Ludwigia Octovalvis'in Drosophila Melanogaster Ve SAMP8 Fareleri Üzerindeki Yaşlanma Karşıtı Etkileri Bölüm 1

SoyutBirçok ülkede sağlıklı bir içecek olarak yaygın şekilde tüketilen bir ekstrakt olan Ludwigia octovalvis (Jacq.) PH Raven'ın (Onagraceae) yaşlanma karşıtı etkilerini araştırdık. Meyve sineği Drosophila melanogaster'ı model organizma olarak kullanarak, L. octovalvis ekstraktının (LOE) yüksek kalorili ancak düşük kalorili olmayan bir diyette sinek ömrünü önemli ölçüde uzattığını gösterdik; DR) ile ilgili yol. LOE ayrıca, su alımı, gıda alımı, doğurganlık veya spontan motor aktivite dahil olmak üzere fark edilebilir herhangi bir negatif değiş tokuşa neden olmadan hem sineklerde hem de yaşlanma hızlandırılmış eğilimli 8 (SAMP8) farede yaşa bağlı bilişsel gerilemeyi hafifletti. LOE, güçlü DPPH radikal süpürme aktivitesine sahip olan ve sineklerde parakuat kaynaklı oksidatif hasarı ve öldürücülüğü azalttığı gösterilen yüksek seviyelerde polifenoller ve flavonoidler içeriyordu. Gaz kromatografisi-kütle spektrometrisi (GC-MS) analizleri, bilinen 17 molekülü tanımladı; bunlardan -sitosterol ve skualen en bol bulunan iki moleküldü. Ayrıca, -sitosterolün, muhtemelen yetişkin sineklerin yağ gövdesinde AMP ile aktive olan protein kinazı (AMPK) aktive ederek ömrünü uzatabileceğini gösterdik. Verilerimiz, LOE'nin yaşa bağlı bozuklukları tedavi etme potansiyeline sahip güçlü bir yaşlanma karşıtı müdahale olduğunu göstermektedir.

Cistanche glikozidi ayrıca kalp ve karaciğer dokularındaki SOD aktivitesini artırabilir ve her dokudaki lipofuscin ve MDA içeriğini önemli ölçüde azaltabilir, çeşitli reaktif oksijen radikallerini (OH-, H₂O₂, vb.) etkili bir şekilde temizleyerek ve neden olduğu DNA hasarına karşı koruma sağlayabilir. OH radikalleri tarafından. Cistanche feniletanoid glikozitler, serbest radikalleri güçlü bir şekilde süpürme yeteneğine, C vitamininden daha yüksek bir indirgeme kabiliyetine sahiptir, sperm süspansiyonunda SOD aktivitesini geliştirir, MDA içeriğini azaltır ve sperm zarı işlevi üzerinde belirli bir koruyucu etkiye sahiptir. Cistanche polisakkaritleri, D-galaktozun neden olduğu deneysel olarak yaşlanmış farelerin eritrositlerinde ve akciğer dokularında SOD ve GSH-Px aktivitesini artırabilir, ayrıca akciğer ve plazmada MDA ve kollajen içeriğini azaltabilir ve elastin içeriğini artırabilir. DPPH üzerinde iyi bir temizleme etkisi, yaşlanmış farelerde hipoksi süresini uzatır, serumdaki SOD aktivitesini geliştirir ve deneysel olarak yaşlanmış farelerde akciğerin fizyolojik dejenerasyonunu geciktirir Hücresel morfolojik dejenerasyonla, deneyler Cistanche'nin iyi antioksidan yeteneğe sahip olduğunu göstermiştir. ve cilt yaşlanması hastalıklarını önleyen ve tedavi eden bir ilaç olma potansiyeline sahiptir. Aynı zamanda, Cistanche'deki ekinacoside, DPPH serbest radikallerini temizleme konusunda önemli bir yeteneğe sahiptir ve reaktif oksijen türlerini temizleyebilir, serbest radikal kaynaklı kollajen bozulmasını önleyebilir ve ayrıca timin serbest radikal anyon hasarı üzerinde iyi bir onarım etkisine sahiptir.

Cistanches herba'ya tıklayın

【Daha fazla bilgi için:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】

anahtar kelimelerLudwigia octovalvis. Diyet kısıtlaması. Ömür. AMPK

giriiş

Yaşlanmayı anlamak, demografik eğilimler ve yaşlı bir toplumun tahmin edilen yükleri göz önüne alındığında, zamanımızın en büyük zorluğudur. Nörodejeneratif hastalık, kanserler ve kardiyovasküler hastalık gibi yaşa bağlı hastalıkları araştıran çalışmalar, insan yaşlanmasına ilişkin önemli içgörüler sağlamıştır. Yetersiz beslenme veya diyet bileşenlerinin dengesinde değişiklik olmaksızın kalori alımının azaltılması yoluyla diyet kısıtlamasının (DR), mayadan sineklere ve memelilere kadar türler arasında sağlıklı yaşam süresini uzatmak için en etkili müdahale olduğu bilinmektedir (Lin ve ark. 2000; Wood ve diğerleri 2004; Bonkowski ve diğerleri 2006; Wu ve diğerleri 2013). Kemirgenlerde DR, normal farelerde ve kısa ömürlü yaşlanmaya eğilimli 8 (SAMP8) farelerde yaşam süresini önemli ölçüde artırabilir (Weindruch ve Walford 1982; Choi ve Kim 2000; Simons ve ark. 2013). Sineklerde de çarpıcı bir yaşam süresi uzaması gözlemlenebilmektedir (Zheng ve ark. 2005; Soh ve ark. 2013). Primatlarda (al yanaklı maymun) yapılan çalışmalar, DR'nin ölüm oranı üzerindeki etkisine ilişkin kesin sonuçlar vermemiş olsa da, maymunlarda DR'nin kemirgenlerde ve sineklerde gözlemlenenlere benzer yararlı fizyolojik etkiler ürettiği açıktır (Colman ve ark. 2009; Mattison ve ark. ark. 2012). DR tarafından yaşam süresinin uzatılmasına muhtemelen insülin/IGF, sirtuinler (Sir), SKN-1, rapamisin hedefi ve AMP ile aktive olan protein kinaz gibi besin algılama ve metabolizmayı içeren çeşitli genetik yolların aracılık ettiği gösterilmiştir. (AMPK) yolları (Lin ve ark. 2000; Kaeberlein ve ark. 2005; Bishop ve Guarente 2007; Alcedo ve Kenyon 2004; Stenesen ve ark. 2013). Sir2/Sirt1 (Lin ve ark. 2004) ve AMPK'nin (Xiao ve ark. 2011), daha düşük bir hücresel enerji durumunu yansıtan artan AMP/ATP, ADP/ATP veya NAD/NADH oranları ile aktive edilebileceği görülmektedir. Bunlar sırayla, hücrelerin metabolik durumunu enerji tüketiminden enerji depolamasına ve üretimine dönüştüren bir dizi aşağı akış sinyal olayını tetikler.

İnsanların günlük yaşamda DR uygulamasındaki pratik sınırlar göz önüne alındığında, DR mimetiklerinin geliştirilmesi, yaşlanma karşıtı araştırmalar için heyecan verici bir alan olarak ortaya çıkmıştır. Nutrasötik bileşikler veya bitki özleri içeren diyet takviyeleri, sağlıklı yaşamı uzatmak için güvenli ve etkili müdahaleler sağlayabilir. Nektarin ve elmadan elde edilen meyve özlerinin yanı sıra Rhodiola rosea ve Curcuma longa'dan elde edilen bitki özlerinin, oksidatif hasarı azaltarak meyve sineklerinde yaşam süresini uzattığı zaten gösterilmiştir (Boyd ve ark. 2011; Peng ve ark. 2011; Schriner ve diğerleri 2009; Lee ve diğerleri 2010; Schriner ve diğerleri 2013). Sağlığı geliştiren bu bitkilerde, ömrü uzatan etkiler için olası adaylar olarak tanımlanan ana bileşenler, serbest radikal temizleyiciler veya redoks-aktif metal şelatörleri olarak hareket etme potansiyeline sahip olan polifenollerdir (Galleano ve ark. 2010). Büyük ölçüde kırmızı üzüm kabuğunda bulunan polifenolik bir bileşik olan Resveratrol, bu molekül sınıfının en iyi bilinen örneğidir ve Saccharomyces cerevisiae, Caenorhabditis elegans, Drosophila melanogaster ve Nothobranchius gibi evrimsel olarak uzak türlerin ömrünü uzattığı gösterilmiştir. furzeri (Howitz ve diğerleri 2003; Wood ve diğerleri 2004; Valenzano ve diğerleri 2006). Resveratrolün anti-oksidatif özellikleri gösterilmiş olmasına rağmen, biriken kanıtlar, bu bileşiğin yukarıda belirtilen Sir2/Sirt1 dahil olmak üzere uzun ömürle ilişkili birkaç gen için güçlü bir aktivatör görevi görebileceğini düşündürmektedir (Hubbard ve ark. 2013).

Ludwigia octovalvis (Jacq.) PH Kuzgun (Onagraceae) dünya çapında birçok ülkenin tropikal bölgelerinde geniş bir yayılış göstermektedir. L. octovalvis'in tam kimyasal bileşimi tam olarak tanımlanmamış olsa da, bu bitki, ödem, nefrit ve hipotansiyon dahil olmak üzere çeşitli durumların tedavisinde bitkisel bir ilaç olarak uzun bir kullanım geçmişine sahiptir. Asya'daki büyük popülasyonlar, günlük olarak sağlıklı bir içecek olarak L. octovalvis özü (LOE) tüketmektedir. Farelerde yapılan toksikolojik değerlendirme, kronik LOE tedavisinin gözlemlenebilir yan etkiler olmaksızın immün düzenleyici, hepatoprotektif ve kardiyovasküler koruyucu özellikler sağlayabileceğini öne sürdü (Kadum Yakob ve ark. 2012). Ek olarak, LOE'nin anti-bakteriyel ve anti-kanser aktiviteleri olduğu bildirilmiştir (Chen ve ark. 1989; Chang ve ark. 2004). Bu çalışmada, model organizmalar olarak hem meyve sineklerini hem de SAMP8 farelerini kullanarak LOE'nin yaşlanma karşıtı etkilerini araştırdık. Bulgularımız, LOE'nin yaşlanma karşıtı bir müdahale olarak gelişebileceğini göstermektedir.

Yöntemler

LOE hazırlığı

L. octovalvis'in bütün bitkileri genellikle yaz mevsiminde toplandı ve kurutulmuş bitkiler yerel Tarım Geliştirme İstasyonundan ve Tayvan'daki Taiwan Herbal Biopharma Company Ltd.'den temin edildi. L. octovalvis için kalite kontrol, Taiwan Herbal Biopharma Company Ltd. tarafından izlendi ve Hsiehyu Biotech Company Ltd.'nin herbaryumuna bir belge örneği (No. 034) bırakıldı. LOE hazırlığı için, 100 g L. octovalvis tozu, 400°C'ye batırıldı. 4 derecede bir gece boyunca yüzde 95 etanol ml'si ve daha sonra 30 dakika boyunca 55 derecede iki kez ekstrakte edildi. Süpernatan santrifüjlendi (8,{8}}×g'de 5 dakika) ve birikintileri çıkarmak için süzüldü (TOYO No. 1). LOE, bir dekompresyon işleminin ardından elde edildi.

Gaz kromatografisi-kütle spektrometrisi (GC-MS)

LOE'nin GC-MS analizi, HP-5MS kılcal gaz kromatografi kolonu ile donatılmış bir HP- 6890 gaz kromatografı ve HP-5973 kütle seçici dedektör (MSD, Agilent Technologies) kullanılarak yapıldı. (12,5 m×0,2 mm iç çap, 0,33 μm film kalınlığı) (J&W Scientific). Enjeksiyon hacmi bölmesiz modda 2 ul idi ve giriş sıcaklığı 29{13}} dereceydi. Taşıyıcı gaz olarak helyum kullanıldı (akış hızı 0,6 ml/dk) ve fırın sıcaklığı şu şekilde programlandı: başlangıç ​​sıcaklığı: 35 derece, 5 derece/dk artırılarak 90 dereceye, ardından 10 derece/dk artırılarak 200 dereceye ve son olarak 20 derece/dak ile 290 dereceye kadar 8 dakika tutulmuştur. Analiz, iyonizasyon voltajı 70 eV'de sabitlenmiş olarak EI modunda gerçekleştirildi. MSD'nin tarama alımı (m/z 45-550), HP Chemistation yazılımı ile gerçekleştirildi.

2,2-Difenil-1-pikrilhidrazil (DPPH) radikal süpürme aktivitesi ve toplam polifenol ve flavonoid içeriği

DPPH radikal süpürme aktivitesi, daha önce tarif edilen değiştirilmiş bir yöntem kullanılarak ölçüldü (Brand-Williams ve diğerleri, 1995). Kısaca, 100 ul farklı LOE, askorbik asit, resveratrol, skualen veya - sitosterol (Sigma) konsantrasyonları, nihai konsantrasyonlara ulaşmak için 96-mikro kuyu plakalarında 200 ul 100 uM DPPH'ye eklendi 0, 1, 5, 10 ve 50 ug/ml. Reaksiyon karışımı, karanlıkta oda sıcaklığında 30 dakika inkübe edildi. Bir mikroplaka okuyucusunda (AccuReader 965) 520 nm'de absorbanstaki bir azalma ölçüldü. LOE'nin toplam fenolik bileşenleri, standart olarak gallik asit kullanılarak Folin-Ciocalteu reaktifi ile belirlendi (Slinkard ve Singleton 1977). Tüm flavonoid içerikleri, standart olarak rutin kullanılan bir alüminyum klorür kolorimetrik deney ile ölçüldü (Shih ve ark. 2010).

Hücre kültürü ve Western blot analizleri

Drosophila Schneider (S2) hücreleri, yüzde 10 ısıyla inaktive edilmiş cenin sığır serumu (Gibco) ile takviye edilmiş Schneider Drosophila ortamında (Invitrogen) 25 derecede büyütüldü. Hücreler, normal (yukarıdaki gibi 1x ortam) büyüme koşulları altında veya DR koşulları (0.5x ortam, 1x ortamın fosfat tamponlu salin içinde 1:1 dilüsyonu) altında farklı LOE ve -sitosterol (Sigma) konsantrasyonları ile muamele edildi (yukarıdaki gibi 1x ortam) PBS)) 12 saat. Fosfor-AMPK ve -tubulin (Cell Signaling Technology'den gelen antikorlar) protein seviyeleri, daha önce açıklandığı gibi Western blot ile analiz edildi (Wang ve ark. 2005).

Sinekler ve ömür deneyleri

Canton-S (CS), w1118, fat body GeneSwitch driver S106 (Bloomington Stock Center #8151) ve UASAMPK.RNAi (Bloomington Stock Center #32371) stokları standart sukroz/maya/mısır unu yemi ile büyütüldü . S106 bakireleri, AMPK demonte deneylerinde UASAMPK.RNAi erkekleri ile çaprazlanmıştır. Ömür boyu analizleri için, 48 saat içinde kapanan sinekler (yaklaşık 100 erkek ve 100 dişi) bir 1-1 popülasyon kafesine aktarıldı ve 12-saat açık/ 25 derecede kapalı ışık döngüsü (Wang ve ark. 2009). Her gün taze yiyecek verildi ve ölü sineklerin sayısı ve cinsiyeti puanlandı. Yüksek kalorili ve düşük kalorili yiyecekler, sırasıyla hem dekstroz hem de mayanın yüzde 15 veya 5'ini içeriyordu. Tüm gıdalara yüzde iki agar ve yüzde 0,23 Tegosept (Apex) eklendi. Her deneyde açıklanan gıdalara farklı konsantrasyonlarda LOE, skualen, -sitosterol, RU486 (Mifepristone, Sigma) veya araç kontrolü eklendi.

Sineklerin beslenmesi, doğurganlığı ve spontan motor aktivitesi

Farklı LOE konsantrasyonları içeren yüksek kalorili yiyeceklerle beslenen on günlük sinekler, 0.5 yüzde FD&C no. 1 mavi gıda boyası. 24 saat sonra, PBS içeren tek bir tüpte 10 sinek homojenize edildi ve alınan boya miktarı, 625 nm'de boya emilimi için spektrofotometre ile belirlendi. Dişi doğurganlığı, çiftleşen üç çift tarafından üretilen yumurtaların günlük olarak sayılmasıyla belirlendi. Sinekler günlük olarak uygun yiyecek içeren yeni şişelere geçirildi ve bırakılan yumurta sayısı yetişkin yaşamının ilk 20 günü boyunca sayıldı ve kaydedildi. Aktivite seviyelerini izlemek için, uygun gıda kaynağı üzerinde tek bir erkek sinek içeren cam şişeler, kızılötesi ışık kaynaklarının dairesel halkalarına sahip lokomotor kayıt odalarına yerleştirildi; kiriş kırılmaları aktivite (TriKinetics) olarak kaydedilir. Veriler, 72-saatlik bir süre boyunca her 20 saniyede bir kaydedildi. Etkinlik monitörleri, yukarıda açıklanan inkübatöre yerleştirildi.

Sineklerin Pavlovian koku çağrışımsal kısa süreli hafızası

Farklı yaşlarda sinekler, 60 saniye boyunca bir koku ile eşleştirilen elektroşoka (70 V) maruz bırakılarak eğitildi. Daha sonra sinekler, 60 saniye boyunca elektroşok olmadan ikinci bir kokuya maruz bırakıldı. Sinekler 45 saniye dinlenmeye bırakıldı ve ardından 2 dakika boyunca iki koku arasında seçim yapmaları gereken bir T-labirent testine tabi tutuldu. Kullanılan kokular, metil sikloheksanol (mineral yağda 1:1, 000 seyreltme) ve veya oktanol (1.5:1, 000 mineral yağda seyreltme) idi. Tüm deneyler için, koku-elektroşok eşleşmesinin her biri için en az beş seans gerçekleştirildi. Tüm verilerin ortalaması alındı ​​ve her grup için bellek indeksinin yüzdesi olarak gösterildi. Performans indeksi, kokunun elektroşok ile eşleştirildiği kola giren sinek sayısının, kokunun elektroşok ile eşleştirilmediği karşı kola giren sayıdan çıkarılması ve toplam sinek sayısına bölünmesiyle hesaplanmıştır.

Paraquat kaynaklı oksidatif stres ve 4-hidroksi-2-nominal (HNE) tayini

Farklı LOE konsantrasyonları içeren yüksek kalorili yiyeceklerle beslenen on günlük sinekler, 0 veya 20 mM parakuat ve yüzde 6 dekstroz çözeltisine batırılmış filtre kağıdına sahip küçük şişelere aktarıldı. Ölü sineklerin sayısı her 3 ila 4 saatte bir sayıldı. 12 saatte, parakuatla muamele edilmiş sineklerin bir kısmı toplandı ve HNE, üretici tarafından sağlanan protokol izlenerek OxiSelect™ HNE Adduct ELISA Kiti (Cell Biolabs) ile ölçüldü.

Hayvanlar

Tüm deney protokolleri, yerel hayvan etiği düzenlemelerine uygundu. SAMP8 fareleri, Modular Animal Caging System® (Alternatif Tasarım) içinde yetiştirildi ve tutuldu ve yiyecekleri, gama ışınlaması ile sterilize edildi. Oda, 12-saatlik bir açık/kapalı ışık döngüsüne sahipti, karanlık faz saat 20'de başlıyor Fareler için, içme suyuna 0, 50 ve 100 ug/'lik nihai konsantrasyonlarda LOE eklendi. ml. Yiyecek alımı, su tüketimi ve vücut ağırlığındaki değişim düzenli olarak izlendi.

RNA hazırlama, cDNA sentezi ve kantitatif polimeraz zincir reaksiyonu (qPCR)

Toplam RNA, RNeasy Mini Kit (Qiagen) kullanılarak en az 30 sinekten hazırlandı. RNA, DNaz ile işlendi ve daha önce açıklandığı gibi (Chou ve ark. 2013) oligo-d(T)15 (Invitrogen) ve SuperScript III ters transkriptaz (Invitrogen) kullanılarak cDNA'ya dönüştürüldü. qPCR reaksiyonları, StepOnePlus Real-Time PCR Systems (Applied Biosystems), SYBR Green Master Mix (Applied Biosystems) kullanılarak gerçekleştirildi ve gene spesifik primerler, AMPK- için CAAG AGCTATCTGCTCGACTTCAA ve CACATTTCGA AAAACTCCATGGT ve GAPDH için GACGAAAT CAAGGCTAAGGTCG ve AATGGGTGTCGCTG AAGAAGTC idi. Toplam 40 döngüde 95 derecede 15 saniye denatürasyon, tavlama ve 60 derecede 1 dakika süreyle birleştirilmiş uzatma ile iki aşamalı bir PCR reaksiyonu gerçekleştirildi. GAPDH'ye kıyasla her bir hedef genin mRNA ifade seviyesi, çıkarma işlemiyle ölçüldü: Cttarget − CtGAPDH=ΔCt. Bir PCR döngüsü farkı, mRNA ifade seviyesinde iki kat değişikliğe eşittir. Amplikonların benzersizliği ayrışma eğrileri kullanılarak doğrulandı.

Yeni nesne tanıma, yükseltilmiş T labirenti ve açık alan testleri

Yeni nesne tanıma testi için, fareler ilk olarak arka arkaya iki gün boyunca günde 10 dakika boyunca hiçbir nesne olmadan açık bir kutuya (50 cm × 25 cm × 50 cm) alıştırıldı. Üçüncü gün, fareler 2 dakika süreyle kutuya yerleştirildi ve ardından her fareye iki benzer nesne sunuldu. Sonraki 5-dk. süre boyunca (eğitim oturumu olarak tanımlanır) her bir nesneyi keşfetmek için harcanan süre kaydedildi. Fareler daha sonra ev kafeslerine geri gönderildi. Bir, iki veya üç saat sonra aynı hayvanlar, tanıdık ve yeni bir nesne (hafıza testi oturumu olarak tanımlanır) ile kutuda 5 dakika boyunca yeniden test edildi. Nesne ayırt etme indeksi, tanıdık bir nesneyi keşfetmek için harcanan sürenin yeni bir nesneyi keşfetmek için harcanan süreden çıkarılması ve her iki nesneyi keşfetmek için harcanan toplam süreye bölünmesiyle hesaplandı.

Yükseltilmiş T labirenti önceki çalışmalardan modifiye edilmiştir (Cruz-Morales ve diğerleri 2008; De-Mello ve Carobrez 2002; Maia ve diğerleri 2010; Santos ve diğerleri 2006; Takahashi ve diğerleri 2005). Karşılıklı iki açık kola dikey olarak 15 cm yüksekliğinde duvarlarla çevrili bir koldan oluşuyordu. Üç kolun boyutları eşitti (30 cm×5 cm) ve tüm aparat yerden 50 cm yüksekteydi. Eğitim gününde, her bir fare kapalı kolun distal ucuna, kolların kesişme noktasına bakacak şekilde yerleştirildi ve kapalı kolu keşfetmesine izin verildi. Deneme, fare ya açık kollara girdiğinde (dört pati de açık kol alanındaydı) ya da kapalı kolda 300 saniye kaldığında sona erdi. Kaçınma kriterine ulaşmak için gereken deneme sayısı, eğitim seansları sırasında farelerin öğrenme yeteneğini değerlendirmek için kullanıldı. Eğitim seanslarından yirmi dört saat sonra, fareler tekrar kapalı kola maruz bırakıldı ve kapalı kolda kaldıkları süre, hafıza tutma değerlendirmesi olarak kaydedildi.

Açık alan testi, açık bir kutuda (50 cm×25 cm×50 cm) yapıldı. Her fare açık alanın merkezine yerleştirildi ve 1 saat boyunca aparatı serbestçe keşfetmesine izin verildi. Her farenin yönü ve hareket hızı, otomatik gözlem (Tanı ve Araştırma Araçları) ile kaydedildi.

Sonuçlar

LOE kaynaklı yaşam süresinin uzaması, DR ile ilişkilidir

LOE'nin in vivo yaşlanma karşıtı bir etkisinin olup olmadığını test etmek için, önce farklı LOE konsantrasyonları içeren gıdalar üzerinde yetiştirilen CS sineklerinin ömrünü inceledik. Yüksek kalorili yiyeceklerle beslenen erkek CS sineklerinin ortalama ömrü 41,5 gündü ve sinek yiyeceğine 50, 100 ve 1,000 ug/ml LOE eklenmesi erkek sineklerin ömrünü 8,9 artırdı, Sırasıyla yüzde 16.1 ve yüzde 9.6 (Şekil 1a ve Tablo 1). Yüksek kalorili yiyeceklerle beslenen dişi CS sineklerinin ortalama ömrü yalnızca 32,2 gündü ve erkek meslektaşlarına kıyasla kısaydı. Bununla birlikte, LOE, 100 ug/ml LOE'nin en büyük etkiye sahip olduğu (yüzde 24,2 uzatma; Şekil 1b ve Tablo 1) ve 100 ug/ml LOE'nin hem erkek hem de sineklerde yaşam süresini uzattığı dişi CS sineklerinde daha da büyük yaşam süresi uzamasına neden oldu. dişi w1118 uçar, bu da LOE'nin uzatılmış yaşam süresinin CS genetik arka planıyla sınırlı olmadığını düşündürür (Şekil 1c, d ve Tablo 1).

DR, yaşam süresini uzatmak için iyi belgelenmiş bir müdahale olduğundan, LOE'nin uzun ömür etkilerinin DR tarafından değiştirilip değiştirilmeyeceğini test etmek istedik. Düşük kalorili yiyeceklerle yetiştirilen erkek ve dişi CS sinekleri, yüksek kalorili yiyeceklerle yetiştirilen CS sineklerine kıyasla ortalama yaşam süresinde sırasıyla yüzde 17,8 ve yüzde 49,4 artış gösterdi (Şekil 1e, f ve Tablo 1). Bununla birlikte, LOE, düşük kalorili yiyecekler üzerindeki kontrol sinekleri için zaten görülenin üzerinde yaşam süresi uzamasına neden olmadı (Şekil 1e, f ve Tablo 1), bu, LOE ile DR kaynaklı yaşam süresi uzaması arasında bir ilişki olduğunu öne sürüyor; en azından kısmen aynı yollardan hareket eder.

Kronik LOE tedavisi, olumsuz ödünleşimlere neden olmaz

LOE'nin neden olduğu yaşam süresi uzatması potansiyel olarak DR yolu ile bağlantılı olduğundan, LOE'nin sineklerin gıda alımını azaltıp azaltamayacağını ve DR benzeri bir durumla sonuçlanıp sonuçlanamayacağını inceledik. Yiyeceklerine boya ekleyen standart bir sistem kullanarak sineklerin yiyecek alımını izledik (Wang ve ark. 2009). Ortalama olarak, dişi CS sinekleri, aynı yaştaki erkeklere kıyasla çok daha fazla yiyecek yuttu, ancak kontrol ve LOE ile tedavi edilen sinekler arasında her iki cinsiyet için de gıda alımında hiçbir fark gözlenmedi (Şekil 2a).

Azaltılmış gıda alımına ek olarak, yaşam süresini uzatan müdahaleler doğurganlık ve fiziksel aktivitede azalma gibi olumsuz ödünleşimler içerebilir (Flatt ve ark. 2008; Wang ve ark. 2009; Sohal ve Buchan 1981). LOE ile tedavi edilen CS sineklerinin, yetişkin yaşamının ilk 20 gününde yumurta üretiminde herhangi bir fark göstermediğini bulduk (Şekil 2b). Hem LOE ile tedavi edilen hem de kontrol CS sinekleri, daha önce belirtildiği gibi (Wang ve ark. 2009), normal sirkadiyen ritim ve spontan motor aktivite (Şekil 2c) gösterdi.

LOE, meyve sineklerinde ve SAMP8 farelerinde yaşa bağlı hafıza eksikliklerini azaltır

Nöronların fonksiyonel düşüşü, yaşlanma sürecinin ortak bir özelliğidir. Sineklerin fonksiyonel hafızasını Pavlovian koku çağrışımlı kısa süreli hafıza testi kullanarak inceledik. Yüksek kalorili yiyecekler üzerindeki CS sinekleri, yetişkin yaşamının ilk 20 gününde kademeli bir bilişsel düşüş gösterdi (Şekil 3a). Bu hafıza düşüşü, 20. günde görülen istatistiksel olarak anlamlı bir farkla DR tarafından zayıflatıldı (Şekil 3a, b). LOE ayrıca, 100 ug/ml LOE'deki sineklerin, DR sinekleri için görülene benzer bir plato seviyesine ulaşmasıyla, yaşa bağlı hafıza düşüşünü doza bağlı bir şekilde azalttı (Şekil 3b).

Öğrenme ve hafızada erken başlangıçlı eksiklikler geliştirdiği bilinen ve Alzheimer hastalığının temel mekanizmalarını incelemek için uygun bir model olduğu gösterilen SAMP8 farelerinde LOE'nin pro-bilişsel etkisini daha da araştırdık (Flood ve Morley 1992, 1993). ; Chan ve diğerleri 2006; Takeda 2009). Yeni nesne tanıma testlerinde, 3-aylık SAMP8 fareleri, tanıdık nesneye kıyasla yeni nesne üzerinde daha fazla zaman harcayarak, eğitim seansından 3 saat sonraya kadar sürekli tanıma belleği gösterdi (Şekil 3c, d). Ancak bu hafıza tutma, 8-aylık SAMP8 farelerinde gözlenmedi (Şekil 3c, d). 5 ay boyunca (3 aylıktan başlayarak) içme suyuna LOE (100 ug/ml) eklenmesi, eğitim seansından 3 saat sonra bile SAMP8 farelerinin tanıma hafızasında tutulmasını önemli ölçüde arttırdı (Şekil 3d). 50 ug/ml LOE'lik su takviyesi daha az yararlı etkiye sahipti, ancak 2 saate kadar hafızada tutmayı iyileştirebildi (Şekil 3d).

Yükseltilmiş T labirent testlerinde, tüm fare grupları, kaçınma kriterine ulaşmak için benzer sayıda eğitim denemesi gerektirdi, bu da tüm farelerin benzer öğrenme yeteneklerine sahip olduğunu düşündürdü (Şekil 3e). 24-h bellek alma testlerinde, yalnızca 8-aylık, ancak 3-aylık değil, SAMP8 fareleri, bellek tutmada önemli bir eksiklik gösterdi (Şekil 3f). SAMP8 farelerindeki yaşa bağlı bu korku hafızası eksikliği, içme suyuna 5-aylık bir LOE takviyesi yapılarak da giderilebilir (Şekil 3f). Açık alan testlerinde seyahat hızı veya mesafesinde herhangi bir fark gözlenmediğinden (Şekil 3g ve veriler gösterilmemiştir), LOE'nin yukarıda gözlemlenen pro-bilişsel etkileri, farelerin genel motor aktivitesindeki herhangi bir değişikliğe atfedilemez. 5-aylık bir LOE tedavisi alan SAMP8 fareleri, gıda alımı veya su tüketimi üzerinde hiçbir etki ve vücut ağırlığında herhangi bir değişiklik göstermedi (Şekil 3h–j).

【Daha fazla bilgi için:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】