Aşılar, SARS-CoV-2 Omicron Varyantına Karşı Yüksek Derecede Çapraz Reaktif Hücresel Bağışıklık Sağlıyor

İletişim: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-posta:audrey.hu@wecistanche.com

Jinyan Liu1*, Abishek Chandrashekar1*, Daniel Sellers1*, Julia Barrett1, Michelle Lifton1, Katherine McMahan1, Michaela Sciacca1,

Haley VanWyk1, Cindy Wu1, Jingyou Yu1, Ai-ris Y. Collier1, Dan H. Barouch1,2*

1 Beth Israel Deaconess Tıp Merkezi, Boston, MA, ABD;

2 Ragon Enstitüsü MGH, MIT ve Harvard, Cambridge, MA, ABD

Yüksek oranda mutasyona uğramış SARS-CoV-2 Omicron (B.1.1.529) varyantının, WA1/2020 Spike immünojenini1 kodlayan mevcut aşılar tarafından ortaya çıkarılan nötralize edici antikor yanıtlarının önemli bir kısmından kaçındığı ve bunun sonucunda, artan enfeksiyonlara yol açtığı gösterilmiştir. ve azaltılmış aşı etkinliği. Hücresel bağışıklık tepkileri, özellikle CD8 artı T hücre tepkileri, ciddi SARS-CoV-2 hastalığına2-6 karşı koruma için büyük olasılıkla kritiktir. Burada, mevcut SARS-CoV-2 aşıları tarafından indüklenen hücresel bağışıklığın, SARS-CoV-2 Omicron varyantına karşı oldukça çapraz reaktif olduğunu gösteriyoruz. Ad26.COV2.S veya BNT162b2 aşılarını alan bireyler, merkezi ve efektör bellek hücresel alt popülasyonları dahil olmak üzere hem Delta hem de Omicron varyantlarına karşı kapsamlı çapraz reaktivite gösteren dayanıklı CD8 plus ve CD4 plus T hücresi tepkileri gösterdi. Medyan Omicron-spesifik CD8 artı T hücresi yanıtları, WA1/2020-spesifik CD8 artı T hücre yanıtlarının yüzde 82-84 idi. Bu veriler, mevcut aşıların, nötralize edici antikor yanıtlarında önemli ölçüde azalma olmasına rağmen, SARS-CoV-2 Omicron varyantı ile ciddi hastalıklara karşı önemli ölçüde koruma sağlayabileceğini göstermektedir.

cistanche sağlık yararları: bağışıklığı geliştirmek

Yakın zamanda yapılan araştırmalar, aşıyla ortaya çıkan nötralize edici antikorların (NAb'ler) büyük ölçüde yüksek oranda mutasyona uğramış SARS-CoV-2 Omicron varyantına indirgendiğini ve bunun da tam olarak aşılanmış bireylerde çığır açan enfeksiyonlar dahil olmak üzere hızlı küresel yayılmaya yol açtığını göstermiştir1. SARS-CoV-2 Omicron varyantına karşı aşıyla tetiklenen hücresel bağışıklık tepkilerinin çapraz reaktivitesini değerlendirmek için, adenovirüs vektörü bazlı Ad26 ile aşılanmış 51 kişide CD8 artı ve CD4 artı T hücresi yanıtlarını değerlendirdik. COV2.S aşısı7 (Johnson & Johnson; N=20) veya mRNA bazlı BNT162b2 aşısı8 (Pfizer; N=31).

BNT162b2 aşısını takiben, 1. ayda yüksek WA1/2020-spesifik NAb tepkileri gözlemledik, ardından beklendiği gibi 8. ayda keskin bir düşüş9,10 (Şekil 1a). Ad26.COV2.S aşısını takiben, 1. ayda önemli ölçüde başlangıçta daha düşük WA1/2020-spesifik NAb tepkileri vardı, ancak bu tepkiler daha kalıcıydı ve 89,11. aylarda devam etti (Şekil 1a). Bununla birlikte, her iki aşı için de minimal çapraz reaktif Omicron-spesifik NAb'ler gözlendi (Şekil 1a), ilave güçlendirmenin yokluğunda son verilerle tutarlı olarak1. Reseptör bağlanma alanına (RBD) özgü bağlanma antikor yanıtları, ELISA ile değerlendirildi ve minimal çapraz reaktif Omicron'a özgü bağlanma antikorları ile benzer eğilimler gösterdi (Şekil 1b). Antikor yanıtlarının aksine, Spike'a özgü hücresel bağışıklık yanıtları, şu şekilde değerlendirildi: havuzlanmış peptit IFN-g ELISPOT deneyleri, Omicron'a karşı önemli çapraz reaktivite gösterdi (Genişletilmiş Veri Şekil 1). Daha sonra Spike'a özgü CD8 plus ve CD4 plus T hücresi tepkilerini hücre içi sitokin boyama deneyleriyle değerlendirdik. Ad26.COV2.S, medyan Spike'a özgü IFN-g CD8 artı 0 T hücre yanıtlarını indükledi.0Yüzde 61, 0.0Yüzde 62 ve {{ 72}}.0aşıdan sonraki 8. ayda WA1/2020, Delta ve Omicron'a karşı sırasıyla yüzde 51 (Şekil 2a). BNT162b2, aşılamayı takiben 8. ayda WA1/2020 ve Omicron'a karşı sırasıyla yüzde 0.028 ve yüzde 0.023'lük medyan Spike'a özgü IFN-g CD8 artı T hücre yanıtlarını indükledi (Şekil 2a). Bu veriler, Omicron'a özgü CD8 artı T hücresi yanıtlarının, WA1/2020-spesifik CD8 artı T hücresi yanıtları ile yüzde 82-84 çapraz reaktif olduğunu göstermektedir. Ad26.COV2.S tarafından ortaya çıkarılan başak spesifik IFN-g CD4 artı T hücresi tepkileri, WA1/2020, Delta ve Omicron'a karşı sırasıyla yüzde 0.026, yüzde 0.030 ve yüzde 0.029'du ve BNT162b2'ye göre medyan, WA1/2020 ve Omicron'a karşı sırasıyla yüzde 0.033 ve yüzde 0.027, CD4 artı T hücre tepkilerinin de önemli çapraz reaktivitesini gösterir (Şekil 2b). Spike'a özgü TNF-a ve IL-2 salgılayan CD8 artı ve CD4 artı T hücresi tepkileri için de önemli Omicron çapraz reaktivitesi gözlendi (Genişletilmiş Veri Şekil 2).

Doğrusal regresyon analizi, Omicron'a özgü CD8 artı T hücresi tepkilerinin, her iki zaman noktasında (R=0.78, P) Ad26.COV2.S aşısı için WA1/2020-spesifik CD8 artı T hücresi tepkileriyle korele olduğunu gösterdi (R=0.78, P<0.0001, slope="" 0.75)="" and="" the="" bnt162b2="" vaccine="" (r="0.56,"><0.0001, slope="" 0.81),="" although="" two="" individuals="" had="" undetectable="" omicron-specific="" cd8+="" t="" cell="" responses="" following="" bnt162b2="" vaccination="" (fig.="" 3a).="" similarly,="" omicron-specific="" cd4+="" t="" cell="" responses="" correlated="" with="" wa1/2020-specific="" cd4+="" t="" cell="" responses="" for="" both="" the="" ad26.cov2.s="" vaccine="" (r="0.79,"><0.0001, slope="" 0.83)="" and="" the="" bnt162b2="" vaccine="" (r="0.90,"><0.0001, slope="" 0.88)="" (fig.3b).="" spike-specific="" ifn-g="" cd8+="" and="" cd4+="" t="" cell="" central="" memory="" and="" effector="" memory="" subpopulations="" elicited="" by="" ad26.cov2.s="" also="" showed="" extensive="" cross-reactivity="" to="" delta="" and="" omicron.="" at="" month="" 8,="" cd8+="" central="" memory="" responses="" were="" 0.076%,="" 0.054%,="" and="" 0.075%,="" cd8+="" effector="" memory="" responses="" were="" 0.168%,="" 0.143%,="" and="" 0.146%,="" cd4+="" central="" memory="" responses="" were="" 0.030%,="" 0.035%,="" and="" 0.038%,="" and="" cd4+="" effector="" memory="" responses="" were="" 0.102%,="" 0.094%,="" and="" 0.083%,="" against="" wa1/202,="" delta,="" and="" omicron,="" respectively="" (fig.="">

Verilerimiz, Ad26.COV2.S ve BNT162b2'nin, Omicron dahil SARS-CoV-2 varyantlarına karşı geniş ölçüde çapraz reaktif hücresel bağışıklık ortaya çıkardığını göstermektedir. Bu gözlemlerin iki farklı aşı platformu teknolojisi (viral vektör ve mRNA) üzerindeki tutarlılığı, bu bulguların genelleştirilebilirliğini ortaya koymaktadır. Omicron'a özgü CD8 plus ve CD4 plus T hücre yanıtlarının kapsamlı çapraz reaktivitesi, belirgin şekilde azaltılmış Omicron'a özgü nötralize edici ve bağlayıcı antikor yanıtlarıyla keskin bir tezat oluşturur. Bu veriler, SARS-CoV-2 Alfa, Beta ve Gama varyantlarına karşı hümoral bağışıklık tepkileriyle karşılaştırıldığında aşıyla tetiklenen hücresel bağışıklık tepkilerinin daha fazla çapraz reaktivitesini gösteren önceki çalışmalarla tutarlıdır12. Omicron'a karşı CD8 artı T hücresi yanıtlarının 82-84 yüzde çapraz reaktivitesi, Omicron mutasyonlarına6 dayalı teorik tahminlerle tutarlıdır.

Klinik öncesi çalışmalar, CD8 artı T hücrelerinin al yanaklı makaklarda, özellikle antikor yanıtları optimalin altında olduğunda, SARS-CoV-2'a karşı korumaya katkıda bulunduğunu göstermiştir5. Dayanıklı CD8 artı ve CD4 artı T hücre tepkileri de enfeksiyon ve aşılamanın ardından rapor edilmiştir2- 4,6,9,11,13,14. CD8 artı T hücrelerinin viral enfeksiyonların temizlenmesindeki rolü göz önüne alındığında, hücresel bağışıklığın ciddi SARS-CoV-2 hastalığına karşı aşı korumasına önemli ölçüde katkıda bulunması muhtemeldir. Bu, antikor tepkilerinin önemli bir kısmından kaçan Omicron için özellikle alakalı olabilir. Verilerimiz, mevcut aşıların, azaltılmış nötralize edici antikor yanıtlarına ve artan bulaşıcı enfeksiyonlara rağmen SARS-CoV-2 Omicron varyantı nedeniyle ciddi hastalıklara karşı önemli koruma sağlayabileceğini göstermektedir.

cistanche tozu

yöntemler

Çalışma popülasyonu

BNT162b2 aşısını alan bireylerden örnekler, Beth Israel Deaconess Medical Center (BIDMC) numune biorepository'den alındı. Ad26.COV2.S alan kişilerden örnekler COV1001 çalışmasından (NCT04436276) alınmıştır. Her iki çalışma da BIDMC kurumsal inceleme kurulu tarafından onaylandı. Tüm katılımcılar bilgilendirilmiş onam verdi. SARS-CoV- 2 enfeksiyonu geçmişi olan, başka COVID-19 aşıları olan veya immünosupresif ilaçlar alan bireyler bu çalışmanın dışında tutulmuştur.Psödovirüs nötralize edici antikor testi

Bir lusiferaz raportör geni ifade eden SARS-CoV-2 psödovirüsleri, psödovirüs nötralize edici antikorları ölçmek için kullanıldı. Kısaca, paketleme yapıları psPAX2'yi (AIDS Kaynak ve Reaktif Programı), lusiferaz raportör plazmidi pLentiCMV Puro-Luc'u (Addgene) ve spike protein eksprese eden pcDNA3'ü oluşturur.1-SARS-CoV-2 SΔCT birlikteydi. lipofektamin 2000 (ThermoFisher Scientific) ile HEK293T hücrelerine (ATCC CRL_3216) transfekte edildi. SARS-CoV-2 varyantlarının psödovirüsleri, WA1/2020 suşu (Wuhan/WIV04/2019, GISAID erişim ID: EPI_ISL_402124), B.1.1.7 varyantı kullanılarak üretildi (Alfa, GISAID erişim kimliği: EPI_ISL_601443), B.1.351 varyantı (Beta, GISAID erişim kimliği: EPI_ISL_712096), B.1.617. 2 (Delta, GISAID erişim kimliği: EPI_ISL_2020950) veya B.1.1.529 (Omicron, GISAID Kimliği: EPI_ISL_7358094.2). Sözde tip virüsleri içeren süpernatanlar, transfeksiyondan 48 saat sonra toplandı; sözde tip virüsler, 0.45-um filtre ile süzülerek saflaştırıldı. İnsan serumunun nötralizasyon aktivitesini belirlemek için, HEK293T-hACE2 hücreleri, gece boyunca oyuk başına 1.75 x 104 hücre yoğunluğunda 96-yuvalı doku kültürü plakalarına ekildi. Isı ile inaktive edilmiş serum numunelerinin üç kat seri dilüsyonları hazırlandı ve 50 ul psödovirüs ile karıştırıldı. Karışım, HEK293T-hACE2 hücrelerine eklenmeden önce 37 derecede 1 saat inkübe edildi. 48 saat sonra hücreler, üreticinin talimatlarına göre Steady-Glo Luciferase Assay (Promega) içinde parçalandı. SARS-CoV-2 nötralizasyon titreleri, virüs kontrol kuyularının ortalamasına göre göreceli ışık birimlerinde yüzde 50'lik bir azalmanın (NT50) gözlemlendiği numune seyreltisi olarak tanımlandı.

Enzim bağlantılı immünosorbent tahlili (ELISA)

Serumdaki SARS-CoV-2 spike reseptör bağlama alanı (RBD)-spesifik bağlanma antikorları ELISA ile değerlendirildi. 96-kuyu plakaları 2 ug/mL SARS-CoV-2 WA1/2020, B.1.617.2 (Delta), B.1.351 ile kaplandı (Beta) veya 1x Dulbecco fosfat tamponlu salin (DPBS) içinde B.1.1.529 (Omicron) RBD proteini ve gece boyunca 4 derecede inkübe edildi. İnkübasyondan sonra, plakalar bir kez yıkama tamponu (1 x DPBS içinde yüzde 0.05 Tween 20) ile yıkandı ve oda sıcaklığında 2 ila 3 saat boyunca oyuk başına 350 uL kazein blok solüsyonu ile bloke edildi. İnkübasyonun ardından blok solüsyonu atıldı ve plakalar kuru olarak kurutuldu. Kazein bloğunda seyreltilmiş ısıyla inaktive edilmiş serumun seri dilüsyonları kuyucuklara ilave edildi ve plakalar, 3 yıkamadan ve 1:4000 seyrelti anti- karanlıkta oda sıcaklığında insan IgG yaban turpu peroksidazı (HRP) (Invitrogen, ThermoFisher Scientific). Plakalar 3 kez yıkandı ve her bir kuyucuğa 100 µL SeraCare KPL TMB SureBlue Start solüsyonu eklendi; oyuk başına 100 μL SeraCare KPL TMB Stop solüsyonu eklenerek plaka gelişimi durduruldu. 650 nm'de bir referansla 450 nm'de absorbans, bir VersaMax mikroplaka okuyucusu (Molecular Devices) ile kaydedildi. Her numune için, ELISA son nokta titresi, 0.2'lik bir düzeltilmiş absorbans değeri (450 nm-650 nm) veren karşılıklı serum seyreltmesini hesaplamak için bir 4-parametre lojistik eğrisi kullanılarak hesaplandı. Enterpolasyonlu uç nokta titreleri rapor edildi.

cistanche Deserticola özü: bağışıklığı iyileştirin

Enzime bağlı immüno-spot (ELISPOT) tahlili.

ELISPOT plakaları, MabTech'ten fare anti-insan IFN- monoklonal antikoru ile 1 ug/oyukta kaplandı ve gece boyunca 4 derecede inkübe edildi. Plakalar DPBS ile yıkandı ve R10 ortamı ile bloke edildi (yüzde 1 100x penisilin-streptomisin, 1M HEPES, 100mM Sodyum piruvat, 200mM L-glutamin ve yüzde 0.1 55mM ile ısıyla inaktive edilmiş FBS ile yüzde 10 RPMI 2-Merkaptoetanol) 37 derecede 2-4 saat. SARS-CoV-2 havuzlanmış S peptidleri SARS-CoV-2 WA1/2020, B.1.617.2 (Delta) veya B.1.1.529 (Omicron) (21st Century Biochemicals) hazırlandı ve 2 ug/kuyu konsantrasyonunda kaplandı ve plakaya 100,000 hücre/kuyucuk eklendi. Peptitler ve hücreler 15-20 saat 37 derecede inkübe edildi. Bu inkübasyonu izleyen tüm adımlar oda sıcaklığında gerçekleştirildi. Plakalar, ELISPOT yıkama tamponu ile yıkandı ve 2-4 saat MabTech'ten Biotinlenmiş bir fare anti-insan IFN- monoklonal antikoru (1 ug/mL) ile inkübe edildi. Plakalar ikinci kez yıkandı ve Rockland, Inc.'den konjuge Goat anti-biotin AP (1.33 ug/mL) ile 2-3 saat süreyle inkübe edildi. Son yıkamayı 7 dakika boyunca Nitor-mavi Tetrazolium Chloride/5-Bromo-4-kloro 3'indolil fosfat p-toluidin tuzu (NBT/BCIP kromagen) substrat çözeltisinin eklenmesi izledi. Kromagen atıldı ve plakalar su ile yıkandı ve 24 saat boyunca loş bir yerde kurutuldu. Plakalar tarandı ve bir Cellular Technologies Limited Immunospot Analyzer üzerinde sayıldı.

Hücre içi sitokin boyama (ICS) tahlili

CD4 artı ve CD8 artı T hücresi tepkileri, havuzlanmış peptit ile uyarılan hücre içi sitokin boyama (ICS) deneyleriyle nicelendirildi. Peptit havuzları, SARS-CoV-2 WA1/2020, B.1.617.2 (Delta) veya B.1.1'i kapsayan 11 amino asitle örtüşen 15 amino asit peptidi içeriyordu. .529 (Omicron) Spike proteinleri (21st Century Biochemicals). 106 periferik kan mononükleer hücre kuyusu, CD49d monoklonal antikoru (1 µg/mL) ve CD28 monoklonal antikoru (1 µg/mL) ile desteklenmiş 100 µL R10 ortamında yeniden süspanse edildi. Her numune sahte (100 µL R10 artı yüzde 0,5 DMSO; arka plan kontrolü), peptitler (2 µg/mL) ve/veya 10 pg/mL forbol miristat asetat (PMA) ve 1 µg/ml iyonomisin (Sigma- Aldrich) (100uL; pozitif kontrol) ve 37 derecede 1 saat inkübe edildi. İnkübasyondan sonra, her kuyuya 0.25 µL GolgiStop ve 50 µL R10 içinde 0.25 µL GolgiPlug ilave edildi ve 37 derecede 8 saat inkübe edildi ve daha sonra gece boyunca 4 derecede tutuldu. Ertesi gün hücreler iki kez DPBS ile yıkandı, 10 dakika boyunca suda canlı/ölü boya ile boyandı ve daha sonra CD279'a (klon EH12.1, BB700), CD4'e (klon L200, BV711) karşı önceden belirlenmiş monoklonal antikor titreleriyle boyandı. 30 dakika boyunca CD27 (klon M-T271, BUV563), CD8 (klon SK1, BUV805), CD45RA (klon 5H9, APC H7). Hücreler daha sonra iki kez yüzde 2 FBS/DPBS tamponu ile yıkandı ve 15 dakika boyunca 200 uL BD CytoFix/CytoPerm Fiksasyon/Permeabilizasyon solüsyonu ile inkübe edildi. Hücreler iki kez 1X Perm Yıkama tamponu (MilliQ su ile seyreltilmiş ve 0.22 um filtreden geçirilmiş CytoFix/CytoPerm Fiksasyon/ Geçirgenleştirme kitinde BD Perm/WashTM Tampon 10X) ile yıkandı ve hücre içinde IFN-'ye karşı monoklonal antikorlarla (klon B27; BUV395) ve CD3 (klon SP34.2, Alexa 700), 30 dakika süreyle. Hücreler iki kez 1X Perm Yıkama tamponu ile yıkandı ve 250uL taze hazırlanmış yüzde 1.5 formaldehit ile sabitlendi. Sabit hücreler 96-kuyu yuvarlak tabanlı bir plakaya aktarıldı ve BD FACSymphony™ sistemi ile analiz edildi. Veriler FlowJo v9.9 kullanılarak analiz edildi.

cistanche takviyesi:bağışıklığı geliştirmek

Referanslar

1. Cele S, Jackson L, Khan K, et al. SARS-CoV-2 Omicron, Pfizer BNT162b2'den kaynaklanan nötralizasyonun kapsamlı ancak eksik kaçışına sahiptir ve enfeksiyon için ACE2 gerektirir. medRxiv 2021.

2. Dan JM, Mateus J, Kato Y, et al. SARS-CoV-2 için immünolojik hafıza, enfeksiyondan sonra 8 aya kadar değerlendirildi. Bilim 2021;371.

3. Sette A, Crotty S. SARS-CoV-2 ve COVID-19'e karşı uyarlanabilir bağışıklık. Hücre 2021;184:861-80.

4. Goel RR, Ressam MM, Apostolidis SA, et al. mRNA aşıları, SARS-CoV-2 ve ilgili türevlere karşı dayanıklı bağışıklık belleğini indükler. Bilim 2021;374:abm0829.

5. McMahan K, Yu J, Mercado NB, et al. Rhesus makaklarında SARS-CoV-2'a karşı koruma ilişkisi. Doğa 2021;590:630-4.

6. Grifoni A, Weiskopf D, Ramirez SI, et al. COVID-19 Hastalığı Olan İnsanlarda ve Maruz Kalmamış Bireylerde SARS-CoV-2 Coronavirüsüne T Hücre Yanıtlarının Hedefleri. Hücre 2020;181:1489-501 e15.

7. Sadoff J, Gray G, Vandebosch A, et al. Tek Doz Ad26.COV2.S Aşısının Covid-19'e Karşı Güvenliği ve Etkinliği. N Engl J Med 2021;384:2187-201.

8. Polack FP, Thomas SJ, Kitchin N, et al. BNT162b2 mRNA Covid-19 Aşısının Güvenliği ve Etkinliği. N Engl J Med 2020.

9. Collier AY, Yu J, McMahan K, et al. Covid-19 Aşılarının Sağladığı Bağışıklık Tepkilerinin Diferansiyel Kinetiği. N Engl J Med 2021;385:2010-2.

10. Falsey AR, Frenck RW, Jr., Walsh EE, et al. SARS-CoV-2 BNT162b2 Aşı Dozu ile Nötralizasyon 3. N Engl J Med 2021.

11. Barouch DH, Stephenson KE, Sadoff J, et al. Ad26.COV2.S Aşılamasından 8 Ay Sonra Dayanıklı Humoral ve Hücresel Bağışıklık Yanıtları. N Engl J Med 2021;385:951-3.

12. Alter G, Yu J, Liu J, et al. Ad26.COV2.S aşısının insanlarda SARS-CoV-2 varyantlarına karşı immünojenisitesi. Doğa 2021;596:268-72.

13. Poon MML, Rybkina K, Kato Y, et al. SARS-CoV-2 enfeksiyonu insanlarda dokuda lokalize immünolojik hafıza oluşturur. Bilim immünolojisi 2021;6:eabl9105.

14. Vidal SJ, Collier AY, Yu J, et al. Erken Pandemik Sera ile SARS-CoV-2 Endişe Varyantları ile Nötralizasyonun İlişkisi. J Virol 2021;95:e0040421.

cistanche takviyesinin faydası:bağışıklığı geliştirmek