Cistanche feniletanoid glikozitlerin ve glabridin'in sinerjistik anti-cilt pigmentasyon etkisi
Jan 14, 2025
Sinerjisti araştırmak için özetCistanche etkisiDeri pigmentasyonuna karşı fenil etanol tarafı (PHG'ler) ve glabridin (GLA), PHGS ve GLA kütle oranı in vitro tirozinaz inhibisyon deneyi, {}}} dipenil -2-}} trrinitrofenilhidrazin (dpph) ve 2, 2- diazo-bis (3- etil-benzotiazol -6- sülfonik asit diammonyum katyonu (abts+) serbest radikal temizleme deneyleri. dizinler olarak.
.iltihaplıLipopolisakkarit (LPS) ile indüklenen HACAT hücrelerinin modeli oluşturuldu ve ilacın anti-enflamatuar etkisi, interlökin -6 (IL -6) ve tümör nekroz faktörü- (TNF-) salınımı inhibe edilerek değerlendirildi. Azodiizobuamidin hidroklorür (AAPH) tarafından indüklenen HACAT hücrelerinin oksidatif stres modeli daha da kuruldu ve ilacın antioksidan etkisini değerlendirmek için süperoksit dismutaz (SOD) ve katalazın (CAT) gelişmiş aktivitesi kullanıldı. PHGS ve GLA'nın optimal kütle oranı, yukarıdaki üç hücre modeli tarafından belirlenmiştir. Sonuçlar, PHGS/GLA (1∶1), PHGS/GLA (5∶1) ve PHGS/GLA (10∶1) ile hazırlanan sulu çözeltilerin =1 ∶1, =1 ∶1, 5∶1, 5∶1, 10∶1'in tirosinaz aktivitesi üzerinde iyi inhibitör ve sinerjistik etkiler sergilediğini gösterdi. PHGS/GLA (1∶1) inhibisyon oranları,
0.4 g/L kütle konsantrasyonu olan PHGS/GLA (5∶1) ve PHGS/GLA (1 0 ∶1) sulu çözeltileri sırasıyla%94.37,%92.93 ve%88.06 idi. DPPH serbest radikallerinin temizleme oranları sırasıyla%89.44, 88.72,%ve%88.10 idi.
ABTS+ serbest radikallerinin temizleme oranları sırasıyla%0.13,%100.0,1 ve%99.87 idi. PHGS/GLA'nın kütle konsantrasyonu 25 ug/ml, PHGS/GLA (1∶1), PHGS/GLA (5∶1) ve PHGS/GLA (10∶1) sulu çözeltiler B16F10 ve HACAT hücrelerine sitotoksisite göstermedi. PHGS/GLA'da (1 ∶1) sulu çözeltide tirozinaz aktivitesinin inhibisyonu daha güçlüdür (tirozinaz aktivitesi%23.80) ve melanin içeriği (%30.90) önemli ölçüde azalmıştır. PHGS/GLA (1∶1) sulu çözelti, IL -6 ve TNF-salınımı ve SOD ve CAT aktivitesini artırma yeteneğini en iyi inhibisyon etkisini gösterdi. PHG'ler ve GLA kombinasyonu iyi sinerjistik performans, daha üstün A'dan tek bir ilaca ve PHGS/ GLA (5∶1) ve PHGS/ GLA (10∶1) sulu çözeltiden daha yüksek bir performans gösterdi. PHG'ler ve GLA kombinasyonu, melanin üretimini ve anti-enflamatuar ve antioksidan etkileri inhibe ederek cilt pigmentasyonunu iyileştirmede sinerjik bir rol oynadı.
Anahtar Kelimeler Cistanche feniletanoid glikozitler; glabridin; sinerjistik etkiler; anti-cilt pigmentasyonu; anti-oksidasyon; antienflamatuvar; ilaç malzemeleri
Beyazlatma için Cistanche fenil etanol tarafı
Çin'deki en büyük cistanche ihracatçısı Wecistanche'nin destekleyici hizmeti:
E -posta: wallence.suen@wecistanche.com
WhatsApp/Tel: +86 15292862950
Potansiyel indirimler hakkında daha fazla bilgi için lütfen müşteri hizmetleri ekibimizle iletişime geçmekten çekinmeyin. Size yardımcı olmaktan mutluluk duyacaklar!
Deri pigmentasyonu, yaralanma, cilt iltihabı ve ultraviyole radyasyon gibi faktörlerin neden olduğu bir cilt hastalığıdır [1-2]. Bu faktörler, melaninde anormal bir artışa yol açabilir, bu da Chloasma, çiller ve enflamatuar sonrası hiperpigmentasyon (3-4] gibi sorunlara neden olabilir, bu da insanların zihinsel durumunu ve yaşam kalitesini etkilemektedir. Şu anda, cilt pigmentasyonunun tedavisi esas olarak melanin oluşumunda bir anahtar enzim olan tirozinazın inhibe edilmesine odaklanmaktadır [5-6].
En son araştırma [7-8] cilt pigmentasyonunun epidermisteki keratinositler ve melanositler arasındaki yakın bağlantıya bağlı olduğunu göstermektedir. Keratinositler tarafından salınan serbest radikaller ve enflamatuar faktörler melanositlerle temas ettiğinde, tirozinaz aktivitesinde bir artışa neden olacak ve bu da melanin içeriğinde bir artışa yol açacaktır. Ayrıca melanin taşınmasını hızlandıracak ve melaninin cildin yüzeyinde birikmesine neden olacaklar. Bu nedenle, cilt pigmentasyonunun tedavisi, melanin üretimini inhibe etme, anti-enflamatuar ve anti-oksidasyon gibi çeşitli önlemler gerektirir.
Şu anda, hidrokinon ve hidrokinon gibi geleneksel ilaç preparatlarının cilt pigmentasyonunun tedavisinde belirli etkileri olmasına rağmen, etkileri nispeten bekardır ve advers reaksiyonlar üretebilir [9-10]. Buna karşılık, doğal ilaçlar doğal ve hafiftir ve tüketiciler tarafından giderek daha fazla tanınır ve övülür [11-12]. Özellikle, çoklu bitki ekstraktlarının [13-14] kombinasyonu sadece melanin üretimini inhibe etmekle kalmaz, aynı zamanda anti-enflamatuar ve antioksidan etkiler gibi birçok etkiye sahiptir ve cilt pigmentasyonunun tedavisi için yeni fikirler ve yöntemler sağlar.
Cistanche Deserticola MA benzersiz tıbbi değere sahiptir ve "Çöl Ginseng" olarak bilinir. Çalışmalar, Cistanche'de bulunan karakteristik bileşen feniletanoid glikozitin iyi antioksidan aktiviteye [15] ve anti-enflamatuar etkilere [16] sahip olduğunu ve ayrıca belirli bir tirozinaz inhibitör etkisine sahip olduğunu bulmuştur [17]. Glycyrrhizin, Glycyrrhiza Glabra L.'de güçlü bir beyazlatma etkisi olan ve "beyazlatma" olarak bilinen bir flavonoid bileşenidir [18]. Cilt pigmentasyonunun geleneksel Çin tıbbı tedavisi genellikle dalak ve böbreğin fbystreatingine, ısıyı ve detoksifikasyonu temizlemeye ve Qi ve kanı yenilemeye başlar [19].
Cistanche Deserticola'nın feniletanolik glikozitleri, böbrek yangını yenileyebilir ve öz ve kandan yararlanırken, Glycyrrhiza glabra dalak ve qi'yi yenileyebilir, ısıyı temizleyebilir ve detoksifikleyebilir. İkisi pigmentasyona direnmek için birlikte çalışabilir. Cistanche deserticola ve glabridin'infeniletanoidc glikozit kombinasyonu, çoklu boyut ve hedeflerden cilt pigmentasyonuna direnebilir, tüm banttaki ultraviyole ışınlarına karşı koruma sağlar, tirozinaz aktivitesini sinerjist olarak inhibe edebilir ve melanin üretimini azaltır ve serbest radikalleri azaltabilir ve inflamatuar faktörleri azaltabilir ve cilt ve regülasyon ve menkultürü azaltabilir. Bununla birlikte, literatürde deri pigmentasyonunun cistanche deserticola ve glabridin feniletanoid glikozitleri tarafından sinerjistik inhibisyon hakkında çok az rapor vardır.
Bu makale, in vitro biyokimyasal deneyler ve 3 hücre modelinin oluşturulması yoluyla ppeniletanoidglikozlar arasında sinerjistik bir etki olup olmadığını araştırmayı amaçlamaktadır. Doğal bitki cilt bakım ürünlerinin geliştirilmesi için teorik destek ve pratik rehberlik sağlaması ve cilt bakım endüstrisinin daha doğal, sağlıklı ve verimli bir yönde gelişmesine yardımcı olması beklenmektedir.
Nerede: Bir reaksiyon, numune çözeltisi, L-tiyozin çözeltisi, PBS ve tirozinaz çözeltisinin absorbansıdır; Bir reaksiyon kontrolü, numune çözeltisinin, L-tiyozin çözeltisinin, N ve PBS çözeltisinin absorbansıdır; Boşluk, L-tiyozin çözeltisinin, PBS çözeltisinin ve tirozinaz çözeltisinin absorbansıdır; Boş bir kontrol, L-tiyozin ve PBS çözeltilerinin absorbansıdır.
'
1.3.2 DPPH serbest radikal temizleme yeteneğinin belirlenmesi
İlk olarak, {{0}}}}. 0 197 g (0. 0 5 mmol) DPPH içinde çözülür ve çözünür ve 2 dpph çalışması için bir DPPH iş çözümü ile çözünür. mmol/l. Daha sonra, PHG'ler ve GLA, 0 0 01, 0.01, 0.1, 0.4, 0.8, 1.2, 1.0 mg/ml kütle konsantrasyonları ile PHGS etanol çözeltisine ve GLA etanol çözeltisine hazırlandı ve hacim ile% 50 etanol kullanılarak VC etanol çözeltisi kullanılarak sırasıyla% 50 etanol kullanılarak hazırlandı. Daha sonra, PHGS etanol çözeltisi ve GLA etanol çözeltisi, M (PHGS çözeltisi) ∶ m (GLA çözeltisi)=40 ∶1, 1∶1, 1∶1, 1∶10, 1∶20, 1∶40, 1∶40, farklı kitle oranı elde edilen 9 türü elde edildi, bu da PHG'li 9 tür/GLAS, PHG'li/GLA gLA, Rored/GLA fgg, Rored/GLA gLa, Kayıtlı/GLA GLA'ları elde etti, (40∶1) ~ PHGS/GLA (1∶40) Etanol çözeltileri. Son olarak, 96- kuyu plakasına 100 ul farklı numune çözeltisi ve 100 μL DPPH çalışma çözeltisi ekleyin, iyice karıştırın ve 30 dakika boyunca oda sıcaklığında ışıktan uzak durun. Bir enzim markeri ile 517 nm'deki absorbansı ölçün. Pozitif kontrol olarak VC kullanıldı ve her deney 3 kez tekrarlandı. Formül (2) 'e göre DPPH serbest radikal temizleme oranını (%) hesaplayın.
DPPH Serbest Radikal Çırpma Oranı/%=(1 −𝐴1 - 𝐴3) × 100 (2) burada: A1, örnek çözeltisinin + DPPH çalışma çözeltisinin absorbansıdır; A2, hacim + DPPH çalışma çözeltisi ile% 50 etanolün absorbansıdır; A3, hacim ile örnek çözeltinin + 50% etanolün absorbansıdır.
1.3.3 ABTS'nin Tespiti+ Serbest Radikal Çöpçü yeteneği
İlk olarak, 1 g (1.82 mmol) ABT'lerin tartılın ve 7.4 mmol/L nihai konsantrasyona sahip bir ABTS çalışma çözeltisi hazırlamak için deiyonize su içinde çözün; 0. ABTS çalışma çözeltisini ve potasyum persülfat çalışma çözeltisini eşit hacimlerde karıştırın ve ABTS+ çalışma çözeltisini hazırlamak için karanlıkta 12 saat reaksiyona girin. Daha sonra, Bölüm 1.3.2'deki yönteme göre, PHGS etanol çözeltisi, GLA etanol çözeltisi, N ve VC etanol çözeltisinin yanı sıra PHGS/GLA (40∶1) ~ PHGS/GLA (1∶40) etanol çözeltisi hazırlayın.
Son olarak, 96- kuyu plakasına 40 ul farklı numune çözeltisi ve 160 μL ABTS+ çalışma çözeltisi ekleyin, iyice karıştırın, oda sıcaklığında 6 dakika boyunca tepki verin ve bir ELISA okuyucusu kullanarak çözeltinin 734 nm'de absorbansını ölçün. Formül (3) 'e göre ABTS+ serbest radikal temizleme oranını (%) hesaplayın.
Nerede: A1, numune çözeltisi + abts + çalışma çözeltisinin absorbansıdır; A2, deiyonize su + abts + çalışma çözeltisinin absorbansıdır; A3, numune çözeltisi + deiyonize suyun absorbansıdır.
1.4 Hücre Deneyi
1.4.1 Hücre Kültürü
B16F10 ve HACAT hücreleri yeniden canlandırıldıktan sonra, DMEM yüksek glikoz ortamına aşılanırlar (bir kitle fraksiyonu ile% 10 fetal sığır serumu ve% 1 penisilin streptomisin karışımı içerir) ve 37 derece,% 5 CO2 hacim fraksiyonu ve% 70 humitte kültürlenir ve 24 H için% 70 human. Hücre büyüme durumu bir mikroskop altında gözlenir ve ortam, hücre büyüme durumuna göre değiştirilir veya alt kültürlenir.
1.4.2 Deneysel Gruplama
Logaritmik büyüme fazındaki B16F10 ve HACAT hücreleri, 96- kuyu plakalarında, uygun hücre sayılarına sahip ve hücrelerin duvara yapışmasına izin vermek için 24 saat kültürlenir. Farklı kütle konsantrasyonlarının örnek çözeltileri bir DMEM kültür ortamı kullanılarak hazırlanır. Normal grup, model grubu, düşük doz PHG'ler (125 ug/mL) grubu, orta doz PHG'ler (250 ug/ml) grup, yüksek doz PHG'ler (500 ug/ml) grup, düşük doz GLA (6.25 ug/ml) grup, orta-doz GLA (25 UG/ml) grubu, yüksek doz GLA (25 UG/ml), yüksek doz GLA (25 UG/ml), yüksek doz GLA (25 UG/ml), yüksek doz GLA (25 ug/ml) yüksek doz GLA (25 ug/ml), yüksek doz GLA (25 ug/ml) (1∶1) Grubu, PHGS/GLA (5∶1) Grubu ve PHGS/GLA (10∶1) Kültür Orta Grubu kuruldu.
UVB ile indüklenen B16F10 pigmentasyon modelinde, model grubu hücreleri 30 ul PBS (pH =7. 4) ile ilave edildi ve 110 saniye boyunca doğrudan UVB ışınlayıcının altına 3 cm yerleştirildi; Deney grubu, 1 saat boyunca farklı kütle konsantrasyonlarına sahip 100 ul numune çözeltisi ile ön işleme tabi tutuldu, daha sonra 30 uL PBS ile ilave edildi ve 110 saniye boyunca UVB ışınlayıcının doğrudan 3 cm altına yerleştirildi; Normal grup her zaman yüksek glikoz DMEM kültür ortamı kullanılmıştır; Boş grup hücrelerle değil, eşit miktarda kültür ortamı ile aşılanmıştır.
LPS ile indüklenen HACAT hücre inflamasyon modelinde, model grubu 24 saat boyunca 20 ug/ml'lik bir konsantrasyonda PBS LPS çözeltisi ile kültürlendi; Deney grubu, 24 saat boyunca farklı kütle konsantrasyonlarına sahip 100 ul numune çözeltileri ile ön işleme tabi tutuldu ve daha sonra 24 saat boyunca 20 ug/mL LPS çözeltisi ile ilave edildi; Normal grup her zaman yüksek glikoz DMEM ortamı kullanılmıştır; Boş grup hücrelerle değil, eşit miktarda kültür ortamı ile aşılandı.
AAPH ile indüklenen HACAT hücresi oksidatif stres modelinde, model grubu 24 saat boyunca 25 mmol/L konsantrasyonda 100 mL Aaph (2.5 mmol) çözeltisi ile kültürlendi; Deney grubu, 24 saat boyunca farklı kütle konsantrasyonlarına sahip 100 ul numune çözeltileri ile ön işleme tabi tutuldu ve daha sonra 24 saat boyunca 25mmol/L konsantrasyonunda AAPH çözeltisi ile ilave edildi; Normal grup her zaman yüksek glikoz DMEM ortamı kullanılmıştır; Boş grup hücrelerle değil, eşit miktarda kültür ortamı ile aşılandı.
Her grup 3 kopya kuyu ile kuruldu ve 37 derece,% 5 CO2 hacim fraksiyonu ve% 70 nemde bir inkübatörde kültürlendi.
1.4.3 Sitotoksisite Deneyi
Sitotoksisiteyi belirlemek için CCK8 yöntemi kullanıldı. B16F1 0 ve logaritmik büyüme fazındaki HACAT hücreleri, 3 dakika boyunca% 0.25 tripsin ile sindirildi. Sindirim sonlandırıldıktan sonra, kültür ortamı, 1 x 104 hücre/mL yoğunluğuna sahip bir hücre süspansiyonu yapmak için tekrar tekrar üflendi. Hücreler, bir 96- kuyu plakası, oyuk başına 100 uL içinde eşit olarak aşılandı ve hücrelerin etrafındaki kuyulara PBS ilave edildi. Hücreler duvara yapıştıktan sonra, farklı kütle numune çözeltisi konsantrasyonları ilave edildi, grup başına 3 replike kuyucusu ve 37 derece,% 5 CO2 hacim fraksiyonu ve 24, 48 ve 72 saat için% 70 nemde kültürlendi ve daha sonra çözelti atıldı. Tüm gruplar,% 10 CCK8 hacim fraksiyonu içeren 100 ul tam kültür ortamı ile ilave edildi ve 60 dakika süreyle inkübe edildi. Çözeltinin 450 nm'de absorbansı bir ELISA okuyucu kullanılarak ölçüldü. Hücre canlılığı (%) formüle (4) göre hesaplandı.
Nerede: Deneysel bir grup, kuyuların içeren hücrelerin absorbansı ve UVB ışınlaması altında numune çözeltisidir; Normal bir grup, UVB ışınlaması olmadan kuyuların ve numune çözeltisinin absorbansıdır; Boş bir grup, kültür ortamını içeren kuyuların absorbansıdır, ancak hücre yoktur.
1.4.5 Melanin içeriğinin belirlenmesi
Melanin içeriği NaOH lizis yöntemi ile belirlendi. Bölüm 1.4.2'deki yönteme göre hücrelere 72 saat tedavi edildikten sonra, süpernatan atıldı ve iki kez PBS ile yıkandı ve hacim (1 mol/l konsantrasyonu) içeren% 10 DMSO içeren 100 ul NaOH sulu çözelti ilave edildi. 1 saat boyunca 90 derece fırına yerleştirildikten sonra, çözeltinin 490 nm'de absorbansı bir enzim markeri ile belirlendi. Deney 3 kez tekrarlandı. Melanin içeriği (%) formüle (5) göre hesaplanmıştır.
1.5 Enflamatuar faktör içeriğinin ve oksidatif stres indeksi belirlenmesi
Bölüm 1.4.2'deki yönteme göre hücrelere 48 saat tedavi edildikten sonra, her gruptaki HACAT hücreleri bir hücre kazıyıcı ile toplandı, santrifüjlendi ve süpernatan toplandı. IL -6 ve tnf- içeriği ELISA kitinin talimatlarına göre belirlendi.
Bölüm 1.4.2'deki yönteme göre hücrelere 48 saat tedavi edildikten sonra, her gruptaki HACAT hücreleri bir hücre kazıyıcı ile toplandı ve hücreler tekrarlanan donma ve çözülme ile kırıldı. Hücreler, 10 dakika boyunca 4 derece 12000 r/dakikada santrifüjlendi ve süpernatan toplandı. SOD aktivitesi ve kedi içeriği ELISA kitinin talimatlarına göre belirlendi.
1.6 Birleşik endeksin belirlenmesi
Farklı kütle oranlarındaki PHG'lerin ve GLA'nın tirozinaz aktivitesini ve anti-oksidasyonu inhibe etmede sinerjistik bir etkiye sahip olup olmadığını belirlemek için kombine indeks (CI) yöntemi [20] kullanılmıştır. Kombinasyon endeksi formül (6) 'ye göre hesaplandı:
Wherein: D1 and D2 are the mass concentrations (mg/mL) of the two drugs when the activity reaches x% in the combined treatment; DX is the mass concentration (mg/mL) required for the activity to reach x% when the two substances are used alone. Compusyn software was used for calculation. CI>1 antagonistik bir etkiyi gösterir, CI =1 katkı maddesi etkisini gösterir ve CI<1 indicates a synergistic effect.
1.7 Veri Analizi
Tüm veriler "aritmetik ortalama ± standart sapma (𝑥̅ ± 𝑠)" olarak ifade edilir. Grafik Prism 9.5. 0 yazılımı istatistiksel analiz için kullanılmıştır. Çoklu gruplar arasında karşılaştırma için tek yönlü varyans analizi kullanıldı. P<0.05 was considered statistically significant.
