Geleneksel Çin Bitkisi Cistanche'nin Antidepresan ve Bilişsel İyileştirme Aktiviteleri Ⅰ
Jun 23, 2022
Soyut
İnsanların yüzde onundan fazlası, yaşamları boyunca en az bir depresyon epizodundan ve buna bağlı ruhsal bozukluklardan muzdariptir ve depresyon ve buna bağlı ruhsal bozukluklar, dünyanın en büyük halk sağlığı sorunlarından biridir. Çoklu sistem teorisi, çoklu sistemlerin düzensizliğinin, depresyon ve ilgili zihinsel bozuklukların patogenezinin altında yattığını ve çoklu sistem düzensizliği teorisine dayanan yeni tedavilere acilen ihtiyaç duyulduğunu iddia eder. Bu çalışmada, bitkiden kaynatmanın antidepresan etkisicistanche çöl çiçeğiYCMa veCistanche tübülozaincelendi. otcistanchekaynatma, fare kuyruğu süspansiyon testinde hareketsizlik süresini önemli ölçüde azalttı. Bitki kaynatma ile tedavi edilen fareler, Morris su labirenti testinde gelişmiş bir uzaysal öğrenme ve hafıza yeteneği gösterdi. Bitki kaynatma işlemine tabi tutulan gruplar, aşağı regüle edilmiş bir monoamin oksidaz (MAO) aktivitesi sergiledi; beyindeki dopamin (DA) konsantrasyonu, bitkiyi gösteren yukarı regüle edildicistanchekaynatma sinir uyarılabilirliğini geliştirdi; kortikosteronun (CORT) serum konsantrasyonu aşağı regüle edildi, bu da farelerin azaltılmış bir stres seviyesinden fayda sağladığını gösterdi. Bu nedenle, antidepresan etkinliği ve mekanizmasıgeleneksel Çin otucistanchebu çalışmada incelenmiştir. otcistanchedepresyon için tamamlayıcı ve alternatif bir terapi olarak geliştirilebilecek bir potansiyel göstermiştir.
1. Giriş
Depresyon ve buna bağlı duygudurum bozuklukları, tahminen nüfusun yüzde 12~17'sinin yaşamı boyunca en az bir dönem yaşadığı tahmin ediliyor, zihinsel engelliliğin önde gelen nedenleri arasında yer alıyor ve dünya çapında en önemli halk sağlığı sorunlarından biri olarak kabul ediliyor. Özellikle anlamlı olarak, depresyonlu hastaların önemli bir kısmı hafıza kaybı, konsantrasyon sorunları, enerji azalması veya yorgunluk, hobilere ve aktivitelere ilgi veya zevk kaybı ve uyku güçlüğü, sabah erken uyanma veya aşırı uykudan muzdariptir. Depresyon ve ilişkili sendromlarda anormallik için nöral substratlar belirsiz olsa da, nöroplastisite ve hücresel esnekliğin bozulmasının depresyonun patofizyolojisine yol açtığı ve başarılı tedavinin nörotransmitter seviyesinin müdahalesine bağlı olabileceği genel olarak kabul edilmektedir. Depresyon tedavisine yaklaşım temel olarak monoaminlerin özellikle serotonin (5-HT) ve norepinefrinin (NE) düzensizliğinin depresyon patogenezine katkıda bulunduğunu ve nörotransmitter sisteminin dopamin ile müdahalesini iddia eden klasik monoamin sistemi hipotezine dayanmaktadır. agonistler ve dopamin-noradrenerjik modülatörler, majör depresyon bozukluğunun semptomlarını hafifletebilir. Yaygın olarak reçete edilmesine rağmen, antidepresanların iyileştirici etkinliği sorgulanabilir ve yan etki göz ardı edilemez çünkü hastaların önemli bir kısmı monoamin sistemi manipülasyonuna yanıt vermez. Son zamanlarda, depresyon patogenezinin yeni teorileri, inflamatuar yollar, oksidatif stres yolu, hipotalamik-hipofiz-adrenal (HPA) ekseni, metabolik ve biyoenerjetik sistem, nörotrofik yollar, glutamat sistemi, opioid sistemi ve kolinerjik sistem, depresyon oluşumu ile yakından ilişkilidir. Kanıtlar, çoklu hedef müdahalenin tek bir hedef müdahaleden daha iyi etkinlik ürettiğini göstermektedir. Çoklu sistem düzensizliği teorisine dayalı yeni tedavilere acilen ihtiyaç duyulmaktadır.
Cistanche Faydaları hakkında daha fazla ayrıntı arama
Bitkisel ürünlerin ABD nüfusunun yarısından fazlasını tükettiği bildirildi; Depresyon tedavisinin tamamlayıcı bir yolu olarak bitki veya bitkisel ürünlere olan ilgi ve talep tüm dünyada artıyor. Depresyon giderici yararlı etki gösteren çok sayıda tıbbi bitki bulunmuştur. Depresyonu baskılama ve bilişsel işlevi iyileştirme etkisine sahip olduğu bildirilen bitkiler arasında deniz topalak,Ginkgo Biloba,piper zenci,hipericum perforatum,Griffonia simplicifolia. Ferulik asit ve piperin kombinasyonunun uygulanması, farelerde monoaminerjik sistemi manipüle ederek sinerjik bir antidepresan benzeri etki göstermiştir. Albiflorin, nörotransmiter reseptörlerine ve taşıyıcılarına karşı yüksek bir seçici afinite ile karakterize edildi ve serbestçe hareket eden sıçanların hipotalamusunda hücre dışı 5-HT ve NE konsantrasyonlarını önemli ölçüde arttırdı. Tıbbi bir bitkiMelisa officinalisL., serotonerjik nörotransmitter seviyesi üzerindeki etkiyi uygulayarak farelerin depresif davranışlarını hafifletti. Depresyon için alternatif ilaçlar olarak geliştirilen bu şifalı otlar veya kaynatmalar, depresyon semptomlarını hafifletmeye yardımcı olur ve antidepresan ilaç geliştirme için yeni bir kaynak sağlar. otcistancheÇin'in kuzeyindeki kurak topraklarda ve çöllerde dağıtılan türler, geleneksel Çin tıbbı bitkileridir ve Çin'de 1,000 yıldan fazla bir süredir çeşitli hastalıkların tedavisinde yaygın olarak kullanılmaktadır. Bitkinin çoklu etkinliğicistanchekaynatma afrodizyak arasında değişir [14], bağışıklık geliştirici [15], antioksidan [16] ve hepatoprotektif [17] özellikleri.c. çöl çiçeğikaynatmalar testiküler steroidojenik enzimleri indükler [18], penis erektil tepkisini teşvik eder ve hadım edilmiş sıçanlarda erektil reaksiyonun gecikme süresini kısaltır [19]. otcistancheinhibitör apoptoz genlerini ve nörotrofik faktörleri düzenleyerek dopaminerjik nöronların aktivitelerini engellediği bildirilmiştir.20].C. tübülozakaynatmalar, A'nın neden olduğu bilişsel işlev bozukluğunu değiştirdi 1-42 amiloid birikimini bloke ederek ve kolinerjik ve hipokampal dopaminerjik nöronal işlevi canlandırdı [21]. Bitkinin nöroprotektif özelliğicistanchebilişsel ilişkili hastalıklarda terapötik potansiyeli ifade eder. Depresyon, ortak belirtiler olarak unutkanlık ve bilişsel gerileme ile duygu tepkilerinin ortak bir karışık modudur.22]. otcistancheunutkanlığı tedavi etmek için yaygın olarak geleneksel bir Çin tıbbı olarak kullanılmıştır; dahası, yakın tarihli bir rapor, mısır unu ile takviye edilmiş erken yetişkin bir başlangıç uygulamasınınC. tübülozaOmurgasız hayvanlarda uzun ömür promosyonu ve koku alma ile ilişkili öğrenme ve hafıza gelişimi için faydalıdır.Meyve sineğimodel [23]. Bu gerçekler, bitkinin bilişsel iyileştirici özelliğini gösterir.cistanche; burada bu araştırmada ilk kez monoamin sistemi ve HPA eksenini düzenleyerek memeli modelinde antidepresan özelliği ve bunun bilişsel iyileştirme faaliyetleriyle ilişkisini tanımladık. Bitkinin antidepresan özelliği ve ön mekanizmasının aydınlatılmasıcistanchebitkinin uygulama spektrumunu genişletebilircistanchedepresyon için alternatif bir çare olarak geliştirilebilir.
2. Cistanche'nin Anti-Depresyon Fonksiyonunun Materyalleri ve Yöntemleri
2.1. Cistanche Bitki Malzemesi ve Kaynatma Hazırlama
c. çöl çiçeğiYCMa, Çin'deki Nei Moğol Özerk Bölgesi'nden elde edildi;C. tübülozaÇin'in Sincan Uygur Özerk Bölgesi'nden alındı. Kaynatmadan önce, bitki (c. çöl çiçeğiYCMa veyaC. tübüloza), HPLC (yüksek performanslı sıvı kromatografisi) (Milford, MA, Waters, ABD) kullanılarak ekinakozit ve verbaskosit içeriğini tespit etmek için incelendi ve hayvan deneyleri için uygun ürün (Çin Halk Cumhuriyeti Farmakopesi'ne göre) kullanıldı. . Kaynatma, Sun Yat-sen Üniversitesi Devlet Eğitim Bakanlığı Gıda ve Sağlık Mühendisliği Araştırma Merkezi tarafından geliştirilen su buharlaştırma yöntemine göre elde edildi. Kurutulmuşcistanche çöl çiçeği125 g'lık YCMa, 120-mesh elek ile parçalandı ve elendi ve ardından toz 3 L ultra saf su içinde çözüldü, 100 derecede 2 saat ısıtıldı, sonra oda sıcaklığına soğutuldu ve elendi ; süpernatant geri dönüştürülmüştür. Tortu daha sonra 2 L ultra saf suda çözündürüldü ve daha sonra 1.5 saat ısıtıldı ve süpernatantı geri dönüştürmek için yukarıda belirtildiği gibi soğutuldu; tortu daha sonra süpernatantın geri dönüştürülmesi için kullanıldı. Tüm süpernatantın içeriği döner vakumlu buharlaştırıcılarla 60 derecede zenginleştirildi; son olarak ham ilaç konsantrasyonu 0,5 g/ml olarak ayarlandı ve ürün -20 derecede saklandı.
2.2. HPLC Analizi ile Ekinakozit ve Verbaskosit Testi
HPLC (yüksek performanslı sıvı kromatografisi) ekinakozid ve verbaskosidin kalitatif ve kantitatif analizini ölçmek için kullanıldı; Verbascoside (saflık > yüzde 93) ve echinacoside (saflık > yüzde 93) Ulusal Gıda ve İlaç Kontrolü Enstitülerinden (Pekin, Çin) satın alındı ve standart bir kontrol olarak kullanıldı.
2.3. Cistanche'de Hayvan Bakımı ve Deneysel Davranış
Denekler, Guangdong Eyaleti Tıbbi Deney Hayvanları Merkezi tarafından sağlanan 21-25 gram ağırlığında SPF (spesifik patojen içermeyen) erkek Kunming fareleriydi. Hayvanlar plastik kafeslere (kafes başına on) yerleştirildi; ortam koşulu şu şekilde ayarlandı: nem yüzde 40~70, oda sıcaklığı 21 ± 1 derece ve 12 saat: 12 saat aydınlık-karanlık periyodu. Tüm hayvan deneyleri, Sun Yat-sen Üniversitesi Hayvan Etik Kurulu tarafından onaylandı.
2.4. Cistanche'de Kuyruk Süspansiyon Testi
Kuyruk süspansiyonu testi, Cryan ve diğerleri tarafından açıklanan protokole göre yapıldı. [24] mütevazı değişikliklerle. Kısaca, 21. günde, fareler, kafaları yerden 50 mm yükseklikte olacak şekilde naylon kateter ile bağlanmış metalik darağacı kullanılarak kuyruk tarafından askıya alındı. Fareler, kuyruğunun ucundan 10~20 mm uzaklıkta yapışkan bantlar üzerindeki kancaya asıldı ve fıçı tahtaları ile akustik ve görsel olarak izole edildi. Farenin vücut hareketleri kaydedildi ve solunum hareketleri göz ardı edildi. Deney gününden önce, fareler adaptasyon için 8 dakika süreyle askıya alındı.
2.5. Cistanche üzerinde Morris Su Labirenti Testi
Su labirenti testi, Vorhees ve ark. [25–27] Çin Tıp Bilimleri Akademisi tarafından geliştirilen cihazı kullanarak. Su ile doldurulmuş dairesel bir havuz (150 cm çapında) (26 ± 1 derece; kenar yüksekliği (su yüzeyinden duvar kenarına olan mesafe): 10 cm) kullanılmış, dairesel kurtarma platformu (çap: 11 cm; platform merkez noktası ile havuz arasındaki mesafe) duvar: 27 cm) su yüzeyinin 1-1.5 cm altına daldırıldı ve yansımaları önlemek için test alanı dolaylı aydınlatma (50 ± 10 lux) ile aydınlatıldı. Dört başlangıç konumu kullanıldı, N, G, E ve W. Uzamsal öğrenme testi için hayvanlar, sabit başlangıç konumunda 9-11. günlerde günlük olarak eğitildi. Farelerin uzamsal hafızasını ve öğrenme yeteneğini göstermek için kaçış gecikme süresi ölçülür. Fareler platformu bulamaz veya üzerine tırmanamazlarsa, fareler platforma yönlendirilir ve 10 saniye kalır. 60 sn dinlendikten sonra bir sonraki antrenman seansına geçilir. Son uzamsal öğrenme testinden elde edilen veriler kalıplama için temel değer olarak kullanılmıştır. 23-28. günlerde, yer navigasyon testi ve uzaysal sonda yapıldı. Yer yön bulma testi 6 gün sürmüş ve saat 13:00'te alınmış, hayvanlar başları havuz duvarına saat yönünde bakacak şekilde suya bırakılmış ve gecikme süresi (2 dakika içinde) kaydedilmiştir. Yer navigasyon testi yapıldıktan sonra platform kaldırıldı. Fareler rastgele bir yerde başları havuz duvarına bakacak şekilde suya yerleştirildi ve 2 dakika içinde platformun bulunduğu yerde farelerin yüzdüğü hareket izi ve sıklığı kaydedildi. Hareket izi, fare hareketinin çok işlevli otonom kaydedicisi (YLS-1A, Yiyan Technology, Jinan, Çin) tarafından kaydedildi.
2.6. MAO Aktivitesinin Tespiti
MAO aktivitesi, MAO tespit kiti (A034, Nanjing Jiancheng Biyomühendislik Enstitüsü, Nanjing, Çin) kullanılarak ölçüldü ve tespit, imalatçının protokolüne göre yapıldı. Beyin dokusundan homojenat elde edildi; 500μ300 ile karıştırıldımμl Ajan 1 ve 300μl Ajan 2, 3 saat 37 derecede inkübe edildi ve ardından arka arkaya 300 ile ilave edildi.μ1, Ajan 3, 3 ml Ajan 4 ve 2 dakika girdap. Reaksiyon karışımı, 10 dakika süreyle 3,000 rpm'de santrifüjlendi ve süpernatantın optik yoğunluğu, 242 nm uyarma ışığı kullanılarak ultraviyole ve görünür spektrum spektrofotometresi (Lambda 25, PerkinElmer, ABD) ile belirlendi.
2.7. Nörotransmitterlerin ve ACTH ve CORT'un Enzim Bağlı İmmünosorbent Testi
Dopamin (DA), norepinefrin (NE) ve 5-hidroksitriptamin (5-HT) için Enzyme Linked Immunosorbent Assay (ELISA) saptama kiti Şanghay, BLUE GENE'den satın alındı. ELISA tespit kitleri, Qiyun Biotech, Guangzhou'dan satın alındı.
Prosedürler aşağıdaki gibidir: deney oda sıcaklığında gerçekleştirilmiştir. PVC mikrotitre plakasının kuyularını 1-10'da yakalama antikoru ile kaplayın.μkarbonat/bikarbonat tamponunda g/mL konsantrasyonu (pH 9.6). Plakayı kapatın ve gece boyunca 4 derece inkübe edin; plağı 3 kez PBS/tween ile yıkayın ve spesifik olmayan bağlanma bölgeleri Block Solution tarafından bloke edilir; sonra plağı 3 kez PBS/tween ile yıkayın. Standartlar ve numuneler Blocking Solution ve 100'de seyreltilir.μPlakanın kuyusuna l eklenir ve plaka kapatılır ve 1 saat 37 derecede inkübe edilir. 100 ekleμl. seyreltilmiş saptama antikoru ve plakayı 37 derecede 1 saat kuluçkaya yatırın; plağı 3 kez PBS/Tween ile yıkayın. 50 ekleμl. renk geliştirme solüsyonu ve plağı ışıktan uzak tutun ve oda sıcaklığında 15 dakika inkübe edin; 50μReaksiyonu durdurmak için stop buffer eklenir. 30 dakika içinde 405 nm'ye ayarlanmış bir mikroplaka okuyucu ile her kuyu için optik yoğunluğu (OD) ölçün.
2.8. İstatistiksel analiz
Tüm veriler ortalama ± SEM (ortalamanın standart hatası) olarak temsil edildi, anlamlı fark şu şekilde analiz edildi: t-test veya tek yönlü ANOVA, ardından SPSS 16.0 kullanan Duncan'ın çoklu aralık testi veP< 0.05, istatistiksel olarak anlamlı kabul edildi.