeki farklılıkları karşılaştırarak, sırasıyla Cistanches ve Cistanches tübülozlarının iki bileşeninin birleştirilmiş sınırlarının belirlenmesi gerekliliği açıklandı.

 

1 Malzeme

1.1 enstrümanlar

Ultimate 3 000 Ultra yüksek performanslı sıvı faz-elektrostatik alan tandem İyon Tuzağı Yüksek çözünürlüklü kütle spektrometresi (UPLC-LTQ Orbitrap XL, Thermo Fisher Scientific, ABD); 2695 Yüksek Performanslı Sıvı Kromatograf, 2489 Ultraviyole Dedektörü (Waters, ABD); BT125D 1/100.000 elektronik denge (Sartorius Instrument Systems, Almanya); KQ -500 de CNC Ultrasonik Temizleyici (Kunshan Ultrasonic Instrument Co., Ltd.); PL2002 Elektronik Denge [Mettler-Toledo Enstrüman (Shanghai) Co., Ltd.].

 

Cistanche tubulosa

1.2 Test İlaçları

Referans maddeler ekinakosid, Cistancheside A, Verbascosid ve Isoverbosasid (sırasıyla%98'den büyük saflık, PS0867, PS010950, PS000683 ve PS001059), LTD.; kütle spektrometri sınıfı metanol (Fisher); kütle spektrometri sınıfı formik asit (saflık:%99, Sigma Aldrich); Su Watsons damıtılmış su idi.

 

1.3 Örnekler

10 grup Cistanche Deserticola dilimi ve 10 grup Cistanche tubulosa dilimi, Pekin Tıp Üniversitesi Profesör Li Xiangri tarafından kurutulmuş etli, Cistanche Deserticola Ycma ve Cistanche tubulosa (Schenk) wight, orobancheae ailesinin bitkilerinin ölçekli yaprakları ile tanımlanmıştır. Ayrıntılı bilgiler Tablo 1'de gösterilmiştir.

 

2 Yöntem

2.1 Farklı kökenlerden Cistanche Deserticola'nın farklı bileşenleri üzerinde çalışma

2.1.1 Test çözümünün hazırlanması

Yaklaşık 0. 2 g kuru numune tozu (4 numaralı elekten geçer), 50 mL kahverengi hacimsel bir şişeye doğru tartın ve yerleştirin, 40 dakika boyunca tartın, kütleyi tartın, 40 dakika boyunca ultrasonik olarak tedavi edin (güç 250 w, frekans 35khz, shilt ve shooting ile ağırlık verin ve ağırlıklandırın ve ağırlık verin ve shile yapın ve shoet ve shooting yapın ve shoet ve shooting yapın, elde etmek için süzün.

 

2.1.2 Kromatografik Koşullar

Waters Acquity UPLCTM Beh C18 Kromatografik kolon (1 0 {{{11} mm × 2.1 mm, 1.7 um), 35 derecelik sütun sıcaklığı, örnek bölme sıcaklığı, örnek oda sıcaklığı, metanol (a) {{{{{{{{{{{{{{{{} Mobil faz olarak sulu çözelti (b) (0 dakika,%10 A; 0 ~ 4 dk,%10 ~%26 A; 4 ~ 18 dakika,%26 ~%40 A; 18 ~ 24 dakika,%40 ~%100 A; 24 ~ 28 dakika,%100 A), 330 nm tespit dalga boyu, 0.3 ml · min -1 akış hızı.

 

2.1.3 Kütle Spektrometri Koşulları

Elektrosprey iyon kaynağı (ESI) kullanıldı, negatif iyon modu taraması, kılcal sıcaklık 350 derece, kılıf gazı hacim akış hızı 30 ARB, yardımcı gaz hacim akış hızı 10 ARB, püskürtme voltajı 3 kV idi, kılcal voltaj –35 V, tarama aralığı m/z100 ~ 1000 idi ve veri edinme sistemi 21 idi.

Cistanche tubulosa

2.1.4 Ana Bileşen Analizi (PCA)

Doğru kütle tutma süresi veri çiftlerinin iki boyutlu matrisini elde ettikten sonra, gösterge paneli otomatik olarak aktarılan tüm doğru tutma süresi bilgilerini görüntüler ve genişletilmiş istatistik modülünün PCA yöntemi analiz için kullanılacaktır.

 

2.1.5 Ortogonal kısmi en küçük kareler-ayrımcı analiz (OPLS-DA)

OPLS-DA ile iki boyutlu veri analizi yapılarak, iki örnek grubu arasındaki farkları açıkça gösterebilen çok sayıda dikey spektrum elde edildi. S-grafik formatında, s-şekilli eğrinin her iki ucundaki kütle tutma süresi verileri çiftleri, her numune grubundan en güvenilir karakteristik iyonları temsil eder.

 

2.2 Diferansiyel bileşenlerin belirlenmesi

 

2.2.1 Karışık referans çözeltinin hazırlanması

 

Uygun miktarlarda ekinakozit, cistancheside A, verbascosid ve izoverassosid'e 1 0 ml kahverengi hacimsel şişe içine alın, 5 0%}% metanol ile işaretle, 0}%}% {87, {87, {87, {87, {87, {87, {87, {87, {87, {87, {87, {87, {87, {87, {87, {87, { Sırasıyla 0.384 ve 0.312 mg · ml - 1.

 

2.2.2 Test Çözümünün Hazırlanması

 

Yöntem 2.1.1 ile aynıdır.

 

2.2.3 Kromatografik koşullar

Agilent Eclipse XDB-C18 column (250 mm×4.6 mm, 5 μm) was used, with methanol (A)-0.1% formic acid aqueous solution (B) as the mobile phase, and gradient elution ({{10}} min, 15%A; 0~15 min, %15 ~ 21 dakika,%21 ~%25 ~%25 ~%40 A), akış hızı 1.0 ml ∙ min - 1, tespit dalga boyu 35 derece idi ve enjeksiyon hacmi 10 uL idi.

 

2.2.4 Metodolojik Araştırma

2.2.4.1 Doğrusal ilişki araştırması

Tam olarak pipet {{{0}}}. 1, 0. 5, 1. 0, 2. 0 ve 5.0 mL karışık referans çözeltisi, farklı 10 mL hacimsel şişelere farklı 10 mL hacimsel şişelere karışık referans ekler ve karışık referans elde eder ve% 50 metan ekleyin ve% 50 metan ekleyin ve% 50 metan ekleyin. Örneği belirleme için enjekte edin, kromatografik tepe alanını koordinat (y) ve konsantrasyonu apsis (x) olarak kullanın, bir dağılım grafiği çizin ve farklı referans maddelerin doğrusal regresyon denklemlerini elde etmek için regresyon analizi yapın.

 

2.2.4.2 Hassas deneme

Ekinakozit, Cistancheside A, Verbascosid ve Isoverbaktosit'in karışık referans çözeltisini alın, sürekli olarak 6 kez enjekte edin, ekinakosid, cistancheside A, verbascosid referansının tepe alanını kaydedin ve sırasıyla her bir bileşenin RSD değerini hesaplayın.

 

2.2.4.3 Kararlılık deneyi

Aynı Cistanche Deserticola (Parti Numarası: 16 0 901) test çözeltisi alın, 0, 2, 4, 8, 12, 24 saatte enjekte edin, test çözeltisinde sırasıyla RSD değerini hesaplayın ve echinasosid, cistancheside A, Verbascosid ve Isoverbaktozit içeriğini belirleyin.

 

2.2.4.4 Tekrarlanabilirlik Deneyi

Aynı numuneyi alın (parti numarası: 160901) tozu alın, 6 test çözeltisini 2.1.1 altındaki yönteme göre hazırlayın, enjekte edin ve ölçün, her test çözeltisinde ekinakozit, cistancheside A, verbascosid ve isoverbaskosid içeriğini hesaplayın ve her bir bileşenin RSD değerini hesaplayın.

 

2.2.4.5 Örnek Kurtarma Deneyi

Bilinen içeriğe sahip 6 Cistanche Deserticola (Parti Numarası: 160901) örneğini doğru bir şekilde tartın, bilinen ekinakozit, Cistancheside A, Verbascosid ve Isoverbascosid içeriğine eşdeğer referans çözelti ekleyin, 2.1.1 altındaki yönteme göre test çözümleri hazırlayın.