Cistanche Polisakkaritinin Bağışıklık Fonksiyonu Üzerine Faydaları Nelerdir?

İletişim: emily.li@wecistanche.com

Cistanche Polisakkaritinin immünolojik aktivitesi ve mekanizması

Zeng Qunli, Zheng Yifan, Lu Zhiliang

[Soyut]Amaç: Çalışmakbağışıklıkfaaliyeticistanchepolisakkarit(CDPS) ve mekanizmasıbağışıklıkin vitro düzenleme. Yöntemler: CDPS'nin düzenleyici etkisini gözlemlemek için tiyazol mavisi kolorimetrik yöntem (MTT) kullanıldı (Cistanche Polisakkarit) fare timik lenfositlerinin in vitro proliferasyonunu inhibe eden IQS DEX TNF üzerinde; CDPS (Cistanche Polisakkarit) akış sitometrisi kullanılarak hücre döngüsü ve hücre döngüsü analizini gerçekleştirmek için kullanıldı. Hücre içi Ca2 tayini. Sonuçlar: CDPS (Cistanche Polisakkarit) daha yüksek bir konsantrasyonda, ISQDEX'in lenfosit proliferasyonu üzerindeki inhibitör etkisine ve yüksek konsantrasyonlu TNF'nin lenfosit proliferasyonu üzerindeki inhibitör etkisine direnebilir ve düşük konsantrasyonlu TN F'nin lenfositler üzerindeki proliferasyon teşvik edici etkisine sinerji sağlayabilir; 100ug/ml 200 ug/ml CDPS (Cistanche Polisakkarit) bölünme aşamasında hücreleri önemli ölçüde artırabilir; daha yüksek konsantrasyon (100ug/ml) CDPS (Cistanche Polisakkarit), fare timositlerinde Ca iyonunun konsantrasyonunu önemli ölçüde artırabilir. Sonuç: CDPS (Cistanche Polisakkarit) hücrelerin bölünme fazına girmesini teşvik edebilir ve fare timik lenfositlerinin proliferasyonu üzerindeki teşvik edici etkisinin, fare timik lenfositlerinde kalsiyum salınımını teşvik etmesiyle ilgili olduğu sonucuna varılır.

cistanche(cistancheçölikolYC Ma) ülkemde nadir ve değerli bir Çin tıbbi materyalidir. "Shen Nong'un Materia Medica'sında" en üst sınıf olarak listelenmiştir.cistanchekanı besleme, böbreği besleme ve yang'a yardımcı olma, bağırsakları nemlendirme ve yaşlanmayı geciktirme işlevlerine sahiptir. Modern farmakolojik araştırmalar gösteriyor kicistanchepolisakkaritvücudunu iyileştirebilirbağışıklıkişlev, DNA sentezini teşvik eder, fiziksel gücü güçlendirir, zekayı geliştirir ve belirgin yaşlanma karşıtı etkilere sahiptir [1]. Yazar, CDPS düzenlemesini inceledi(Cistanche Polisakkarit), bir polisakkarit bileşenicistanche, üzerindebağışıklıkişlevfare lenfositleri.

Cistanche Polisakkaritteşvik etmekçoğalmasılenfositler

1 Malzeme ve yöntemler

1.1 Reaktifler ve ilaçlar.

RPM, I 1640 ortam: GIB-CO; HEPES: FARCO; L-glutamin: Şanghay Dongfeng Reaktif Fabrikası; Penisilin ve Streptomisin: Kuzey Çin İlaç Fabrikası; Concanavalin (ConA), MTT: SIGM A Şirketi; Fitohemagglutinin (PHA): Şanghay Tıp Laboratuvarı; İzoproterenol (ISO): Şanghay Tianfeng İlaç Fabrikası; Merkaptoetanol: Fluka Company; Yenidoğan buzağı serumu: Sijiqing Bioengineering Company; Deksametazon (DEX), Zhejiang Üniversitesi Tıp Fakültesi'nin İlk Bağlı Hastanesi olan Dr. Ma Liang tarafından sunuldu; Tümör Bastırıcı Faktör (TNF), Zhejiang Üniversitesi Yaşam Bilimleri Okulu Hücre Bölümü Profesörü Yu Yuehan tarafından sağlandı; Reaktiflerin geri kalanının tümü yurt içinde üretilen analitik derecelerdir.

1.2 Deney hayvanları.

68 haftalık erkek, 18-20g ağırlığında, 22 ICR fareleri, Zhejiang Deney Hayvanları Merkezinden satın alındı.

1.3 Cistanche Polisakkarit Ekstraksiyonu [2]:

cistanchepolisakkaritlaboratuvarımız tarafından çıkarılır! Ham ilacı ezdikten sonracistanche, sıcak etanol içine daldırılır, kaynar suda ekstrakte edilir ve etanol içinde çökeltilir. Tek bir CDPS bileşeni elde etmek için deproteinizasyon için Sewag yöntemi, anyon DEAE-Sephadex A- 50 değişim kromatografisi ve Sephacry S-200 jel filtrasyon kromatografisi ile birleştirilmiş nötr enzim (Cistanche Polisakkarit)). Kuru tutun, kullanmadan önce belirli bir konsantrasyon elde etmek için eksik RPMI1640 kullanın ve ultrafiltrasyon ile sterilize edin

1.4 Dalak ve timus lenfositlerinin hazırlanması [3]:

The mice were sacrificed by neck removal. The spleen or thymus was taken aseptically and sieved through a 200-mesh steel mesh. The Hanks solution containing porridge newborn calf serum was used to prepare a single-cell suspension. After centrifugation at 1500 r/min for 10 min, red blood cells were lysed with 0.01 mol/L Tris-NHCl hypotonic solution for 1 min, and then washed with Hanks liquid centrifugation. Finally, the cells were suspended in RPMI1640 containing 10% fresh calf serum for complete culture Solution (containing 2 mmol/LL glutamine, 100 mmol/L sodium pyruvate, 1 mmol/L mercaptoethanol, add penicillin 100 U/ml and streptomycin 100 μg/ml just before use), trypan blue count, live For cells>93, dalak hücrelerinin konsantrasyonunu X 10 /ml'ye ve timositlerin konsantrasyonunu x 10 derece /ml'ye ayarlayın

1.5 Lenfosit proliferasyon reaksiyonu:Mosmanmn yöntemine göre [4] İyileştirme: 96-kuyu hücre kültürü plakası, her kuyuya 10/ml dalak hücre süspansiyonu veya su 10/ml timosit süspansiyonu 100M1 ve farklı konsantrasyonlarda ilaç 10041 ekleyin. 72 saat boyunca CO2.37C kuluçka makinesinde yetiştirin. Kültürün bitiminden 4 saat önce, her kuyucuğa 8μ1 MTT (5 mg/ml) ekleyin. Kültürün sonunda, her kuyudan 150"1 süpernatan aspire edin ve 0,5N izopropanol hidroklorür 150M1 ekleyin. Mavi kristalleri tamamen çözmek için mikro çalkalayıcıda hafifçe sallayın. Mikroplaka okuyucuda OD570'i ölçün. Her bir deneyi ayarlayın üç kopya kuyu olarak işaret edin.

1.6 Hücre döngüsü üzerindeki etkinin belirlenmesi [5]:

{{0}}kuyu hücre kültürü plakası, her kuyuya 1ml 4 10 derece /ml timosit süspansiyonu ekleyin, güçlü CO içinde 2ml'ye çeşitli reaktifler ve polisakarit solüsyonu ekleyin, 37 inkübatör 72 saat kültürlendikten sonra santrifüjleyin 15 dakika boyunca 1500r/dk'da, süpernatantı atın, çökelen hücreleri sabitlemek için 7 etanol ekleyin, bekleme testi için 4C'de saklayın, hücreleri PBS ile iki kez yıkayın, 15 dakika boyunca 1500r/dk'da santrifüjleyin, 0.5ml0.1 RNaseA 4°C'de 30 dakika sindirildikten sonra, 50ug/ml bromoasetat 30 dakika boyunca 4°C'de boyandı ve hücre numunelerinin floresan yoğunluğu FACScan akış sitometresinde ölçüldü. Her numune için 10,000 hücre test noktası toplandı ve veriler Mul üç tekerlekli bisiklet yazılım analizini kullandı.

1.7 Hücre içi kalsiyum iyon konsantrasyonunun belirlenmesi [6]

Fare timositlerini yukarıdakiyle aynı şekilde alın. Eksik RPMIl640 kültür ortamında askıya alın ve hücre konsantrasyonunu x 10'/ml'ye ayarlayın. Her deney tüpüne 1 ml timosit süspansiyonu ve 1 μM Fluo-3AM boyama solüsyonu 5μ1, yüzde 2 F-275μ1 ekleyin, 37°C'de 30 dakika inkübasyondan sonra, eksik RPM1640, 1500r/ ile iki kez yıkayın dakika, 10 dakika santrifüjleyin, süpernatantı atın ve çökelen hücrelere farklı konsantrasyonlarda polisakaritler ve polisakaritler ekleyin ConA'dan sonra floresan yoğunluğu FACScan akış sitometresinde ölçüldü. Her numune için 10,000 hücre test noktasının verileri toplandı ve CELLQUEST yazılımı ile analiz edildi. 1.8 Varyans analizi için istatistiksel yöntemler kullanılmış ve hücre döngüsü ve kalsiyum iyonu ölçümü akış sitometresinin yazılımı ile analiz edilmiştir.

Cistanche Deserticola kaynaklı Cistanche Polisakkarit

2 Sonuç

2.1 Cistanche Polisakkarit in vitro olarak, ISO DEX TNF ile fare timik lenfositlerinin çoğalmasını engeller

-adrenerjik reseptör agonisti izoproterenol (ISO) ve bir adrenal korteks hormonu deksametazon (DEX) sınıfı, lenfosit proliferasyonunu inhibe eder CDPS (Cistanche Polisakkarit) daha yüksek bir konsantrasyonda (75 125ug/ml), ISO DEX'in lenfosit proliferasyonu üzerindeki inhibitör etkisine direnebilir (P<0.01) as="" shown="" in="" figure="" 1.="" tumor="" necrosis="" factor="" (tnf="" β)="" on="" lymphocytes="" at="" high="" concentration="" cdps="">cistanche polisakkarit) (125ug/ml) daha yüksek bir konsantrasyonda TNF'nin inhibe edici etkisine direnebilir ve düşük konsantrasyonda TNF ile lenfositlerin çoğalmasını sinerjistik olarak teşvik edebilir (Şekil 2)

2.2 Cistanche Polisakkarit'in timus lenfosit döngüsünün düzenlenmesi

CDPS (cistanchepolisakkarit) 25ug/ml 100ug/ml 200#g/ml fare timik lenfositleri üzerinde 72 saat boyunca üç konsantrasyon uygulandı, hücrelerdeki DNA içeriği FACS ile ölçüldü ve çoğalma indeksi (PI) hesaplandı formüle göre. Sonuçlar, hem 100ug/ml hem de 200ug/ml'nin bölünme fazındaki hücreleri önemli ölçüde artırabildiğini ve her ikisinin de proliferasyon indeksinin (yüzde 68.0, 56.6) kontrol grubundan (44.6) ve 200ug/ml'den önemli ölçüde daha yüksek olduğunu göstermektedir. grubu 100ug/ml grubundan biraz daha düşüktür, çünkü 200ug/ml konsantrasyonunda hücre proliferasyonu üzerindeki etkisi aşağı yönlü bir eğilim haline gelmiştir [7]. 25ug/ml grubunun PI değeri (yüzde 47.5) kontrol grubununkinden önemli ölçüde yüksek değildi.

2.3 Cistanche Polisakkaritinin fare timositlerinde kalsiyum iyonu konsantrasyonu üzerindeki etkisi

Deneysel sonuçlar, daha yüksek bir konsantrasyonda (100 ug/ml) CDPS (Cistanche Polisakkarite) fare timositlerinde kalsiyum iyonu konsantrasyonundaki artışı önemli ölçüde teşvik edebilir Kontrol grubu ile karşılaştırıldığında, önemli bir fark vardır (P<0.01), and="" there="" is="" a="" certain="" effect="" relationship="" with="" the="" action="" time="" (figure="">

3 Tartışma

cistanche, yaygın olarak bilinen"çöl ginsengi", kuru, pullu etli bir saptır.Cistanche.cistancheböbrek yang, besleyici özü, kan ve bağırsakları besleme işlevlerine sahiptir. Hipofiz-adrenal korteksin bir tür heyecanına aittir veya adrenal kortekse benzer hormon benzeri bir etkiye sahiptir. düzenleyebilen değerli bir Çin tıbbıbağışıklıkişlevvücudun. Önceki araştırma sonuçlarımız, CDPS'nin (Cistanche Polisakkarit) in vitro, ConA PHA tarafından etkinleştirilmemiş veya etkinleştirilmemiş timik T lenfositlerin çoğalmasını teşvik edebilir. ConA PHA ile birlikte iki tip T hücre stimülatörü vardır, biz inanıyoruz ki CDPS (Cistanche Polisakkarit) T hücreleri için bir Badjuvanttır ve ayrıca CDPS'nin (Cistanche Polisakkarit) daha yüksek konsantrasyonlarda fare dalak lenfositlerinin salgılanmasını önemli ölçüde artırabilir [8]

Bazı araştırmalar, rekombinant TNF'nin in vitro normal fare ve insan T lenfosit kümelerinin apoptozisine neden olabileceğini ve bu etkinin potansiyel olarak IIL-2 IL-1 IFN ve IIL-4 tarafından inhibe edilebileceğini bulmuştur. deksametazon ile (DEX) Lenfosit ekspresyonunu ve IL-2 sekresyonunu inhibe ederek ve yüksek afiniteli IL-2R üretimini aşağı regüle ederek lenfosit proliferasyonunu inhibe edebilir. Bu deney, daha yüksek bir CDPS konsantrasyonunun (cistanchepolisakkarit) yüksek konsantrasyonda TN F'nin lenfosit proliferasyonu üzerindeki etkilerine karşı koyabilir. İnhibisyon, lenfositlerin proliferasyonunu desteklemek için düşük konsantrasyonda TNF ile sinerjiktir ve ISQ DEX'in lenfosit proliferasyonu üzerindeki inhibitör etkisine karşı koyabilir. Bu etkiler tam olarak CDPS (cistanchepolisakkarit) T lenfositlerinin çoğalmasını teşvik etmek ve T hücreleri tarafından otokrin IL-2 ve diğer sitokinleri tamamlamak.

Son yıllarda bitki polisakkaritlerinin immünofarmakolojik etkileri üzerine birçok çalışma yapılmış, ancak bu konuda çok az çalışma yapılmıştır.bağışıklıkpolisakkaritlerin düzenleme mekanizması, özellikle ikinci haberci olarak Ca2 ile lenfositler üzerinde etkili olan polisakkaritlerin sinyal iletim yolu. Rapor yok. Bu deney, bu alanda ön araştırma yaptı. Hücre içi sinyal molekülleri arasında, Ca"'nın hücreler üzerinde son derece önemli bir fizyolojik etkiye sahip olduğu cAM R Ca", IP3 DG cGMP, vb. yer alır. Hücre içi Ca2 konsantrasyonundaki artış, lenfosit aktivasyonunun ve proliferasyonunun erken evresinde önemli bir olgudur. Bu süreç, esas olarak, hücreler uyarıcılar tarafından aktive edildiğinde, ilk on saniye ile dakika arasında gerçekleşir. T hücresi aktivasyonunun klasik yolu, fosfatidil kasını metabolize etmek için fosfatidilinositoldür (PIB). Alkol metaboliti 1,4,5-inositol trifosfat (IP3), iç ağ reseptörlerine bağlanarak, hücre içi Ca2 seviyesini ve hücre içi Ca konsantrasyonunu artırarak, iç ağda depolanan Ca" salınımını teşvik edebilir. * artar.Yüksek, NF-AT (aktive edilmiş T hücresinin nüdeik faktörü) üretimini teşvik edebilir, ikincisi, IIL-2 geninin ekspresyonunu teşvik etme etkisine sahiptir.Deneysel sonuçlar, daha yüksek bir konsantrasyonun (100ug/ml) olduğunu göstermektedir. ) CDPS'nin (cistanchepolisakkarit) 5 10 dakika süreyle etkilidir Zaman, fare timositlerinde Ca* konsantrasyonunu artırmada önemli bir etkiye sahiptir ve ConA ile sinerjik bir etkiye sahiptir. Bu nedenle, CDPS'nin (Cistanche Polisakkarit) hücre içi kalsiyum iyonu konsantrasyonunu artırmak için fare timik lenfositlerinde kalsiyum salınımını destekler. Artış, IL-2 geninin ekspresyonunu teşvik eder ve T hücrelerinin proliferasyonuna yol açar.cistanchepolisakkaritvücut üzerinde düzenleyici etki

Cistanche Polisakkarit

Referanslar

1. XiuHin, SU Yuke'de ( Farmakoloji araştırmalarının genel durumucistancheSka 【J】. Geleneksel Çince ve Bitkisel ilaçlar ((Çin bitkisel tıbbı). 1993.24(10. 550-552(Çince))

2. ZHANG Weijiee (Bileşik polisakkarit [M] biyokimyasal teknolojisi. Hangzhou Zhejiang University Press (Zhejiang University Press), 1994.16-17 (Çince)

3. MA Bo- (Ma Baoli). İmmünoloji tekniği【M1. Şanghay Tıp Üniversitesi Yayınları (Shanghai Medical University Press), 1984 188-190. (n Çin))

4. Proliferasyon ve sitotoksisiteyi ortadan kaldırmak için daha kolay büyüme ve hayatta kalma uygulaması için Mosmann T. Rapiloloimeric test[JJ Immun Meth.1983,6 55- 58.

5. WU is-hi, WU shailing, Acai-n, et al (Wu Jiahui, Wu Shuibing. Li Carian, vb.), Zin'in siklik hücrelerin proliferasyonu üzerindeki etkisibağışıklıkakış sitometrisi [J] kullanılarak organ analizi. Çin immünolojisi (Chinese Journal of Immunology), 1994, 10X5: 278-281. (Çin'de)

6. TAO ekseni. JIYong-yong, GAO Qi-rong ve diğerleri (Tao Jiaxian, Ji Yongpu Gao Qirong, vb.). Elaktivasyon sırasında hücre içi C2'deki değişikliklerin FACS analizi[J] Çin immünoloji dergisi (China Journal of Immunology), 1993, 9 (2): 97-10L. (Çin'de)

7. ZENGQu-li.MAO Jum-hao, LU böyle; Arıtma d polisakkaritcistancheçölikolYC Mfa ve onun Tellfunction[J].burnal of Zhejiang Medical University (Journal of Zhejiang Medical University), 1998.27 (3: 108-111. (Çince) üzerindeki immünomodülatör etkileri)

8. Sarin A, Michelle C C. Perre AH T Lenfoblak Üzerinde TNF ve Lenfotoksinin Sitotoksik Etkisi. J Immunol, 1995, 1553716-3721.