Prunus Persica (L.) Var. Florida Prince: Cilt Bakımı İçin Yeni Bir Katı Lipit Nanoparçacık Kozmetik Formülasyonu Bölüm 1

Apr 14, 2023

Soyut: Polifenoller bilinen diyet antioksidanlarıdır. Son zamanlarda güneş UV ışımasından kaynaklanan cilt yaşlanmasını ve hiperpigmentasyonu önlemek için kullanımlarda büyük ilgi gördüler. Prunus persica (L.) yaprakları yan ürün olarak kabul edilir ve yüksek polifenol içeriği nedeniyle dikkate değer bir antioksidan aktiviteye sahip olduğu rapor edilmiştir. Bu çalışma, cilt iletimini arttırmak için katı lipid nanoparçacıkları (SLN'ler) içinde yüklenmiş Prunus persica (L.) (PPEE) etanol yaprakları ekstresi kullanılarak kozmesötik yaşlanma karşıtı ve cilt beyazlatıcı bir krem ​​preparasyonunun geliştirilmesini amaçladı. PPEE'nin kimyasal araştırması, dikkate değer antioksidan aktivitelerle (DPPH, ABTS ve -karoten deneyleri) önemli ölçüde yüksek toplam fenolik ve flavonoid içeriği gösterdi. Nadir bir yapıya sahip benzersiz bir açillenmiş kaempferol glikozit, kaempferol 3-O- -4C1-(600 -O-3,4-dihidroksifenilasetil glukopiranosid) ( KDPAG) ilk kez izole edilmiş ve yapısı tam olarak aydınlatılmıştır. Flavonoid kimyasında 3,{{10}}dihidroksi fenilasetik asit ile asilasyonun ilk örneğini temsil eder. Bir insan keratinosit hücre hattına karşı yapılan in vitro sitotoksisite çalışmaları, PPEE ve PPEE-SLN'lerin toksisitesini ortaya çıkardı. Ayrıca PPEE, PPEE-SLN'ler ve KDPAG, N (Metoksisüksinil)-Ala-Ala-Pro-Val-klorometil ketonunkiyle karşılaştırılabilir şekilde iyi anti-elastaz aktivitesi gösterdi. Ayrıca PPEE-SLN'ler ve KDPAG, sırasıyla EDTA ve kojik asit ile karşılaştırıldığında önemli ölçüde (p < 0.001) daha yüksek anti-kollajenaz ve anti-tirozinaz aktiviteleri gösterdi. Farklı PPEE-SLN krem ​​formülleri (yüzde 2 ve yüzde 5), bir fare modelinde kırışıklık puanlama yöntemi kullanılarak UV kaynaklı fotoyaşlanmaya karşı olası kırışıklık önleyici aktivite açısından değerlendirildi ve kanıtlandığı gibi UV'ye karşı oldukça önemli bir koruyucu etki sunduğu gösterildi. doku biyobelirteçleri (SOD) ve histopatolojik çalışmalar ile. Bu nedenle, mevcut çalışma, Prunus persica yaprağı yan ürünlerinin doğal kozmetik bileşenler için ilginç, değerli bir kaynak sağladığını göstermektedir. Bu, PPEE-SLN'lerin geliştirilmiş cilt geçirgenlik özelliklerine sahip topikal yaşlanma karşıtı kozmetik formülasyonlarda potansiyel güvenli kullanımının daha fazla araştırılması için ilgili verileri sağlar.

İlgili araştırmalara göre,cistanche"ömrü uzatan mucize bitki" olarak bilinen yaygın bir bitkidir. Ana bileşenikistanositgibi çeşitli etkilere sahiptir.antioksidan, antienflamatuvar, Vebağışıklık fonksiyonu teşviki. Cistanche ve arasındaki mekanizmacilt beyazlatmakantioksidan etkisinde yatmaktadır.cistanche glikozitler. İnsan derisindeki melanin, tirozinin oksidasyonu ile üretilir.tirozinazve oksidasyon reaksiyonu oksijenin katılımını gerektirir, bu nedenle vücuttaki oksijensiz radikaller melanin üretimini etkileyen önemli bir faktör haline gelir. Cistanche, bir antioksidan olan ve vücuttaki serbest radikallerin oluşumunu azaltabilen cistanoside içerir, böylecemelanin üretimini inhibe eder.

how to take cistanche

Beyazlatma İçin Cistanche Takviyesine Tıklayın

Daha fazla bilgi için:

david.deng@wecistanche.com WhatsApp:86 13632399501

anahtar kelimeler:kaempferol 3-O- -4C1-(600 -O-3,4-dihidroksifenilasetil glukopiranosid) yan ürünleri; katı lipid nanoparçacıkları; antioksidan; in vitro deri ile ilgili enzimler; canlı kırışıklık önleyici

1. Giriş

Cilt yaşlanması, cilt ve bağ dokusundaki fiziksel değişiklikleri katalize eden karmaşık, çok faktörlü ilerleyici bir süreçtir [1]. İçsel ve dışsal yaşlanma olarak sınıflandırılır.

Ekstrinsik cilt yaşlanması, esas olarak kirleticiler, sigara ve yaşam stresi gibi çevresel faktörlerden veya ağırlıklı olarak UV radyasyonuna (fotoyaşlanma) tekrar tekrar maruz kalmaktan kaynaklanır [2].

UV radyasyonuna aşırı maruz kalma, cilt dokularında hücre dışı matris (ECM) bileşenlerinin bozulmasına yol açan endojen oksidatif stresle sonuçlanan reaktif oksijen türlerinin (ROS) aşırı üretimini uyarır. ECM bozulması doğrudan cilt yaşlanmasıyla bağlantılıdır ve cilt yaşlanmasında yer alan kollajenaz, elastaz ve tirozinaz gibi belirli enzimlerin aktivitesindeki artıştan sorumludur. Bu dermal enzim aktivasyonları, elastin ve kollajen seviyelerinde azalmaya neden olarak cildin elastikiyetini ve gücünü kaybetmesine ve kırışıklıkların ortaya çıkmasına neden olur [3]. Ayrıca aşırı melanin üretimi ve cilt bronzlaşması ciltte hiperpigmentasyona neden olur.

Bu nedenle, ROS içeren yaşa bağlı hastalıkların savunmasında ve terapötiklerinde büyük öneme sahip olabilecek serbest radikal süpürücü aktiviteye sahip antioksidanlar tarafından cilt yaşlanması önlenebilir [4]. Yaşlanmayı geciktirmenin diğer bir yolu, cilt elastikiyetinin korunmasını destekleyen kırışıklık önleme ve cilt beyazlatma aktiviteleri için çok güçlü adaylar olan ve pigmentasyon bozukluklarıyla başa çıkmak için yaygın bir yaklaşım olabilen elastaz, kollajenaz ve tirozinaz inhibitörlerinin kullanılmasıdır [5].

Bitkilerden izole edilen doğal antioksidanların hem in-vitro hem de in-vivo UV ışınlarının neden olduğu fotoyaşlanma riskini azalttığı ve kozmesötik bileşenler olarak maliyet ve yan etkiler açısından sentetik antioksidanlardan daha çok tercih edildiği bildirilmiştir. Ek olarak, birçok in vitro ve in vivo çalışma, fenolik asitler, flavonoidler ve tanenler gibi fenolik bileşiklerin serbest radikalleri temizleyebildiğini ve elastaz, kollajenaz ve tirozinaz enzimlerini inhibe edebildiğini göstermiştir [7].

Dış etkenlerin neden olduğu oksidatif strese karşı cildi korumak için topikal preparatlarda doğal antioksidanların kullanıldığı bildirilmiştir [8]. Bununla birlikte, antioksidan moleküllerin çoğu doğuştan kararsızdır ve etki bölgesine ulaşmadan önce kolayca oksitlenerek aktif olmayan bileşikler oluşturabilir, bu da onların uygun ve kararlı bir kozmetik ürün olarak formüle edilmesini zorlaştırır. Bu bulgular, bu antioksidan formülasyonları geliştirmek için benzersiz dağıtım sistemlerinin gerekliliğini kanıtlamaktadır [9].

Topikal olarak uygulanan polifenollerin geçirgenliğini birkaç faktör etkiler; fenolik alt sınıf, yapısı, moleküler boyutu ve glikozit veya aglikon formu ve ayrıca diğer formülasyon bileşenleri. Bununla birlikte, fiziksel ve kimyasal yöntemlerin bir karışımı yoluyla cilt bileşenleri ile etkileşim, stratum korneum tabakasının bariyer yapısının geri dönüşümlü bir şekilde bozulması yoluyla geçirgenliği iyileştirebilir. Kapsülleme yaklaşımları, kozmetik ve topikal tedavilerde antioksidan etkilerini, dermal absorpsiyonu ve penetrasyonu artırarak, depolama sırasında polifenoliklerin kolayca stabilize edilmesi için en yaygın olarak kullanılan geçirgenlik arttırıcı yöntemlerden biridir. Yeni geliştirilen kapsülleme teknolojileri arasında nanoemülsiyonlar, transferazlar, katı lipid nanopartiküller, nanokristaller ve ribozomlar yer alır [10].

cistanche side effects reddit

Katı lipid nanoparçacıkları (SLN'ler), cilt ürünleri için kararlı bir dağıtım sistemidir. SLN'ler, fotostabiliteleri, kontrollü salım özellikleri, oklüziviteleri, koku maskeleme etkileri ve basitliğe ek olarak cilt tahrişi belirtisi olmaksızın hidrasyonunu artırarak aktif bileşenlerin deriden penetrasyonunu artırmaları nedeniyle topikal formülasyonlar için umut verici ilaç taşıyıcıları olarak kabul edilir. üretim, düşük toksisite ve fiziksel stabilite [9,11].

Bu nedenle, vücudun antioksidan sistemini iyileştirme yeteneğinin yanı sıra bir nano-taşıyıcı dağıtım sistemi kullanan olası terapötik kırışıklık önleyici ve cilt beyazlatıcı maddeler olarak ilgili bir bitki polifenol kaynağı aramak son derece önemlidir.

Dünya çapında yaklaşık 2000 şeftali çeşidi vardır [12]. Prunus (Rosaceae), fenolik bakımından zengin türleri içeren ünlü bir bitki cinsidir [13-15]. Bu cinsin bazı türleri Mısır'da yenilebilir meyveleri veya süs bitkileri olarak yetiştirilmektedir [16].

Prunus persica (L.) Batch (PP), tüysüz dalları ve kısa gövdesi, yayılan, yuvarlak tacı [12] olan ve genellikle Batı Asya, Avrupa, Hindistan ve Kuzey Afrika'da [17] yetiştirilen küçük bir ağaçtır. Geleneksel olarak yaprakları idrar söktürücü, müshil, vermifüj, böcek ilacı, yatıştırıcı, boğmaca, lökoderma tedavisi ve ateş düşürücü olarak kullanılmıştır [17]. Ayrıca, yapraklar üzerinde yapılan farmakolojik çalışmalar, in-vivo anti-diyabetik, spazmojenik, antiinflamatuar, antikoagülan, hepatoprotektif, antimalarial, anti-astımlı ve in-vitro sitotoksik, antimikrobiyal ve nitrik oksit inhibitörü ile önemli antioksidan aktiviteleri karakterize etmiştir. [18–22].

PP takipçilerinin, meyvelerin ve tohumların fenolik profilini, antioksidan aktivitelerini ve farmakolojik ve besin değerlerini araştırmak için birçok çalışma yapılmıştır [13,14,23,24]. Ancak yapraklar hakkında çok az veri mevcuttu. Bugüne kadar, bir etanol yaprak ekstraktından beş flavonol glikozidin izolasyonunu açıklayan tek bir rapor mevcuttur [25]. Ek olarak, belirlenen tüm bileşikler arasında baskın maddeler olarak flflavonoller ile HPLC-MS analizi kullanılarak fenolik asitler ve flflavonoidler dahil olmak üzere fenolik bileşikler karakterize edilmiştir [20,26].

Ayrıca, PP tohumlarının, meyvelerinin, takipçilerinin ve diğer türlerin UV ile indüklenen fotoyaşlanmaya karşı in-vivo koruyucu aktiviteye ve in-vitro kırışık önleme ve cilt beyazlatma aktivitelerine sahip olduğu bildirilmesine rağmen [15,23,27-32], bu PP yaprakları ekstresi için hiç rapor edilmemiştir.

Büyük miktarlarda PP yaprakları, şeftali ağacı yetiştiriciliğinden ve meyve konservesi endüstrilerinden elde edilen yan ürünlerdir [33]. PP tohumlarının, meyvelerinin ve diğer yaprak çeşitlerinin yan ürünleri kozmetikte ve potansiyel değerlenme açısından diyet gıdası olarak değerlendirilmiştir [32,34,35]. Ancak, bildiğimiz kadarıyla, PP'nin yaprak yan ürünleri var. Florida Prince hiç araştırılmadı ve ilginç bir fitokimyasal kaynağı olabilir. Diğer endüstrilerle karşılaştırıldığında, kozmetik pazarı daha erişilebilir ve genişliyor ve yan ürünlerin değerlendirilmesi için bir kaynak olabilir [15]. Cilt bakımı ve cilt yaşlandırma ürünleri en önemli kozmetik potansiyellerden bazılarıdır.

Mısır yenilebilir bitkilerinin polifenolikleri üzerine araştırmamızın devamında [36] ve PP yaprakları yan ürün olarak kabul edildiğinden ve esas olarak yüksek flavonol içeriği nedeniyle önemli antioksidan aktiviteye sahip olduğu bildirildiğinden, bu çalışma PPEE'yi kapsamlı bir fitokimyasala tabi tutmayı amaçlamaktadır. fenolik profilinin analizi ve PPEE'yi benzersiz bir cilt taşıma sistemi olarak yüklü SLN'lere dahil etmek. Ayrıca, yaşlanma karşıtı ve cilt beyazlatıcı kozmetik potansiyeli, PPEE, PPEE-SLN'lerin ve izole edilmiş bileşenlerin in vitro antioksidan aktivitesi ve bunların ciltle ilgili enzimlere karşı inhibe edici etkilerinin değerlendirilmesiyle değerlendirildi. PPEE-SLN'lerin topikal bir kozmesötik yaşlanma karşıtı kreme dahil edilmesine ek olarak ve ürün güvenliğini test etmenin yanı sıra PPEE-SLN krem ​​formülasyonlarının UV kaynaklı fotoyaşlanmaya karşı olası in-vivo kırışıklık önleyici aktivitesinin değerlendirilmesi. fare modeli. Bu, PPEE-SLN yapraklarının cilt geçirgenliği artırılmış topikal formülasyonlardaki potansiyel kullanımının daha fazla araştırılması için veri sağlayabilir.

2. Gereç ve Yöntemler

2.1. Genel

NMR spectra were acquired in DMSO-d6 on an Avance 400 NMR spectrometer (Bruker bio spin Gmbh, Rheinstetten, Germany) at 400 MHz. Standard pulse sequence and parameters were used to obtain one-dimensional 1H and 13C-APT, and two-dimensional HSQC and HMBC spectra. 1H chemical shifts (δ) were measured in ppm, relative to TMS, and 13C-NMR chemical shifts to DMSO-d6 and were converted to TMS scale by adding 39.49. ORAC measurements were performed on a FLUOstar Omega Microplate Reader (BMG LABTECH Gmbh, Ortenberg, Germany). A Shimadzu UV–Visible-1601 spectrophotometer (Shimadzu, Kyoto, Japan) was used for recording the UV spectra. Chromatographic analysis (PC) was carried out on Whatman No. 1 paper, using solvent systems: (1) H2O; (2) 6% HOAc; (3) BAW (n-BuOH–HOAc–H2O, 4:1:5, upper layer). For 2-DPC, solvent 2 was used for the first way and solvent 3 for the second way. Materials: chemicals, solvents, elastase, collagenase, tyrosinase enzymes, and reference drugs (EDTA, kojic acid, and N-(Methoxysuccinyl)-Ala-Ala-Pro-Val-chloromethyl ketone with purities >Yüzde 95) Sigma-Aldrich'ten (Sigma-Aldrich, MO, ABD) elde edildi.

cistanche for sale

2.2. Bitki malzemeleri

Prunus persica (L.) Batsch var. Florida Prince, Haziran 2020'de EL-Hashash Çiftliği, El-Bastan girişi, Kahire-İskenderiye çöl yolu K. 103, 18 k. içeride, Mısır. Kupon örneği (4643), Herbaryum Flora ve Fitotaksonomi Araştırmaları Departmanı'na (CAIM), Bahçıvanlık Araştırma Enstitüsü, Tarımsal Araştırma Merkezi, Giza, Mısır'a yerleştirildi. Tarımsal Araştırma Merkezi Botanik Profesörü Prof. Dr. Abdel-Haleem Abdel-Mogaly kimliğini doğruladı.

2.3. Bitki Ekstraktının Hazırlanması 

PP yaprak örneğinin (2 kg) ekstraksiyonu, sıcak EtOH/H20 (3:1, üç kez, her biri 3 L, 8 saat, geri akış altında) kullanılarak yapıldı, ardından 50 ◦C'de indirgenmiş basınç altında çözücü buharlaştırılarak amorf bir ekstrakt elde edildi. , KKE, kahverengimsi koyu renkli (101 g).

2.4. Toplam Polifenol İçeriğinin (TPC) Tayini 

Li ve diğerleri [37] tarafından açıklanan Folin-Ciocalteu reaktifi, mg eşdeğer gallik asit/g kuru ekstrakt olarak sunulan PPEE'deki toplam fenolik içeriğin miktarını tahmin etmek için kullanıldı.

2.5. Toplam Flavonoid İçeriğinin (TFC) Tayini

Bahromun ve diğerleri [38] tarafından açıklanan alüminyum klorür kolorimetrik yöntemi, toplam flavonoid içeriğini tahmin etmek için kullanıldı. Sonuçlar mg eşdeğer kuersetin/g kuru ekstrakt olarak sunulur.

2.6. PPEE'nin Fraksiyonlanması ve Bileşik 1'in İzolasyonu

Elde edilen kuru malzeme (101 g), 150 mL MeOH içinde çözülmüş, bir MCI jel kolonuna (CHP20P, 75–150 mm; Mitsubishi Chemical Co., Düsseldorf, Almanya) uygulandı ve azalan polaritelere sahip MeOH/H2O karışımları ile yıkandı. Bu, dört ana fraksiyonla sonuçlanır (I – IV). Fraksiyon I'in elüsyonu, yüzde 30 MeOH/H20, 22 g; fraksiyon II, yüzde 50 sulu MeOH, 3.1 g ile yıkandı; yüzde 70 sulu MeOH (4.6 g) içeren fraksiyon III; fraksiyon IV, yüzde 90 sulu MeOH (1.9 g) ile yıkandı. Fraksiyon III'ün konsantre bir solüsyonu, oda sıcaklığında gece boyunca bekletilerek bileşik 1'in ham bir numunesi (765 mg) elde edildi. Bunu süzme ve kaynayan EtOH içinde yeniden çözme takip eder, ardından kahverengimsi-sarı saf bir 1 numunesi (530 mg) elde etmek için oda sıcaklığında beklemeye bırakılır.

2.7. Kaempferol 3-O- -4C1-(6"-O-3,4-dihidroksifenilasetil glukopiranosid) tanımı (1)

Rf değerleri: 34 (H20), 39 (yüzde 15 HOAc), 44 (BAW). MeOH içinde UV λmax nm: 268, 316, 368; NaOAc: 267,317,369; NaOAc artı H3BO3: 268, 318, 340; NaOMe: 277, 370. Normal asit hidrolizi glikoz (Co-PC), kaempferol (Co-PC) ve 3,4-dihidroksi fenilasetik asit (UV ve 1H NMR spektrumları), UV λmax (MeOH): 224, 282 nm; λmaks (MeOH artı A1C13): 220, 250 (sh), 291 nm; (MeOH artı NaOAc artı H3BO3) 211, 234 (sh), 288 nm. 1H NMR: δ ppm: 3,40 (s, 2H, C-H2), 6,60 (m, 3H aromatik, H-2, H-5, H-6), –glukosidaz tedavisi 1 [liyofilize, kromatografik olarak saf, bademden tuzsuz enzim, BDH Merck, Poole Dorset, UK (EC 3.2.1.21)] 24 saat, 37°C'de asetat tamponunda, pH 5.1: bileşik değişmeden geri kazanıldı. 1'in 1H-NMR'si: δppm: kaempferol kısmı: 8.0.3 (d, J=8 Hz, H-20 ve H-60 ), 6.89 (d, J=8 Hz, H-30 ve H-50 ), 6,45 (d, J=2 Hz, H-6), 6,21 (d, J=2 Hz, H -8); glikoz kısmı: 5,42 (d, J=8 Hz, anomerik proton H-100 ), 4,04 (dd, J=12 Hz ve J=4,5 Hz, H{{ 88}} a), 4.2 (d, J=12 Hz, H-600 b); 3,4-dihidroksifenil asetik asit parçası: 3,46 (geniş tekli, ∆ν1/2=4 Hz, CH2-7), 6,67 (m, 3H, H-2000 , H{ {104}} , H-6000 ). 13C-NMR of 1: δ ppm: kaempferol parçası:156.65 (C-2), 133.5 (C-3), 178.01 (C-4), 161.69 (C-5) ), 99,13 (K-6), 164,58 (K-7), 93,90 (K-8), 156,71 (K-9), 104,39 (K-10) ), 121,34 (C-10 ), 133,66 (C-20 ve C{142}} ), 161,63 (C-40 ), 115,20 (C-30 ve C{ {149}} ); glikoz kısmı: 99,13 (C-100 ), 73,85 (C-200 ), 76,88 (C-300 ),70,35 (C-400 ), 76,96 (C{{164} } ), 62.25 (C-600 ); 3,4-dihidroksi fenil asetik asit parçası: 127.87 (C-1000 ), 116.35 (C-2000 ), 145.33 (C-3000 ), 148.92 (C{{181} } ), 121.57 (C-5000 ), 117.0 (C-6000 ), 176.26 (C=O), 40.02 (C-H2).

2.8. In-Vitro Çalışmalar

2.8.1. İnsan Keratinositlerinde Sitotoksisitenin Değerlendirilmesi

İnsan keratinositleri hücre çizgisi, VACSERA CO.'dan (Mısır Şirketi Aşı, Sera ve İlaç Üretimi, Giza, Mısır) elde edildi. PPEE ve PPEE-SLN'ler için MTT testi Mostafa ve ark.'nın yöntemine göre yapıldı. [36].

2.8.2. In-Vitro Antioksidan Testleri

DPPH testi, Yardpiroon ve ark. [39] ve C Vitamini pozitif kontrol olarak kullanıldı. ABTS tahlili, Re ve diğerleri, [40] yöntemini takip etti, standart olarak C Vitamini kullanıldı. -karoten ağartma deneyi, pozitif kontrol BHT varlığında Soulef ve arkadaşları [14] tarafından açıklanan yöntemi kullandı. Her test örneğinin değeri, yüzde 50'de inhibisyon eğrisi veya IC50 olarak sunuldu.

2.8.3. Anti-Elastaz, Anti-Kolajenaz ve Anti-Tyrosinaz Aktivitelerinin Tahmini

Yaşlanma karşıtı ve cilt beyazlatma aktiviteleri, Mostafa ve diğerleri tarafından bildirilen yöntemler izlenerek değerlendirildi. [41]. Anti-elastaz tahlili için 1 ug/mL insan lökosit elastazı, HEPES tamponu pH 7.5 ve test edilen özütlerin her biri veya 1.4 mg/mL N-Metoksisüksinil-Ala-Ala-Pro-klorometil keton (standart inhibitör) ile inkübe edildi. Substrat olarak 100 µL 1 mM N-Methoxysuccinyl-Ala-Ala-Pro-Val-p-nitroanilit eklenmeden önce 96-oda sıcaklığında 20 dakika kuyu plakası. 40 dakikalık inkübasyonun ardından, özüt/inhibitörden yoksun bir boşluk kör görevi görecek şekilde 405 nm'de absorbans ölçülmüştür. Test edilen numuneler, 25–300 µg/mL konsantrasyon aralığında kullanıldı.

Anti-kollajenaz için, Clostridium histolyticum'dan 1 mg/mL kolajenaz tip 1, tamponu (pH 7.4) ve test edilen özütlerin her biri veya 1.4 mg/mL EDTA (standart inhibitör), daha önce 37°C'de 20 dakika inkübe edildi. substrat olarak 100 uL FALGPA eklenmesi. Karışım, 200 mM sitrat tamponunda (pH 5) 200 uL yüzde 2 ninhidrin eklenmeden önce 37 °C'de 1 saat daha inkübe edildi ve 5 dakika kaynar su banyosuna kondu. Çözelti daha sonra soğumaya bırakıldı. Daha sonra 200 uL yüzde 50 izopropanol eklendi ve absorbanslar 540 nm'de ölçüldü. Test edilen numuneler, 25–300 µg/mL konsantrasyon aralığında kullanıldı.
Anti-tirozinaz tahlili için 5600 ünite/mL mantar tirozinazı, substrat olarak 1 mM L-DOPA eklenmeden önce test edilen özütlerin her biri veya 1,4 mg/mL kojik asit (standart inhibitör) ile 37°C'de 15 dakika inkübe edildi . Oluşan dopakromun absorbansı 475 nm'de ölçülmüştür. Test edilen numuneler, 75–500 µg/mL konsantrasyon aralığında kullanıldı.

2.9. PPEE-SLN'lerin Formülasyonu ve Karakterizasyonu

Formülasyon, Choubey ve diğ.'nin yöntemine göre yapıldı. [11]. İlk olarak, gliseril monostearat bir kloroform-metanol karışımında (1:1) çözündürüldü ve daha sonra etanolik ekstrakt bu solüsyonda dağıtıldı. Daha sonra organik solventler bir rotovap kullanılarak çıkarıldı ve solüsyon ısıtıldı. Daha sonra Tween 80 ilave edildi ve karışım 3000 rpm'de 30 dakika karıştırıldı ve daha sonra süzme ve kurutmadan önce 4 saat homojenleştirildi. PPEE-SLN'lerin karakterizasyonu, şekil ve yüzey morfolojisi, partikül boyutu, polidispersite indeksi (PDI), zeta potansiyel analizi, yüzde yakalama verimliliği (PEE) ve Fourier dönüşümü kızılötesi (FT-IR) spektroskopi çalışmaları tahmin edilerek incelenmiştir.

2.10. PPEE Topikal Krem Formüllerinin Hazırlanması

2.10.1. PPEE-SLN Kreminin Formülasyonu

İki krem ​​formülasyonu (yüzde 2 ve PPEE-SLN'lerin yüzde 5'i), Mahawar ve diğerlerinin yöntemine göre Tablo 1'de gösterildiği gibi hazırlandı. [42].

cistanche amazon

2.10.2. PPEE-SLNs Kreminin Değerlendirme Parametreleri

Kremin organoleptik özellikleri, pH'ı, sürülebilirlik çalışmaları, viskozite testi, homojenlik testi, yama testi (Burchard testi), in-vitro deri permeasyon incelemesi ve stabilite çalışmaları (ICH yönergeleri) Matangi ve ark. [43]. Sekar ve arkadaşlarına göre bir mikrobiyal limit testi yapıldı. [44].

2.11. PPEE-SLNs Kremin In-Vivo Kırışıklık Karşıtı Çalışması

2.11.1. Deney Hayvanları

Elli erkek tüysüz fare (HR{{0}}) (4-haftalık), 17–24 g, VACSERA'dan elde edildi. Deney, Ekim Modern Bilimler ve Sanatlar Üniversitesi'nde (MSA) etik kurul onayı alındıktan sonra gerçekleştirildi, Protokol numarası (PG1/EC1/2020PD) örneklem büyüklüğü (G. Power) yazılımına göre belirlendi. İn-vivo kırışık önleme çalışmasından bir hafta önce, fareler yiyecek ve suya erişimde serbest bırakıldı ve klimalı odaya (23 ± 2 ◦C) alıştı. Fareler (50), Tablo 2'de gösterildiği gibi, rastgele (n=10) beş gruba ayrıldı. Tedavi, 40 gün boyunca, haftada üç kez, 0,5 g PPEE-SLNs kremi veya başka herhangi bir tedavi ile yapıldı ve uygulandı dorsal fare derisine ve daha sonra UV'ye (365 nm) maruz bırakıldı.

cistanche para que serve

2.11.2. Kırışıklık Skoru Ölçümü

Topikal tedavilerden önce ve sonra haftada iki kez dorsal farelerin cilt fotoğrafları çekildi. Cilt kırışıklığı derecelendirmesi, Bissett'in görsel kırışık ölçeği [45] kullanılarak değerlendirildi. Derecelendirme ölçeğinin temelleri, beş dereceye ayrılan kırışık (ince veya kaba) ve keratoz dokusuydu: daha kötü (-2), biraz daha kötü (-1), değişiklik yok (0), biraz iyileşmiş ( artı 1) ve geliştirilmiş ( artı 2).

2.11.3. Histolojik Değerlendirme

Histolojik değerlendirme Elder ve ark. [46].

2.11.4. Süperoksit Dismutaz (SOD) Aktivitesi

SOD aktivitesi, Ukeda ve arkadaşlarının yöntemine göre tahmin edildi. [47].

2.12. İstatistiksel analiz

Tüm numuneler üç kopya halinde analiz edildi. Veriler, ortalama ± standart sapma (SD) olarak temsil edildi. IC50 değerleri (yüzde 50 inhibisyon için gereken konsantrasyon), numune konsantrasyonlarını ve inhibisyon yüzdesini gösteren bir lineer regresyon eğrisi yapılarak hesaplandı. İstatistiksel karşılaştırma, çoklu karşılaştırmalar için Tukey testi tarafından tamamlanan tek yönlü varyans analizi (ANOVA) kullanılarak yapıldı. Antioksidan aktivitelerin ve enzim inhibisyon deneylerinin farklı değerleri, Pearson korelasyon testi kullanılarak karşılaştırıldı ve farklılıklar, p < 0.05'te istatistiksel olarak anlamlı kabul edildi. Bu analizleri gerçekleştirmek için Windows için GraphPad Prism 5.03 (GraphPad Software, San Diego, CA, ABD) kullanıldı.

3. Sonuçlar

3.1. Toplam Fenolik ve Flavonoid İçeriği

TPC, PPEE'de spektrofotometrik olarak 387.5 ± 4.28 mg GAE/g ekstrakt olarak belirlendi. Ayrıca, TFC 241.7 ± 3.25 mg QE/g ekstrakt olarak tahmin edilmiştir. PPEE, yüksek konsantrasyonlarda fenolik ve flflavonoid bileşikler göstermiştir. Her iki sonuç da PP yapraklarındaki ana kimyasal bileşenlerin flavonoidler olduğunu doğrulayan PP yaprak ekstraktları için daha önce bildirilen değerleri takip ediyor [20].

rou cong rong benefits

3.2. Kaempferolün İzolasyonu ve Yapısının Aydınlatılması

3-O- - 4C1-(600 -O-3,4-dihidroksifenilasetil glukopiranosid), Bileşik 1

Bu özütteki bilinen tüm yapıları ayıkladıktan sonra, benzersiz, potansiyel olarak biyolojik olarak aktif bileşikler arayışı daha verimli hale geldi. Alınan 2-DPC analitik verilerine göre, PPEE'nin fenoliklerinin en iyi şekilde, dört ana kolon fraksiyonu sağlayan bir süreç olan, azalan polaritelere sahip MeOH/H2O karışımları tarafından ayrıştırılan bir MCI jel kolonu üzerinde fraksiyone edildiği bulundu. Şekilsiz bir malzeme, oda sıcaklığında gece boyunca bekletilerek fraksiyon III'ün sıcak bir konsantresinden (sütundan yüzde 70 sulu MeOH ile desorpsiyonu alınmış) ayrıldı. Bu malzemenin EtOH kaynatılarak iki kez kristalleştirilmesi, kromatografik olarak saf kahverengimsi-sarı amorf bir toz verdi 1. Kromatografik özellikler gösterdi (UV ışığı altında PC'de koyu mor nokta, sulu ve organik çözücüler içinde orta düzeyde geçişle amonyak buharı ile tütsülendiğinde limon sarısına dönüşüyor) ) ve serbest 40 hidroksil grubu ve O-ikameli 3-O-konumu taşıyan bir kaempferol türevi öneren renk reaksiyonları (Naturstoff reaktifi ile limon sarısı renk). MeOH (268 nm, 316 nm, 360 nm) içinde 1 UV spektrumu ve teşhis kaydırma reaktiflerinin [48] eklenmesi üzerine, 3-O-glikosile edilmiş kaempferolünkiler için tipikti (NaOAc ile pozitif kayma, sabit kayma NaOMe ile). 1'in (2 N sulu HC1, 3 saat, 100 ◦C) normal asit hidrolizi, glikoz (karşılaştırmalı kağıt kromatografisi, Co-PC), kaempferol ve 3,4-dihidroksi fenilasetik asit (UV) verdi. hidrolizatın etil asetat ekstraktının hazırlayıcı kağıt kromatogramları ile izole edilen bireysel numuneler için absorpsiyon ve 1H-NMR spektrumları). Sonuç olarak 1, kaempferol 3-O-(3,4-dihidroksi fenil asetil glukozit)'tir. Bileşik, -glukosidaz enzimi ile 24 saat inkübe edildikten sonra değişmeden geri kazanılır, böylece glukozil parçasının açillendiği kanıtlanır. 1'in moleküler formülünün, m/z=597.5302'de bir [MH]− iyonu gösteren negatif HRESI kütle spektrumundan C29H26O14 olduğu sonucuna varıldı (C29H25O14 için hesaplanan, 597.5015). ESI-MS deneyi (negatif iyon modu), m/z'de yarı moleküler bir iyon tepe noktası [MH] verdi: 597, 1 için 598'lik bir moleküler ağırlığa işaret ediyor. ESI-MS-MS spektrumundaki diğer fragman iyon tepe noktaları m/z'de gözlendi: [MH]-: 447, 167 ve 285, ana bileşik 1'den dihidroksi fenil asetat kaybına karşılık gelirken, m/z 285 ve m/z 167'deki fragman iyonları kaempferole atfedildi ve sırasıyla dihidroksifenilasetik asit parçaları. 1 molekülündeki tüm parçaların eklenme yerini belirlemek ve tüm karbon ve proton rezonanslarının tam olarak atanmasını sağlamak için, 1D- 1H ve 13C ve 2D- HSQC ve HMBC dahil olmak üzere 1'in NMR spektroskopik analizi , ardından gerçekleştirildi. δ ppm 62.25 ve 76.9 arasındaki şeker bölgesindeki beş sinyalden ve 99.13 ppm'de bulunan anomerik karbon sinyalinden, bu C-3 karbon sinyali nedeniyle şeker kısmının kaempferolün 3. pozisyonuna bağlanması gerektiği kanıtlanmıştır. alan yukarı kaydırıldı ve karşılık gelen orto ve para-karbon sinyalleri alan aşağı kaydırıldı (bkz. deneysel). Benzer kaymalar, Nawwar ve diğerlerinin çalışmalarından iyi bilinmektedir. [48]. Bu, HMBC spektrumunda tanınan 3 J uzun menzilli korelasyonlarla daha da doğrulandı; burada, δ 5.42'deki anomerik glikoz proton H-100 sinyalini flavonol C-3 karbon ile ilişkilendiren bir çapraz sinyal bulundu. δ 133.5'te sinyal. Glikoz parçasının konfigürasyonu, 99.13 ppm'de C-100 kimyasal kaymasından türetilmiştir. Şeker karbonlarının kimyasal kayma değerleri, bu parçanın piranoz formunu doğrulamıştır [48]. 1'in 1H-NMR spektrumu da önerilen yapıya göreydi. δ 5,42 ppm'de (d, J=8 Hz) anomerik proton sinyalinin kimyasal kayması, anomerik karbonun C-3'de (δppm 133,5) kaempferol kısmına bağlandığını ve belirlenen bağlantı sabitini gösterdi 8 Hz, glukoz parçasının konfigürasyonunu kanıtlayın. Şeker yarımının yapısı 4C1'dir ve bunu yukarıda tartışılan -konfigürasyonları takip eder.

Ayrıca, 3,4-dihidroksi fenilasetik asit kısmının C-600 metilen glukopiranoz kısmına eklenmesi, bu karbonun sinyalinin 13C-NMR spektrumunda 8 ppm 62.25'e aşağı alan kaymasını takip etti. Bu, δ 4.04 (H-600 a) ve δ 4.2 ppm'deki (H-600 b) metilenik glikoz proton sinyallerini karbonil karbonuyla ilişkilendiren HMBC spektrumundaki çapraz tepe ile daha da doğrulandı. 3,4-dihroksifenilasetik asit yarımı, δ 176.26 ppm'de. Bunlar ve yukarıda verilen veriler nihayet bileşik 1'in yapısının yeni kaempferol 3-O- - 4C1-(600 -O-3,{ {24}}dihidroksifenilasetil glukopiranosid) (KDPAG), flflavonoid kimyası ile bağlantılı olarak 3,4-hidroksifenil asetik asit ile ilk asilasyonu temsil ettiği için doğada ilk kez bildirilmiştir (Şekil 1).

cistanche tubulosa supplement


Daha fazla bilgi için: david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501

Bunları da sevebilirsiniz