Tongluo Digui Kaynatma, Podositlerin Otofajisini Teşvik Ederek Diyabetik Sıçanlarda Böbrek Hasarını Tedavi Ediyor

İletişim:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

HAN Jiarui, ZHANG Yage, SHI Xiujie, PENG Zing, XING Yufeng, PANG Xinxin

Soyut

AMAÇ:

Tongluo Digui kaynatma işleminin diyabetik sıçanlarda böbrek hasarı ve streptozotosin kaynaklı podosit otofajisi üzerindeki etkilerini araştırmak.

YÖNTEMLER:

Erkek Sprague-Dawley sıçanları rastgele altı gruba ayrıldı: normal, model, Tongluo Digui kaynatma (yüksek, orta ve düşük doz) ve valsartan. Diyabetik hayvan modelini kopyalamak için streptozotosin intraperitoneal olarak enjekte edildi. 8 hafta sonra, diyabetik nefropati modelini oluşturmak için proteinüri değerlendirildi. Tedaviler intragastrik yoldan günlük olarak uygulandı. Gavajdan 16 hafta sonra, 24 saatlik idrar protein konsantrasyonu, kan şekeri, serum kreatinin ve üre nitrojen konsantrasyonlarını belirledik. Daha sonra, sıçanlar kurban edildi ve böbrekler hasat edildi ve transmisyon elektron mikroskobu ile glomerüler podositler dahil olmak üzere glomerüllerdeki patolojik değişiklikleri değerlendirmek için periyodik asit-Schiff ile boyandı. Western blot analizi böbrek dokularında nefrin, podosin, p62, beclin-1, LC3Ⅱ/Ⅰ ve p-mTOR/mTOR proteininin ekspresyonunu belirlemek için kullanıldı.

SONUÇLAR:

Model grubu ile karşılaştırıldığında, Tongluo Digui kaynatma, 24 saatlik idrar protein konsantrasyonu, kan şekeri, hemoglobin A1c, serum kreatinin, üre azot konsantrasyonları, toplam serum proteini ve albüminde düşüşlerle ilişkilendirildi. Aynı zamanda, mezangial mezenterik genişleme ve ayak proseslerinin füzyonu azaldı, glomerüler bazal membran önemli ölçüde kalınlaşmadı ve podositlerdeki podosit sayısı ve otofagozom sayısı arttı. Ayrıca böbrek dokusunda nefrin, podosin, LC3Ⅱ ve beclin-1 proteininin ekspresyonu yukarı doğru düzenlenirken, p62 proteininin ekspresyonu aşağı regüle edildi ve mTOR fosforilasyonu inhibe edildi.

ÇÖZÜM:

Tongluo Digui kaynatma, mTOR fosforilasyonunu inhibe ederek diyabetik nefropatinin ilerlemesini engelleyebilir, böylece podositleri korumak için otofajiyi arttırır ve proteinüriyi azaltır.

Anahtar Kelimeler:Diyabetik nefropatiler; otofaji; podosit; Tongluo Digui kaynatma

cistanche sapı faydalarıiçinböbrek fonksiyonu

GİRİİŞ

Diyabetik nefropati (DN), diyabetin ciddi mikrovasküler komplikasyonlarından biridir ve diyabetik hastaların yüzde 30'unun -40 böbrek hastalığından muzdarip olmasıdır. Artan diyabet insidansı ile DN, dünya çapında son dönem böbrek hastalığının ana nedeni haline gelmiştir.1 Bu hem aileler hem de toplum için ağır bir ekonomik yüktür.

Podosit hasarı, DN ilerlemesinin önemli bir nedenidir. Terminal olarak farklılaşmış bir hücre olarak otofaji, podositlerin fizyolojik işlevini sürdürmede önemli bir rol oynar.2,3 Normal bir fizyolojik durumda, podositlerde hasarlı proteinleri ve organelleri uzaklaştıran yüksek derecede bir otofaji vardır.4 Bununla birlikte, diyabetiklerde ortamda, podosit otofajisi inhibe edilir, bu da podosit otofajisinin DN patogenezinde önemli bir rol oynadığını düşündürür.5 DN, Geleneksel Çin Tıbbında "Xiao Ke", "Guan Ge" ve "ödem" kategorilerine aittir. Geleneksel Çin Tıbbı teorisi, kanın durması veYin eksiklikDN'nin en önemli nedenleridir.6 Bu nedenle, DN tedavisi kan dolaşımını teşvik etmeli ve yin'i beslemelidir ve bunun için Tongluo Digui kaynatma kurulmuştur. Daha önce Tongluo Digui kaynatma işleminin DN'de faydalı bir tedavi etkisi olduğunu bulmuştuk. Bu çalışmada, Tongluo Digui kaynatma işleminin böbrek hasarı, otofaji ve mTOR sinyal yolu üzerindeki etkisini değerlendirmek için streptozotosin (STZ) kaynaklı tip 1 DN sıçan modelini kullanmayı amaçladık. Ayrıca, DN'nin ilerlemesini geciktirmede Tongluo Digui kaynatma işleminin altında yatan moleküler mekanizmayı araştırdık ve DN'nin klinik önlenmesi ve tedavisi için kanıt sağladık.

MALZEMELER VE YÖNTEMLER

Hayvanlar

Spesifik patojen içermeyen (SPF) Sprague-Dawley sıçanları [n=60, erkek, (150 ± 10) g; yeterlilik sertifikası numarası: SCXK (Yu) 2017-0001], Henan Deney Hayvanları Merkezi'nden (Zhengzhou, Çin) satın alındı. Standart ışık döngüsü (14 saat ışık, 10 saat gece), kapı içi sıcaklık (23 ± 2) derece, nem (yüzde 40 -50), barınma (kafes başına üç hayvan) ve besleme (sterilize yem ve içme suyu) kullanılmıştır. Deney, Henan Geleneksel Çin Tıbbı Hastanesinin (Zhengzhou, Çin) Hücre Görüntüleme Merkezi Laboratuvarında tamamlandı. Tüm deneyler, Ulusal Sağlık Enstitüleri tarafından yayınlanan Laboratuvar Hayvanlarının Bakımı ve Kullanımı kılavuzuna göre yapıldı.

İlaçlar

Valsartan (Val) kapsülleri, Novartis Pharma Schweiz AG'den (X2307 CN-b, Beijing, Çin) satın alındı. Tongluo Digui kaynatma, Shuichi (Hirudo) 12g, Guijia (Carapax et Plastrum Testudinis) 30 g, Dihuang (Radix Rehmanniae) 20 g, Huangqi (Radix Astragali Perparata) 20 g, Danggui (Radix Angelicae Sinensis) 30 g, Zexie (Rhizoma) içerir. Alismatis) 10 gr, Dahuang (Radix et Rhizoma Rhei) 15 gr, Gancio (Radix Glycyrrhizae) 6 gr. Çin bitkileri, Henan Geleneksel Çin Tıbbı Hastanesinden (Zhengzhou, Çin) satın alındı.

Deneysel tasarım

Sıçanlar rastgele her biri 10 sıçandan oluşan altı gruba ayrıldı: kontrol grubu (Ctrl), DN model grubu (STZ), Val tedavi grubu ile DN modeli (Val), Tongluo Digui kaynatma ile DN modeli yüksek doz tedavi grubu (HTL) , Tongluo Digui kaynatma orta doz tedavi grubu (MTL) ile DN modeli ve Tongluo Digui kaynatma düşük doz tedavi grubu (LTL) ile DN modeli. Altı sıçan grubu, gavajdan 16 hafta sonra öldürüldü ve böbrekler toplandı.

Üç farklı dozda Val (10 mg·kg－1·d－1) ve Tongluo Digui kaynatma, 16 hafta boyunca günde bir kez gavaj yoluyla verildi. Uygulanan dozlar, hayvanlar ve insanlar arasındaki ilaç dozları için dönüşüm denklemine dayanıyordu. Sıçan dozu (mg/kg)=yetişkin insan dozu (mg/kg) × dönüşüm faktörü (6,25). Yüksek doz, orta doz ve düşük doz Tongluo Digui kaynatma gruplarına sırasıyla 5.4, 2.7 ve 1.35 g·kg － 1·d － 1 gastrik gavaj verildi. Sıçanlar haftalık olarak tartıldı. 24-h idrar, 0, 12 ve 24 haftaların sonunda metabolik kafesler kullanılarak toplandı. Tedavinin bitiminden sonra (24 haftada), sıçanlara kloral hidrat deri altı enjeksiyonu ile anestezi uygulandı ve böbrek ve kan doku örnekleri toplandı ve －80 derecede saklandı. Sıçanlar, normal bir laboratuvar hayvanı diyetine ve temiz suya (aşağıda açıklananlar hariç) serbest erişime sahipti.

sans bitkisi

DN modelinin kurulması

STZ (Sigma, St. Louis, MO, ABD) daha önce tarif edildiği gibi diyabeti indüklemek için kullanıldı.7 Deneylerden önce 60 sıçanın tümü 12 saat boyunca sınırlı su erişimine sahipti. Bunlardan 50 sıçana, sitrat tamponu (0.1 mol/L, pH 4.5) içinde çözülmüş 60 mg/kg STZ'nin tek bir intraperitoneal enjeksiyonu uygulandı. Diyabet, STZ enjeksiyonundan 72 saat sonra kan glukoz konsantrasyonları ölçülerek doğrulandı. Art arda üç gün boyunca 16.7 mmol/L'den büyük veya buna eşit glikoz konsantrasyonuna sahip hayvanlar diyabetik olarak kabul edildi. 8 hafta sonra, sıçanlar ayrı metabolik kafeslere yerleştirildi ve idrar mikroalbümin (BAE) ölçümü için 24 saat boyunca idrar toplandı. DN modeli, BAE 30 mg/ 24 h'ye eşit veya daha büyük elde edildiğinde doğrulandı.

biyokimyasal göstergeler

Hayvanların böbrek fonksiyonlarını değerlendirmek için serum ve idrar değerlendirmeleri kullanıldı. Sıçan idrarı metabolik kafes kullanılarak değerlendirildi. Kuyruk kesme yöntemi kullanılarak sıçan kanı örnekleri alındı.8 Serum ve idrar örnekleri kullanılana kadar －80 derecede donduruldu. Serum kreatinin, kan üre azotu, albümin ve idrar protein konsantrasyonları radyoimmünoassay ile ölçüldü. Hemoglobin A1c (HbA1c), C-peptid ve insülin seviyeleri, HbA1c ELISA Kiti (Crystal Chem INC, Elk Grove Village, IL, ABD), C-peptid Elisa kiti (Kainuo Bio Ltd., Beijing, Çin) ve insülin kullanılarak ölçüldü. Üreticinin talimatlarına göre Elisa kiti (Merck Millipore Co., Ltd., Bed ford, MA, ABD). Sıçanlarda ürik asit, toplam serum proteini (TP), albümin (ALB), alanin aminotransferaz (ALT) ve aspartat aminotransferaz (AST) otomatik biyokimyasal analiz cihazı ile belirlendi.

Histopatolojik inceleme

Formalinle sabitlenmiş böbrek dokusu parafine gömüldü, 3-4 um kalınlığında kesitler halinde dilimlendi ve periyodik asit-Schiff (PAS) ile boyandı. Mezanjiyal hücre proliferasyonu, hücresel infiltrasyon ve mezanjiyal matris değişiklikleri dahil olmak üzere böbrek dokusundaki morfolojik değişiklikler, ışık mikroskobu (NIKON D3100) (x 400) ile boyanmış her bölüm için incelenmiştir.

Transmisyon elektron mikroskobu

TEM, böbrek dokusundaki podositlerin ve mezanjiyal hücrelerin morfolojisini gözlemlemek için kullanıldı. Taze böbrek dokuları bloklara ayrıldı (< 1="" mm3="" ),="" were="" quickly="" fixed="" in="" 2%="" phosphate-buffered="" glutaraldehyde="" for="" at="" least="" 2="" h,="" washed="" three="" times="" with="" pbs,="" fixed="" in="" 1%="" osmium="" tetroxide="" for="" 2="" h,="" and="" then="" embedded="" in="" acetone="" wrap="" after="" dehydration.="" specimens="" were="" sliced="" in="" 50-60="" nm="" ultrathin="" sections,="" double-stained="" with="" 3%="" uranyl="" acetate="" and="" lead="" citrate,="" and="" then="" examined="" under="" a="" tem="" (jeol-jem-1400="" plus,="" japan="" electron="" optics="" laboratory,="">

Western blot analizi

Toplam protein, protein lizis tamponu (Solarbio Biotech, Beijing, Çin) ile böbrek dokusundan ekstrakte edildi. Süpernatandaki protein konsantrasyonları, bir BCA tahlil kiti (Solarbio Biotech, Beijing, China, PC0020) ile test edildi. 40 ug protein içeren numuneler, yüzde 12 SDS-poliakrilamid jel elektroforezi (SDS PAGE) (Applygen, Beijing, Çin, B1004) üzerinde ayrıldı ve daha sonra bir nitroselüloz filtre membranına (Solar bio Biotech, Beijing, Çin) aktarıldı. 2 saat oda sıcaklığında yüzde 5 yağsız süt ile bloke edildikten sonra, -aktin (Proteintech, ürün numarası: 60008-1-lg), LC3II/I (Ab cam, ürün numarası: ab48394), P62 (Proteintech, ürün numarası: 18420-1-AP), beclin-1 (protein teknolojisi, ürün numarası: 11306-1-AP), p-mTOR (CST, ürün numarası: #5536), mTOR (CST, ürün numarası: # 2983), nefrin (Abcam, madde numarası: ab58968) ve podosin (her biri protein, madde numarası: 20384 -1-AP) ilave edildi ve gece boyunca 4 derecede inkübe edildi. Bu karışım daha sonra beş kez TBS artı yüzde 0,05 Tween-20 (Solar bio Biotech, Beijing, Çin) (TBS-T) ile 5 dakika yıkandı, ardından odada inkübe edilmeden önce ikincil antikor (1-2000) eklendi. 1 saat sıcaklık, 5 dakika boyunca TBST ile beş kez yıkama, geliştirilmiş kemilüminesans (ECL, Millipore, Billerica, MA, ABD) ile renk gelişimine tabi tutuldu ve şerit gri tonlama analizi için ImageJ yazılımı kullanılarak maruz bırakıldı.

istatistiksel analiz

Veriler, SPSS yazılımı (Windows için IBM SPSS İstatistikleri, sürüm 23.0. 2014, Armonk, NY, ABD) kullanılarak analiz edildi. Gruplar arasındaki farklılıklar, tek yönlü bir varyans analizi ve ardından Tukey testi kullanılarak test edildi. Veriler ortalama ± standart sapma olarak ifade edildi. P < 0.05="" anlamlı="" kabul="">

luteolin

SONUÇLAR

Tongluo Digui kaynatma işleminin DN sıçan böbrekleri üzerindeki koruyucu etkisi

Kan şekeri, glike hemoglobin, serum kreatinin, kan üre nitrojen konsantrasyonu ve {{0}}saat idrar protein konsantrasyonu gibi biyokimyasal göstergeler gavajdan 16 hafta sonra ölçülmüştür. (Tablo 1). Sonuçlar, normal grupla karşılaştırıldığında, kan şekeri, glislenmiş hemoglobin, serum kreatinin, kan üre nitrojen konsantrasyonu, 24-saat idrar protein konsantrasyonu, TP ve ALB'nin model grubunda önemli ölçüde daha yüksek olduğunu gösterdi (P < {{="" 7}}.01),="" böylece="" model="" grubunun="" böbrek="" fonksiyonunun="" bozulduğunu="" gösterir.="" val="" grubunda="" hem="" serum="" kreatinin="" konsantrasyonu="" hem="" de="" 24="" saatlik="" idrar="" protein="" konsantrasyonu="" azaldı="" (p="">< 0.05).="" ayrıca,="" tongluo="" digui="" kaynatma="" yüksek="" doz="" grubunda,="" kan="" şekeri,="" hba1c,="" serum="" kreatinin="" ve="" üre="" nitrojen="" konsantrasyonlarında="" ve="" ayrıca="" 24="" saatlik="" idrar="" atılımında="" önemli="" bir="" azalma="" gözlendi="" (p="">< 0.01).="" bu="" etkiler="" doza="" bağımlıydı.="" her="" bir="" sıçan="" grubunda="" ürik="" asit,="" insülin,="" alt="" ve="" ast="" düzeylerinde="" anlamlı="" bir="" farklılık="" yoktu.="" birlikte="" ele="" alındığında,="" bulgularımız="" tongluo="" digui="" kaynatma="" maddesinin="" dn="" sıçanlarında="" böbrek="" hasarını="" hafiflettiğini="" ve="" böbrek="" fonksiyonunu="" doza="" bağlı="" bir="" şekilde="" iyileştirdiğini="">

DN sıçan böbrek patolojisindeki değişiklikler, Tongluo Digui kaynatma işleminden sonra PAS boyama ile değerlendirildi (Şekil 1). Normal grup ile karşılaştırıldığında, model grubunda mezangial alanda genişleme ile birlikte glomerüler mezanjiyal hücrelerde ve mezanjiyal stromada önemli bir artış gözlendi. Glomerüler mezangial alan, üç Tongluo Digui kaynatma doz seviyesinin her birinde ve Val grubunda arttı. Ayrıca, bu dört tedavi grubu, model grubu ile karşılaştırıldığında mezanjiyal matrisin genişliğini azaltmıştı ve yüksek doz Tongluo Digui kaynatma grubundaki glomerüler mezanjiyal alan, Val grubundan daha azdı. Bu bulgular, Tongluo Digui kaynatma işleminin DN glomerüler lezyonlarının ilerlemesini geciktirdiğini gösterdi.

DN sıçanlarında Tongluo Digui kaynatma işleminin glomerüler podosit hasarı üzerindeki etkisi

Podosit işaretleyici proteinler nefrin ve podosin ekspresyonunu belirlemek için Western blot analizi kullanıldı (Şekil 2). Normal grupla karşılaştırıldığında, model grubundaki her iki proteinin ekspresyonu önemli ölçüde azaldı (P < 0.01),="" bu="" da="" podosit="" hasarını="" gösterir.="" ek="" olarak,="" model="" grubu="" ile="" karşılaştırıldığında="" tongluo="" digui="" kaynatma="" gruplarında="" nefrin="" ve="" podosin="" ekspresyonu="" yukarı="" doğru="" düzenlenmiştir="" (p=""><>

Tongluo Digui kaynatma işleminin DN sıçanlarında glomerüler podosit otofajisi üzerindeki etkisi

Glomerüler podositlerdeki otofagozomlardaki değişiklikler TEM altında gözlendi (Şekil 3). Sonuçlar, normal grubun glomerüler podositlerinde otofagozomlar gösterdi. Model grubunda podosit otofagozomları yoktu ve podosit ayak süreçleri de kayboldu. Üç Tongluo Digui kaynatma doz grubunda ve valsartan grubunda, Tongluo Digui kaynatma işleminin DN sıçanlarında podosit otofajisini arttırdığını öne süren glomerüler podosit otofagozomlarını gözlemledik. Otofaji ile ilgili proteinler P62, beclin-1 ve LC3Ⅱ'nin ekspresyonunu saptamak için Western blot kullanıldı (Şekil 4). Normal grupla karşılaştırıldığında, model grubundaki beclin-1 ve LC3Ⅱ ifadesi önemli ölçüde azalırken (P < 0.01),="" p62="" ifadesi="" önemli="" ölçüde="" arttı="" (p="">< 0.01).="" bu="" bulgular,="" dn="" sıçanlarında="" otofajinin="" zayıfladığını="" gösterdi.="" model="" grubuyla="" karşılaştırıldığında,="" tongluo="" digui="" kaynatma="" yüksek="" doz="" grubu,="" yukarı="" regüle="" edilmiş="" beclin-1="" ve="" lc3ⅱ="" ifadesine="" (p="">< 0.05)="" ve="" p62'nin="" aşağı="" regüle="" edilmiş="" ifadesine="" sahipti.="" birlikte,="" bu="" sonuçlar,="" dn'li="" sıçanlarda="" tongluo="" digui="" kaynatma="" işleminin="" böbrek="" koruyucu="" etkisinin,="" böbrek="" hücrelerinde="" artan="" otofaji="" ile="" ilişkili="" olabileceğini="">

Tongluo Digui kaynatma, DN sıçanlarında mTOR fosforilasyonunu inhibe ederek glomerüler podosit otofajisini arttırır

mTOR fosforilasyonunun inhibisyonu, otofajiyi arttırır (Şekil 5). Normal grupla karşılaştırıldığında, model grubunda mTOR fosforilasyonu artarken (P < 0.01)="" tongluo="" digui="" kaynatma="" gruplarında="" inhibe="" edildi="" (p="">< 0.05).="" bu,="" tongluo="" digui="" kaynatma="" işleminin,="" mtor="" sinyal="" yolunun="" aktivasyonunu="" inhibe="" ederek="" podosit="" otofajisini="" arttırdığını="" ileri="" sürdü.="" önceki="" çalışmalar,="" otofajinin="" podositleri="" koruduğunu="" ve="" böbrek="" fonksiyonunu="" iyileştirdiğini="">

TARTIŞMA

DN esas olarak idrar proteini, yüksek kan şekeri, polidipsi, polifaji ve poliüri gibi belirti ve semptomlarla karakterizedir. Belirtiler, "Xiao Ke", "Guan Ge" ve "ödem" gibi geleneksel Çin tıbbının semptomlarına benzer. DN'nin oluşumu ve gelişimi, yin eksikliği ve kan stazının patolojik temelinden ayrılamaz.6 Yin eksikliği ve kan stazının gelişmesiyle birlikte, böbrek yavaş yavaş hasar görür, böylece üriner protein kaybı gösterir, bu da ayrıca mikrotrombüs oluşumuna yol açar ve böbrek fibrozu. DN hastaları kaçınılmaz olarak son dönem böbrek hastalığından muzdariptir.11

Tongluo Digui kaynatma, ünlü bir Çin geleneksel tıp doktoru olan Zhang Binghou tarafından kuruldu ve DN.12 tedavisinde yılların deneyimine dayanarak, 13 Tougluo Digui kaynatma, Shuichi (Hirudo), Guijia (Carapax et Plastrum Testudinis), Dihuang (Radix Rehmanniae), Huangqi (Radix Astragali Perparata), Danggui (Radix Angelicae Sinensis), Ze Xie (Rhizoma Alismatis), Dahuang (Radix et Rhizoma Rhei), Gancio (Radix Glycyrrhizae). Bunlar arasında Shuizhi (Hirudo) ve Guijia (Carapax et Plastrum Testudinis), Yin'i beslemede ve DN'de kan dolaşımını teşvik etmede rol oynadığına inandığımız hükümdar ilaçlarıdır. Guijia (Carapax et Plastrum Testudinis) vücudun bağışıklığını ve salgı durumunu iyileştirir ve yaşlanmayı geciktirir.14 Shuizhi (Hirudo), diğer farmakolojik etkilerin yanı sıra anti-pıhtılaştırıcı, anti-tümör, anti-inflamatuar ve anti-fibrotik etkilere sahiptir ve böbrekleri iyileştirebilir. serum kreatinin ve kan üre nitrojen konsantrasyonlarını önemli ölçüde azaltmak ve idrar protein atılımını azaltmak için DN'deki patolojik değişiklikler.15,16 DN'de podosit hasarı, glomerüler bazal membran filtrasyon bariyerinde ve proteinüri oluşumunda önemli bir rol oynar.17 Nefrin ve podocin, podositlerin yüzeyindeki gözenek membran proteinleridir. İki protein, glomerüler filtrasyon bariyerinin işlevinde önemli bir rol oynayan bir kompleks oluşturmak üzere etkileşime girer.18 Protein ekspresyonunun anormal dağılımı, farklı derecelerde proteinüriye yol açar.19 Bu çalışmada, STZ ile indüklenen tip 1 DN sıçanları bir artış gösterdi. 24 saat boyunca idrarla protein atılımında ve bozulmuş böbrek fonksiyonunda. Ayrıca, PAS boyaması model grubunda mezanjiyal hücre sayısının ve mezanjiyal matrisin arttığını göstererek modelin başarılı bir şekilde kurulduğunu gösterdi. Farklı dozlarda Tongluo Digui kaynatma, 24 saatlik idrar proteini ve serum kreatinin konsantrasyonlarını azalttı ve azaltılmış mezangial hücreler ve matris ile DN sıçanlarının böbrek patolojisini iyileştirdi. Western blot analizi, Tongluo Digui kaynatma grubundaki nefrin ve podocin ekspresyonunun, model grubuna kıyasla daha yüksek olduğunu gösterdi; bu, bu formülün podositleri koruyarak sıçanlarda DN ilerlemesini geciktirdiğini gösterir.

Otofaji, hücrelerdeki lizozomal proteinlerin parçalanması için bir yoldur ve hücre homeostazını ve bütünlüğünü koruyan hasarlı veya aşırı eksprese edilmiş proteinlerin temizlenmesinde çok önemli bir rol oynar.20 Otofaji, diyabette podosit lizozomal homeostazının ayrılmaz bir parçasıdır ve gelişmiş otofaji, podosit hasarını azaltabilir. .5 Podositlerde otofaji ile ilgili gen Atg5'i spesifik olarak devre dışı bıraktıktan sonra, fareler yavaş yavaş podositlerde her yerde bulunan protein agregasyonu, mitokondriyal hasar ve otofaji aktivitesi gösterdi; podositler hasar gördü ve ayak süreçleri kayboldu ve birleşti, bu da otofajinin korunduğunu gösterdi. Normal podosit fonksiyonunu korumak önemlidir.21,22 Bu çalışmada, TEM ve Western blot analizi kullanarak glomerüler podositlerde Tongluo Digui kaynatma işleminin otofaji üzerindeki etkisini araştırdık. TEM, her Tongluo Digui kaynatma dozu grubundaki podosit otofagozomlarının sayısının model grubuna kıyasla arttığını gösterdi. Ayrıca Western blot, otofaji ile ilgili proteinler LC3, beclin-1 ve p62'nin ekspresyonunu gösterdi. Model grubu ile karşılaştırıldığında, Tongluo Digui kaynatma grubunda LC3Ⅱ ve beclin-1 ifadesi önemli ölçüde artarken, p62 protein ifadesi önemli ölçüde azaldı. Bu bulgular, Tongluo Digui kaynatma işleminin glomerüler podositlerde otofaji seviyesini arttırdığını gösterdi.

Rapamisin hedef proteini (mTOR), otofajinin ana düzenleyicilerinden biridir.23 Renal korteks ve medullada yaygın olarak dağılır ve DN podosit hasarının gelişiminde rol oynar.24,25 Yüksek glukoz ve stres durumlarında, mTOR aktive edilir ve fosforile edilir, bu da aşağı akış hedeflerinin fosforilasyonuna ve otofajinin inhibisyonuna yol açar. Liu ve arkadaşları 26, mTOR inhibitörü rapamisinin spesifik olarak mTOR kinaza bağlandığını ve mTOR aktivitesini inhibe ettiğini, podosit otofajisini arttırdığını ve böbrek fonksiyonunu koruduğunu gösterdi. Model grubunda mTOR fosforilasyonunun arttığını ve Tongluo Digui kaynatma işleminin bu süreci engellediğini bulduk, bu da Tongluo Digui kaynatma işleminin podositlerde otofajiyi arttırdığını ve mTOR sinyal yolu aktivasyonunu engelleyebileceğini öne sürdü.

Özetle, Tongluo Digui kaynatma, podositlerde otofajiyi inhibe edebilir, glomerüler podositleri koruyabilir, glomerüler filtrasyon membran bütünlüğünü koruyabilir, 24 saatlik idrar proteini atılımını azaltabilir ve mTOR aktivasyonunu inhibe ederek DN ilerlemesini geciktirebilir. Bu bulgular, DN'de Tongluo Digui kaynatma işleminin koruyucu etkisinin daha iyi anlaşılmasına yönelik içgörüler sağlar, ancak ilgili altta yatan mekanizma açıklanmaya devam etmektedir.

cistanche nedirböbrek hastalığı için

REFERANSLAR
1 Teknik GH. Diyabetik nefropati - bu bir bağışıklık bozukluğu mu? Klinik Bilim 2017; 131(16): 2183-2199.
2 Li JJ, Kwak SJ, Jung DS, et al. Diyabetik nefropatide podosit biyolojisi. Böbrek Uluslararası Suppl 2007; (106): S36-S42.
3 Liu N, Xu L, Shi Y, Zhuang S. Podosit otofajisi: diyabetik nefropatinin ilerlemesini önlemek için potansiyel bir terapötik hedef. J Diyabet Res 2017; 2017(4): 1-6.
4 Mizushima N, Komatsu M. Otofaji: hücre ve dokuların yenilenmesi. Hücre 2011; 147(4): 728-741.
5 Tagawa A, Yasuda M, Kume S, et al. Bozulmuş podosit otofajisi, diyabetik nefropatide proteinüriyi şiddetlendirir. Diyabet 2016; 65(3): 755-767.
6 Sun C, Xie QY, Meng QG. Diyabetik nefropatinin TCM sendromunun dağılım yasası üzerine çalışma. Pekin Zhong Yi Yao Da Xue Xue Bao 2015; 38(4): 266-270.
7 Szkudelski T. Sıçan pankreasının B hücrelerinde alloksan ve streptozotosin etki mekanizması. Physiol Res 2001; 50(6):537-546.
8 Dang WY, Hou LY, Wu HM, Yan XM, Zheng XF, Hao J. Qingre Lishi Yishen kaynatma işleminin bir sıçan modelinde immünoglobulin A nefropatisinin glomerüler fibrozu üzerindeki etkinliği. J Tradit Chin Med 2019; 39(4): 516-523.
9 Lu MK, Gong XG, Guan KL. Podosit fonksiyonunda mTOR: rapamisin diyabetik nefropati için iyi midir? Hücre Döngüsü 2011; 10(20): 3415-3416.
10 Hartleben B, Gödel M, Meyer-Schlesinger C, et al. Otofaji, glomerüler hastalık duyarlılığını etkiler ve yaşlanan farelerde podosit homeostazını korur. J Clin Yatırım 2010; 120(4): 1084-1096.
11 Sun GD, Li CY, Cui WP, et al. Diyabetik nefropati tedavisi için bitkisel Geleneksel Çin Tıbbının gözden geçirilmesi. J Diyabet Res 2016; 2016: 5749857.
12 Zhao WJ, Cai Z, Meng Y, et al. Kronik böbrek hastalığının tedavisinde Zhang Binghou'nun besleyici böbrek Yin yönteminin uygulanması. Pekin Zhong Yi Yao 2016; 35(4): 341-343.
13 Duan YF, Zhang HB. Profesör Zhang Binghou'nun uygulama deneyiminin tanıtımı. Xin Zhong Yi 2012; 44 (4): 147-149.
14 Yu XJ, Chen SH, Lu GY. Kaplumbağa kabuğu "Ziyin Bushen"in farmakodinamiği üzerine bir araştırma araştırması. Dang Dai Yi Xue 2009; 15(10): 15-17.
15 Pang XX, Tong Y, Li HP, Han JR. Diyabetik nefropati tedavisinde sülük ve ekstraktlarının araştırma ilerlemesi. Guang Ming Zhong Yi 2019; 34(1): 168-171.
16 Zhang ZL, Dong H. Diyabetik nefropati tedavisinde sülük ve aktif bileşenlerinin araştırma ilerlemesiZhong Xi Yi Jie He Yan Jiu 2018; 10(02): 106- 110.
17 Dai H, Liu Q, Liu B. Diyabetik nefropatide podosit tükenmesinin mekanizması üzerine araştırma ilerlemesi. J Diyabet Res 2017; 2017: 2615286.
18 Martin CE, Jones N. Nephrin podositte sinyalleşme: yarık diyaframda ve ötesinde sinyal düzenlemesinin güncellenmiş bir görünümü. Ön Endokrinol (Lozan) 2018; 9:302.
19 Jaakko P, Karl T. Glomerüler filtrasyon bariyerinin moleküler yapısı. Biochem Bioph Res Co 2010; 396(1): 164-169.
20 Noboru M, Beth L, Ana Maria C, Klionsky DJ. Otofaji, hücresel kendi kendine sindirim yoluyla hastalıkla savaşır. Doğa 2008; 451(7182): 1069.
21 Lenoir O, Jasiek M, Henrique C, et al. Endotelyal hücre
ve podosit otofajisi, diyabetin neden olduğu glomerülosklerozdan sinerjistik olarak korur. Otofaji 2015; 11(7): 1130-1145.
22 Ilatovskaya DV, Levchenko V, Lowing A, Shuyskiy LS, Palygin O, Staruschenko A. Diyabetik nefropatide podosit hasarı: TRPC kanallarının anjiyotensin Ⅱ bağımlı aktivasyonunun etkileri. Bilim Temsilcisi 2015; 5:17637.
23 Rabanal-Ruiz Y, Otten EG, Korolchuk VI. Otofajiye ana ağ geçidi olarak mTORC1. Denemeler Biochem 2017; 61 (6): 565-584.
24 Kim YC, Guan KL. mTOR: otofaji düzenlemesi için farmakolojik bir hedef. J Clin Yatırım 2015; 125(1): 25-32.
25 Li XY, Wang SS, Han Z, et al. Triptolid, miR-141-3p/PTEN/Akt/mTOR yolu yoluyla diyabetik renal fibrozu hafifletmek için otofajiyi geri yükler. Mol Ther Nükleik Asitler 2017; 9: 48-56.
26 Liu L, Yang L, Chang B, Zhang J, Guo Y, Yang X. Diyabetik nefropatili sıçanların böbrek dokularında mTORS6K1-LC3 Ⅱ sinyal yolu aracılığıyla rapamisinin hücre otofajisi üzerindeki koruyucu etkileri. Ren Başarısız 2018; 40(1): 492-497.