Birden Fazla Nefrona Özgü Hücrede Aktin Hücre İskeletinin Eşzamanlı Stabilizasyonu Böbreği Çeşitli Yaralanmalardan Korur Ⅱ

Dinamin yoluyla kortikal aktinin farmakolojik stabilizasyonu AKI'yi iyileştirir.

Aktomiyosin korteksinin sökülmesine bağlı olarak böbrek tübüllerinin fırça sınırının kaybı AKI'nin baskın bir özelliğidir.2,29. Yaygın olarak kullanılan ve sıklıkla AKI'ye yol açan bir anti-kanser ilacı sisplatindir30. Böbrek hücrelerinde sisplatin hasarının önemli bir sonucu reaktif oksijen türleri (ROS) seviyesindeki artıştır.31. Dahası, artan ROS seviyeleri aktin dinamiğinde bir azalmaya yol açar32mitokondriyal membranın bozulmasına neden olan; bu daha da ileriROS'u şiddetlendirirüretme33,34. Böylece dinaminin farmakolojik uyarımının olup olmadığını inceledik.'çapraz bağlanma yeteneği çok iyidirfiSisplatin kaynaklı hasara karşı etkili.

35'ten önce görüldüğü gibi sisplatin, MDCK hücre yüksekliğini, mikrovillus sayısını ve uzunluğunu azalttı ve endositozu etkilemeden hücre polaritesini etkiledi (Tablo 1, Ek Şekil 7a-d). TEM analizi, bu fenotiplerin sisplatin kaynaklı F-aktin kaybına atfedilebileceğini öne sürdü (Şekil 4a). Sisplatinden önce Bis-T- 23'nin eklenmesi, aktomiyosin korteksini sisplatin kaynaklı hasara karşı stabilize ederek etkilerini ortadan kaldırdı (Şekil 4a-c). Domuzlarda da benzer fenotipler gözlendiböbrek proksimal tübülü(LLC-PK1) hücreleri (Ek Şekil 8). Bu veriler birlikte, Bis-T-23'nin aktomiyosin korteksini sisplatin kaynaklı parçalanmaya karşı koruduğuna dair kanıt sağlar.

Tamamlayıcı, fizyolojik olarak alakalı bir yaklaşımda36, Bis T-23, sisplatinin, bir transwell kültür sistemi kullanılarak canlı epitelyal tek tabaka boyunca ölçülen transepitelyal elektrik direncini (TER) azaltma yeteneğini etkisiz hale getirdi (Şekil 4d). TER, hücre kültüründeki sıkı bağlantıların bütünlüğünü ölçtüğü için, bu veriler ayrıca Bis-T-23'nin yaralanma durumunda epitelyal hücre bütünlüğü üzerindeki yararlı etkisini ortaya koymaktadır.

CKD CISTANCHE'İ ALMAK İÇİN BURAYA TIKLAYIN

Değişen aktin dinamikleri ROS üretimini daha da artırabildiğinden, daha sonra aktin ağının Bis-T-23 ile stabilizasyonunun sisplatinle zarar görmüş hücrelerde oksidatif stresi giderip gideremeyeceğini inceledik. Yakın zamanda geliştirilen floresan sensörümüz TFCH37'yi kullanarak, yüksek seviyelerde ROS tarafından üretilen oksidatif hasarın stabil bir biyolojik belirteci olan hücresel biyomolekül karbonillerin durumunu değerlendirmeyi seçtik (Şekil 4e). Aslında sisplatinden önce Bis-T-23'nin eklenmesi, karbonilasyonda sisplatin kaynaklı artışı kısmen azaltmıştır (Şekil 4f). Bis-T-23 ve aktin depolimerizatörü LatA ile muameleden sonra karbonilasyonla ilgili benzer eğilimler gözlemlendi (Ek Şekil 9a). Bu veriler birlikte, aktin ağlarının stabilizasyonunun, oksidatif stres ile yaralı hücrelerdeki aktin durumu arasındaki geri bildirim döngüsünü ortadan kaldırabileceğine dair kanıt sağlar.

Ex vivo sıçanböbrek modelidaha sonra fırça kenarındaki astomiyosin korteksinin BisT-23-tabanlı korunmasını görselleştirmek için kullanıldı. Sisplatin, proksimal tübüllerin fırça sınırında önemli bir F-aktin boyama kaybına neden oldu (Şekil 4g). Şiddetli iskemi-reperfüzyon hasarının başlangıcında fırça sınırında benzer bir F-aktin kaybı yakın zamanda intraviral görüntüleme kullanılarak gözlemlenmiştir38. Bis-T-23 ile ön tedavi, böbrek tübüllerinin fırçamsı kenarında sisplatin kaynaklı F-aktin kaybını kısmen korumuştur (Şekil 4g), ayrıca Bis-T-23'nin aktomiyosin üzerindeki etkisini göstermektedir Böbrek epitel hücrelerinin apikal membranındaki korteks. Hücre kültüründe görüldüğü gibi Bis-T-23, doku dilimlerindeki endositozu etkilemedi (Ek Şekil 9b), ayrıca Bis-T-23'nin böbrek endositozunda dinaminin rolünü etkilemediğini gösterdi. proksimal tübüller.

Son olarak, sisplatin kaynaklı AKI39'un fare modelinde Bis-T-23'nin reno-koruyucu etkisini inceledik. BL6 farelerine, sisplatin enjeksiyonundan 24 saat önce başlanarak günde bir kez Bis-T-23 veya DMSO enjekte edildi. Daha önce görüldüğü gibi40, serum kreatinin (SCr) ve kan idrar nitrojeni (BUN) seviyeleri sisplatin enjeksiyonundan 3 gün sonra önemli ölçüde arttı (Şekil 4h). DMSO, oksidan temizleme özelliğinden dolayı42 daha önce görüldüğü gibi hafif bir reno-koruma sergilemiştir42. Günlük Bis-T-23 uygulaması, reno koruması açısından DMSO'dan daha iyi performans gösterdi (Şekil 4h). Sisplatinin sistemik toksisitesi nedeniyle tüm hayvanlar 5. günde kurban edildiğinden (Ek Şekil 9c), Bis-T-23'nin uzun vadeli faydalarını inceleyemedik.Böbrek fonksiyonu. Bu çalışmalar birlikte, apikal membrandaki aktomiyosin korteksinin stabilizasyonu yoluyla renal hücre bütünlüğünün korunmasının sisplatin kaynaklı nefrotoksisiteyi önlediğini ikna edici bir şekilde göstermektedir.

Aktin ağlarının stabilizasyonu, iyoheksol kaynaklı AKI'yi ortadan kaldırır.

Kontrast boya kaynaklı AKI'nin kesin mekanizması tam olarak çözülmemiş olsa da, hastaneden edinilen AKI'nin başlıca nedeni olmaya devam etmektedir43. Fizyolojik olarak kontrast boya ozmotik yükü arttırır, renal kan akışını azaltır ve renal arteriyel daralmaya neden olur44. Hücresel düzeyde ROS, boya kaynaklı AKI45'in aksine kritik bir oyuncudur. ROS'un aktin hücre iskeletini düzenlemedeki rolü ve aktomiyosin korteksinin stabilizasyonunun oksidatif hasarı önleyebileceği hipotezimiz göz önüne alındığında, Bis-T-23'nin kontrast boya, iyoheksol kaynaklı AKI46 üzerindeki etkilerini inceledik.

İoheksolün hücresel etkileri insanda incelendiböbrek proksimal tübüler(HK-2) hücreleri. Sisplatin için görüldüğü gibi, iyoheksol, F-aktin kaybına neden oldu; buna, yüksek ROS seviyelerinin geri döndürülemez bir sonucu olan karbonile edilmiş moleküllerin seviyesinde önemli bir artış eşlik etti (Şekil 5a, b). Bis-T-23 ile ön tedavi ile her iki fenotip kısmen etkisiz hale getirildi, bu da aktin hücre iskeletinin durumu ile bu hücrelerdeki oksidatif stres düzeyi arasındaki sinerjiyi daha da ortaya koydu. Hücre bazlı analizleri tamamlayıcı olarak Bis T-23'nin günlük uygulanması, kontrast boya uygulanan BL6 farelerinde Scr ve BUN seviyelerine dayalı olarak böbrek fonksiyonunu korudu (Şekil 5c). Kontrast boyayla birlikte Bis-T-23 alan hayvanlarda hayatta kalma oranının artmasıyla birlikte çok beğenilen bir tepki de gözlendi (Şekil 5d).

Yakın zamanda, çözünür ürokinaz tipi plazminojen aktivatör reseptörünün (suPAR) yüksek serum seviyelerinin, böbreği iyoheksol kaynaklı AKI47'ye karşı duyarlı hale getirdiğini gösterdik. Daha sonra, tübüler hücrelerin dinamin aracılı korumasının, yağ dokusundan (suPAR-Tg)48 yüksek seviyelerde suPAR ifade eden BL6 farelerinde de reno-koruma sağlayıp sağlayamayacağını araştırdık. Beklendiği gibi47, suPAR-Tg fareleri, ioheksol enjeksiyonundan 24-48 saat sonra böbrek fonksiyonunda bir azalma sergiledi (Şekil 5e). Buna karşılık, günlük dozda Bis-T-23 alan hayvanlardaönemli ölçüde daha iyi böbrek fonksiyonukontrast boya sorununa rağmen (Şekil 5e). Özellikle Bis-T-23 alan fare kohortunda ölüm oranında önemli bir azalma gözlendi (Şekil 5f). Beklendiği gibi, Bis-T-23 ile eş zamanlı olarak tedavi edilen HK-2 hücrelerindeki oksidatif hasarın boyutu (biyomolekül karbonilasyonu), yalnızca suPAR ve Iohexol'ün bir kombinasyonunu alan hücrelere göre önemli ölçüde daha düşüktü (Ek Şekil 1). 9d).

Şekil 4 Dinamin agonisti, apikal membrandaki aktomiyosin korteksini stabilize ederek böbrek tübüllerini sisplatin kaynaklı hasardan korur. 1 saat önce DMSO (0.1%) veya Bis-T-23 (5 µM, 0.1% DMSO) ile muamele edilmiş MDCK hücrelerindeki lamellipodyumun PR-EM görüntüsü 23 saat boyunca sisplatin (35 uM) eklenmesi. Aktomiyozin korteksi sarı renkteydi. b (a)'daki kutulu bölgelerin daha yüksek büyütme görüntüleri. Farklı kalınlık seviyeleri renk kodludur. Üst ve alt paneller sırasıyla daha kısa filamanlardan ve daha uzun filamanlardan oluşan ağları göstermektedir. c Ön kenardaki aktin filamentlerinin yoğunluğunu gösteren grafik ((a)'daki sarı kutu; 18–20 alan sayılır). d Sisplatin (50 µM) ve Bis-T-23 (30 µM) konsantrasyonları (12) hariç (a)'da belirtildiği gibi tedavi edilen canlı MDCK hücrelerindeki göreceli transepitelyal elektrik direncini (%) gösteren çubuk grafik örnek başına okumalar). Veriler ortalama ± SEM (***P <0,001, ****P <0,0001, eşleştirilmemiş iki kuyruklu t-testi) olarak çizilmiştir. ns, anlamlı değil. e TFCH tahlili kullanılarak oksidatif stres kaynaklı karbonilasyon tespitinin şematik gösterimi. f TFCH tarafından belirlenen biyomolekül karbonil seviyelerini gösteren görüntüler. Hücreler, sisplatin konsantrasyonu (5 uM) dışında (a)'da tarif edildiği gibi işlendi. Ölçek çubuğu, 20 µm. Hücre başına biyomolekül karbonilleriyle ilişkili TFCH floresansının göreceli seviyelerini gösteren grafik (veri noktaları (n)=83-116; her nokta 4-9 hücrenin ortalama yoğunluğunu temsil eder). g Sıçanböbrek dilimlerianti-aktin antikoru ile boyandı.Böbrek dilimleri8 saat boyunca sisplatin (200 uM) veya tampon eklenmeden önce tampon, DMSO (%0.1%) veya Bis-T-23 (30 uM) içinde 1 saat inkübe edildi. Beyaz kareli bölgeler genişletildi. Ölçek çubukları, 40 µm. Tübül başına fırça sınırındaki F-aktin yoğunluğunu gösteren grafik (100-236). C, f, g için veriler ortalama ± SD olarak çizilmiştir (P değerleri Şekilde, Tukey çoklu karşılaştırma testi ile tek yönlü ANOVA'da rapor edilmiştir). h Kan üre nitrojeni (BUN) veya serum kreatinin (SCr) düzeyine göre belirlenen sisplatin tarafından indüklenen AKI'yi gösteren dağılım nokta grafikleri. Hayvanlara ya DMSO (%1) ya da Bis-T-23 (20 mg/kg) (SCr için koşul başına n=12; BUN için koşul başına n=17) enjekte edildi. sisplatin (15 mg/kg) enjeksiyonundan 24 saat önce başlayarak günde bir kez. Ölçümler belirtilen zamanlarda yapıldı. Veriler ortalama ± SEM olarak çizilmiştir (P değerleri Şekilde rapor edilmiştir, eşleştirilmemiş iki kuyruklu t-testi). ns, anlamlı değil.

Sisplatin ve ioheksolün neden olduğu ROS aracılı hücresel hasarın aksine suPAR, kısmen oksijen tüketim oranını (OCR)47 artırarak tübüler hücre hasarını teşvik eder. suPAR transgenik farelerinde Bis-T-23'nin fizyolojik etkisini hücre metabolizması üzerindeki etkisine bağlamak için, aktin ağının dinamin aracılığıyla stabilizasyonunun suPAR kaynaklı OCR'yi azaltıp azaltmadığını inceledik. OCR, bazal koşullar altında HK-2 hücrelerinde gerçek zamanlı olarak ve bir Seahorse XFe24 hücre dışı akış analizörü kullanılarak mitokondriyal inhibitörlerin sıralı enjeksiyonlarına yanıt olarak ölçüldü (Şekil 5g). Bir anti-suPAR antikoru veya Bis-T-23'nin eklenmesi, mitokondriyal bazal solunum, ATP üretimi, maksimum solunum hızı ve yedek solunum kapasitesinde suPAR kaynaklı artışları iyileştirdi (Şekil 5f). Bu veriler, Bis-T-23'nin yaralanma durumunda hücre metabolizması üzerindeki olumlu etkilerini göstermektedir. Bu çalışmalar birlikte, birden fazla AKI tipine karşı koruma sağlamanın ve dolayısıyla kemirgen modellerinde dinamin vekil olarak hayatta kalma oranının iyileştirilmesinin fizibilitesini daha da doğrulamaktadır.

Aktin'in eş zamanlı stabilizasyonufarklı böbrek hücrelerinefron hasarını hafifletir. Daha önce dinamin kaynaklı aktin polimerizasyonunun farmakolojik aktivasyonunun, CKD12'nin çeşitli fare modellerinde podositlerin yapısını ve fonksiyonunu restore ettiğini göstermiştik. Bu çalışmada dinaminin, aktin hücre iskeletini çapraz bağlayarak akut yaralanma durumunda tübüler hücrelerin bütünlüğünü koruma yeteneğini gösterdik. Bu içgörüler birlikte, dinamini farmasötik olarak hedefleyerek hem glomerüler hem de tübüler hasara aynı anda karşı koyma olasılığını tasavvur etmemize yol açtı.

Bu hipotezi test etmek için Bis-T-23'nin kayıplarını geciktirip geciktiremeyeceğini inceledik.Böbrek fonksiyonuAlport sendromunun (AS) fare modelinde. AS kalıtsal bir formdurilerleyici böbrek yetmezliğiGlomerüler bazal membranın (GBM) önemli bir bileşeni olan tip IV kollajeni birlikte kodlayan COL4A3, COL4A4 veya COL4A5 genlerindeki mutasyonlar nedeniyle ortaya çıkar49,50. AS'deki birincil defekt ayak çıkıntısının silinmesi ve proteinüri olmasına rağmen.

Bu hipotezi test etmek için Bis-T-23'nin kayıplarını geciktirip geciktiremeyeceğini inceledik.Böbrek fonksiyonuAlport sendromunun (AS) fare modelinde. AS kalıtsal bir formdurilerleyici böbrek yetmezliğiGlomerüler bazal membranın (GBM) önemli bir bileşeni olan tip IV kollajeni birlikte kodlayan COL4A3, COL4A4 veya COL4A5 genlerindeki mutasyonlar nedeniyle ortaya çıkar49,50. AS'deki birincil defekt ayak çıkıntısının silinmesi ve proteinüri olmasına rağmen.

Tartışma Doğrudan dinamin-aktin etkileşimlerinin10 tanımlanmasından bu yana, giderek artan sayıda kanıt, bu GTPaz'ın hücredeki aktin hücre iskeletinin ana düzenleyicilerinden biri olduğunu ortaya koyuyor. Kanonik ABP'lerin aksine, dinaminin aktini etkileme mekanizmaları hem çok yönlü hem de hücre tipine özgüdür. Bunun nedeni, dinaminin çoklu oligomerizasyon durumlarının birleşimi ve F-aktin'i iki farklı bağlanma bölgesi ile bağlama yeteneğidir. C-terminal PRD'si aracılığıyla dinamin halkaları ve helislerle F-aktin etkileşimleri, miyoblast füzyonu28 sırasında filopodia56 ve membran çıkıntılarının oluşumunda rol oynayan aktin demetleri ve hiper demetlerle sonuçlanır. Dinaminin Orta alanı ile F-aktin arasındaki etkileşimlerin, lamellipodia26'daki aktin ağlarının düzenlenmesinde, postsinaptik hücre iskeleti organizasyonunda ve nöromüsküler kavşak gelişiminde27, miyoblast füzyonu sırasında endozomlarda aktin demetinin sertliğinde25 ve podosit ayak süreçlerinin oluşumunda12 rol oynadığı gösterilmiştir. Ayak süreçlerinin oluşumu dinaminle uyarılan aktin polimerizasyonu tarafından yönlendirilirken, bu çalışma dinaminin bu diğer aktinle yönlendirilen süreçleri etkileyen moleküler mekanizmanın kısmen F-aktini dallanmış ağlara çapraz bağlama yeteneğinden kaynaklanabileceğini öne sürüyor . Mevcut çalışmamız, dinamine bağımlı ağ oluşumunun rolünü, polarize epitel hücrelerinin apikal membranında aktomiyosin korteksinin oluşumunu ve hücre sertliğinin oluşturulmasını içerecek şekilde genişletmektedir.

Tartışma Doğrudan dinamin-aktin etkileşimlerinin10 tanımlanmasından bu yana, giderek artan sayıda kanıt, bu GTPaz'ın hücredeki aktin hücre iskeletinin ana düzenleyicilerinden biri olduğunu ortaya koyuyor. Kanonik ABP'lerin aksine, dinaminin aktini etkileme mekanizmaları hem çok yönlü hem de hücre tipine özgüdür. Bunun nedeni, dinaminin çoklu oligomerizasyon durumlarının birleşimi ve F-aktin'i iki farklı bağlanma bölgesi ile bağlama yeteneğidir. C-terminal PRD'si aracılığıyla dinamin halkaları ve helislerle F-aktin etkileşimleri, miyoblast füzyonu28 sırasında filopodia56 ve membran çıkıntılarının oluşumunda rol oynayan aktin demetleri ve hiper demetlerle sonuçlanır. Dinaminin Orta alanı ile F-aktin arasındaki etkileşimlerin, lamellipodia26'daki aktin ağlarının düzenlenmesinde, postsinaptik hücre iskeleti organizasyonunda ve nöromüsküler kavşak gelişiminde27, miyoblast füzyonu sırasında endozomlarda aktin demetinin sertliğinde25 ve podosit ayak süreçlerinin oluşumunda12 rol oynadığı gösterilmiştir. Ayak süreçlerinin oluşumu dinaminle uyarılan aktin polimerizasyonu tarafından yönlendirilirken, bu çalışma dinaminin bu diğer aktinle yönlendirilen süreçleri etkileyen moleküler mekanizmanın kısmen F-aktini dallanmış ağlara çapraz bağlama yeteneğinden kaynaklanabileceğini öne sürüyor . Mevcut çalışmamız, dinamine bağımlı ağ oluşumunun rolünü, polarize epitel hücrelerinin apikal membranında aktomiyosin korteksinin oluşumunu ve hücre sertliğinin oluşturulmasını içerecek şekilde genişletmektedir.

Şurası kesin kiCKD ve AKImekanik olarak farklı olsa da, AKI ile yakından bağlantılıdır ve AKI, KBH gelişimi ve ilerlemesi için bir risk faktörü olarak kabul edilmektedir 66. Şu an itibariyle AKI'ye karşı mücadele edilemez67. Bu, özellikle hastaneye yatırılan COVID-19 hastalarında ve yüksek suPAR plazma seviyesinin endişe verici oranlarda AKI geliştirdiği mevcut koronavirüs hastalığı 2019 (COVID-19) salgını göz önüne alındığında anlamlıdır. Yüksek suPAR seviyeleri hem AKI47 hem de CKD69'a bağlanmıştır ve bu ikisi arasındaki moleküler bağlantıyı daha da güçlendirmektedir.farklı böbrek hastalıkları. Bu nedenle, birden fazla hücre tipi üzerinde meydana gelen bir dizi böbrek hasarına karşı koruma sağlayabilecek terapötiklerin geliştirilmesi giderek daha önemli hale gelmektedir70. Burada, hem podositlere hem de tübüler hücrelere zarar veren AS'nin genetik modelinde bir dinamin agonisti'nin reno-koruyucu etkisini rapor ediyoruz. Çalışmamız, nefron içindeki birden fazla hücre tipinde aktin ağıyla etkileşime giren ve sayısız hücre tipini tedavi eden yeni terapötiklerin geliştirilmesi için kapsamlı bir yaklaşım oluşturmaktadır.böbrek hastalıklarıYaralanmanın yeri ne olursa olsun.

Yöntemler Hücre kültürü. MDCK (Madin-Darby köpek böbreği) hücreleri (ATCC CCL-34) ve fare iç medüller toplama kanalı (mIMCD-3) hücreleri (ATCC CRL-2123), DMEM/F12'de (ThermoFisher) büyütüldü Bilimsel) %10 fetal sığır serumu (FBS) ve 1X Antibiyotik-Antimikotik (penisilin, streptomisin ve Amfoterisin B; Gibco) içerir. LLC-PK1 (Lilly Laboratories Hücre-Domuz Böbrek 1) hücreleri (ATCC CL- 101), 4,5 g/L glikoz, L-glutamin, sodyum piruvat (Corning), %10 FBS ve 1X Antibiyotik içeren DMEM içerisinde büyütüldü -Antimikotik. MDCK ve LLC-PK1 hücreleri, deneylere başlamadan önce sırasıyla ~24 saat ve ~72 saat boyunca büyütüldü. Hong Kong-2 (İnsan Böbreği 2) proksimal tübüler hücreler (ATCC CRL-2190), biyoenerjetik deneyler için kullanıldığında %10 FBS, 100 U/ml penisilin ve 100 ug/ml streptomisin içeren DMEM/Ham'ın F12 ortamında (Corning) kültürlendi. Aktin hücre iskeletinin ve hücresel karbonilasyonun durumunu analiz etmek için HK-2 hücreleri, %10 FBS, 1X Antibiyotik-Antimikotik ve 1X ITS (insülin, transferrin ve sodyum selenit) sıvı ortam takviyesi (Sigma-Aldrich). Dinamin 2 (Dyn2) yıkma hücre hattını (mIMCD Dyn2KD) oluşturmak için hücrelere, polibren içeren tam ortamda DNM2 genini (5′CGGCCTAGTGGACATGACAATGAACTCGAGTTCATTGTCATGTC CACTAGGTTTTTG3′)10 kodlayan shRNA taşıyan lentivirüsler veya şifrelenmiş shRNA (Sigma-Aldrich) ile enfekte edildi (8) µg/ml). 24 saat sonra ortam, stabil transfektanları seçmek için günaşırı puromisin içeren ortamla değiştirildi. Dyn2'nin yıkılmasının boyutu western blot ile değerlendirildi. Tüm hücre çizgileri, kolajen kaplı cam lamellerde büyütüldü.

Şekil 6 Dinaminin farmakolojik aktivasyonu, eş zamanlı olarak nefronun iki farklı hücresindeki aktin hücre iskeletini hedef alır. Col4a3−/− farelerine 42 günlükken (0. Gün) günde bir kez DMSO (%1) veya Bis-T-23 (20 mg/kg) enjekte edildi. Eşit sayıda DMSO veya Bis-T-23 ile tedavi edilen fareler (ACR için n=10; BUN için n=8) kullanıldı. Dağılım nokta grafiği proteinüri düzeyini (albümin/kreatinin oranı, ACR) veböbrek hasarıBUN düzeyine göre belirlenir. Hata çubukları, ortalama ± SD (P değerleri Şekilde rapor edilmiştir, eşleştirilmemiş iki kuyruklu t-testi). b İki tedavi grubunun hayatta kalma eğrilerini analiz etmek için Log-Rank (Mantel-cox) testi yapıldı. c (a)'da açıklanan Col4a3 -/− farelerden elde edilen numunelerde periyodik asit-Schiff (PAS) ve H&E boyama ile belirlenen böbreğin temsili histopatolojisi. Hayvanlar 62 günlüktü (Bis-T-23 veya DMSO tedavisinin 20. günü). Col4a3 -/− DMSO ile tedavi edilen hayvanlarda glomerülopati, PAS boyamasında (siyah ok) gözlemlenen mesangial genişleme, artan selülerite ve Bowman alanındaki bir artış ile karakterize edildi. Tübüllerdeki dejeneratif değişiklikler arasında silindir oluşumu (*) ve tübüler skleroz varlığı yer alıyordu. 20 gün boyunca Bis-T-23 tedavisi glomerüllerin (mezangial genişlemenin azalması) ve tübüllerin (alçıların yokluğu) morfolojisini kısmen korudu. d Nefronun şemaları (görüntü Ulusal Diyabet ve Sindirim ve Sindirim Enstitüsü'ne atfedilmiştir)Böbrek Hastalıkları, Ulusal Sağlık Enstitüleri) ve dinaminle düzenlenen reno korumasında yer alan mekanizma. Renal tübüllerin polarize epitel hücrelerinde dinamin, aktin filamentlerini ağlar halinde çapraz bağlayarak hücre polaritesini oluşturur (bu çalışma). Dinaminin filamentleri demetler halinde çapraz bağlama yeteneği, mikrovillus oluşumunda rol oynar. Akut yaralanma, ROS üretimini arttırır, hücre metabolizmasını değiştirir ve aktin dinamiklerini bozar; bu da ROS üretimini daha da artırarak daha belirgin hücresel oksidatif hasara (biyomolekül karbonilasyonu) yol açar. Aktomiyozin korteksindeki dinaminin çapraz bağlanma kapasitesindeki artış, tübüler hücre bütünlüğünü korur ve bu da onları kısmen oksidatif hakaretten korur. Ayrıca dinamin, podositlerin yapısı ve işlevi için de gereklidir. Dinaminin farmakolojik aktivasyonu, aktin polimerizasyonunu indükleyerek ayak süreçlerini eski haline getirir. Çalışmamız, dinamin oligomerizasyonunun farmakolojik aktivasyonunun, iki farklı moleküler mekanizmayı hedefleyerek nefron üzerinde ikili bir faydalı etki gösterdiğini göstermektedir: podositlerin bütünlüğünün korunması (aktin polimerizasyonu) ve renal tübüler hücrelerin (aktin filamentlerinin çapraz bağlanması).

Referanslar

1. Basile, DP, Anderson, MD & Sutton, TA Akut böbrek hasarının patofizyolojisi.Kompr. Fizyol. 2, 1303–1353 (2012).

2. Bonventre, JV & Yang, L. İskemik akut böbrek hasarının hücresel patofizyolojisi.J. Clin. Yatırım. 121, 4210–4221 (2011).

3. Campanale, JP, Sun, TY & Montell, DJ Bir bakışta hücre polaritesinin gelişimi ve dinamikleri.J. Cell Sci. 130, 1201–1207 (2017).

4. Salbreux, G., Charras, G. ve Paluch, E. Aktin korteks mekaniği ve hücresel morfogenez.Trendler Hücre Biol. 22, 536–545 (2012). 

5. Vicente-Manzanares, M., Ma, X., Adelstein, RS & Horwitz, AR Kas dışı miyozin II, hücre yapışması ve göçünde merkez aşamayı alır.Nat. Rahip Mol. Hücre Biol. 10, 778–790 (2009). 

6. Chugh, P. ve diğerleri. Aktin korteks mimarisi hücre yüzey gerilimini düzenler.Nat. Hücre Biol. 19, 689–697 (2017). 7. Nguyen, LT & Hirst, LS Yüksek düzeyde çapraz bağlı F-aktin ağlarının polimorfizmi: çoklu uzunluk ölçeklerinin araştırılması.Fizik. Rev.E Stat. Nonlin Yumuşak Madde Fiz. 83, 031910 (2011).

Wecistanche Destek Hizmeti-Çin'deki en büyük cistanche ihracatçısı:

E-posta:wallence.suen@wecistanche.com

Whatsapp/Tel:+86 15292862950

Mağaza:

https://www.xjcistanche.com/cistanche-shop