SLC41A1'deki Alzheimer Hastalığıyla İlişkili SNP Rs708727, Parkinson Hastalığı Riskini Artırabilir: Genişletilmiş Slovak Çalışması Bölüm 2'den Rapor

2.2. Genetik Analizler

Genetik analizler, 508 Parkinson hastasından oluşan kohortta (pilot çalışmada 150 hastaya karşı) ve 472 kontrolden oluşan kohortta (pilot çalışmada 120 kontrole karşı) A1 SNP'leri rs11240569, rs708727 ve rs823156 üzerinde gerçekleştirildi [37]. Dolayısıyla, bu çalışmada Parkinson hastalarının ve kontrol probandlarının sayısı, pilot çalışmayla karşılaştırıldığında sırasıyla 3,{10}}kat ve 3,9 kat arttı.

Birçok kişi yaşlandıkça hafıza kaybı yaşar, ancak Parkinson hastalığı olan kişilerde hafıza değişiklikleri daha belirgin olabilir. Ancak Parkinson hastalığı olan kişilerin hafıza kaybı yaşayacağını düşünmemeliyiz çünkü onların hafızalarını korumalarına yardımcı olmak için yapabileceğimiz şeyler var.

İlk olarak, sürekli olarak bazı beyin jimnastiği aktiviteleri yapmak, Parkinson hastalığı olan kişilerin hafızalarını geliştirmelerine yardımcı olabilir. Bu aktiviteler şunları içerebilir: Sudoku yapmak, masa oyunları oynamak, bulmaca çözmek ve daha fazlası. Bu aktiviteler sayesinde hafızalarını çalıştırabilir, beyin fonksiyonlarını geliştirebilir ve zihinsel durumlarını korumalarına yardımcı olabilirler.

İkincisi, beslenmenin de Parkinson hastalarının hafızası üzerinde çok önemli bir etkisi var. Diyetimize balık, fasulye, kuruyemiş gibi protein ve besin açısından zengin bazı gıdalar ekleyebiliriz. Bu gıdalar sağlıklı kalmamıza ve hafızamızı geliştirmemize yardımcı olabilir.

Son olarak düzenli egzersiz, Parkinson hastalığı olan kişilerin hafızalarını geliştirmelerine de yardımcı olabilir. Egzersiz sadece fiziksel olarak sağlıklı kalmamıza yardımcı olmakla kalmaz, daha da önemlisi beyin fonksiyonumuzu geliştirir. Düzenli egzersiz yoluyla kardiyopulmoner fonksiyonlarını artırabilir, kaslarının ve kemiklerinin elastikiyetini artırabilir ve hafızalarını geliştirebilirler.

Sonuç olarak, Parkinson hastalığı olan kişilerin hafıza kaybı yaşayıp yaşamadıkları, yaşam tarzlarına ve yeme alışkanlıklarına, ayrıca beyin eğitimi ve egzersiz gibi şeylere dikkat edip etmediklerine bağlıdır. Bu hususlara dikkat ettiğimiz sürece Parkinson hastalarının hafızasının etkili bir şekilde geliştirilebileceğine inanıyorum. Hafızamızı geliştirmemiz gerektiği görülebilir. Cistanche Deserticola hafızayı önemli ölçüde geliştirebilir çünkü Cistanche Deserticola birçok benzersiz etkiye sahip geleneksel bir Çin tıbbi malzemesidir ve bunlardan biri hafızayı geliştirmektir. Kıymanın etkinliği, içerdiği karboksilik asit, polisakkaritler, flavonoidler vb. dahil olmak üzere çeşitli aktif bileşenlerden gelir. Bu bileşenler, çeşitli kanallar aracılığıyla beyin sağlığını geliştirebilir.

Beyin fonksiyonunu iyileştirmenin yollarını bilin'e tıklayın

In the sub-cohort of 96 PD patients and 100 controls, we also examined A1 SNPs rs9438393, rs56152218, and rs61822602 (first identified in the PD sub-cohort by the Sanger sequencing and afterward by RFLP analysis of the sub-cohort of controls). They were not analyzed in the pilot study (37]. The allele and genotype count and frequencies (fq) for each particular A1 SNP in the PD and the control cohorts are summarized in Table 3. The minor allele fa was, for rs11240569 (C>A) toplam kohortumuzda (PD vakaları + kontrol probandları), kabaca gnomAD ve ExAC veritabanları tarafından bildirilen minör alel toplam popülasyon fq aralığı (MATPFR) ile karşılaştırılabilir, aşağıdaki gibidir: fqo (gözlenen) ve for (rapor edilen) {{1 %}} ve %29-30.

Toplam kohortumuzdaki rs708727 (G > A) için minör alel fq, gnomAD ve ExAC veritabanlarındaki MATPFR'den daha yüksekti (fq, vs. for=40% vs. 29-30%) ancak şununla karşılaştırılabilirdi: ALFA veri tabanında Avrupa popülasyonu için bildirilen rs708727 minör alel fq (%41). Toplam kohortumuzdaki rs823156 (A > G) minör alel fq'si %17 idi ve dolayısıyla gnomAD ve ExAC veritabanlarındaki MATPFR'den (%23-30) daha düşüktü ancak Avrupa popülasyonu için rapor edilen rs823156 minör alel fq'si ile karşılaştırılabilirdi. ALFA veri tabanı (%18).

Toplam kohorttaki rs9438393 minör alelinin (A > G) sıklığı %40 idi ve bu nedenle, gnomAD ve TOPMED veritabanlarında rapor edilen %26-29'luk MATPFR'den oldukça yüksekti, ancak rs9438393 minör ile karşılaştırılabilir nitelikteydi. Avrupa popülasyonu için ALFA veritabanında bildirilen alel sıklığı (%41). Toplam kohorttaki rs56152218'in (T> C) küçük aleli, ALSPAC, TOPMED ve ALFA (Avrupa popülasyonu) veritabanları tarafından bildirilen %32-46'lık MATPFR dahilinde olan %38'lik bir fq ile mevcuttu.

İlginç bir şekilde, Avrupa popülasyonunda gözlemlendiği gibi Vietnam, Kore ve Katar popülasyonlarında minör alel C değil T'dir [https://www.ncbi.nlm.nih.gov/snp/?term{0} }rs56152218, erişim tarihi: 2 Ağustos 2021)]. Rs61822602'deki (G > T) minör alelin fq'si %12 olarak bulundu. Bu, ALSPAC ve TWINSUK veritabanları tarafından bildirilen T aleli frekanslarıyla karşılaştırılabilir düzeydedir (sırasıyla %12 ve %13) ancak ALFA veritabanında Avrupa popülasyonunda rapor edilen T alelinin fq'sından (%6) çok daha yüksektir.

PD'mizde ve kontrol gruplarımızda test edilen tüm A1 SNP'ler Hardy-Weinberg dengesindeydi (HWE; Tablo 4).

Daha sonra, test edilen her SNP için minör alelin ve minör aleli içeren genotiplerin olasılık oranlarını (OR) hesapladık. Bu sonuçlar Tablo 5'te özetlenmiştir. rs708727'deki GA genotipi, popülasyonumuzda PD (OR=1.42 (1.08–1.87), p=0.01) ile ilişkilendirilmiştir. Ayrıca, test edilen her SNP için belirli genotipik kombinasyonların PD ile ilişkisini resesif, dominant ve tamamen aşırı dominant genetik modellerde test ettik (Tablo 6). Önceki verilerle tutarlı olarak, baskın (GG vs. GA + AA) ve tamamen aşırı baskın (GG + AA vs. GA) genetik modellerde (ORD {{16}) rs708727 minör alelinin (A) PD ile ilişkisini belirledik. },36 (1,05–1,77), p=0,02 ve ORCOD=1,34 (1,04–1,72), p=0,02, sırasıyla). Geriye kalan SNP'ler, test edilen genetik modellerde PD ile hiçbir ilişki göstermedi (Tablo 6).

Ayrıca PD kohortunda (N {{0}}) ve kontrol kohortunda (N {{0}}) test edilen SNP'lerin ikili, üçlü, dörtlü, beşli veya altılıdan oluşan herhangi bir genotipik kombinasyonunun popülasyon oranlarının eşitliğini de test ettik ( N=100) test edilen A1 SNP'ler arasındaki etkileşimlerin popülasyonumuzda PD gelişimine yatkınlığa yönelik etkisinin boyutunu incelemek için. Toplamda, önemli ölçüde (p < 0.05, 10 genotip; p < 0,06, iki genotip) ile toplam 12 genotipik kombinasyon (iki ikili, yedi üçlü ve üç dörtlü, Tablo 7) ) PD ve kontrol kohortlarında farklı sayımlar belirlendi (Tablo 7). Oranlardaki farklılıkları tanımlayan Cohen kriterlerini [39] takiben, 12 genotipten yalnızca üçlü GG(rs708727) + AG(rs823156) + CC(rs61822602), Cohen'in h(2arcsin√ prp1) tarafından tanımlanan "orta" boyut farkını gösterdi. –2arcsin√ prp2) 0,5'ten büyük veya eşit.

Geri kalan 11 genotipin h değeri 0.32 ile 0.46 arasında değişiyordu ve dolayısıyla 0.2 ila 0.5 arasındaki h aralığı içindeydi; oranlardaki küçük farklılıkları tanımlar (Tablo 7) [39]. Bu nedenle üçlü GG(rs708727) + AG(rs823156) + CC(rs61822602) klinik olarak anlamlı olabilir ve bu genotipin PH duyarlılığı açısından gelecekte incelenmesi gerekir. Rs11240569, rs708727 ve rs823156 için, 508 Parkinson hastasından oluşan kohort ve 472 kontrolden oluşan kohorttan alınan kaynak verilerle aynı tip analizi gerçekleştirdik. Dört genotip, iki ikili (GG(rs11240569) + AG(rs708727), GG(rs708727) + AG(rs823156)) ve iki üçlü (GG(rs11240569) + GG(rs708727) + AA(rs823156), (GG(rs11240569) + GG(rs708727) + AG(rs823156)), PD ve kontrol kohortlarında önemli ölçüde (p < 0.05) farklı sayımlarla belirlendi.Dört genotipin her biri için hesaplanan Cohen's h, 0.2 eşiğinin altındaydı [39], ve dolayısıyla test edilen gruplar arasındaki nüfus oranları arasındaki fark, dört vakanın tamamında da ihmal edilebilir düzeydeydi.

Yaşlanmanın ardından erkek cinsiyetin, idiyopatik PH'nin başlangıcı için en belirgin risk faktörü olduğu düşünülmektedir [37]. Pilot çalışmamızda, 15 Parkinson hastasının kohortunda idiyopatik PD'nin başlangıç ​​yaşı, rs11240569, rs708727 ve rs823156 SNP'leri için herhangi bir genotipik kombinasyonun varlığı ile ilişkili değildi [37]. Burada, PD'nin başlangıç ​​yaşını (1) 508 PD hastası grubundaki rs11240569, rs708727 ve rs823156 SNP'leri için her genotipik kombinasyonun varlığıyla (Şekil 2) ve (2) her birinin varlığıyla ilişkilendirdik. A1 promoter dizilimi için PD kohortundan rastgele seçilen PD hastalarının alt kohortunda rs11240569, rs708727, rs823156, rs9438393, rs56152218 ve rs61822602 SNP'leri için genotipik kombinasyon (Şekil 3). Başlangıç ​​yaşı hakkında, tek yönlü bir ANOVA analizi, hem büyük PD kohortunda hem de PD alt kohortunda test edilen SNP'lerin her biri için genotipik alt popülasyonlar arasında anlamlı bir fark olmadığını (p < 0,05) ortaya çıkardı. hastalar. Bu nedenle, test edilen SNP'lerdeki herhangi bir genotip, PH'nin idiyopatik formunun başlangıç ​​yaşını etkilemez. Bu, pilot çalışmamızda varılan sonuçla tam bir uyum içindedir [37].

Ayrıca, büyük kohort (N=508) ve alt kohorttan (N=96) türetilen kadın ve erkek alt popülasyonlarındaki test edilen SNP'lerin her biri için aynı türde bir analiz gerçekleştirdik. ) PD hastalarının. Ek Şekiller S1-S3'te gösterildiği gibi, başlangıç ​​yaşı ile test edilen SNP'ler rs11240569, rs708727, rs823156, rs9438393, rs56152218'de herhangi bir özel genotip kombinasyonunun varlığı arasında anlamlı (p < 0.05) bir ilişki yoktur, ve cinsiyete göre bölünmüş alt gruplardaki rs61822602, ya büyük PD kohortundan (NM=306, NF=202) ya da A1 promoter dizilimi için seçilen PD alt kohortundan (NM {{20}) türetilmiştir. }, NF=42).

2.3. RandomForest Makine Öğrenimi (RF-ML)

Tüm A1 SNP'leri, PD hastaları ile RF-ML'li kontroller arasında ayrım yapma yetenekleri açısından test edildi. RF-ML algoritması verilerimiz kullanılarak eğitildi ve bireysel SNP'lerin ayırt edici önemi, grafik derinliği olarak bilinen teknik bir yapıyla değerlendirildi [37,40]. Pilot çalışmamızda olduğu gibi [37], test edilen SNP'lerin öngörme yeteneği sırasıyla ROC (alıcı çalışma karakteristiği) eğrileri ve AUC (ROC eğrisi altındaki alan) ile görselleştirildi ve ölçüldü. Tahmincilerin ayırt etme yeteneği, %100'den (maksimum ayırt etme yeteneği) %50'ye (minimum ayırt etme yeteneği) kadar AUC aralığı içinde verilir; AUC < %50, ayırt edici yeteneğin bulunmadığına karşılık gelir.

RF algoritması aşağıdaki modlarda eğitilmiştir: (1) üç veya altı (Tablo 8) belirli A1 SNP'leri (her SNP, üç genotip (AMAM/AMAm/AmAm, burada AM ana alel anlamına gelir ve Am küçük alel anlamına gelir), bir öngörücü olarak (üç veya altı RF modeli, her SNP için bir tane), (2) öngörücü olarak eşleştirilmiş SNP'lerin genotipik kopyalarıyla (üç RF modeli (üç SNP) veya 15 RF modeli (altı SNP), her bir çift için bir tane) SNP'ler; Tablo 8), (3) öngörücü olarak üç SNP'nin genotipik üçlüsü ile (bir RF modeli (üç SNP) veya 20 RF modeli (altı SNP), SNP'lerin her üçlüsü için bir tane; Tablo 8), (4) ile öngörücü olarak altı SNP'nin genotipik dörtlüleri (15 RF modeli, her dörtlü için bir tane; Tablo 8), (5) öngörücü olarak altı SNP'nin genotipik beşlileri (altı RF modeli, her beşli için bir; Tablo 8) ve ( 6) genotipik altılıya sahip (bir RF modeli, Tablo 8).

Bu nedenle, A1 SNP'lerin tekilleri, ikilileri, üçüzleri, dörtlüleri, beşizleri ve altılıları öngörücü olarak kullanıldığında, PD hastaları ve kontroller arasında ayrım yapma yeteneği taşımadılar (Tablo 8). Bu nedenle, RF-ML analizine göre ve pilot çalışmayla [37] uyumlu olarak, A1 SNP'lerin kontroller ve Parkinson hastaları arasında ayırıcı olarak hizmet etme potansiyeli yoktur ve PD konusunda Slovak popülasyonunda hiçbir öngörücü veya tanısal değer taşımamaktadır. .

3. Tartışma

PARK16 lokusu, PH ile ilişkisi ve bu karmaşık rahatsızlığa duyarlılığı tanımlamadaki tartışılan rolü nedeniyle bilim camiasında ilgi görmüştür. 2019'da, Slovak (Batı Slavlar) popülasyonunda üç A1 SNP'nin (rs11240569, rs708727 ve rs823156) PD'nin idiyopatik formuyla ilişkisini analiz ettiğimiz bir pilot çalışma bildirdik. Rs11240569 ve rs823156'nın esas olarak Asya/Doğu popülasyonlarında PD duyarlılığı ile rapor edilen ilişkisi çalışmamızda bulunamadı [37]. Frekans istatistikleri (konservatif genetik analizler) veya RF-ML analizi kullanılarak hiçbir ilişki doğrulanamadı [37].

Ancak pilot çalışmamızın en büyük sınırlaması, Parkinson hastalığı ve kontrol kohortlarındaki hasta/proband sayısının nispeten düşük olmasıydı (sırasıyla 150 ve 120). İstatistiksel açıdan bakıldığında, her iki kohorttaki örneklem büyüklüğünün küçük olması ve gerçekleştirilen analizlerin istatistiksel gücünün düşük olması nedeniyle verilerin dikkatli bir şekilde yorumlanması gerektiğini vurguladık [37]. Bununla birlikte, geleneksel frekans istatistiklerinden veya yaklaşık Bayes hesaplamasından çok daha küçük örnek boyutları gerektiren ML yaklaşımını kullanarak, belirli A1 SNP'lerin PD hastaları ve kontroller arasında ayrım yapma yeteneğini güvenle inceleyebildik. Tüm durumlarda, ML yaklaşımı, Slovak popülasyonunda rs11240569, rs708727 ve rs823156 SNP'lerinin tanısal ve öngörücü ilişkisinin esasen sıfır olduğunu ortaya çıkardı [37].

Bu çalışmada, yalnızca yukarıda bahsedilen üç SNP'yi değil, aynı zamanda A1'in promoter bölgesinde lokalize olan üç SNP'yi de (rs9438393, rs56152218 ve rs61822602) inceledik. Bu SNP'ler, 96 PD numunesinin sekanslanması ve ardından kontrol numunelerinin RFLP analizi ve sekanslanan PD numunelerinin RFLP doğrulaması ile tanımlanmıştır. Genetik analizlerimiz, yeni incelenen üç SNP'nin hiçbirinin PD ile esasen hiçbir ilişkisini ortaya çıkarmadı. Aynı durum, PD ve kontrol alt gruplarında (96/100) ve ayrıca 508 PD hastası ve 472 kontrolden oluşan kohortlarda analiz edilen rs11240569 ve rs823156 için de geçerlidir. Bu sonuçlar pilot çalışmanın sonucuyla tam bir uyum içindedir [37]. Bununla birlikte, büyük kohortlarda rs708727, Slovak popülasyonunda artan Parkinson hastalığı riski ile ilişkilidir.

Bildiğimiz kadarıyla, henüz hiçbir çalışma A1 SNP rs708727'yi PD gelişimi açısından değişen riskle doğrudan ilişkilendirmemiştir [19,37]. Genişletilmiş çalışmamızda (pilot çalışma [37] ile karşılaştırıldığında), rs708727'deki minör alel A, dominant olarak test edildiğinde artan Parkinson hastalığı başlangıç ​​riski ile ilişkilidir [40] (ORD=1.36 (1.05–1.05– 1.77), p=0.02) veya tamamen aşırı baskın [41] (ORCOD=1.34 (1.04–1.72), p=0.02) modelleri (Tablo 5). Bu nedenle, rs708727'de minör alelin (A) varlığı, PH gelişme riskinin artmasıyla ilişkili olabilir. Sanchez-Mut ve ark. [27] ve Wang ve ark. [42], rs708727'deki minör A alelinin varlığının, PM20D1 promotörünün metilasyonunu (ve dolayısıyla ekspresyonunu) doza bağımlı (kantitatif) bir şekilde değiştirdiğini açıkça göstermiştir; bu, çalışmamızdaki en uygun genetik modellerdir. bir rs708727 A alelinin varlığının Parkinson hastalığının başlangıcına duyarlılığı değiştirmek için yeterli olduğunu gösterir. Küçük alelin bir veya iki kopyasının rs708727'de (genotip) bulunup bulunmadığına ilişkin PD duyarlılığı (fenotip), ayrıntılı olarak daha fazla açıklığa kavuşturulmayı beklemektedir.
Sanchez-Mut ve ark. PM20D1'i (PARK16 lokusu içinde lokalize olan ve hem hidrolaz hem de peptidaz aktivitelerine sahip protein bir enzimi içeren peptidaz M20- alanını kodlayan; N-yağlı asil amino asit sentaz/hidrolaz) bir metilasyon ve ekspresyon kantitatif özelliği olarak tanımlamıştır. Güçlendirici benzeri özellikler sergileyen ve haplotip bağımlı, CTCF (CCCTC bağlayıcı) transkripsiyon faktörü aracılı kromatin döngüsü aracılığıyla PM20D1 promotörü ile temas eden AD riskiyle ilişkili bir haplotipe bağlanan lokus (mQTL) [27]. Sağlıklı kontrollerden ve ileri evre AD'li hastalardan alınan numuneleri karşılaştırarak, PM20D1'in AD'li hastalarda tutarlı bir şekilde promoter hipermetilasyonu sergilediğini bulmuşlardır [27]. A1 SNP rs708727, SNP rs960603'ün [27] yaptığı gibi, insan frontal korteksi ve hipokampüsündeki PM20D1 DNA metilasyon seviyeleri ile ilişkilidir [27]. Wang ve meslektaşları periferik kan üzerinde yaptıkları çalışmalarda PM20D1'in öncelikle AD riskiyle ilişkili A1 SNP rs708727 tarafından aracılık edilen bir mQTL olduğunu doğrulayan veriler elde ettiler [42].

Ayrıca, uzunlamasına verileri, hipometilasyonun, AD'nin semptomatik başlangıcından önce meydana geldiğini, muhtemelen koruyucu fonksiyonunu aktive etmek için PM20D1'in artan ekspresyonunu kolaylaştırmak için meydana geldiğini göstermektedir [42]. AD ilerlemesi, AD hastalarında PM20D1 promotörünün DMR'sindeki (diferansiyel olarak metillenmiş bölge) CpG adalarında artan metilasyon seviyesi ile işaretlenir ve sonuçta gen transkripsiyonunun ve ekspresyonunun inhibisyonuna yol açar [27,42,43]. PM20D1 aynı zamanda diyabet [44], obezite [45] ve multipl skleroz [46] ile de ilişkilendirilmiştir ve PARK16 lokusu içinde lokalize olduğundan, PD ile olası ilişkisi/ilişkisi varsayılmaktadır [47].

Moleküler mekanistik analizlerin olmamasına rağmen, mevcut verilerimizin ışığında, Alzheimer ve Parkinson hastalığının (ve diğer daha az sıklıkta görülen nörodejeneratif hastalıkların) yalnızca "iyi bilinen" patofizyolojik mekanizmaları (örn. bozulmuş mitofaji, retromer ve proteozom) paylaşmadığını düşünüyoruz. işlevleri), aynı zamanda PM20D1 ifadesinin A1rs708727-bağımlı düzenlenmesi gibi epigenetik mekanizmalar da vardır [27,42]. Çalışmamız, PH ve diğer nörodejeneratif bozuklukların patobiyolojisinde PM20D1 tarafından metabolize edilen endojen N-asil amino asitlerin (NAA'lar) rolünün ayrıntılı olarak aydınlatılması ihtiyacına dolaylı olarak katkıda bulunmaktadır. NAA'ların ve nörotransmiterlerin N-asil konjugatlarının (NAAN'ler) artık nöromodülasyonda önemli bir rol oynadığı bilinmektedir [48,49]. PM20D1 ekspresyonunu N-asil dopamin (NADA) ile ilişkilendiren kanıtlar Song ve ark.'nın son çalışmasıyla sağlanmıştır. Bu yazarlar, kir6.2'nin (ATP'ye duyarlı K+ kanallarının gözenek oluşturucu bir alt birimi) silinmesinin, PM20D1 ve mitokondriyal solunumu ayıran ajanların seviyelerinde bir artış yoluyla mitokondri sayısında azalmaya ve ATP üretiminde azalmaya yol açtığını göstermiştir. farelerin orta beyninde NADA dahil [49].

NADA, 5-lipoksijenazın (5-LOX) güçlü bir inhibitörüdür ve beyinle sınırlı bir dağılıma sahiptir; seviyeleri en yüksek striatumda ve diğer yerlerde çok düşüktür [48,50,51]. 5-LOX, araşidonik asitten lökotrien veya 5-HpETE (5-hidroperoksi eikosatetraenoik asit) sentezini katalize eder ve nöroinflamasyona katılımı yoluyla nörodejenerasyon (AD ve PD) ile ilişkilendirilmiştir [51, 52]. Bu nedenle azalan PM20D1 ifadesinin, daha sonra NADA bolluğunun azalmasının ve 5-LOX aktivitesinin artmasının PD patolojisine (ve diğer nörodejeneratif hastalıklara) önemli ölçüde katkıda bulunduğunu öneriyoruz.

Sanchez-Mut ve arkadaşları, PM20D1'in fare AD hipokampusunda aşırı ekspresyonunun öğrenmede iyileşme sağladığını, bunun yıkılmasının ise amiloid plak yükünü arttırdığını göstermiştir [27]. PH ile ilişkili demansta hem Lewy tipi hem de Alzheimer tipi patolojiler önemlidir [53]. Parkinson hastalarının önemli bir kısmı, hastalık sırasında kötüleşen demanstan muzdariptir [54]. Bu gözlemleri dikkate alarak, PM20D1'i susturan rs{10}}bağlantılı etkinliğin Parkinson hastalığı demansının başlangıcına katkıda bulunup bulunmadığını ve PM20D1 etkinliğinin izlenmesinin Parkinson hastalığı demansının başlangıcı için prognostik bir parametre olarak hizmet edip edemeyeceğini tahmin ediyoruz.

Daha önce yayınlanmış çalışmalar, Mg2+ taşıyıcılarının PD patobiyolojisine dahil olduğunu ileri sürmüştür [18-22,55]. Somatik hücrelerin Mg homeostazisinde anahtar oyuncu olan A1, doğrudan PD ile bağlantılıdır [20-22]. A1'de p.A350V, p.R244H ve p.R285Q ikamelerine yol açan nokta mutasyonları, varsayılan olarak PD ile ilişkilendirilmiştir ve A1'deki hem fonksiyon eksikliğinin hem de fonksiyon kaybı mutasyonlarının, nöronlarda zararlı sonuçlara sahip olduğu varsayılmaktadır. PH fenotipine katkıda bulunur [20-22]. Bu çalışma dolaylı olarak yalnızca A1 çekirdek fonksiyonundaki (Na+/Mg2+ değişimi) bozulmaların değil aynı zamanda PM20D1 ifadesinin (ve aktivitesinin) A1-bağlantılı (rs708727) epigenetik düzenlemesinin de katkıda bulunduğu ihtimaline işaret etmektedir. PD'nin patobiyolojisi.

Bu çalışmada, genotipik üçlü GG(rs708727) + AG(rs823156) + CC(rs61822602)'nin potansiyel olarak klinik olarak anlamlı (h 0,5'ten büyük veya eşit) olduğunu belirledik. İlginçtir ki, GG genotipli rs708727 üçlünün bir parçasıdır. Bununla birlikte, önceki araştırmaların ışığında, rs708727'deki küçük alel A'yı içeren genotipin, bu üçlüyle ilişkili potansiyel bir Parkinson riskiyle bağlantılı olması beklenebilir. Şu anda, GG(rs708727) + AG(rs823156) + CC(rs61822602) üçlüsündeki SNP'leri içeren herhangi bir moleküler/genetik/epigenetik etkileşim ve dolayısıyla bu üçlünün toplamdaki herhangi bir varsayılan katkısı hakkında yorum yapamıyoruz. PD'nin başlama riski.

Pilot çalışmamızda verilerimizi değerlendirmek ve yorumlamak için RF-ML'den yararlandık [37]. RF-ML veri analizinin en büyük avantajı iki yönlüdür: (1) Parkinson hastaları ve kontroller arasındaki SNP'lerin ayırt edici yeteneğinin ölçülmesine izin verir [37] ve (2) SNP'lerin değerlendirilmesi için daha düşük örneklem boyutları gerektirir. bireysel SNP'lerin veya bunların kombinasyonlarının ayırt edici önemi [37]. Ayrıca RF-ML, daha büyük örneklerle ilişkilendirilen p-değeri problemini, mevcut olsalar bile atlar [56]. Önceki raporumuzdaki gibi, test edilen A1 SNP'lerin hiçbirinin kohortumuzda PD hastaları ile PD olmayan probandlar arasında ayrım yapma gücüne sahip olduğu gösterilmemiştir (Tablo 8). Bu nedenle, test edilen A1 SNP'lerden hiçbirinin Slovak popülasyonunda PD/PD olmayan ayırıcı olarak hizmet etmeye uygun olmadığını varsayabiliriz.

A1 rs708727'nin değişen PD riski ile ilişkisine ilişkin olarak, RF-ML analizimizin sonucu ilk bakışta çelişkili görünmektedir (Tablo 5 ve 6'ya karşı Tablo 8). Jakobsdottir ve ark. lojistik regresyon ve ROC eğrisi analizlerinde, güçlü genetik ilişkilerin bile vakalar ve kontroller arasında etkili ayrımcılığı otomatik olarak garanti etmediğini gösterdi [57]. Zayıf sınıflandırıcılar olmalarına rağmen anlamlı OR'ye sahip SNP'ler, etiyolojik hipotezlerin oluşturulmasında çok değerli olabilir [57]. Bizim olgumuzda A1 SNP rs708727'nin PD'ye ilişkin sınıflandırma gücü yoktur, dolayısıyla klinik önemi yoktur. Bununla birlikte, PD için değişen riskle olan zayıf ama anlamlı ilişkisi, rs708727'nin PD patobiyolojisine AD'dekiyle benzer veya aynı şekilde dahil olduğu hakkında spekülasyon yapmamıza olanak sağladı [27].

4. Malzemeler ve Yöntemler

4.1. Çalışma Katılımcıları (Temel Özellikler)

Toplamda 980 proband çalışmaya dahil edildi (dahil kriterleri karşılayan 508 Parkinson hastası ve 472 kontrol). PH'nin idiyopatik formu, MDS'nin (Hareket Bozuklukları Derneği) Parkinson hastalığı tanı kriterlerine göre beş Parkinson tanı merkezindeki (Martin, Bratislava, Trencin, Zvolen ve Kosice'de) nörologlar tarafından teşhis edildi. Tüm hastalar standart anti-PD tedavisi ile tedavi edildi. Parkinson hastalarının yaş ortalaması 68,4±9,6 yıldı. Hastalığın ortalama başlangıç ​​yaşı 61,7±10,7 yıldı. En genç vakaya 34, en yaşlı vakaya ise 89 yaşında tanı konuldu. PH grubunun 202'si kadın (K) ve 306'sı erkek (E) hastadan oluşmaktaydı ve dolayısıyla F:E oranı 1:1,5 idi.

Probandların kontrol grubu, Mesleki Tıp ve Toksikoloji Kliniği (Martin Üniversitesi Hastanesi (UHM)) ve Nöroloji Kliniğinden (UHM) dışarıdan ve içeriden gelen hastalardan oluşuyordu. Yalnızca daha önceden diyabetes melitus veya osteoporoz (tüm hastalıklar A1 ekspresyonunda değişiklik ve A1 fonksiyonunun düzensizliği ile ilişkili olduğu varsayılan) gibi herhangi bir nörodejeneratif ve nöropsikiyatrik hastalık tanısı almamış hastalar kontrol çalışma grubuna dahil edildi. Kontrol probandlarının ortalama yaşı 68,3 ± 11,6 yıldı. Kontrol grubunu 208 kadın ve 264 erkek birey oluşturduğundan kontrol grubunda F:E oranı 1:1,3 olarak bulundu.

A1 promoter bölgesinin sıralandığı PD hastalarının alt grubu rastgele seçilmiş 96 denekten oluşuyordu. F:M oranı 1:1.3 idi (42 kadın ve 54 erkek). PH alt grubundaki hastaların ortalama yaşı 67.{{10}} ± 9,5 yıldı. Kontrol alt grubu 41 kadın ve 59 erkekten oluşuyordu, dolayısıyla F:M oranı 1:1.4'tü. Kontrol alt grubundaki probandların ortalama yaşı 59,8 ± 5,0 yıldı.

Bu çalışma Comenius Üniversitesi (JFM CU) Jessenius Tıp Fakültesi Etik Kurulu tarafından onaylandı. Onay ID: EK 66/2019 altında kaydedildi. Tüm çalışma katılımcıları bilgilendirilmiş onam formlarını imzaladı.

4.2. Örnek İşleme

Kan örnekleri EDTA ile muamele edilmiş BD Vacutainer® tüplerine (Becton, Dickinson and Company, Franklin Lakes, NJ ABD) toplandı. Üreticinin protokolüne göre Wizard® Genomic DNA Purification Kit (Promega Corporation, Maddison, WI, ABD) kullanılarak taze (UHM) veya dondurulmuş kan örneklerinden (diğer PD merkezleri) genomik DNA izole edildi. İzole edilen DNA örnekleri -80 ◦C'de saklandı.

4.3. Genotipleme

Genotipleme 358 PD numunesi ve 352 kontrol numunesi üzerinde yapıldı. Bu deneylerden elde edilen sonuçlar, daha önce Cibulka ve arkadaşları tarafından bildirilen sonuçlarla birlikte analiz edildi. [37]. SNP'ler rs11240569, rs708727 ve rs823156, TaqMan® genotipleme probları C_34251_20/rs11240569, C_375742_10/rs823156 ve C_9238453_10/rs708727 (tümü Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA USA) daha önce bildirildiği gibi aynı şekilde [37].

4.4. Sanger Sıralaması

Promotör bölgesi, tek bir sekanslama çalışması için çok uzun olduğundan, örtüşen dört parçaya/amplikona bölündü. Sekanslanmadan önce hedef bölgeler amplifiye edildi. Primerler, çevrimiçi Primer3Plus aracı [https://primer3plus.com/cgi--bin/dev/primer3plus.cgi (3 Mayıs 2018'de erişildi)] kullanılarak tasarlandı. Her bir primer çifti, çoklu amplifikasyon ürünlerinin varlığı açısından PCR çevrimiçi aracı UCSC [http://www.genome.ucsc.edu/cgi--bin/hgPcr (3 Mayıs 2018'de erişildi)] tarafından kontrol edildi.

Dört fragmanın amplifikasyonu için kullanılan primerler ve PCR programları ek Tablolar S1 ve S2'de özetlenmiştir. Her bir parça için ana karışımların bileşimleri SA3'te özetlenmiştir. Fragmanlar 3 ve 4, yüksek miktarda G ve C nükleotid içeriğine sahiptir (sırasıyla %67,4 ve %71,9). Reaksiyon verimi, 10x GC Rich Enhancer'ın (Solis Biodyne, Tartu, Estonya) eklenmesiyle artırıldı. PCR ürünü, NucleoSpinTM Gel ve bir PCR Temizleme kiti (Macherey-Nagel GmbH&Co. KG, Düren, Almanya) kullanılarak saflaştırıldı. Bir sonraki adımda saflaştırılmış PCR ürünü, PCR'nin ön sekanslaması için uygun bir konsantrasyona (SA4, SA5) kadar seyreltildi. Ön sıralama PCR'sinde yalnızca ileri (fw) primerler kullanıldı. Reaksiyon karışımı aynı zamanda BigDye Terminator v3.1 (Applied Biosystems, Waltham, MA, ABD) ve dideoksinükleotidleri de içeriyordu.

Sonuç olarak, floresans işaretli dideoksinükleotidlerle sonlandırılan çeşitli boyutlarda ürünlerin bir karışımını elde ettik. Ürünler daha sonra üreticinin protokolüne göre SigmaSpin Sıralama Reaksiyonu Temizleme kiti (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, ABD) kullanılarak saflaştırıldı. 3 uL saflaştırılmış ürün hacmi, 12 uL yüksek dereceli deiyonize formamid (Applied Biosystems, Waltham, MA, ABD) ile birlikte bir 96-kuyu plakasına aktarıldı. Karışım, bir termocycler içerisinde 95 ◦C'de 5 dakika süreyle denatüre edildi. Parçalar, 8-mikrokapiler cihaz ABI 3500 (Applied Biosystems, Waltham, MA, ABD) üzerinde ayrıldı. Diziler Chromas yazılımı (Technelysium Pty Ltd., Güney Brisbane, Avustralya) tarafından dışa aktarıldı ve görselleştirildi. FASTA dosyaları BLAST'a (Temel Yerel Hizalama Arama Aracı) yüklendi ve referans insan genomuna (sürüm GRCh38.p12) göre hizalandı.

Transkripsiyon faktörü bağlanma bölgelerinin ve bunların değişikliklerinin tahmini, çevrimiçi ConSite aracı tarafından gerçekleştirildi [http://consite.genereg.net/ (3 Eylül 2020'de erişildi)] [38]. Ana aleli ve küçük aleli içeren diziler yüklendi ve transkripsiyon faktörlerinin (TF) spektrumları oluşturuldu. Analiz minimum özgüllüğü önceden ayarlamadan gerçekleştirildi. Varyantların varlığına bağlı olarak TF bağlama profillerindeki değişiklikler Tablo 2'de özetlenmiştir.

4.5. RFLP (Kısıtlama Parça Uzunluğu Polimorfizmi) Analizi

Amplifiye PCR'nin reaksiyon karışımı bileşenleri ve PCR koşulları SA6 ve SA7'de özetlenmiştir. Amplikonların kısıtlamalarını tasarlamak için çevrimiçi in silico aracı NEBCutter 2.0 [http://nc2.neb.com/NEBcutter2 / (14 Şubat 2020'de erişildi)] kullanıldı. RFLP analizi için aşağıdaki kısıtlama enzimleri seçildi: Hpy166II (rs9438393'ün tespiti), NIaIII (rs56152218'in tespiti) ve BmrI (rs61822602'nin tespiti). Tüm enzimler New England Biolabs'tan satın alındı. Rs144056491 varyantı için uygun bir enzim mevcut olmadığından bir RFLP deneyi tasarlayamadık. Kısıtlamanın ardından SA8'de özetlenen parçaların verimi oluşturmasını bekledik. Kısıtlamanın ardından ürünler, agaroz jel elektroforezi (NIaIII ve Hpy166II %1 jel; BmrI %2 jel) ile ayrıldı ve daha sonra bir PharosFX cihazında (Bio-Rad Laboratories) görselleştirildi. Her SNV için genotipler belirlendi.

4.6. Veri analizi

Veriler R [R Core Team (2021); R: istatistiksel hesaplama için bir dil ve ortam. R İstatistiksel Hesaplama Vakfı, Viyana, Avusturya. URL https://www.R-project.org/, ver. 4.0.5 (2021-03-31)]. R kütüphaneleri HardyWeinberg [Jan Graffelman (2015); Dialelik Genetik Belirteçleri Keşfetmek: HardyWeinberg Paketi. İstatistik Yazılımı Dergisi, 64(3), 1-23. URL https://www.jstatsoft.org/v64/i03/], DescTools [Andri Signorelli ve ark. (2021); DescTools: Tanımlayıcı istatistikler için araçlar. R paketi sürümü 0.99.41.], epitools [Tomas J. Aragon (2020); epitools: Epidemiyoloji Araçları. R paketi sürüm 0.5-10.1. URL https://CRAN.R-project.org/package=epitools], pwr [Stephane Champely (2020); pwr: Güç Analizi için Temel Fonksiyonlar. R paketi sürüm 1.3-0. URL https://CRAN.R-project.org/package=pwr] ve şirket içinde geliştirilmiş bir kod. RandomForest tahmine dayalı modelleme, R kütüphanesi randomForestSRC [Ishwaran H. ve Kogalur UB (2021); Hayatta Kalma, Regresyon ve Sınıflandırma için Hızlı Birleşik RandomForests (RF-SRC), R paketi sürüm 2.11.0.]. Veriler R kütüphanesi arı sıcak tarafından görselleştirildi [Aron Eklund (2021); beeswarm: Arı Sürüsü Planı, Stripchart'a Bir Alternatif. R paketi sürümü 0.3.1. URL https://CRAN.R-project.org/package=beeswarm]. Her SNP için üç genotip alt popülasyonu için popülasyonun ortalama başlangıç ​​yaşının eşitliğine ilişkin sıfır hipotezini test etmek için tek yönlü ANOVA kullanıldı. P değeri 0,05'in altında olan bulgular istatistiksel olarak anlamlı kabul edildi.

5. Sonuçlar

Özetle, verilerimiz Slovak popülasyonunda baskın ve aşırı baskın genetik modellerde A1 SNP rs708727'nin PD ile zayıf ama anlamlı bir ilişkisi olduğunu göstermektedir. Test edilen diğer A1 SNP'lerin hiçbiri (rs11240569, rs823156, rs9438393, rs56152218 ve rs61822602), test edilen genetik modellerin herhangi birinde hastalıkla ilişkilendirilmedi. RF-ML analizleri, test edilen tüm A1 SNP'lerin PD'nin zayıf sınıflandırıcıları/tahmin edicileri olduğunu tanımladı, dolayısıyla bunların klinik uygulamada tanısal veya prognostik belirteçler olarak kullanımları ihmal edilebilir seviyede kaldı. Bununla birlikte, rs708727'nin PD ile ilişkisi, rs708727'deki PD riski ile ilişkili minör alelin (G > A), PM20D1 ekspresyonunun epigenetik regülasyonunun bozulması yoluyla hastalığın başlangıcına ve ilerlemesine katkıda bulunduğunu tahmin etmemizi sağladı; bu mekanizmanın rol oynadığı bilinmektedir. AD'nin patobiyolojisinde. Kesin bir açıklama yapmak için bu hipotezin daha fazla incelenmesi gerekir. Ayrıca PH ile ilişkili demans ile rs708727 arasındaki olası bir ilişki açıklığa kavuşturulmalıdır.

Yazar Katkıları:

Kavramsallaştırma, MK; metodoloji, MK, MC, MG (Marian Grendar) ve MB; yazılım, MG (Marian Grendar); doğrulama, MC, MB ve MK; biçimsel analiz, MK, MG (Marian Grendar), MC, AS, ZL, ZP, TS, SS ve MG (Milan Grofik); soruşturma, MC ve MB; veri iyileştirme, MC, MB, MG (Marian Grendar), MG (Milan Grofik), JN, VN ve EK; yazma – orijinal taslak hazırlama, MK; yazma – inceleme ve düzenleme, MC, MG (Marian Grendar) ve ZP; görselleştirme, MK, MC ve MG (Marian Grendar); denetim, MK; proje yönetimi, MC, MK, MG (Milan Grofik), JN, JB, VH, VN, EK, MS ve BV; finansman alımı, MK Tüm yazarlar yazının yayınlanmış versiyonunu okudu ve kabul etti.

Finansman:

Bu çalışma, APVV-19-0222 hibe numarasıyla Slovak Araştırma ve Geliştirme Ajansı ile Slovak Cumhuriyeti Eğitim, Bilim, Araştırma ve Spor Bakanlığı Bilimsel Hibe Ajansı ve VEGA hibe numarasıyla Slovak Bilimler Akademisi tarafından desteklenmiştir. 1/0554/19, her ikisi de MK'ye

Kurumsal İnceleme Kurulu Bildirisi:

Çalışma Comenius Üniversitesi (JFM CU) Jessenius Tıp Fakültesi Etik Kurulu tarafından onaylandı. Onay ID: EK 66/2019 altında kaydedildi.

Bilgilendirilmiş Onam Beyanı:

Çalışmaya katılan tüm deneklerden bilgilendirilmiş onam alındı.

Veri Kullanılabilirliği Beyanı:

Veri kümesinin tamamı makalede yer almaktadır. Dahil edilen verilerin niteliği ve kapsamı daha fazla meta-analiz yapılmasına olanak sağlar. Çalışmayla ilgili her türlü bilgi talep üzerine ilgili yazardan temin edilebilir.

Teşekkürler:

Tüm çalışma katılımcılarına ve aile üyelerine teşekkür ederiz. Ayrıca projeye verdiği yetkin teknik destek için Martin Marak'a (JFM CU), A1 destekçi analizleri konusunda faydalı tavsiyeleri için Jan Radvanszky ve Rastislav Hekel'e (her ikisi de GENETON sro) ve belgenin dil düzenlemesi için Theresa Jones'a teşekkürlerimizi sunarız. el yazması.

Çıkar çatışmaları:

Yazarlar çıkar çatışması olmadığını beyan etmektedir.

Referanslar

1. Tatarkova, Z.; de Baaij, JHF; Grendar, M.; Aschenbach, JR; Racay, P.; Bos, C.; Sponder, G.; Hoenderop, JGJ; Röntgen, M.; Turcanova Köprüsakova, M.; ve ark. Diyetle Mg2+ Alımı ve Na+/Mg2+ Değiştirici SLC41A1, Fare Kardiyomiyositlerinde Mitokondriyal Enerji Bileşenlerini Etkiliyor. Uluslararası J. Mol. Bilim. 2020, 21, 8221. [CrossRef] [PubMed]

2. Yamanaka, R.; Tabata, S.; Shindo, Y.; Hotta, K.; Suzuki, K.; Soga, T.; Oka, K. Mitokondriyal Mg2+ homeostazisi hücresel enerji metabolizmasına ve strese karşı hassasiyete karar verir. Bilim. Temsilci 2016, 6, 30027. [CrossRef] [PubMed]

3. Dudev, T.; Grauffel, C.; Lim, C. Yerli ve Yabancı Metal Katyonları ATP'yi Nasıl Bağlar: Terapötik Bir Ajan Olarak Lityumun Etkileri. Bilim. Temsilci 2017, 7, 42377. [CrossRef] [PubMed]

4. Kolisek, M.; Zsurka, G.; Samaj, J.; Weghuber, J.; Schweyen, RJ; Schweigel, M. Mrs2p, mitokondrideki ana elektroforetik Mg2+ akış sisteminin önemli bir bileşenidir. EMBO J. 2003, 22, 1235–1244. [CrossRef] [PubMed]

5. Schindl, R.; Weghuber, J.; Romanin, C.; Schweyen, RJ Mrs2p mitokondride yüksek iletkenliğe sahip Mg2+ seçici bir kanal oluşturur. Biyofiz. J. 2007, 93, 3872–3883. [CrossRef] [PubMed]

6. Kolisek, M.; Sponder, G.; Pilchova, İ.; Cibulka, M.; Tatarkova, Z.; Werner, T.; Racay, P. Magnesium Extravaganza: TRPM6/7 Dışındaki Hücresel Mg2+ Taşıyıcılarına İlişkin Güncel Araştırmaların Kritik Bir Özeti. Rev. Physiol. Biyokimya. Farmakol. 2019, 176, 65–105. [Çapraz Referans]

7. Kubota, T.; Shindo, Y.; Tokuno, K.; Komatsu, H.; Ogawa, H.; Kudo, S.; Kitamura, Y.; Suzuki, K.; Oka, K. Mitokondri hücre içi magnezyum depolarıdır: PC12 hücrelerinde eşzamanlı floresan görüntüleme ile incelenmesi. Biyokim. Biyofiz. Acta 2005, 1744, 19–28. [Çapraz Referans]

8. Sponder, G.; Abdulhanan, N.; Fröhlich, N.; Mastrototaro, L.; Aschenbach, JR; Röntgen, M.; Pilchova, İ.; Cibulka, M.; Racay, P.; Kolisek, M. Na+/Mg2+ değiştirici SLC41A1'in aşırı ifadesi, hayatta kalma yanlısı sinyalleri zayıflatır. Oncotarget 2017, 9, 5084–5104. [CrossRef] [PubMed]

9. Yamaguchi, H.; Wang, HG Protein kinaz PKB/Akt, Bax konformasyonel değişimini inhibe ederek hücrenin hayatta kalmasını ve apoptozu düzenler. Onkogen 2001, 20, 7779–7786. [Çapraz Referans]

10. Vauzour, D.; Vafeiadou, K.; Rice-Evans, C.; Williams, RJ; Spencer, JP Hayatta kalma yanlısı Akt ve ERK1/2 sinyal yollarının aktivasyonu, flavanonların kortikal nöronlardaki anti-apoptotik etkilerinin temelini oluşturur. J. Neurochem. 2007, 103, 1355–1367. [Çapraz Referans]

11. Muddapu, VR; Dharshini, SAP; Chakravarthy, VS; Gromiha, MM Nörodejeneratif Hastalıklar—Metabolik Eksiklik Temel Neden mi? Ön. Nörobilim. 2020, 14, 213. [CrossRef] [PubMed]

12. Pathak, D.; Berthet, A.; Nakamura, K. Enerji hatası: Nörodejenerasyona katkıda bulunuyor mu? Ann. Nörol. 2013, 74, 506–516. [CrossRef] [PubMed]

13. Dharshini, SAP; Taguchi, YH; Gromiha, MM Transkriptom çalışması kullanılarak Alzheimer hastalığındaki enerji krizinin araştırılması. Bilim. Temsilci 2019, 9, 18509. [CrossRef] [PubMed]

14. Twig, G.; Shirihai, OS Mitokondriyal dinamikler ve mitofaji arasındaki etkileşim. Antioksid. Redoks Sinyali. 2011, 14, 1939–1951. [CrossRef] [PubMed]

15. Zhao, W.; Zhang, W.; Ma, H.; Yang, M. NIPA2, tip 2 diyabet osteoporozunda mitofajiyi modüle ederek osteoblast fonksiyonunu düzenler. Bilim. Temsilci 2020, 10, 3078. [CrossRef]
16. Nadler, MJ; Hermosura, MC; Inabe, K.; Perraud, AL; Zhu, Q.; Stokes, AJ; Kurosaki, T.; Kinet, JP; Penner, R.; Scharenberg, AM; ve ark. LTRPC7 bir Mg'dir. Hücre canlılığı için ATP tarafından düzenlenen iki değerlikli katyon kanalı gereklidir. Doğa 2001, 411, 590–595. [Çapraz Referans]

17. Kolisek, M.; Nestler, A.; Vormann, J.; Schweigel-Röntgen, M. İnsan geni SLC41A1, Na+/Mg2+ değiştiriciyi kodlar. Am. J. Physiol. Hücre Fizyolü. 2012, 302, C318–C326. [Çapraz Referans]

For more information:1950477648nn@gmail.com