Cistanche Deserticola'dan Feniletanoidlerin Antioksidatif Etkileri

İletişim: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-posta:audrey.hu@wecistanche.com

Quanbo Xiong/ Shigetoshi Kadota," Tadato Tani,6 ve Tsuneo Namba"

Cistanche Deserticola'nın sapından elde edilen aseton-H2O (9:1) özü, güçlü bir serbest radikal süpürme aktivitesi gösterdi. Bu özütten dokuz ana feniletanoid bileşiği izole edildi. Bunlar, NMR tarafından asteozid, izoakteozid, l^asetillakteozid, tübülozit B, ekinakozit, tübülozit A, syringalid A 3z-a-ramno-piranosid, cistanosid A ve cistanosid F olarak tanımlandı. 1,1 -difenil-2-pikrilhidrazy 1 (DPPH) radikali üzerindeki -tokoferol ve ksantin/ksantin oksidaz (XOD) süperoksit anyon radikali (Oj) üretti. Dokuz bileşik arasında, kafeoil kısmı glikozun d'-pozisyonunda olan izoakteozid ve tubulosit B, XOD üzerinde inhibitör bir etki gösterdi. Bu feniletanoidlerin enzimatik ve enzimatik olmayan yöntemlerle indüklenen sıçan karaciğer mikrozomlarındaki lipid peroksidasyonu üzerindeki etkilerini ayrıca inceledik. Beklendiği gibi, bunların her biri, sıçan karaciğer mikrozomlarında hem askorbik asit/Fe2 artı hem de ADP/NADPH/Fe3 artı indüklenen lipid peroksidasyonu üzerinde, a-tokoferol veya kafeik asitten daha güçlü olan önemli inhibisyon sergilemiştir. Antioksidatif etkinin, moleküldeki fenolik hidroksil gruplarının sayısındaki bir artışla güçlendirildiği bulundu.

Anahtar Kelimeler: Cistanche Deserticola; feniletanoidler;antioksidan; DPPH (1 ,1 -difenil-2-pikrilhidrazil) radikali; süperoksit anyon radikali; lipid peroksidasyonu

Cistanche Deserticola'nın sapı

Cistanche spp'nin sapı. (bitki özü, Orobanchaceae familyası), iktidarsızlık, bel ve dizlerde soğuk hissi, kadın kısırlığı ve yaşlılıkta bağırsak kuruluğuna bağlı kabızlık ile karakterize böbrek yetmezliği için kullanılan geleneksel Çin tıbbında bir toniktir.Bu bitkilerden fenil-etmoidler (bazen fenilpropanoidler olarak adlandırılır),2) ir idoidler3* ve polisakaritler4 dahil olmak üzere bir dizi bileşen izole edilmiştir. Sato ve arkadaşları5}, bu ham ilaçtan bazı feniletanoidlerin, stres yüklü fareleri asarken hem cinsel hem de öğrenme davranışlarının azalmasına karşı koruyucu bir etki gösterdiğini bildirdi. Feniletanoidler bu bitkilerin ana bileşenleridir ve bu ilacın çeşitli etkilerine katkıda bulundukları kabul edilir.6)

Feniletanoidler, bitkiler aleminde geniş bir dağılıma sahiptir ve bazılarının anti-anoksi,7) anti-neoplazm,8) enzim inhibisyonu,9* anti-inflamasyon,10) antinefrit,1 n anti-mikroorganizma aktivitesine sahip olduğu bulunmuştur. immünomodülasyon.12) Pedicularis kaynaklı bazı feniletanoidlerin antioksidatif aktivitesi üzerine çalışmalar da rapor edilmiştir,13 -15), ancak Cistanche türlerinden feniletanoidlerin antioksidatif aktivitesi ile ilgili herhangi bir rapor bulunmamıştır.

Serbest radikallerin, kanser, kardiyovasküler bozukluk, artrit, iltihaplanma gibi çeşitli patojenlerin yanı sıra yaşlanmayla ilişkili dejeneratif süreçlerde kritik bir rol oynadığı iyi bilinmektedir.16™18) Doğal kaynaklardan yaşlanma karşıtı ajanları taramamızda , Cistanche Deserticola sapının CHC13 (C), EtOAc (E), aseton (A), aseton-H2O (9:1) (AH) ve su (H) ekstraktının her birinin güçlü bir DPPH gösterdiğini bulduk. radikal süpürücü aktivite (Şekil 1), bunlardan en güçlüsü aseton-H?.(9:1) özütü (AH) tarafından sergilendi. Aseton-H2O (9:1) özütü, muhtemelen serbest radikal süpürücü etkilerin aktif bileşenleri olan yüksek oranda feniletanoid içeriyordu. Bu ekstrakttan başlıca feniletanoidleri izole ettik ve DPPH radikali ve ksantin/XOD tarafından üretilen süperoksit anyon radikalini süpürerek antioksidatif etkileri ve askorbik asit/Fe2 plus ve ADP/NADPH/Fe3 plus indüklenmiş lipid peroksidasyonunu sıçan karaciğerinde inhibisyonlarını inceledik. mikrozomlar.

cistanche çöl çiçeği

MALZEMELER VE YÖNTEMLER

Reaktifler Poliamid C-200 (75~150/zm) ve silika jel (Wakogel C-200, 75—150^m) kolon kromatografisi için toz, DPPH (1,1 -difenil{{ 8}}pikrilhidrazil), ksantin, XOD (ksantin oksidaz), NBT (nitromavi tetrazolium), ADP, g-NADPH, kafeik asit ve a-tokoferol, Wako Pure Chemicals, Osaka, Japonya'dan satın alındı. Malonaldehit bis(dimetilasetal), Tokyo Kasei, Tokyo, Japonya'dandı. BSA (sığır serum albümini) ve allopurinol, sigma, St. Louis, ABD Diğer kimyasallar analitik derecedeydi.

Aletler UV absorbansı birShimadzu UV-2200 kayıt spektrofotometresi, NMR spektrumları bir JEOL GX-400 veya bir JEOL JNM-LA 400WB FT NMR sistemi üzerinde gerçekleştirilmiştir.

Bitki Materyalleri Ticari bir ham ilaç (Nei Monggol'da üretilmiştir, Bozhou Ham İlaç Pazarı, Anhui eyaleti, Çin'den satın alınmıştır, 1995; Fiş numunesi, TMPW No. 15479 Materia Medica Müzesi, Etnomedikal Araştırma Merkezi, Araştırma Wakan-Yaku Enstitüsü, Toyama Tıp ve Eczacılık Üniversitesi), morfolojik ve anatomik karakterlerini Çin, Şanghay Tıp Üniversitesi, Farmakognozi Departmanından Profesör Dawen Shi tarafından sağlanan özgün bir örnekle karşılaştırarak Cistanche Deserticola YC Ma'nın gövdeleri olarak tanımlandı.

Ekstraksiyon ve İzolasyon Toz haline getirilmiş ham ilaç (5.87 kg) art arda CHC13 (12, 9 1x2) ve EtOAc (9 1 x 3) ile oda sıcaklığında özümlendi ve asetonla (9 1 geri akıtıldı) x 3), aseton-玦0 (9:1,91x3) ve H2O (7.5 1x4) ile CHC13 (C) (28.7g), EtOAc (E) ( 13.4g), aseton (A) (95g), aseton-H2O (9:1) (AH) (175g) ve H2O (H) (2.51kg), sırasıyla. Aseton-H2O (9:1) ekstraktının 100 g'lık bir kısmı bir poliamid C-200 (4{{5{57}}}}0 g) kolonuna tabi tutuldu ve H2O ({{41) ile ayrıştırıldı. }}) ve ardından MeOH (5 1). MeOH eluenti (20 g), bir silika jel (600 g) kolonuna yüklendi ve 10 fraksiyon verecek şekilde CHCl3-MeOH-H20 (8: 3:0.3) (5 1) ile yıkandı. Her fraksiyon Sephadex LH-20 kolonuna tabi tutuldu ve çeşitli oranlarda MeOH-H2O (yüzde 0-50) ile ayrıştırıldı; dokuz ana feniletanoid 1 (607 mg), 2 (286 mg), 3 (43 mg), 4 (187 mg), 5 (1.1 g), 6 (100 mg), 7 (208 mg), 8 (168 mg) , 9 (75 mg) elde edildi.

Hayvanlar Erkek Std: Wistar sıçanları (8 haftalık, 230-250 g) kullanıldı. Hayvanlar, Shizuoka Laboratuvar Hayvanları Merkezi'nden satın alındı ​​ve bir laboratuvar pelet yemi (Clea Japonya) ile beslendi ve ad libitum su verildi.

Sıçan Karaciğeri Mikrozomal Süspansiyonunun Hazırlanması Sıçan karaciğeri mikrozomal fraksiyonu, Kiso ve ark.19'un yöntemiyle, ancak fenobarbital ön işleme tabi tutulmadan hazırlandı. Hayvanlar 24 saat aç bırakıldıktan sonra, karaciğerler buz gibi soğuk bir 0yerinde yüzde 9,9 NaCl çözeltisi ile perfüze edildi, daha sonra ince parçalar halinde kesildi ve soğuk yüzde 1,15 KC1 çözeltisi (1.{{9}) içinde homojenleştirildi. } ml/g ıslak karaciğer ağırlığı). Homojenat yüzde 1.15 KC1 çözeltisi ile dört kez seyreltildi ve 8000 g'de 20 dakika 4 derecede santrifüjlendi. Süpernatan fraksiyonu daha sonra toplandı ve 60 dakika boyunca 105000 g'de ultrasantrifüjlendi. Elde edilen pelet, aynı hacimde yüzde 1.15 KC1 çözeltisi içinde yeniden süspanse edildi. Protein içeriği, standart olarak albümin kullanılarak Lowry ve yöntemiyle belirlendi.

Numune Hazırlama Test edilen numuneler su veya etanol içinde çözülmüş ve çeşitli konsantrasyonlarda su ile seyreltilmiştir. Etanolün nihai konsantrasyonları, DPPH radikal süpürme tahlili hariç tüm tahlil sistemlerinde yüzde 1'in altındaydı. Yüzde 1'in altındaki bir nihai konsantrasyonda etanol, bu tahlil sistemleri üzerinde hiçbir etki göstermedi.

DPPH Radikal Süpürme Etkisi Temizleme etkisi, Hatano ve diğerleri tarafından tarif edildiği gibi DPPH radikalinin söndürülmesinin yoğunluğuna karşılık geldi.21) EtOH içindeki 60 µm DPPH'nin beş yüz /A'sı 500 /zl numune çözeltisine ilave edildi ve reaksiyona girmesine izin verildi. Oda sıcaklığında 30 dakika, ardından optik yoğunluk 520 nm'de ölçüldü. Kör için DPPH çözeltisi yerine EtOH, kontrol için numune çözeltisi yerine H2O kullanıldı. IC50 değerleri, apsisin test edilen bileşiğin konsantrasyonunu ve ordinatın dört ayrı testten DPPH radikalinin ortalama yüzde azalmasını temsil ettiği regresyon çizgilerinden hesaplandı.

Süperoksit Anyon Radikal Üretimi Üzerindeki Etkiler Ksantin/XOD sisteminde süperoksit anyonlarının üretimi, Imanari ve ark.22'nin yönteminin yarım boyutu kullanılarak belirlendi) 900/zl'den oluşan bir karışım 0.05m Na2C03 (pH 10.2), her biri 3mM ksantin, 3mM EDTA, 1.5mg/ml BSA, 0.75 mM NBT'nin 50/il'i ve test edilen numuneyi başlatmak için 50 ul 0.1 mg/ml XOD ile eklenmiştir. reaksiyon. 30 dakika inkübasyondan sonra, reaksiyon 50/il 6 mM CuCl2 ile durduruldu ve absorbans 560 nm'de ölçüldü. Kontrol solüsyonu da aynı şekilde hazırlanmış, ancak numune solüsyonu yerine 50/il H2O kullanılmıştır. Kör çözeltide, XOD çözeltisi yerine 50/il H2O kullanıldı. IC50 değerleri, apsisin test edilen bileşiğin log konsantrasyonunu temsil ettiği ve bağımlı testlerde dördün NBT azalmasının ortalama yüzde inhibisyonunun ordinatını temsil ettiği regresyon çizgilerinden hesaplandı.

XOD Aktivitesi Üzerindeki İnhibitör Etkileri XOD aktivitesi üzerindeki inhibitör etkiler, bazı modifikasyonlarla Hatano ve arkadaşlarının* yöntemiyle tahmin edildi. 600/11 tampon (0.1 m fosfat solüsyonu, pH 7.5), 50 µl XOD solüsyonu (tampon içinde 0.068 U/ml) ve 50 µl numune solüsyonu 25 derecede 10 dakika ön inkübe edildi. Daha sonra karışıma 300 ul ksantin solüsyonu (tampon içinde 0.1 mM) ilave edildi ve elde edilen solüsyon 25 derecede 30 dakika inkübe edildi. Enzim reaksiyonu, 1 n HC1 (100/zl) eklenerek sonlandırıldı ve reaksiyon karışımının absorbansı 295 nm'de ölçüldü. Karışımda oluşan ürik asit konsantrasyonu, XOD solüsyonunun 50/zl tampon ile ikame edilmesi dışında, yukarıda tarif edildiği gibi hazırlanan boş solüsyonun absorbansı çıkarıldıktan sonra absorbanstan hesaplandı. XOD üzerindeki inhibitör etkiler, numune solüsyonu yerine suyun kullanıldığı kontrolde ürik asit oluşumunun inhibisyon yüzdesi (yüzde) ile ifade edildi. İyi bilinen XOD inhibitörü allopurinol, pozitif kontrol olarak kullanıldı.

Sıçan Karaciğer Mikrozomlarında Lipid Peroksidasyonu Üzerindeki İnhibitör Etkiler Askorbik/Fe2 plus tarafından enzimatik olmayan şekilde indüklenen ve ADP/NADPH/Fe3 plus tarafından enzimatik olarak indüklenen sıçan karaciğer mikrozomlarında lipid peroksidasyonu Kiso ve ark.19'un yöntemi ile bazı modifikasyonlarla ölçülmüştür. .

a) Sıçan Karaciğer Mikrozomlarında Askorbik Asit/Fe2 artı İndüklenmiş Lipid Peroksidasyonu: Reaksiyon karışımı 390/11 / 100mM KC1/45 mM Tris-HCl (pH 8.0), 50pl'den oluşmuştur. yüzde 1.15 KC1 (20mg protein/ml) içinde mikrozomal fraksiyon ve 50 u bir numune solüsyonu. 10/11 10 mM askorbik asit/0.5mM FeS04 eklendikten ve 37 derecede 20 dakika kuluçkalandıktan sonra, reaksiyonu durdurmak için reaksiyon karışımı buz içinde soğutuldu. Lipid peroksidasyonu, tiyobarbitürik asit yöntemiyle24 ölçüldü ve MDA (malondialdehit) üretimi olarak ifade edildi. O

b) Sıçan Karaciğer Mikrozomlarında ADP/NADPH/Fe3 artı İndüklenmiş Lipid Peroksidasyonu: Reaksiyon karışımı, yüzde 1.15 KC1 içinde 290贝 100mM KC1/45him Tris-HCl (pH 8.0), 50/il mikrozomal süspansiyon içeriyordu. (20mg protein/ml) ve 50 µ numune su içinde. Elli adet taze hazırlanmış 20 mM ADP, 50//1 1 mM NADPH ve 10 adet 2mM FeCl3 eklenmiş ve ardından 37 derecede 30 dakika inkübe edilmiştir. Lipid peroksidasyonu ölçüldü ve IC50, yukarıdaki yöntemle hesaplandı.

cistanche faydaları: karaciğeri korur

SONUÇLAR

Yapının Belirlenmesi ^H-NMR ve 13C-NMR verilerinin literatürle doğrudan karşılaştırılmasıyla2*, dokuz feniletanoid, 2,-asetillaktozid (1), cistanosid A (2), tübülozit A (3), ekinakozit ( 4), ateozit (5), siringalid A 3'-a-rhamnopiranosid (6), tübülozit B (7), izoakteozit (8) ve cistanosid F (9) (Şekil 2). Bununla birlikte, feniletanoidlerin temsili bir bileşiği olan acteoside için, aglikon parçasındaki C-3 ve C-4'nin 13C-NMR sinyallerinin atamaları, C-3, C-4 , önceki raporlarda25 kafeik kısımda C-5 ve C-6 kafa karıştırıcıydı. HMBC ve HMQC gibi 2D-NMR yöntemiyle, aglikon parçası Cl: 131.49, C-2: 117.14, C-3: 146.07, C{ olarak ateositin 13C-NMR verilerini açık bir şekilde atadık. {41}}: 144.62, C-5: 116.34, C-6: 121.29, Ca: 72.33, C# 36.54; kafeoil parçası Cl: 127.63, C-2: 115.26, C-3: 146.79, C-4: 149.78, C-5: 116.55, C-6: 123.24 , Ca: 168.33, Cg: 114.68, Cy: 148.04; glikoz parçası C-1': 104.16, C-2': 75.97, C-3': 81.66, C4: 70.39, C-5': 76.16, C-6' : 62.35; ve ramnoz parçası: Cl: 102.99, C-2: 72.22, C-3: 72.05, C-4: 73.79, C-5: 70.58, C-6 : 18.46.

Bu dokuz feniletanoid için, sıçan karaciğer mikrozomlarında DPPH radikalleri ve ksantin/XOD tarafından üretilen süperoksit anyon radikal süpürme aktiviteleri, askorbik asit/Fe2 plus ve ADP/NADPH/Fe3 plus indüklenmiş lipid peroksidasyonu ile yapı-aktivite ilişkileri incelenmiştir. Pozitif kontrol maddeleri olarak iyi bilinen serbest radikal süpürücüler ve antioksidanlar olan kafeik asit ve a-tokoferol kullanılmıştır.

DPPH Radical Scavenging Activity All of the nine phenylethanoids showed stronger DPPH radical scav-enging activity than either a-tocopherol or caffeic acid, except that cistanoside A (2), syringalide A 3'-a-rhamno- pyranoside (6) and cistanoside F (9) showed weaker activity than caffeic acid (Fig. 3). The activity order was tubuloside B ⑺(IC50 = 2.99 ^m) > echinacoside ⑷ (IC50 = 3.29 fiM)M 2z-acetylacteoside ⑴(IC50 = 3.30 /im) M tubuloside A (3) (IC50 = 3.34/im) acteoside (5) (IC50 = 3.36 〃m)> isoacteoside (8) (IC50 = 3.49 ^m) >caffeic acid (IC50 = 4.79 /2M)> cistanoside A (2) (IC5O = 4.87 /im)>syringalide A S'-a-rhamnopyranoside (6) (IC5O=5.52 /zm) > cistanoside F (9) (IC50=6.29 /im) > a-tocopherol (IC{{10) }}.2//m). Tubulozit B ⑺,ekinakozit (4), 2/-asetilasetosid (1), tübülozit A (3), asteozit (5) ve izoakteozit (8) (IC5O=2.99一3.49 /im), her biri molekülde dört fenolik hidroksil grubuna sahiptir, benzer şekilde aglikon parçasının 3-OH'si metillenmiş olan cistanosid A (2)'den daha güçlü aktivite göstermiştir. Aglikon kısmında sadece bir OH grubuna sahip olan Syringalide A 3z-a-rhamnopiranoside (6) nispeten zayıf aktivite göstermiştir. Kafeoil kısmında yer alan sadece iki hidroksil grubuna sahip olan ancak feniletanol aglikon içermeyen Cistanoside F (9), en zayıf aktiviteyi sergiledi.

Effects on Superoxide Anion Radical Generation All the tested compounds exhibited a stronger inhibitory activity than a-tocopherol but weaker than caffeic acid on the generation of superoxide anion radical (Fig. 4). The activity order was caffeic acid (IC5()= 1.82jUM)>2'- acetylacteoside (1) (IC50 = 2.25 /im) tubuloside B ⑺ (IC50 = 2.34jUM) >echinacoside (4) (IC50 = 2.74juM)^ isoacteoside (8) (IC50 = 2.88 /zm) acteoside (5) (IC50 = 2.89 f/M) >cistanoside F (9) (IC5o = 3.13 rm) tubuloside A (3) (IC50 = 3.17 jUM)syringalide A 3'-a-rhamnopyrano- side (6) (IC50 = 3.20^m)>cistanosid A (2) (IC5O=3.69 jUm) > a-tokoferol (IC50 > 10 µm).

XOD Aktivitesi Üzerindeki İnhibitör Etkileri Sadece kafeoil kısmı glikozun 6z pozisyonunda olan izoakteozit (8) ve tubulosit B (7), XOD ve ^- noktasında kafeoil kısmı olan diğer feniletanoidlerin aktivitesi üzerinde inhibe edici etkilere sahipti. glikozun pozisyonu, test edilen konsantrasyonlarda (25~200 m) hiçbir etki göstermedi (Tablo 1). bu özütten dokuz ana feniletanoid bileşiği izole etti ve yapılarını NMR ile belirledi. sistem tübülozit B (7)M2'-asetillakteozit (1) izo-akteozit (8) ekinakozit (4) tübülozit A (3) M akteo tarafı (5) > siringalid A 3'-a-rhamnopiranosid (6) > sistanozit A (2) > sistanosit F (9); ADP/NADPH/Fe3 plus sisteminde tubulosit B (7)2,-acetylacteoside (^^iso acteoside (8) acteoside (5) > tubuloside A (3) > echinaco tarafı (4) > syringalide A 3z-a-rhamnopyranoside olarak) (6) > cistanosid A (2) > cistanosid F (9) Bu iki sıra, yukarıdaki serbest radikal süpürme testlerindeki, özellikle DPPH radikal süpürme testindekine benzerdi.Yine de, moleküldeki fenolik hidroksil gruplarının sayısı sıçan karaciğer mikrozomlarında lipid peroksidasyonunun inhibisyonunda en önemli rolü oynamıştır.

cistanche'ın etkileri

TARTIŞMA

Cistanche Deserticola'nın sapının çeşitli çözücü ekstraktlarının serbest radikal temizleme aktivitelerini DPPH radikali üzerinde test ettik ve aseton-H2O (9:1) ekstraktının en güçlü aktiviteyi sergilediğini bulduk. Serbest radikal süpürme aktivitesinin aktif bileşenlerini bulmak için, bu özütten dokuz ana feniletanoid bileşiği izole ettik ve yapılarını NMR ile belirledik.

Bu feniletanoidlerin antioksidatif etkileri, serbest radikal süpürücü aktiviteleri ve anti-lipid peroksidasyon aktiviteleri ile değerlendirildi. Pozitif kontrol maddesi olarak yaygın olarak bilinen a-tokoferol kullanılmıştır. olaraka-tokoferolün lipofilisitesi, DPPH radikal süpürme tahlili dışında mevcut tahlil sistemlerinde aktivitelerini etkileyebilir, biz kafeik asidi başka bir pozitif kontrol maddesi olarak aldık.

İlk olarak serbest radikal temizleme faaliyetleri üzerinde testler yaptık. Test edilen 9 feniletanoidin tümü şüphesiz a-tokoferolden daha güçlü DPPH radikali ve süperoksit anyon radikal süpürme aktiviteleri sergiledi, ancak bazıları kafeik asitten daha güçlü ve diğerleri daha zayıftı. Fenolik hidroksil gruplarının sayısındaki artışla radikal temizleme aktivitesi artmıştır. DPPH radikali ve süperoksit anyon süpürme aktivitelerinin tam olmayan paralelliğinin, radikal türler arasındaki farklı karakterlere ve bu iki reaksiyon sisteminde yer alan diğer bazı faktörlere bağlı olduğuna inanılıyordu,21,26) DPPH radikali, reaksiyona giren kimyasal olarak indüklenen bir radikaldir. radikal süpürücülerle basit bir kimyasal yolla, süperoksit anyon radikali ise bir enzim reaksiyonu olan ksantin/XOD tarafından üretilir.

Feniletanoidler, ksantin/XOD tarafından üretilen süperoksit anyon radikalini inhibe ediyorsa, inhibisyon onların süperoksit anyon radikal süpürme aktivitelerinin veya (ve) XOD,23 enzimini inhibisyonlarının bir sonucu olarak kabul edilebilir, bu nedenle onların bir testini gerçekleştirdik. ksantin oksidazın önleyici etkileri. Seçici olarak sadece kafeoil kısmı glikozun 6/-pozisyonunda olan izoakteozit (8) ve tubulosit B (7)'nin inhibisyon göstermesi ilginçtir. Aktivite allopurinolden daha zayıf olmasına rağmen, 3.4xlO^3U/ml (10jug/ml) XOD üzerinde 25-200jtiM konsantrasyonunda bir etki sergilediler; kafeoil kısmı glikozun 《-pozisyonunda olan diğer bileşikler, hiçbir inhibitör etki göstermedi. Bu sonuç, feniletanoidlerin XOD enzimi üzerindeki inhibitör etkisinin ilk raporunu sağladı. Chan ve diğerleri21), kafeik asidin ve bazı analoglarının XOD aktivitesi üzerinde inhibitör etkileri olduğunu bildirdi, ancak mevcut reaksiyon koşulları altında kafeik asidin böyle bir etkisi bulamadık. Bu testte, XOD konsantrasyonu, süperoksit anyon radikal oluşumu (4.3 /zg/ml) üzerindeki etki testindekine benzerdi, ancak bileşiklerin konsantrasyonu, ikincisinden çok daha yüksekti. Bu nedenle, bu feniletanoidler tarafından Oj oluşumunun inhibisyonu, onların radikal süpürücü aktivitelerinden kaynaklanır, ancak XOD enziminin inhibe edici aktivitelerinden dolayı değildir.

Serbest radikal zincir reaksiyonunun nihayet lipid peroksidasyonuna yol açtığı iyi bilinmektedir.28,29) Bu nedenle, bu feniletanoid bileşikleri, enzimatik sistem ADP/NADPH/Fe3 plus tarafından indüklenen ve sıçan karaciğer mikrozomlarındaki lipid peroksidasyonu üzerindeki etkileri açısından inceledik. enzimatik olmayan sistem askorbik asit/Fe2 plus . Tüm bu bileşikler, her iki sistemde de kafeik asit ve a-tokoferolden daha güçlü anti-lipid peroksidasyon etkileri gösterdi. Her iki sistemin de lipid peroksil radikalleri ile ilgili Fe2 plus veya Fe3 plus demir iyonları tarafından katalize edildiği genel olarak kabul edilir,30,31) ve hidroksil radikali OH'nin lipid peroksidasyonunda en önemli rolü oynadığı,32 _34) OH'nin başlaması bazı raporlarda sorgulansa da.35祁6) Öte yandan, radikal zincirde O2'ye e_ saldırısının birincil ürünü olan süperoksit anyon radikali OJ oldukça zayıftır. reaktif radikaldir ve lipid peroksidasyonunun kendisi ile sonuçlanmaz. Bu feniletanoidler, süperoksit anyon radikali üzerinde kafeik asitten daha zayıf temizleme aktivitesi gösterse de, kafeik asitten çok daha güçlü anti-lipid peroksidasyon etkisi gösterdiler. Bu nedenle, diğer aromatik, zincir kırıcı polifenoller gibi, onların da, Fe2+ veya Fe3+ iyonlarını şelatlayarak ve ayrıca radikal zincir reaksiyonunu parçalamak için süperoksit radikali Oj'yi temizleyerek sıçan karaciğer mikrozomlarında yukarıdaki lipid peroksidasyonunu engelleyebileceklerine inanıyoruz. .37,38) Ayrıca, kafeik asitten daha yüksek potenste lipid peroksidasyonunu doğrudan kesmek için hidroksil radikali ve lipid peroksil radikalleri gibi daha toksik radikal türlerini de temizleyebilirler.38,39)

Li ve ark. biyolojik olmayan bir sistem olan misellerdeki linoleik asidin otoksidasyonunu inhibe etmeleri için Pedicularis'ten gelen asteosit (verbascoside) (5), izoacteoside (izo-verbascoside) (1) ve echinacoside (4) dahil olmak üzere bazı feniletanoid glikozitleri inceledi,13) in vitro oksidatif hemolize karşı korumaları için,14''1 ve ayrıca NBT/PMS/NADH tarafından üretilen süperoksit üzerindeki süpürücü etkileri ve fare karaciğer mikrozomlarında askorbik asit/Fe2 plus tarafından indüklenen lipid peroksidasyonunun inhibisyonu için.15) Benzer bir aktivite -yapı ilişkisi Li ve ark.'nın raporlarında gözlenmiştir. ve sonuçlarımız. Yani, feniletanoidlerin lipid peroksidasyonunu inhibe etme aktiviteleri esas olarak fenolik hidroksil gruplarının sayısına ve sterik pozisyonuna bağlıdır.15) Stereo kimyaları temelinde, kafeoil parçasının fenolik hidroksil grupları akteosit (5), tubulosit A ​​( 3) ve glükozun 4z-pozisyonunda kafeoile sahip olan ekinakozit (4), ramnozilin hidroksil gruplarıyla izoakteozit (8) ve tübülozit B (7) üzerindekilerden daha kolay bir hidrojen bağı oluşturur. Glikozun 6'-pozisyonunda kafeoil var. Böylece, ikincisi öncekinden daha fazla serbest fenolik hidroksil grubu ayırdı ve bu nedenle daha güçlü anti-lipid peroksidasyon aktivitesi gösterdi. Ayrıca, bu feniletanoidlerin 2z-asetilasyonunun az da olsa antioksidan etkilerini arttırdığını fark ettik. Örneğin, ateozid (5) ve izoakteozit (8), sırasıyla 2/-asetillakteozid (1) ve tübülozit B'ye (7) 2'-asetillendiğinde, dört tahlil sisteminin tümünde daha güçlü aktiviteler gösterdi. Stereo kimya ve 2'-asetilasyonun üstünlüğü nedeniyle, tubulosid B (7) test edilen numuneler arasında en güçlü antioksidatif aktiviteyi sergiledi. Belki de 6' konumunda üçüncü bir şeker parçasının ikame edilmesinden dolayı, bu korelasyon tübülozit A (3) veya ekinakozit (4) durumunda iyi uymadı; bununla birlikte, ADP/NADPH/Fe3 plus sisteminde, tubulosit A ​​⑶, ekinakozitten hala daha güçlü anti-lipid peroksidasyon aktivitesi sergiledi (4).

Ek olarak, DPPH radikal süpürme aktivitesinin sırası, anti-lipid peroksidasyonunki ile süperoksit anyon radikal süpürme aktivitesinden daha iyi paralellik göstermiştir. Bu, DPPH radikal süpürme testinin antioksidan testi için uygun ve güvenilir bir yöntem olduğunu bir kez daha kanıtladı,26) DPPH radikali kimyasal olarak indüklenen bir radikal iken, süperoksit anyon radikali biyolojik olarak endojen bir radikal olabilir.

Sonuç olarak, bu çalışmada dokuz feniletanoidin tümü önemli serbest radikal süpürücü aktiviteler ve anti-lipid peroksidasyon etkileri sergiledi. Antioksidatif etki, moleküldeki fenolik hidroksil gruplarının sayısındaki artışla güçlendirildi. Tahmin edilebileceği gibi, burada kanıtlanan bu fenileta noidlerin antioksidatif etkileri, Cistanchis Herba ilacının hareketlerinde önemli bir rol oynayabilir ve bazı fenil etanoidlerin neoplazma,8* iltihaplanma10) ve nefrite karşı etkinliklerinin mekanizmalarını kısmen açıklayabilir, 1 n serbest radikallerin ciddi şekilde dahil olduğu.

Cistanche Ekinakozid: Anti-oksidasyon

REFERANSLAR

1) Namba T., "The Encyclopedia of Wakan-Yaku (Geleneksel Çin-Japon İlaçları) with Color Pictures,5, Vol. II, Hoikusha, Tokyo, 1994, s. 16-17.

2) a) Kobayashi H,, Karasawa H., Miyase T., Fukushima S., Chem. Pham. Bull, 32, 3009-3014 (1984); b) Aynı, aynı eser, 32, 3880-3885 (1984); c) Aynı, aynı eser, 33, 1452-1457 (1985); d) Karasawa H., Kobayashi H., Takizawa N., Miyase T., Fukushima S., Yakugaku Zasshi, 106, 562-566 (1986); e) Aynı, aynı eser, 106, 721-724 (1986); /) Kobayashi H., Oguchi H., Takizawa N., Miyase T., Ueno A., Usmanghani K., Ahmad M., Chem. Eczacılık Bull., 35, 3309-3314 (1987); g) Yoshizawa F., Deyama T., Takizawa N., Usmanghani K., Ahmad M., age, 38, 1927-1930 (1990).

3) a) Kobayashi H, Komatsu J., Yakugaku Zasshi, 103, 508-511 (1983); b): Kobayashi H., Karasawa H., Miyase T., Fukushima S., Chem. Eczacılık Bull., 32, 1729-1734 (1984); c) Aynı, age, 33, 3645-3650 (1985).

4) Naran R., Ebringerova A., Hromadkova Z., Patoprsty V., Phytochemistry, 40, 709-715 (1995).

5) Sato T., Kozima S., Kobayashi K., Kobayashi H., Yakugaku Zasshi. 105, 1131-1144 (1985).

6) Jin XL, Zhang QR, China J. Chinese Materia Medica, 19, 695-697 (1994).

7) Yamahara J., Kitani T., Kobayashi H., Kawahara Y., Yakugaku Zasshi, 110, 932-935 (1990).

8) a) Pettit G. R・, Numata A., Takemura T., Ode RH, Narula A, S., Schmidt JM, Cragg GM, Pase CP, J. Nat. Prod., 53, 456-58 (1990); b) Saraçoğlu İ., İnoue M., Çalış İ., Ogihara Y., Biol. Pharm, Bull., 18, 1396-1400 (1995).

9) Andary C., '4Caffeic Acid Glycoside Esters and Pharmacology/ ed. Scalbert A., Polyphenolic Phenomena, INRA Editions, Paris, 1993, s. 237-245.

10) Murai M., Tamama Y., Nishibe S., Planta Med.. 61, 479― 80 (1995).

11) Hayashi K., Nagamatsu T., Ito M., Hattori T., Suzuki Y., Jpn. J. Pharmacol., 66, 47-52 (1994).

12) a) Molnar J., Gunics G., Mucsi I., Koltai M., Petri L, Shoyama Y., Matsumoto M., Nishioka L, Açta Microbiol. Hung.. 36, 425― 32 (1989); b) Sasaki H., Nishimura T., Morota T., Chin M., Mitsuhashi H" Komatsu Y., Maruyama H., Tu GR, He W., Xiong YL, Planta Med., 55, 4582462 (1989).

13) Li J., Wang PF, Zheng RL, Liu ZM, Jia ve J., Planta Med., 59, 315-317 (1993).

14) Zheng RL, Wang PF, Li J., Liu Z.M,, Jia ZJ, Chem. Fizik Lipitler. 65, 151-154 (1993).

15) Li J., Zheng RL, Liu 乙 M., Jia 乙 J., Açta Pharmacol. Sinica, 13, 427T30 (1992).

16) Berber DA, Harris SR, Amerikan Eczanesi. 34, 26-35 (1993).

17) Elstner EF, Klin Wochenschr, 69, 949-956 (1991).

18) Martin GR, Danner DB, Holbrook NJ, Ann. Rev. Med., 44, 419-29 (1993).

19) Kiso Y., Tohkino H., Hattori M., Sakamoto T., Namba T., Planta Med.. 50, 298-302 (1984).

20) Lowry OH, Rosebrough NJ, Farr AL, Randall RJ, J. Biol. Chem.. 193, 265-275 (1951).

21) Hatano T., Edamatsu R., Hiramatsu M., Mori A., Fujita Y., Yasuhara T" Okuda T., Chem. Pharm. Bull., 37, 2016一2021 (1989).

22) Imanari T., Hirota M., Miyazaki M., Igaku No Ayumi, 101, 496-497 (1977).

23) Hatano T., Yasuhara T, Yoshihara R., Agata L, Noro T., Okuda T., Chem. Eczacılık Bull., 38, 1224-1229 (1990).

24) Ohkawa H., Ohishi N., Yagi K., Anal. Biochem., 95, 351-358 (1979).

25) a) Lahloub M, F., Zaghloul AM, El-Khayat SA, Afifi MS, Sticher O., Planta Med.. 57, 481- 85 (1991); b) Nishimura H., Sasaki H., Inagaki N., Chin M. (Zhen 乙 X.), Mitsuhashi H., Phytochemistry. 30, 965-969 (1991); c) Budzianowski J., Skrzypczak L., age, 38, 997-1001 (1995),

26) Marsden SB, Nature (Londra), 181, 1199—1200 (1958).

27) Chan WS, Wen PC, Chiang HC, Anticancer Res., 15, 703, 708, (1995).

28) Janero DR, Burghardt B., Biochem, Pharmacol.. 37, 3335-3342 (1988).

29) Buettner GR, Arch. Biyokimya. Biophys., 300, 535-543 (1993).

30) Herbert V., Shaw S., Jayatilleke E., Stopler-Kasdan T., Stem Cells, 12, 289-303 (1994).

31) Aust SD, Miller DM, Samokyszyn VM,Methods Enzymol., 186, 457-463 (1990).

32) Kubota S., Ikegami Y., Kurokawa T., Sasaki R., Sugioka K., Nakano M., Biochem. Biyofiz. Res, Commun., 108, 1025-1031 (1982).

33) Yagi K., Ishida N., Komura S., Ohishi N., Kusai M., Kohno M., Biochem. Biyofiz. Araş. Commun., 183, 945-951 (1992).

34) Hockenbery DM, Oltvai ZN, Yin XM, Milliman CL, Korsmeyer SJ, Cell. 75, 241-251 (1993).

35) Bucher JR, Tien M., Aust AD, Biochem. Biyofiz. Res, Commun., Ill, 777-784 (1983).

36) Yoshida T., Otake H., Aramaki Y., Hara T., Tsuchiya S., Hamada A., Utsumi H., Biol. Eczacılık Boğa.. 19, 779-782 (1996).

37) Afanas5 EVIB, Dorozhko A.L, Brodskii AV, Kostyuk VA, Potapovitch L A., Biochem. Pharmacol., 38, 1763-1769 (1989).

38) Robak J., Gryglewski RJ, Biochem. Pharmacol.. 37, 837-841 (1988).

39) Chimi H., Morel I., Lescoat G., Pasdeloup N・,Cillard P., Cillard J., Toxicology in Vitro, 9, 695-702 (1995)