Dolaşımdaki Exosomal PD-L1'in Tespit Yöntemleri

İletişim:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Dolaşımdaki eksozomal PD-L1'in saptanması için hala kabul görmüş ve ana akım yöntemler eksikliği vardır. Enzim bağlantılı immünosorbent tahlili (ELISA) ve akış analizi gibi geleneksel eksozom saptama yöntemleri, dolaşımdaki eksozomlarda PD-L1'i saptamak için kullanılabilir ve ELISA şu anda en yaygın kullanılan yöntemdir. ELISA yöntemi, dolaşımdaki eksozomlardaki PD-L1 içeriğini nicel olarak tespit edebilir ve kullanımı kolaydır. Akış sitometrisi, büyük numunelerde dolaşan eksozomal PD-L1'i nicel olarak saptamak için kullanılabilir, ancak yüksek saptama ekipmanı gerektirir. Eksozomlar üzerinde yapılan derinlemesine araştırmalarla, eksozom proteinlerinin ve nükleik asitlerin tespit yöntemleri de zenginleştirilmiş ve geliştirilmiş ve dolaşımdaki eksozomlarda PD-L1 tespiti alanına bazı yeni yöntemler getirilmiştir (Şekil).

TespitidolaşanekzomalPD-L1

1. Dijital PCR

Eksozomlarda bulunan az miktarda nükleik asit nedeniyle, geleneksel saptama yöntemlerinin gen kopya numaralarını doğru bir şekilde saptaması zordur. Dijital PCR teknolojisi, son derece yüksek hassasiyet ve mutlak niceleme ile bir nükleik asit saptama yöntemidir. Duyarlılığı tek bir nükleik asit molekülünün seviyesine ulaşabilir, bu nedenle eksozomların nükleik asit içeriğini tespit etmede avantajları vardır. Araştırmacılar, melanomlu ve küçük hücreli olmayan akciğer kanserli hastaların plazma eksozomlarındaki PD-L1 mRNA kopya sayısını doğru bir şekilde nicel olarak analiz etmek için dijital PCR teknolojisini kullandılar ve plazma eksozomal PD-L1 mRNA kopya sayısı ile anti-PD1 Korelasyonu arasındaki ilişkiyi ortaya çıkardılar. tedavi etkileri arasında Dijital PCR teknolojisinin tanıtılması, eksozomal PD-L1'in araştırılması için büyük önem taşıyan eksozomal PD-L1 mRNA'nın tespit kabiliyetini önemli ölçüde geliştirdi. Bununla birlikte, eksozomal PD-L1 mRNA içeriği ile PD-L1 proteininin ifadesi arasında tutarsızlıklar olabilir. Bu nedenle, tek başına eksozomal PD-L1 mRNA'nın tespiti, daha fazla araştırma ve açıklama gerektiren belirli kusurlara sahip olabilir.

Anti-kanser çöl cistanche cistanche özünden yararlanır

2. ELISA

ELISA, genellikle plazma veya kültür ortamındaki küçük moleküler proteinleri saptamak için kullanılan geleneksel bir immünolojik analiz yöntemidir. Hassasiyeti yüksektir ve nicel olarak analiz edilebilir. ELISA, eksozomal PD-L1 proteinini saptamak için de kullanılabilir ve büyük numune partilerinin nicel olarak saptanmasını sağlayabilir. ELISA yöntemi ilkesine dayanan PD-L1 protein saptama kiti, plazma eksozomal PD-L1 proteininin kantitatif saptamasına da uygulanmıştır. Chen et al. hücre kültürü ortamından veya plazmadan türetilen eksozomal PD-L1 proteininin saptanması için kullanılan ELISA ilkesine dayalı bir eksozomal PD-L1 protein saptama sistemi kurdu. Doğrusal algılama aralığı {{10}} idi.2-12.0 ng/mL. ELISA, nicel olarak saptanması kolay ve iyi bir tekrarlanabilirliğe sahip olan eksozomal PD-L1 proteinini saptamak için iyi bir yöntemdir. Ancak plazmada serbest PD-L1 proteininin bulunması nedeniyle doğruluğuna müdahale edecektir. Bu nedenle, bu yöntem dolaşımı algılar. Eksozomal PD-L1 proteininin duyarlılığı ve özgüllüğünün hala daha fazla araştırılması gerekmektedir.

Herba cistanche kökü: kanser karşıtı

3. Akış analizi yöntemi

Akış sitometrisi genellikle sıvı içinde asılı kalan hücreleri veya diğer biyolojik parçacıkları yazmak ve saymak için kullanılır, bu nedenle bu yöntem eksozom tespiti ve sayımına da dahil edilmiştir. THEODORAKIS ve ark. önce baş ve boyun kanseri hastalarının plazmasındaki eksozomları ayırmak için kromatografiyi kullandı ve ardından PD-L1-pozitif eksozomları saptamak ve saymak için akış analizini kullandı. PD-L1 protein ifadesi, floresan yoğunluğu olarak ifade edildi. Sonuçlar, yöntemin eksozomal PD-L1 proteinini tespit etmede iyi bir tekrarlanabilirliğe sahip olduğunu ve tek bir hasta numunesi üzerinde çoklu paralel testler gerçekleştirildiğinde birey içi varyasyonunun yüzde 7 olduğunu göstermektedir. Aynı zamanda, yöntemin doğruluğunu doğrulamak için araştırmacılar, eksozomal PD-L1 proteininin tespiti için referans yöntemi olarak konfokal floresan analizini kullandılar. Üç numune paralel olarak test edildi ve sonuçlar karşılaştırıldı ve akış sitometrisi ve konfokal floresan analizi sonuçlarının oldukça tutarlı olduğu bulundu; bu, akış sitometrisinin eksozomal PD-L1'in kantitatif analizi için doğru bir yöntem olduğunu gösterir. Ayrıca LUX ve ark. ayrıca akış sitometrisi ile pankreas kanseri hastalarının serumunda eksozomal PD-L1 ve c-Met proteinlerinin ekspresyonunu başarılı bir şekilde tespit etti, ancak tespit yönteminin performansının daha fazla çalışılması gerekiyor. Şu anda, eksozom protein tespiti için geleneksel akış analizörlerinden daha uygun olan Apogee ultra hassas nano-akış analizörü gibi eksozom tespiti için özel olarak kullanılan akış analizörleri de piyasaya sürülmüştür.

Cistanche tubulosa özü takviyesinin faydası: anti-tümör ve kanser

4. Yüzey Geliştirilmiş Raman Saçılma Teknolojisi

Yüzeyle güçlendirilmiş Raman saçılması (SERS), biyomedikal alanlarda yaygın olarak kullanılan oldukça hassas bir parmak izi spektroskopi tekniğidir. Şu anda, bilim adamları eksozomal PD-L1 proteinini tespit etmek için SERS teknolojisini kullandılar. Araştırmacılar önce plazmada eksozomları spesifik olmayan bir şekilde adsorbe etmek için TiO2-modifiye edilmiş manyetik boncuklar kullandılar ve ardından altın nanoparçacıkları modifiye etmek için PD-L1 antikorlarına bağlı SERS problarını kullandılar ve ardından eksozom örneklerini altın nanoparçacıklarla inkübe ettiler. Bir manyetik boncuk-eksozom-altın nanoparçacık kompleksi yapısı oluşturur ve son olarak kompleksi zenginleştirmek ve ayırmak için bir manyetik alan kullanır ve daha sonra PD-L1 pozitif eksozomlarının tespitini gerçekleştirmek için algılama için bir lazer konfokal Raman spektrometresine yerleştirilir. . Vücut içeriği algılama. Bu yöntemin yüksek algılama hassasiyeti vardır ve en düşük algılama limiti 1 PD-L1 artı eksozom/μL plazmaya ulaşabilir. Ek olarak, araştırmacılar bu yöntemi farklı konsantrasyonlara sahip bir grup numuneyi tespit etmek için kullandılar. Sonuçlar, SERS yoğunluğunun, eksozom numunelerinin konsantrasyonunun logaritması ile doğrusal olarak ilişkili olduğunu gösterdi; bu, saptama yönteminin iyi bir stabiliteye sahip olduğunu ve doğrudan plazmada kullanılabileceğini gösterdi. Ek bir eksozom izolasyon adımı olmadan eksozomları tespit edin. Şu anda, SERS teknolojisinin eksozomal PD-L1 proteininin saptanmasında doğrudan uygulanmasına ilişkin çok az çalışma vardır, ancak SERS teknolojisinin diğer eksozomların saptanması için uygulanmasına ilişkin araştırmalar da yapılmıştır ve bu da önemli bir referansa sahiptir. eksozomal PD-L1 protein değerinin tespiti için.

Çölde yaşayan cistanche yetiştirme durumu

5. HOLMES-ExoPD-L1 yöntemi

HOLMES-ExoPD-L1 yöntemi, eksozomal PD-L1 proteininin yeni bir saptama yöntemidir. Bu yöntemde, eksozom membranı üzerinde PD-L1 proteinini verimli bir şekilde bağlayabilen ve PD-L1 protein glikosilasyonu ile müdahale edilmeyen, PD-L1 proteinini hedefleyen yeni bir MJ5C aptamer tasarlanmıştır. Bu yöntemde, floresan olarak etiketlenmiş MJ5C aptamer ve eksozomlar önce birbirine bağlanmak için ince bir kapiler içinde birlikte inkübe edildi ve kızılötesi lazer, mikron ölçekli bir sıcaklık gradyanı oluşturmak için ince kapiler içine odaklandı. Serbest MJ5C aptamer ve eksozomal MJ5C aptamer komplekslerinin termoforez oranları önemli ölçüde farklıydı ve serbest aptamerin termoforetik tükenmesi, eksozom-aptamer kompleksininkinden daha hızlıydı. ayrıldı. Bu nedenle, uyarma ışığının etkisi altında, eksozomal PD-L1 proteininin içeriği, floresan olarak etiketlenmiş aptamerlerin floresan yoğunluğunun saptanmasıyla belirlenebilir. Yöntem yüksek hassasiyete ve 17,6 pg/mL tespit limitine sahiptir. Ayrıca, daha az numune hacmi ve kısa algılama süresi avantajlarına da sahiptir. Eksozomal PD-L1 proteininin saptanması için oldukça özgün bir yöntemdir, ki bu yeni bir gelişme için çok önemlidir Eksozomal PD-L1 proteini saptama yöntemi aydınlatıcı değere sahiptir.

Anti-tümör: cistanche takviyesi

Exosomal PD-L1, malign tümör immünoterapisi alanında geniş uygulama beklentilerine sahiptir ve eksozom araştırmaları alanında sıcak noktalardan biri haline gelmiştir. Doku PD-L1 ekspresyonunun tespiti ile karşılaştırıldığında, dolaşımdaki eksozomal PD-L1'in tespiti, patolojik örneklemenin neden olduğu doku heterojenliği probleminden kaçınırken numuneleri elde etmek ve gerçek zamanlı tespit yapmak daha kolaydır; eksozomal PD-L1 ayrıca tümör bağışıklığına da yol açar. Önemli bir kaçış nedenidir ve malign tümörlerin ilerlemesi ile ilişkilidir ve hastalık değerlendirmesi ve prognoz tahmini için önemli bir gösterge olabilir. Ek olarak, plazma eksozomal PD-L1 seviyelerinin de anti-PD-L1 immünoterapisi için uygun hastaları taramak ve tedaviye yanıtlarını tahmin etmek için kullanılması beklenmektedir. Bununla birlikte, dolaşımdaki eksozomlar PD-L1'in saptanması için hala tanınan ve etkili yöntemler bulunmamaktadır. Basit veya ayırmasız, daha az numune talebi, yüksek hassasiyet, iyi tekrarlanabilirlik ve daha az duyarlı algılama sinyalleri ile ideal bir dolaşan eksozom oluşturmak gereklidir. PD-L1'in in vivo tespiti için bir yöntem. Dolaşımdaki eksozomal PD-L1'in tespit yöntemi hala daha derinlemesine araştırmalara ihtiyaç duymaktadır, ancak gelecekte yeni tespit yöntemlerinin geliştirilmesi ve uygulanmasıyla, dolaşımdaki eksozomal PD-L1'in anti-PD1 immünoterapisine daha iyi rehberlik edebileceğine inanılmaktadır. ve malign tümörlerin tanı ve tedavisinde kullanılabilir. daha önemli bir rol oynar.