Kozmetik Ürünlerde Hidrofilik Beyazlatıcı Maddelerin Eşzamanlı HPLC Tayini
Mar 22, 2022
İletişim:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791
Miaw-Ling Chang a, Chur-Min Chang b,*
Soyut
En yaygın olarak kullanılan dört hidrofilik maddenin miktarını ölçmek için yüksek performanslı bir sıvı kromatografik yöntembeyazlatmaajan*/glikolik asit (GA), askorbik asit (AA),arbutin(ART) ve Mg askorbil fosfat (MAP) geliştirilmiştir. İzokratik ayırma, mobil faz olarak iyon çifti ajanı ile bir C18 kolonu kullanılarak gerçekleştirildi. Analitler, sırasıyla 220 ve 240 nm dalga boyunda ultraviyole ışık absorpsiyonu ile tespit edildi. Kalibrasyon eğrilerinin 8.0-36 mg/ml (GA), 10.0-300 mg/ml (AA ve ART) ve 5.6-451 mg/ml ( HARİTA). Doğrusal regresyon analizinin korelasyon katsayısı 0.9974-0.9997 aralığındaydı. Dört analitin geri kazanımları yüzde 94,8 ile 100,1 arasındaydı ve bu yöntemin kesinliği yüzde 6,9 bağıl standart sapmadan (RSD) (n=3) daha iyiydi. AA'nın sulu bir çözelti içinde bozunduğu bulundu. HPLC analizi sırasında AA'nın stabil olduğundan emin olmak için tüm analitler distile su içinde çözüldü ve bu çözeltiler oksijeni uzaklaştırmak için nitrojen gazı ile temizlendi ve 25 8C'de saklandı. Test sonuçları, prosedürün hızlı, basit, seçici bir yöntem olduğunu ve ticari ürünlerin rutin analizi için uygun olduğunu göstermektedir.makyaj malzemeleri.# 2003 Elsevier BV Tüm hakları saklıdır.
Anahtar Kelimeler: Kozmetik ürün; Hidrofilik beyazlatma maddesi; Glikolik asit; Askorbik asit; Arbutin; Mg askorbil fosfat; HPLC
Cistanche otudoğal bir beyazlatıcı ajandır.
1. Giriş
Batılılar bronzlaşmış cildi sağlıklı ve güzel buluyor. Aksine doğu ülkelerinde açık ten güzel kabul edilir. Bu nedenle, beyazlatıcı losyonlar teorik olarak çok popülerdir. Cildi beyazlatmak için uygulanırlar. Kimyasal peeling genellikle klinik tedavide akne, melazma, siğiller vb. kaynaklı hasarlı yüz derisinin tedavisinde kullanılır. Bu teknikte,kozmetikcilt hücrelerinin yenilenmesini uyarmak için cilde kemoterapötik ajan içeren ürünler uygulanır. Cildin rengi daha açık hale gelir. Bu nedenle, bu kemoterapötik ajana aynı zamanda birbeyazlatmaaracı [1-6]. Hidroksi asitlerden biri olan glikolik asit (GA) gibi beyazlatıcı bir ajanın cildin nemini arttırdığı ve dolayısıyla daha pürüzsüz bir görünüm vererek yüzdeki çizgi ve kırışıklıkların azalmasına neden olduğu bildirilmiştir [7,8]. İki tip beyazlatıcı ajan vardır: lipofilik beyazlatıcı ajanlar ve hidrofilik ajanlar. Lipofilik beyazlatıcıların örnekleri kojik asit, salisilik asit, askorbilpalmitat, azelaik asit ve adapalendir. Hidrofilik beyazlatma maddelerinin örnekleri, glikolik asit(GA), askorbik asit (AA),arbutin(ART) ve magnezyum askorbil fosfat (MAP). Hidrofilik beyazlatıcı maddeler burada incelenir, çünkü polar grupları HPLC'de kullanılan C18 kolonuna zayıf bir afiniteye sahiptir ve bunları HPLC'de ayırmak zordur. Bu sorunu çözmek için bir iyon çifti yöntemi kullandık.
Bu hidrofiliklerin kimyasal yapıları ve maksimum konsantrasyonubeyazlatmaajanlar Tablo 1'de verilmiştir. Tayvan'da kozmetik ürünlerde kullanılan GA ve AA konsantrasyonunda herhangi bir sınırlama yoktur. Ancak ART, ağırlıkça 7'ye kadar kullanılabilir. yüzde ve MAP ağırlıkça 3'e kadar. yüzde .Kozmetik ürünlerde kullanılan GA konsantrasyonunda bir sınırlama olmamasına rağmen, ABD Gıda ve İlaç Dairesi tarafından bu beyazlatıcı ajanın ciddi yanıklara veya ciltte şişmeye neden olabileceği bildirilmiştir [9]. Genel olarak, ağırlıkça yaklaşık 30-40. GA'nın yüzdesi şu şekilde kullanılır:makyaj malzemelerigüzellik salonlarında kullanılmak üzere ve daha yüksek konsantrasyonda, 50-70wt. yüzde , hekimlerin kullanacağı kozmetik ürünlerde kullanılmaktadır [10].
Bu çalışmanın amacı, kozmetik ürünlerdeki beyazlatıcı maddelerin seviyesini doğru bir şekilde ölçmek için kantitatif analiz yöntemi geliştirmektir. Bu çalışma, kamu güvenliği açısından büyük önem taşımaktadır. Kozmetik formülasyonlardaki beyazlatıcıların tahminini açıklayan birçok yayın olmasına rağmen [11-16], aynı anda nicel analiz yöntemleri literatürde henüz rapor edilmemiştir. Bu çalışma, hidrofilik değerleri tespit edebilen ve aynı anda nicelleştirebilen analitik bir yöntemle ilgilidir.beyazlatmaajanlar.
hidrofilikbeyazlatmaajanlar sulu bir çözeltide her zaman kararlı değildir. Oksidasyona maruz kalırlar. AA'nın stabilitesi için birkaç çalışma rapor edilmiş olmasına rağmen [17-19], bu raporlardaki AA ortamı, hidrofilik beyazlatıcıların aynı anda belirlenmesi için HPLC için uygun değildir. Sonuçların doğruluğu için analiz sırasında hidrofilik beyazlatma ajanlarının stabil olduğundan emin olmak önemlidir.
2. Deneysel
2.1. Reaktifler ve standartlar
GA, AA, ART ve MAP ve reklam, Alfa Co. (Amerikan), AlfaCo'dan satın alındı. (Amerikan), Wako (Japonca) ve Lipo. Co. (Amerikan), sırasıyla. Metilparaben ve U-13, Induchem'den elde edilir. (İsviçre). Sitrik asit, tetrabutilamonyum hidroksit(TBAH), sorbitol, fosforik asit ve potasyumdihidrofosfat AldrichCo'dan satın alındı. (Amerikan). Tüm kimyasallar analitik reaktif derecesindeydi. Reklamkozmetikçeşitli üreticilerin ürünleri perakende mağazalardan ve yerel bir eczaneden satın alındı. Solventler ve su bir 0.45 mm membrandan süzüldü ve gazı alındı.
2.2. Enstrümantasyon
HPLC cihazı (Hitachi Co., Japonya)bir pompa (Model I-7100), bir UV detektörü (Model I-7420; değişken dalga boyu) ve bir enjeksiyon valfinin bulunduğu modüler bir kromatografik sistemden oluşuyordu. 25 ml'lik bir numune halkası ile (Model7725, Rheodyne, Cotati, ABD) eklenmiştir. Veri toplama ve işleme, SISC yazılımı (Tayvan) kullanılarak bir kişisel bilgisayar ile gerçekleştirildi. Numune enjeksiyonları, 25 ml'lik bir şırınga (Hamilton, İsviçre) ile gerçekleştirildi. 5 mm, 250 mm /4,60 mm ID A Paslanmaz çelik Mightysil RP-18GP kolonu kullanıldı.
2.3. kromatografik koşullar
Kromatografik analiz, tek kolonlu izokratik ters faz yöntemi ile gerçekleştirilmiştir. İyon eşleştirme yönteminde, mobil faz bir0 idi.{{10}}05 M potasyum dihidro fosfat tampon solüsyonu, üç kimyasal içerir: TBAH, metanol ve fosforik asit. Bu üç kimyasalın miktarı, HPLC spektrumunun ayrılması ve çözünürlüğü üzerinde büyük bir etkiye sahiptir. TBAH konsantrasyonu 1 ila 10 mM arasında değişmiştir; metanol 1 ila 10 hacim. yüzde . pH değerlerini 2.5 ila 5.0 arasında ayarlamak için tampon çözeltisine çeşitli miktarlarda fosforik asit ilave edildi. Test sonuçları, iyi bir çözünürlük için uygun bir mobil fazın seçilmesine izin verecektir. Tüm mobil fazlar, gözenek boyutu 0.45 mm olan bir Milliporefiltreden süzüldü ve kullanılmadan önce sonikasyonla gazı alındı. 1.1 ml/dk'lık bir akış hızı kullanıldı. Analitler, 220 veya 240 nm'de UV absorpsiyonu ile tespit edildi. Dört bileşenin kimliği, orijinal standartlarla kromatografi ile tayin edildi. Miktar tayini, harici standardizasyon yöntemi kullanılarak pikin entegrasyonu ile gerçekleştirilmiştir.
cistanche faydalarının-ninbeyazlatma etkili cilt
2.4. Kalibrasyon eğrisi
Ajanlar doğru bir şekilde tartılarak ve daha sonra suda çözülerek stok çözeltiler hazırlandı. Dört analitin beş çalışma solüsyonu, saf su ile {{0}} oranında stok solüsyonlarından taze olarak hazırlandı. Bu çalışma solüsyonlarının uygun seyreltilmesi, konsantrasyonların sırasıyla 8.0-36.0mg/ml ve 5.6 /451 mg/ml olduğu GA ve MAP haricinde 10/300 mg/ml konsantrasyonlar verdi. Kalibrasyon eğrileri, konsantrasyona karşı her bileşenin tepe alanlarının grafiği çizilerek oluşturulmuştur ve her bir kalibrasyon eğrisi için kesişme ve korelasyon katsayısı ile birlikte eğimin değerlerini vermiştir. Kalibrasyon eğrileri, dörtbeyazlatmadört ticari örnekteki ajanlarmakyaj malzemeleri.
2.5. Kurtarma çalışması
içeren bir örnek krembeyazlatmaajanlar kurtarma çalışmasında kontrol olarak kullanıldı. Bu kontrol kremine dört hidrofilik beyazlatma ajanı, GA, AA, ART ve MAP'nin çeşitli miktarları ilave edildi. Konsantrasyon Tablo 4'te verilmiştir. Hazırlanan numune kreminin her birinden yaklaşık 1 g bir cam şişeye tartıldı ve 30 ml damıtılmış su ilave edildi ve ardından şişe, 25 8C'de 15 dakika süreyle ultrasonik bir banyoya daldırıldı. Nihai çözelti, damıtılmış su ile 100 ml'lik bir hacme getirildi ve daha sonra süzüldü ve yaklaşık 3 dakika boyunca N2 ile oksijeni giderildi ve daha sonra bir Bakalit vidalı kapak ve bir silikon halka ile kapatıldı.
3. Sonuçlar ve tartışma
3.1. Kromatografi ve çözünürlük
dörtlü yapıbeyazlatmaajanlar, GA,AA, ART ve MAP, Tablo 1'de gösterilmiştir. Bunların hepsi çok polar moleküllerdir. Polar analitler için metanol veya asetonitril genellikle HPLC'nin C18 kolon veya siyano-propil kolonundaki mobil fazın bir bileşeni olarak kullanılır. Bununla birlikte, metanol veya asetonitril kullanıldığında bu polar analitlerin birlikte elüsyonu bulundu. Bu nedenle, bu analitleri ayırmak imkansızdır. Birlikte elüsyonun bu problemini çözmek için, kabul edilen bir alıkonma süresi elde etmek için polar karakterlerini azaltmak için iyon eşleştirme yöntemi kullanıldı. Ek olarak, dört analitin eşzamanlı analizi için uygun bir ayırma koşulunun bulunması önemlidir.kozmetikÜrün:% s. Optimum analitik koşulu elde etmek için burada mobil fazın etkisi ve pH değerleri dikkate alınır. Elde edilen sonuçlar Şekil 1'de gösterilmiştir. Mobil fazdaki TBAH konsantrasyonu 1 ila 10 mM arasında değişmiştir. Hesaplanan kapasite faktörü, TBAH konsantrasyonu arttıkça azalır (bkz. Şekil 1(a)). Kapasite faktörünün değerlerindeki bu düşüş MAP için keskin fakat GA, ART ve AA için çok hafiftir. MAP ile diğerleri arasındaki kapasite faktörü açısından önemli fark, MAP'ın güçlü iyonik karakterinden kaynaklanabilir. Kapasite faktöründeki daha küçük bir fark, HPLC'de makul bir alıkonma süresi verir. Bu nedenle, mobil faz için TBAH konsantrasyonu 10 mM olarak seçilmiştir. Metanol miktarının kapasite faktörü üzerindeki etkisi Şekil 1(b)'de gösterilmiştir. TBAH için olanlara benzer sonuçlar bulundu. Daha yüksek metanol konsantrasyonu, kapasite faktöründe daha küçük bir fark ve HPLC'de daha kısa alıkonma süresi. Bu durumda hacim olarak metanolün yüzde onu seçilmiştir.
pH değerlerini 2.5 ila 5 arasında değiştirmek için yukarıda bahsedilen tampon çözeltisine çeşitli miktarlarda fosforik asit ilave edildi.0. pH değerinde 5.0, kromatograf sonuçlarında geniş ve çoklu pikler gözlendi. GA, AA ve ART için kromatograf pikleri birbiriyle örtüşüyor. Önceki sonuçların aksine, MAP için pH değerlerinin artmasıyla kapasite faktörü artar (bkz. Şekil 1(c)). pH değerlerinden dolayı kapasite faktöründeki değişim GA, AA ve ART için çok küçüktür. HPLC'de iyi bir çözünürlük için kapasite faktörünün değerlerinde yeterli farklılıkları veren bir pH değeri seçmek önemlidir. Bu nedenlerle, 2.5'e eşit bir pH değeri seçilmiştir. Sonuç olarak, HPLC analizi için uygun bir mobil faz, 10 mM TBAH, 10 hacim içeren bir 0.005 M potasyumdihidrofosfat tampon çözeltisidir. metanol ve fosforik asit yüzdesi. Tampon çözeltisinin pH değerini 2.5'e ayarlamak için fosforik asit kullanıldı.
3.2. UV dedektörü için dalga boyu tayini
Bunların UV spektrumubeyazlatmamobil fazda çözünen ajanlar bir UV spektrofotometresi kullanılarak elde edildi. Maksimum absorpsiyon tepe noktası GA için 220 nm'de, AA için 243 nm'de, ART için 227 nm'de ve MAP için 238 nm'dedir. ve ART (bakınız Şekil 2(b))). 220 nm'deyken, HPLCkromatografta dört beyazlatma maddesinin tamamı için net tepe noktaları gösterilmiştir (bakınız Şekil 2(a)). Tüm analitler için daha iyi bir duyarlılık elde etmek için, dedektörün dalga boyu, dört analitin tespiti ve nicelenmesi için 220 nm'ye ayarlandı. Prosedür, oda sıcaklığında (yaklaşık 26 8C) 12.1 dakikalık bir analitik çalışma süresi ile nispeten hızlıdır.
3.3. Beyazlatma ajanları için stabilite çalışması
AA, bir sulu içinde çözüldüğünde dehidroaskorbik aside (DHA) ayrışır. Bu nedenle, sonuçların doğruluğu için analiz sırasında teaskobik asidin stabil tutulması önemlidir. Fernandes et al. bozunmayı etkileyen başlıca faktörlerin oksijen ve sıcaklık olduğunu bildirmişlerdir [19]. Çalışmalarında, 1 saatte bozunma önemliydi ve solüsyonun pH değerlerinin bozunma üzerindeki etkisinden sadece pH 50 ve 5.6'da bahsedildi. AA, N2, pH değeri ve sıcaklık ile işlenmiş veya işlenmemiş çözelti gibi çeşitli farklı çevresel koşullarda. Önemli bir değişiklik için geçen süre ne kadar uzunsa, askorbik o kadar kararlıdır.
Tablo 3'te özetlenen sonuçlar, stabilite ile N2 ile muamele edilmiş veya muamele edilmemiş çözelti arasında güçlü bir korelasyon gösterir. AA ile işlenmemiş çözeltinin kaybı, işlenmiş çözeltiden daha hızlıdır. Tablo 3'te gösterildiği gibi, 10 8C ve pH2'de, AA'nın yüzde 10 bozunması için gereken süre, işlem yapılmadığında yaklaşık 10 saat ve işlenmiş çözelti için yaklaşık 48 saatti. Bunun nedeni oksidasyon için çok daha az oksijen bulunması olabilir. Oksijen varlığında ve 25 8C'de, pH 6,9 ve 2,0 için 10 saat sonra yüzde 8,7 ve yüzde 71,2 AA seviyesinin gözlendiği kaydedilmiştir. Bu sonuç pH 6.9'da daha yüksek miktarda ayrışmış AA ile açıklanabilir ve bu form ayrışmamış formdan daha az stabil olmalıdır [19]. Aksine, oksijen yokluğunda ve 25 veya 10 8C'de, sulu AA çözeltisi pH 6.9'da çok daha kararlıdır. AA'nın daha kararlı olmasının nedeni henüz daha fazla araştırılmamıştır. Çözelti sıcaklığıyla ilişkisi, işlenmemiş çözeltilerde, AA, daha yüksek bir sıcaklıkta (25 8C) daha düşük bir sıcaklıkta (10 8C) olduğundan daha az kararlıdır. Bununla birlikte, işlenmiş çözeltiler için, AA'nın sulu çözeltisi kararlıdır ve sıcaklıktan etkilenmez.
3.4. Doğrusallık için doğrulama ve kesinlik için tahlil
Tarif edilen kromatografik koşullar kullanılarak, bu analitler ve diğer bileşikler arasında makul bir çözünürlük elde edildi.kozmetikürün. Yöntem, doğrusallık ve kesinlik için doğrulandı. Her biri için kalibrasyon eğrilerini hesaplamak için doğrusal eğri uydurma uygulandı.beyazlatmaajan. Sonuçlar Tablo 4'te verilmiştir. Aralığı 8 ila 36 mg/ml olan GA hariç tüm standartlar için 5.6 ila 451 mg/ml aralığında mükemmel doğrusallık elde edilmiştir. Korelasyon katsayısı 0 aralığındadır. .9974 ila 0.9997. Yöntemin kesinliği, aynı konsantrasyon aralığında dört hidrofilik beyazlatıcı içeren testlerin bağıl standart sapması (RSD, n{{10}}) olarak hesaplandı. RSD aralığının yüzde 0,3 ila 6,43 arasında olduğu bulundu.
3.5. Kurtarma
içermeyen bir krembeyazlatmaajanlar kurtarma çalışmasında kontrol olarak kullanıldı. Bu kontrol kremine az miktarda dört beyazlatıcı madde eklenmiştir. HPLC kromatografisi, bir kontrol kremi için tespit edilen hiçbir UV absorpsiyon zirvesi olmadığını (bakınız Şekil 3(a)) ve bu dört beyazlatıcı ajanı içeren bir numune kremi için dört absorpsiyon zirvesi bulunduğunu gösterir. İncirde. 3(b), zirve 1, GA için UV absorpsiyon zirvesidir; AA için tepe 2; ART için zirve 3; 4 forMAP. Her beyazlatıcı ajanın kendi tutma süresi vardır. Bu karakter daha sonra bu beyazlatıcı ajanları tanımlamak için kullanılacaktır. Sonuçlar Tablo 2'de özetlenmiştir. Hem düşük hem de yüksek konsantrasyonlarda dört ajan için yüzde 94-100 geri kazanım aralığı elde edilmiştir. Üç tekrardan hesaplanan varyans katsayılarının tümü yüzde 6.9'dan daha azdı. Deneysel formülasyondan ekstrakte edilen dört analitin HPLC kromatogramları Şekil 3'te gösterildi ve hiçbir girişim gözlemlenmedi.
sans bitkisisahip olmakyaşlanma karşıtı, antioksidan, vecilt bakımı etkileri
3.6. Başvuru
Dört ticari olarak temin edilebilirkozmetikürünler analiz edildi. Bunlarbeyazlatmasırasıyla krem (kozmetik numarası 1), C20 beyazlatma jeli (2 kozmetik numarası), esans losyonu (kozmetik numarası 3) ve peel losyonu (kozmetik numarası 4). Bu kozmetikler, bu çalışmada açıklanan prosedür kullanılarak test edildi. Bu dört kozmetiğin kromatografları Şekil 4(a/d)'de verilmiştir. Kromatograf 4(a), pik 4'lük küçük bir absorpsiyon piki verir, yani 1 numaralı kozmetik MAP içerir. Kromatograf 4 (b), 2 numaralı kozmetik numaranın AA içerdiğinin bir göstergesi olan bir tepe noktası 2 sergiler. Kromatograf 4 (c) ve (d)'den, ART kozmetik numarası 3'te ve hem GA hem de AA kozmetik numarası 4'te tanımlandı. Kromatograf 4 (d)'de işaretsiz bir tepe noktası var. Bu UV absorpsiyon piki, pik 3'ten daha uzun, ancak pik 4'ten çok daha kısa bir tutma süresine sahiptir. Bu işaretlenmemiş absorpsiyon zirvesinin, beyazlatıcı maddelerden değil, kozmetik numarası 4'teki diğer bileşenlerden kaynaklandığı açıktır. piklerin harici standardizasyon yöntemi kullanılarak kromatografiye entegrasyonu. Bu dördünde beyazlatıcı maddelerin seviyesimakyaj malzemeleriTablo 5'te verilmiştir. Elde edilen sonuçların doğruluğunu teyit ettiği ve etiketli iddia ile uyumlu olduğu belirtilmektedir.
4. Sonuç
Geliştirilen HPLC testi, hidrofilik maddenin eş zamanlı analizi için basit ve hızlıdır.beyazlatmaajanlar. HPLC için uygun bir mobil faz seçmek için bir kapasite faktörü kullanıldı. Makul bir tutma süresi için kapasite faktöründe daha küçük bir fark veren bir koşul seçmemiz gerekiyor. HPLC kromatografisinde iyi bir çözünürlük için, seçilen koşul için kapasite faktörünün değerlerinde yeterli farklılıklar vermesi esastır. Sonuç olarak, HPLC analizi için uygun bir mobil faz, 10 mM TBAH, 10 hacim içeren bir 0.005 Mpotasyum dihidrofosfat tampon çözeltisidir. metanol ve fosforik asit yüzdesi. Fosforik asit, tampon çözeltisinin pH değerini 2.5'e ayarlamak için kullanıldı. için daha iyi algılama dalga boyubeyazlatmaajanlar, HPLC için 220 nm'dedir. Ek olarak, analitik prosedürde AA'yı stabilize etmek için uygun bir yöntem elde edilmiştir. Hangi sonuçların doğruluğu için önemlidir.
cistanche tübülozadilimler
