ACOX1 - CPT2 İfadelerinin Düzenlenmesine Dayalı Olarak Rouchongrong'dan (Cistanche Deserticola) Elde Edilen Feniletanoid Glikozit Ekstraktının ApoE - / - Yüksek Yağ Diyetine Sahip Farelerin Karaciğerlerinde Lipid Metabolizması Üzerinde İyileştirici Etkileri Üzerine Çalışma

ÖZET Amaç:Keşfetmek içinFeniletanoid glikozit ekstraktının etkileriitibarenCistanche Deserticola(PGCD), yüksek yağlı bir diyetle indüklenen ApoE-/- farelerin karaciğerinde lipit metabolizması üzerine. Yöntemler: Yüksek yağlı diyetle beslenen 70 erkek ApoE-/- fare 5 gruba ayrıldı, model (MOD) grubu, pozitif kontrol grubu farelere Atorvastatin[20 mg/(kg·d)] + Ezetimibe[20 mg/(kg) verildi. ·d)](A+E), PGCD düşük, orta ve yüksek doz gruplarına verildiPGCD[250, 500, 1000 mg / ( kg·gün)]; ahow diyeti alan diğer 14 erkek C57BL/ 6J faresi normal kontrol (CON) grubu olarak belirlendi. 12. hafta sonunda serum ve karaciğer dokusunda TG içeriği ve ALT ve AST aktiviteleri kullanım talimatlarına göre tespit edildi. Taze karaciğer dokusu homojenize edilmiş ve yağ asidi sentaz (FAS), uzun zincirli asil - CoA dehidrojenaz (LCAD) ve glutatyon peroksidaz (GSH - Px) içeriği,süperoksit dismutaz (SOD)aktiviteleri ELISA yöntemiyle test edilirken, kid yöntemleriyle malondialdehit (MDA) ve lipid peroksit (LPO) içerikleri tespit edildi. Asil-koenzim A oksidaz 1 (ACOX1) ve karnitin palmitoiltransferaz 2'nin (CPT2) mRNA ifadeleri RT-PCR deneyleriyle tespit edildi.

%80'İNİ ÖĞRENMEK İÇİN TIKLAYINFENİLETANOİD GLİKOZİTLERDOĞAL ORGANİK CISTANCHE ÖZÜ

Wecistanche Destek Hizmeti-Çin'deki en büyük cistanche ihracatçısı:

E-posta:wallence.suen@wecistanche.com

Whatsapp/Tel:+86 15292862950

Daha Fazla Özellik İçin Alışveriş Yapın Detaylar:

https://www.xjcistanche.com/cistanche-shop

Sonuçlar:Model grubunun aksine,üç dozluk PGCD'nin tümü TG düzeylerini düşürdükaraciğerde ve serumda doza bağlı bir şekilde etkilenmiş ve serumda ALT ve AST aktivitelerini düşürmüştür. Üç dozluk PGCD'nin tümü, FAS içeriğini doza bağlı bir şekilde azalttı ve karaciğerdeki LCAD içeriğini önemli ölçüde artırdı.PGCD tanıtıldıGSH - Px ve SOD aktivitelerinin karaciğerdeki MDA ve LPO içeriğini önemli ölçüde azalttığı görüldü. RT-PCR deneyleri, PGCD'nin karaciğer dokusunda ACOX1 ve CPT2'nin mRNA seviyelerini yükselttiğini gösterdi.

Çözüm:PGCD, lipit metabolizmasını ve oksidatif stres tepkisini iyileştirebilir ve ACOX1 ve CPT2'nin mRNA ekspresyonlarını düzenleyerek karaciğer dokusunda lipit birikimini azaltabilir.

Anahtar Kelimeler:Cistanche Deserticola'dan feniletanoid glikozitler ekstraktı; ACOX1; CPT2;Lipid metabolizması;oksidatif stres; ApoE- / - fareler

Alkolden bağımsız karaciğer yağlanması(NAFLD), genel popülasyonda yaklaşık %30 görülme sıklığıyla dünyadaki en yaygın karaciğer hastalıklarından biridir. Çin'de yağlı karaciğer hastalığı yıllık %0,594 oranında artmaktadır [1]. NAFLD'nin ortaya çıkışı ve gelişimi vücudun aşırı kalori alımıyla yakından ilişkilidir. Yüksek yağlı diyet, karaciğerde aşırı yağ birikmesine neden olur ve NAFLD'yi indükler[2] ve patogenezindeki ilk adım, karaciğer hücrelerinde triasilgliserolün (TG) birikmesidir[2] 3. Bugüne kadar NAFLD'nin patogenezini hedef alan spesifik bir terapötik ilaç bulunmamaktadır. NAFLD'nin önlenmesi ve tedavisi için açık mekanizmalara sahip güvenli, etkili ilaçların bulunması araştırmacılar için önemli bir görev haline gelmiştir. Cistanche Deserticola YC Ma, Orobanchaceae familyasındaki Cistanche cinsinin parazitik bir bitkisidir. Ana bileşeni olan feniletanoid glikozitler, vücudun bağışıklık fonksiyonunu güçlendirme, yaşlanma karşıtı, radyasyon önleyici, antioksidan ve Hepatoprotektif ve diğer etkilere sahip işlevlere sahiptir[4-5]. Bu çalışma, mekanizması hakkında bir ön çalışma yapmayı amaçlamaktadır.Cistanche Deserticola'dan feniletanoid glikozitler(PGCD) lipid metabolizmasını iyileştirmede.

1 Deneysel materyaller

1.1 Deneysel ilaçlar

Cistanche Deserticola'nın etli sapları (nem içeriği %8,5) Hotan Dichen Pharmaceutical Co., Ltd.'den satın alınmıştır; feniletanoid glikozitler (ana bileşenler verbaskosid ve ekinezyasit) referans maddeleri (her ikisi de saflık > %98) Manster, Chengdu, Sichuan Bioteknoloji Co., Ltd.'den satın alınmıştır; Atorvastatin: Pfizer Şangay; Ezetimibe: Merck Pharmaceuticals Co., Ltd.

1.2 Deney hayvanları

6 ila 8 haftalık erkek C57BL/6J fareleri ve ApoE-/- fareleri, vücut ağırlığı (20 ± 2) g, Changzhou Cavins Experimental Animal Co., Ltd.'den satın alınmıştır, lisans numarası: SCXK (Su) 2016-0010 , 12 saat / 12 saat ışık döngüsü, sıcaklık (22 ± 1) derece, nem %50 ~ %60, serbest yiyecek ve su alımı. Deney öncesinde fareler uyum sağlamaları için 1 hafta boyunca standart bir diyetle beslendi. Tüm hayvan bakımı ve deneyleri, Shandong Birinci Tıp Üniversitesi Deney Hayvanları Etik Komitesi'nin (Etik No.: W202107080303) düzenlemelerine uygundur.

1.3 Deneysel yenidenajanlar

Yüksek yağlı yem: Harlan Teklad; TG, ALT, AST kitleri: Beijing Solebao Bioteknoloji Co., Ltd.; FAS, LCAD kitleri: Shanghai Langton Bioteknoloji Co., Ltd.; GSH-Px kiti: Shanghai Jining Bioteknoloji Co., Ltd.; SOD, MDA, LPO, BCA kitleri: Nanjing Jiancheng Bioteknoloji Co., Ltd.; Trizol kiti: Invitrogen, Carlsbad, CA; ACOX1 ve CPT2 primerleri: Sangon Bioengineering (Shanghai) Co., Ltd. tarafından tasarlanmıştır.

1. 4 Deneysel Cihaz Hei - VAP Expert Döner Evaporatör: Almanya

Heidolph; Varioskan LUX çok fonksiyonlu mikroplaka okuyucu: ThermoFisher; FD8508 vakumlu dondurma kurutucusu: Ilshin, Güney Kore; F6/10 homojenleştirici: Shanghai Fluoroco; Agilent1260 yüksek performanslı sıvı kromatografisi, Cary 3500 UV spektrofotometresi: Agilent Technologies Ltd.; Quant studio5RT - PCR cihazı: Thermo Fisher Biochemicals, Inc.

2.3.1 Vücut kitlesi ve karaciğer indeksi

12. haftanın sonunda fareler aç bırakıldı ve tartıldı. Farelere sodyum pentobarbital ile anestezi uygulandı ve kurban edildi. Karaciğer indeksini hesaplamak için karaciğerler toplandı.

2.3.2 Serum göstergesi tespiti

Serumu alın ve serum aspartat aminotransferaz (AST) ve alanin aminotransferaz (ALT) aktivitelerini kit işlemine göre sırayla tespit edin; BCA serumdaki protein içeriğini belirler ve TG içeriğini tespit eder.

2.3.3 Karaciğer dokusunda lipit metabolizmasıyla ilgili faktörlerin tespiti

4 derecelik koşullar altında, uygun miktarda taze karaciğeri tartın ve PBS'de homojenleştirin, homojenatı 1 dakika boyunca santrifüjleyin (santrifüj yarıçapı 7,5 cm, 3 000 r/dak), süpernatantı alın ve protein içeriğini ölçün. BCA ile karaciğer dokusu. Dokudaki TG içeriği, karaciğer dokusundaki yağ asidi sentazı (FAS) ve uzun zincirli asil-CoA dehidrojenaz (LCAD) içeriğini tespit etmek için ELISA yöntemi.

2.3.4 Karaciğer dokusuna ilişkin oksidatif faktörlerin tespiti

4 derecelik koşullar altında, uygun miktarda taze karaciğeri tartın ve PBS'de homojenleştirin, homojenatı (santrifüj yarıçapı 7,5 cm, 3 000 r/dak) 15 dakika boyunca santrifüj edin, süpernatantı alın ve protein içeriğini ölçün. BCA'lı karaciğer dokusu. Reaktifleri takip edin Kutu talimatları, süperoksit dismutaz (SOD) ve glutatyon peroksidaz (GSH-Px) aktivitelerini tespit eder ve aynı anda malondialdehit (MDA) ve lipit peroksit (LPO) seviyelerini tespit eder.

2. 3. 5 RT-PCR tespiti

Karaciğer dokusunda ACOX1/CPT2 mRNA ifadesi: Uygun miktarda taze karaciğer dokusu alın, toplam karaciğer dokusu mRNA'sını çıkarmak için bir Trizol kiti kullanın, cDNA'yı sentezlemek için MuLV ters transkriptaz kullanın ve gerçek zamanlı floresan kantitatif gerçekleştirmek için cDNA'yı şablon olarak kullanın PCR (Qpcr) tespiti. reaksiyon koşulları şöyleydi: 95 derecede 2 dakika süreyle ön denatürasyon; 10 saniye boyunca 95 derecede denatürasyon, tavlama: 30 saniye boyunca 60 derece, 35 saniye boyunca 72 derecede uzatma, 34 döngü ve son olarak 5 dakika boyunca 72 derecede uzatma ve otomatik bir analizör tarafından gerçek zamanlı nicelik belirleme. ACOX1 ve CPT2 mRNA ifadesi. Rotor-gene Q yazılımı. Veri analizi için 1.7 (Qiagen) kullanıldı ve mRNA ve GAPDH'nin göreceli seviyelerini saymak için 2-△△Ct yöntemi kullanıldı. Her deney grubu paralel olarak> 3 kez gerçekleştirildi. Primer dizileri aşağıdaki gibidir: GAPDH, yukarı akış: 5' - GCCACCC AGAAGACTGTG - 3', aşağı akış: 5' - ATGTAGGCCATGAGGTCCAC - 3'; ACOX1, yukarı akış: 5' -CGCCACCTT CAATCC AGAGT - 3' aşağı akış: 5' -TCTGCGATGCCAAATTCCCT - 3'; CPT2, yukarı akış: 5'- TCCTCCTACTC AGGACGCAA - 3' aşağı akış: TTGGGATCTTCCGCTCACAC.

2.4 İstatistiksel yöntemler

Verilerin analizinde SPSS 20.0 istatistik yazılımı kullanıldı. Ölçüm verileri (x ± s) olarak ifade edildi. Gruplar arası karşılaştırmada tek yönlü varyans analizi kullanıldı. P<0.05 istatistiksel olarak anlamlı bir fark olarak kabul edildi.