Dört Feniletanoid Glikozidin H2O Üzerinde Nöroprotektif Etkileri2-Nrf2/ARE Yolu Üzerinden PC12 Hücrelerinde İndüklenen Apoptoz
Mar 04, 2022
İletişim: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-posta:audrey.hu@wecistanche.com
Maiquan Li 1, Tao Xu 1, Fei Zhou 1, Mengmeng Wang 1, Huaxin Song 1, Xing Xiao ve Baiyi Lu 1,*
1. Giriş
Antioksidan homeostazın dengesizliği olan oksidatif stres, lipid peroksidasyonuna, protein ve DNA hasarına, hücre yaşlanmasına ve hücre ölümüne neden olur. Bu süreç muhtemelen Alzheimer hastalığı (AH), Parkinson hastalığı (PD) ve iskemi/reperfüzyon gibi çeşitli nörodejeneratif bozukluklara katkıda bulunur [1]. Ana reaktif oksijen türlerinden (ROS) biri olan hidrojen peroksitin (H2O2) lipid peroksidasyonuna ve DNA hasarına neden olduğu bilinmektedir [2]. Ayrıca H2O2, hücresel oksidatif stresin arka plan seviyesine katkıda bulunan endojen bir hidroksil serbest radikal kaynağıdır [3,4]. Bu nedenle, oksidatif stres kaynaklı apoptozu önlemeye yönelik terapötik stratejiler, nörodejeneratif hastalıkların tedavisinde potansiyele sahip olabilir.
Nükleer faktör eritroid 2-ilgili faktör 2 (Nrf2), oksidatif stres ile güçlü bir şekilde ilişkili olan bir transkripsiyon faktörüdür. Nrf2'nin aktivasyonu, hem oksijenaz-1 (HO-1), NAD(P)H kinon oksidoredüktaz 1, anti-inflamatuar [13] ve immünomodülatör [14] dahil olmak üzere çok sayıda antioksidan ve detoksifikasyon geninin transkripsiyonunu indükler. ] biyoaktiviteler. Osmanthusfragrans, çeşitli Asya yemeklerinde ortak bir bileşendir ve uzun süredir tüketilmektedir. Bir ICR fare modelinde O.fragrans çiçek özlerinin uzamsal öğrenmeyi ve hafızayı geliştirdiğini, oksidatif hasarı inhibe ettiğini ve d-galaktoz kaynaklı yaşlanmada nöroprotektif aktiviteler sergilediğini daha önce göstermiştik [15]. O.fragrans çiçek ekstraktlarının antioksidan aktiviteleri için salidrosid, acteoside ve isoacteoside başlıca PhG yanıtıdır [16].
PhG'lerin nöroprotektif etkisi üzerine yapılan çalışmalar, istenen sonuçları elde etmiştir. Salidrosid, MPP plus'ta maruz kalan PC12 hücrelerinin hücre apoptozunu önemli ölçüde azalttı [17,18]. Acteoside ayrıca PC12 hücrelerinde [19] ve Ap25-35-indüklenen SH-SY5Y hücre hasarını [20] MPP artı kaynaklı apoptozu ve oksidatif stresi de hafifletti. Ekinakozid, SH-SY5Y hücrelerinde tümör nekroz faktörü-a (TNFa) ile indüklenen apoptoz [21], farelerde MPTP ile indüklenen dopaminerjik toksisite [22], sıçan kortikal hücrelerinin glutamat ile zarar görmüş primer kültürleri [23] ve { {19}}PC12 hücrelerinde OHDA kaynaklı hasar [24]. Sonuçlar, PhG'lerin sitoprotektif bir etki sergilediğini ve nörodejeneratif hastalıkları tedavi etmek için potansiyel ajanlar olduğunu gösterdi. Çalışmalar, bu bileşikler için diğer birçok biyoaktivitenin altında PhG'lerin antioksidan özelliklerinin olduğunu göstermiştir [25]. Bununla birlikte, az sayıda çalışma, PhG'lerin oksidatif toksisiteye karşı moleküler mekanizmasını araştırmıştır.
Çalışmamızda, aşağıdaki gibi dört tipik PhG seçtik: salidrosid (feniletanoid monosakkaritler), asteosit (feniletanoid disakkaritler), izoakteozid (feniletanoid disakkaritler) ve ekinakozit (feniletanoid trisakkaritler). PhG'lerin H2O2-indüklenmiş PC12 hücre modeli üzerindeki koruyucu etkisini ve moleküler mekanizmasını araştırmak için farklılaşmış PC12 hücrelerini [26] kullanan bir nöron ölümü modeli kullandık. PhG'lerin, Kelch benzeri ECH ile ilişkili protein 1'e (Keap1) bağlanarak Nrf2/ARE yolunu aktive ettiğini gösterdik. Bu süreç, antioksidan enzimleri yukarı regüle etti ve PC12 hücrelerinin oksidatif strese karşı direncini arttırdı.
Nörodejeneratif bozuklukların tedavisi:cistanche kaynaklı PhG'ler
2. Sonuçlar
2.1. PhG'ler Bastırılmış H2O2-PC12 Hücrelerinde Sitotoksisiteye Neden Oldu
H2O2 ve PhG'lerin (0.1,1,5 ve 10 卩g/mL) PC12 hücreleri üzerindeki sitotoksik etkileri test edildi. Sonuçlar, H2O2'nin konsantrasyona bağlı ve zamana bağlı şekillerde PC12 hücre canlılığının kaybına neden olduğunu gösterdi (Şekil 1A). PC12 hücrelerinin 2 saat süreyle 200 H2O2'ye maruz bırakılması, yüzde 57,4 hücre canlılığı ile sonuçlandı. Hücrelerin 0.1,1, 5 ve 10 昭/mL'de PhG'lerle ön tedavisinin hücre canlılığı üzerinde hiçbir etkisi olmadı (Şekil 1B) ve PC12 hücrelerini H2O2-indüklenen hasarı iyileştirerek belirgin şekilde korudu. hücre canlılığı sırasıyla yüzde 9.549-22.141, yüzde 12.092-25.289, yüzde 1.470-9.289 ve yüzde 3.411-11.441 olarak ( Şekil 1C). Bununla birlikte salidrosid (0,1 ^g/mL), izoakteozid (0,1, 1, 5 ve 10 ^g/mL), ekinakozid (0,1,1 ve 5 ^g/mL) ön tedavisi HzOz ile indüklenen hücre üzerinde anlamlı bir fark göstermedi. incinme. Hücrelerin PhG'lerle ön işleme tabi tutulması, H2O2'nin neden olduğu morfolojik özelliği de iyileştirdi (Şekil 1D).
Şekil 1.PhG'ler, PC12 hücrelerinde H2O2-indüklenen sitotoksisiteyi bastırdı. Hücre canlılığı MTT tahlili ile tespit edildi. H2O2 (A) ve PhG'lerin (B) farklı konsantrasyonlarda PC12 hücreleri üzerinde sitotoksik etkisi. (C) PhG'ler H2O'yu zayıflattı2-hücre canlılığında azalmaya neden oldu. PC12 hücreleri 24 saat boyunca PhG'ler (0.1 ve 10 mg/mL) ile inkübe edildi ve ardından 200 pM H2O2 ile 2 saat daha inkübe edildi PhG'ler çıkarıldıktan bir saat sonra. (D) Morfolojik gözlem. Tedaviden sonra hücreler, bir faz kontrast mikroskobu (x100), CK: normal grup, H2O2: H2O2 ile tedavi edilen grup, HL: salidrosid düşük dozla tedavi edilen grup, HH: salidrosid yüksek dozla tedavi edilen grup, ML: acteoside düşük dozla tedavi edilen grup, MH: yüksek doz asteozid ile tedavi edilen grup, IL: izoakteozid düşük doz ile tedavi edilen grup, IH: izoakteozid yüksek doz ile tedavi edilen grup, SL: ekinakozid düşük doz ile tedavi edilen grup, SH: ekinakozid yüksek doz ile tedavi edilen grup. ** p < 0.01,="" tedavi="" edilmeyen="" gruba="" karşı;="" #="" p="">< 0.05,="" h2o2="" ile="" tedavi="" edilen="" gruba="" karşı;="" ##="" p="">< 0.01,="" h2o2="" ile="" tedavi="" edilen="" gruba="">
2.2. PhG'ler H2O'yu Bastırdı2-PC12 Hücrelerinde ROS, Lipid Peroksidasyonu (MDA) ve Artan Süperoksit Dismutaz (SOD) Aktivitelerinin İndüklenmiş Hücre İçi Birikimi
PC12 hücrelerinin 2 saat boyunca 200 pM H2O2'ye maruz kalması ROS seviyelerini, MDA içeriğini ve SOD aktivitesini azalttı (Şekil 2). PhGs ön muamelesi ROS seviyesini, salidrosit ve asteositi zayıflattı ve yüksek dozda izoakteosit ve ekinakozit ön muamelesi ROS seviyesini önemli ölçüde azalttı (p < 0.01).="" salidrosid="" ön="" işlemi,="" mda="" içeriği="" üzerinde="" hiçbir="" etki="" göstermedi,="" ancak="" asteosid="" ön="" işlemi,="" mda="" içeriğini="" önemli="" ölçüde="" azalttı="" (p="">< 0.05).="" izoacteoside="" ve="" echinacoside="" ön="" muamelesi,="" mda="" içeriğini="" daha="" büyük="" bir="" düzeye="" önemli="" ölçüde="">
Şekil 2.PhG'ler, ROS ve MDA birikimini bloke etti ve PC12 hücrelerinde SOD aktivitelerini arttırdı. PC12 hücreleri 24 saat boyunca PhG'ler (0.1 ve 10 4g/mL) ile inkübe edildi ve ardından 200 |^M H2O2 ile bir süre daha inkübe edildi PhG'ler çıkarıldıktan 2 saat sonra. (A) PhG'ler ROS ve MDA birikimini engelledi. (B) PhG'ler MDA birikimini engelledi. (C) PhG'ler SOD'nin aktivitelerini arttırdı. CK: normal grup, Model: H2O2 ile tedavi edilen grup, Salidrosid: salidrosid ile tedavi edilen grup, Acteoside: acteoside ile tedavi edilen grup, İzoacteoside: izoakteosit ile tedavi edilen grup, Ekinakozid: ekinakozid ile tedavi edilen grup. ** p < 0.01,="" tedavi="" edilmeyen="" gruba="" karşı;="" #="" p="">< 0.05,="" h2o2="" ile="" tedavi="" edilen="" gruba="" karşı,="" ##="" p="">< 0.01,="" h2o2="" ile="" tedavi="" edilen="" gruba="">
2.3.PhGs Ters H2O2-PC12 Hücrelerinde İndüklenen Apoptoz
2 saat süreyle H2O2 tedavisi (200 |1M) PC12 hücrelerinde apoptozu önemli ölçüde artırdı ve toplam apoptotik oranı yüzde 16.02'ye kadar çıkardı (Şekil 3). Bununla birlikte, 24 saat boyunca PhG'lerle (0.1 ve 10 µg/mL) ön tedavi, apoptoz oranını konsantrasyona bağlı bir şekilde azalttı (p < 0.01).="" salidroside,="" acteoside,="" isoacteoside="" ve="" echinacoside,="" hücre="" apoptoz="" yüzdesini="" yüzde="" 4.750-6.627="" ,="" yüzde="" 4.413-5.800="" ,="" yüzde="" 6.593-10.047="" oranında="" önemli="" ölçüde="" azalttı="" ve="" sırasıyla="" yüzde="" 1.530-7.510="">
Figür 3. PhG'ler, PC12 hücrelerinde H2O2-indüklenen apoptozu tersine çevirdi. PC12 hücreleri 24 saat boyunca PhG'ler (0.1 ve 10 卩g/mL) ile inkübe edildi ve ardından 200 pM H2O2 ile 2 saat daha inkübe edildi. PhG'ler kaldırıldı. Daha sonra apoptoz, bir PI/FITC floresan probu kullanılarak akış sitometrisi ile ölçüldü. CK: normal grup, Model: H2O2 ile tedavi edilen grup, Salidrosid: salidrosid ile tedavi edilen grup, Acteoside: acteoside ile tedavi edilen grup, İzoacteoside: izoakteosit ile tedavi edilen grup, Ekinakozid: ekinakozid ile tedavi edilen grup. ** p < 0.01,="" tedavi="" edilmeyen="" gruba="" karşı;="" ##="" p="">< 0.01,="" h2o2="" ile="" tedavi="" edilen="" gruba="">
2.4. PhG'ler Ters H2O2-H2O-1, NQO1, GCLC ve GCLM'nin Protein Ekspresyonunun İndüklenmiş Aşağı Regülasyonu
HO{{0}}, NQO1 ve glutamat-sistein ligaz (GCL) önemli hücresel antioksidan enzimlerdir ve HO-1, NQO1 ve GCL'nin katalitik veya modifiye edici alt birimleri (GCLC veya GCLM) önemlidir. Nrf2-aşağı akış genlerini düzenler [27]. HO-1, NQO1, GCLC ve GCLM'nin protein ekspresyonu, tedaviden sonra gözlendi. HO-1 ve NQO1'in H2O2'li veya H2O2'siz protein ekspresyonu arasında bariz bir fark bulundu (Şekil 6A-C) (p < 0.01).="" phg'ler="" (0.1="" ve="" 10="" p^g/ml),="" h2o2-h2o'nun="" protein="" ekspresyonunun="" indüklenen="" aşağı="" regülasyonunu="" tersine="" çevirdi-1="" ({{32}'de="" salidrosid="" hariç)="" }.1="" pg/ml),="" nqo1="" (0.1="" pg/ml'deki="" asteosit="" hariç)="" (p="">< {{40}}.01).="" h2o2="" ayrıca="" gclc="" ve="" gclm="" protein="" ekspresyonunu="" da="" aşağı="" regüle="" etti="" (p="">< 0.05)="" (şekil="" 6a,d,e).="" phg'ler="" (0.1="" ve="" 10="" pg/ml)="" ters="" h2o2-gclc="" (0.1="" pg/ml'de="" ekinakozid="" hariç)="" ve="" gclm'nin="" protein="" ekspresyonunun="" aşağı="" regülasyonunu="" indükledi="" (0,1="" pg/ml'de="" salidrosid="" hariç)="" (p="">< 0.01).="" ardından,="" ho-1="" için="" kimyasal="" inhibitörler,="" antioksidan="" enzimlerin,="" phg'lerin="" h2o2-uyarılmış="" sitotoksisiteye="" karşı="" korunmasını="" düzenlemedeki="" rollerini="" daha="" fazla="" değerlendirmek="" için="" kullanıldı.="" phg'ler="" (0.1="" ve="" 10="" pg/ml)="" h2o2-indüklenen="" sitotoksisiteyi="" önledi,="" ancak="" bu="" koruyucu="" etki,="" 20="" pm'de="" ho-1="" inhibitörü="" znpp="" (p="">< 0.01)="" tarafından="" tersine="" çevrildi="" (şekil="" 6f,="" p="">< 0.01)="">
2.5. Keap1 İfadesi ve Moleküler Yerleştirme Analizi
Fizyolojik koşullar altında, Keap1, Nrf2'nin Neh2 alanına bağlanarak ve Nrf2'yi ubiquitination ve ardından 26S proteazomu tarafından bozunma için bir Cul3-tabanlı E3 ubikuitin ligazına hedefleyerek Nrf2'nin bir baskılayıcı proteini olarak görev yapar [28]. PhG'lerin Keap1'ine bağlanma kapasitesi, antioksidan etkileri altındaki mekanizmayı araştırmak için moleküler yerleştirme analizi ile değerlendirildi.
Antioksidan etkisi: CistanchePhG'ler
3. Tartışma
PC12 hücrelerinde H2O2 ile indüklenen sitotoksisite üzerindeki PhG'lerin nöro-korumasını araştırdık. Sonuçlar, PhG'lerin ön tedavisinin HzOz kaynaklı sitotoksisiteyi önemli ölçüde bastırdığını, hücre içi ROS seviyesini azalttığını, hücre içi antioksidan enzimlerin seviyesini iyileştirdiğini ve nihayetinde PC12 hücrelerinde H2O2-uyarılmış sitotoksisiteyi tersine çevirdiğini göstermektedir. Ayrıca, PhG'ler Nrf2'nin transkripsiyonel aktivasyonunu arttırdı, HO-1, NQO1, GCLC ve GCLM'nin protein ekspresyonunun HzOz kaynaklı aşağı regülasyonunu tersine çevirdi. Ek olarak, PhG'ler, Keap1 proteinindeki Nrf2 bağlanma bölgesi ile potansiyel etkileşim gösterdi.
H2O2-'nun neden olduğu PC12 hücre hasarında, lipidin oksidatif bozunması anlamına gelen lipid peroksidasyonu, membranların geçirgenliğini artırarak hücre hasarına yol açar [29]. MDA oluşumu, lipid peroksidasyonunun indeksi olarak yaygın olarak kullanılmaktadır [30]. H2O2, ROS üretimini artırdı ve SOD, katalaz ve GPx gibi antioksidan savunma enzimlerini tüketti. Bu süreç, nörodejeneratif bozuklukların çoğunun nedenselliği ve ilerlemesinde anahtar rol oynayan oksidatif strese [31] yol açar. Daha önceki çalışmalarla uyumlu olarak, H2O2 tedavisinden sonra ROS seviyesinin arttığını, hücre içi antioksidan enzimlerin azaldığını ve PC12 hücrelerinin apoptozunun arttığını gözlemledik. PhG'lerin ön tedavisi, hücre içi ROS'ta HzOz kaynaklı artışı önemli ölçüde azalttı, hücre içi antioksidan enzimleri geliştirdi ve sonuçta PC12 hücrelerinde HzOz kaynaklı sitotoksisiteyi tersine çevirdi.
Kuang et al. [32], ekinakozidin, mitokondriyal apoptotik yol yoluyla PC12 hücrelerinde H2O2- ile indüklenen sitotoksisite üzerinde önemli bir nöro-koruyucu etki gösterdiğini bildirdi. Bu çalışmada, ekinakozid, salidrosid, asteosit ve izoakteozidin, Nrf2'nin transkripsiyonel aktivasyonunu arttırdıkları ve HO-1, NQO1'in aşağı akış protein ekspresyonunu yukarı doğru düzenledikleri için PC12 hücrelerinin antioksidan aktivitesini artırarak nöroprotektif etkiler gösterdiğini bulduk. GCLC ve GCLM. Çok sayıda çalışma, astrositlerde ve nöronlarda Nrf2 hedef genlerinin, özellikle HO-1 aktivasyonunun, inflamasyona, oksidatif hasara ve hücre ölümüne karşı güçlü bir koruma sağladığını açıkça göstermiştir. HO-1 sisteminin merkezi sinir sisteminde çok aktif olduğu rapor edilmiştir ve modülasyonu nörodejeneratif bozuklukların patogenezinde görünüşte çok önemli bir rol oynar [33]. Son çalışmalar ayrıca Nrf2'nin PD'nin [9] progresyonu ve riskindeki rolünü ve Keap1'in AD'de Nrf2'nin reaktivasyonu için etkili bir hedef olduğunu netleştirmiştir [34]. Sonuçlar, nörodejeneratif hastalıklarda terapötik bir hedef olarak Nrf2 için yeni kanıtları desteklemektedir.
Moleküler yerleştirme analizi, PhG'lerin Keap1'e aşağıdaki bağlanma kapasiteleriyle bağlanabileceğini gösterdi: ekinakozit > izoakteosit > ateozit > salidrosid. Bu sonuçlarla tutarlı olarak, PhG'lerin ön işlemi, çekirdekte aşağıdaki Nrf2 ifadesi ile Nrf2 nükleer translokasyonuna yol açtı: ekinakozit > izoakteosit * ateosit > salidrosit. Glikozit sayısının PhG'ler ve Keap1'in olası bağlanma modunu etkilediğini ve bağlanma modunun ayrıca Nrf2'nin Keap1'den salınmasına neden olduğunu varsaydık. Bu süreç, Nrf2 ve aşağı akış genlerinin aktivasyonu ile sonuçlandı ve nihayetinde PC12 hücrelerini H2O2 -indüklenen oksidatif stresten korur.
Cistanche'nin nöroprotektif etkileriPhG'ler
4. Malzemeler ve Yöntemler
4.1. Kimyasal Bileşikler ve Reaktifler
Salidrosid (CAS No. {0}}), acteoside (CAS No. 61276-17-3), izoacteoside (CAS No. 61303-13-7) ve ekinakozit (CAS No. {{3}) }) YYuanye Biotechnology Company'den (Shanghai, China) satın alındı. PhG'ler, -20 derecede saklanan 10 mg/mL'lik bir stok solüsyonu üretmek için PBS içinde çözündürüldü. H2O2 Aladdin®'den (Shanghai, China) satın alındı. RPMI-1640 ortam ve fetal sığır serumu Hyclone'dan (Logan, UT, ABD) satın alındı ve yüzde 0,5 tripsin EDTA, penisilin ve streptomisin Keyi'den (Hangzhou, Çin) satın alındı. MDA, SOD teşhis kitleri, MTT ve DCFH-DA, Beyotime Biyoteknoloji Enstitüsü'nden (Nanjing, Jiangsu, Çin) satın alındı. Annexin V-FITC/PI çift boyama Kiti Solarbio Life Sciences'tan (Pekin, Çin) satın alındı. Nrf2, Histon H3, Keap1, HO-1, NQO1, GCLC, GCLM ve p-aktin, anti-fare-yaban turpu peroksit (HRP) IgG ve anti-tavşan-HRP-IgG antikorları Abcam'dan satın alındı. (Londra, Birleşik Krallık). HO-1 ve ZnPP inhibitörleri Sigma Chemical Co.'dan (St. Louis, MO, ABD) satın alındı. RNAiso Plus, gDNA Silgili PrimeScript™RT reaktif Kiti ve SYBR® Premix Ex Taq™ II, Takara'dan (Shiga, Japonya) satın alınmıştır. Lipofectamine® RNAiMAX Transfeksiyon Reaktifi Thermo Fisher Scientific'ten (Waltham, UK) satın alınmıştır. Nrf2 siRNA dizileri aşağıdaki gibidir: ileri, CCGAAUUACAGUGUCUUAA; ve ters, UUAAGACACUGUAAUUCGG. Bu arada kontrol siRNA dizileri şu şekildeydi: ileri, UUCUCCGAACGUGUCACGU; ve tersine, ACGUGACACGUUCGGAGAA.
4.2. Hücre kültürü
Fare adrenal feokromositoma hattı (PC12 hücreleri), Institute of Biochemistry and Cell Biology, SIBS'den (CAS, Shanghai, China) elde edildi. Hücreler, yüzde 10 fetal bovin serumu (Hyclone), 100 U/mL penisilin ve yüzde 5 CO2 ile 37 derecede 0.1 mg/mL streptomisin içeren RPMI-1640 (Hyclone) içinde tutuldu. Ortam gün aşırı değiştirildi.
4.3. Hücre Canlılığı Testi
PC12 hücreleri, 96-yuvalı plakalara 2 x 104 hücre/oyuk olacak şekilde ekildi. Bağlandıktan sonra hücreler, 20 dakika boyunca inhibitörlü veya inhibitörsüz ön inkübe edildi, 24 saat boyunca PhG'lerle veya onsuz inkübe edildi ve daha sonra PhG'ler çıkarıldıktan sonra 2 saat daha H2O2 ile inkübe edildi. İnkübasyondan sonra hücreler, 37 derecede 4 saat 5 mg/mL MTT ile muamele edildi ve ortam dikkatlice çıkarıldı. Hayatta kalan hücreler tarafından oluşturulan formazan kristalleri, mavi bir renk [35] oluşturmak için 150 rL DMSO içinde çözündürüldü ve absorbans, bir plaka okuyucuda 570 nm'de ölçüldü. Kontroller, yalnızca DMSO ile aynı ortam konsantrasyonunu kullandı. Hücre canlılığı, kontrol yüzdesi olarak normalleştirildi.
PhG'lerin konsantrasyonları (0.1,1,5 ve 10 Rg/mL), PhG'lerin sitotoksisite analizine ve ekinakozitin bildirilen sitoprotektif etkisine bağlı olarak seçilmiştir [32]. Rapora göre, 10 Rg/mL'nin altında gösterilen herhangi bir sitotoksisite etkisi görülmedi ve ekinakozidin HzOz ile hasarlı hücre modelinde sitoprotektif etki gösterdiği bildirildi.
4.4. apoptoz tahlili
Apoptoz, bir Annexin V-FITC/PI çift boyama Kiti (Solarbio) ile tespit edildi. PC12 hücreleri 6-yuvalı plakalara 2 x 105 hücre/kuyu olacak şekilde ekildi. Bağlandıktan sonra hücreler, 24 saat boyunca PhG'ler (0.1 ve 10 Rg/mL) ile işlendi ve PhG'ler çıkarıldıktan sonra 2 saat daha H2O2 ile inkübe edildi. İnkübasyondan sonra hücreler soğuk PBS içinde yıkandı, iki kez 1500 rpm'de 10 dakika santrifüjlendi ve 500 rL bağlama tamponu içinde yeniden süspanse edildi. FITC etiketli Annexin V (5 rL) ve propidium iyodür.
Kısaltmalar
GCLC glutamat-sistein ligaz-katalitik alt birimi
GCLM glutamat-sistein ligaz-katalitik değiştirici alt birimi
H2O2 hidrojen peroksit
HO-1 hem oksijenaz 1
Keap1 Kelch ECH birleşme proteini 1
NQO1 NAD(P)H kinon oksidoredüktaz 1
Nrf2 nükleer faktör eritroid 2-ilgili faktör 2
PhG'ler salidrosid, acteoside, isoacteoside ve echinacoside
ROS reaktif oksijen türleri
ZnPP çinko protoporfirin
Cistanche Deserticola özü: Cistanche'nin PHG'si
Referanslar
1. Güneş, AY; Chen, YM Oksidatif stres ve nörodejeneratif bozukluklar. J. Biomed. bilim 1998, 5, 401-414. [CrossRef] [PubMed]
2. Maheshwari, A.; Mikro, MM; Aggarwal, A.; Sharma, RK; Nandan, D. H2O2 tarafından in vitro indüklenen testis germ hücre apoptozunda yer alan yollar. FEBS J. 2009,276, 870-881. [CrossRef] [PubMed]
3. Halliwell, B. Reaktif oksijen türleri ve merkezi sinir sistemi. J. Neurochem. 1992, 59,1609-1623. [CrossRef] [PubMed]
4. Richardson, JS; Subbarao, KV; Ang, LC Alzheimer hastalığında nöral dejenerasyonda demir kaynaklı serbest radikal peroksidasyonunun olası rolü üzerine. Anne. NY Acad. bilim 1992, 648, 326-327. [CrossRef] [PubMed]
5. Zhang, DD Nrf2-Keap1 sinyal yolunun mekanik çalışmaları. İlaç Metab. Rev. 2006, 38, 769-789. [CrossRef] [PubMed]
6. Itoh, K.; Tong, KI; Yamamoto, M. Elektrofillere adaptif yanıtın düzenlenmesinde Nrf2-Keap1 yolunu aktive eden moleküler mekanizma. Ücretsiz Radic. Biol. Med. 2004, 36,1208-1213. [CrossRef] [PubMed]
7. Kong, AN; Owuor, E.; Yu, R.; Hebbar, V.; Chen, C.; Hu, R.; Mandlekar, S. Harita kinaz yolu ve antioksidan veya elektrofil tepki elemanı (ARE/EpRE) tarafından ksenobiyotik enzimlerin indüksiyonu. İlaç Metab. Rev. 2001, 33, 255-271. [CrossRef] [PubMed]
8. Buendia, İ.; Michalska, P.; Navarro, E.; Gameiro, İ.; Egea, J.; Leon, R. Nrf2-ARE yolu: Nörodejeneratif hastalıklarda oksidatif stres ve nöroinflamasyona karşı ortaya çıkan bir hedef. Farmakol. orada. 2016, 157, 84-104. [CrossRef] [PubMed]
9. Skibinski, G.; Hwang, V; Ando, DM; Daub, A.; Lee, AK; Ravisankar, A.; Modan, S.; Finucane, MM; Eski püskü, BA; Finkbeiner, S. Nrf2, proteostazı modüle ederek LRRK2- ve a-sinüklein kaynaklı nörodejenerasyonu hafifletir. Proc. Natl. Acad. bilim ABD 2016, 114, 1165-1170. [CrossRef] [PubMed]
10. Jimenez, C.; Riguera, R. Bitkilerde Feniletanoid glikozitler: Yapı ve biyolojik aktivite. Nat. Ürün Rep. 1994, 11, 591-606. [CrossRef] [PubMed]
11. Georgiev, M.; Alipieva, K.; Orhan, İ.; Abrashev, R.; Denev, P.; Angelova, M. Verbascum xanthophoeniceum Griseb'in antioksidan ve kolinesteraz inhibe edici aktiviteleri. ve feniletanoid glikozitleri. Gıda Kimyası 2011, 128, 100-105. [CrossRef] [PubMed]
12. Li, N.; Wang, J.; anne, J.; Gu, Z.; Jiang, C.; Yu, L.; Fu, X. Nöroprotektif EtkileriCistanches HerbaOrta Derecede Alzheimer Hastalığı Olan Hastalarda Tedavi. Kanıta Dayalı Tamamlayıcı. Alternatif. Med. 2015, 2015,103985. [CrossRef] [PubMed]
13. Liu, YL; O, WJ; Mo, L.; Shi, MF; Zhu, YY; Pan, S.; Li, XR; Xu, QM; Yang, SL Monochasma savatieri Franch kaynaklı feniletanoid glikozitlerin antimikrobiyal, antienflamatuar aktiviteleri ve toksikolojisi. eski Maxim. J. Etnofarmakol. 2013,149, 431-437. [CrossRef] [PubMed]
14. Dong, Q.; Yao, J.; Fang, JN; Ding, K. İki soğuk su ekstrakte edilebilir polisakkaritin yapısal karakterizasyonu ve immünolojik aktivitesiCistanche Deserticola YC Ma. Karbonhidrat. Araş. 2007, 342,1343-1349. [CrossRef] [PubMed]
15. Xiong, L.; Mao, S.; Lu, B.; Yang, J.; Zhou, F.; Hu, Y.; Jiang, Y.; Şen, C.; Zhao, Y. Osmanthusfragrans Çiçek Özü ve Acteoside, Bir ICR Fare Modelinde d-Galaktoza Bağlı Yaşlanmaya Karşı Koruma. J. Med. Gıda 2016, 19, 54-61. [CrossRef] [PubMed]
16. Jiang, Y.; Mao, S.; Huang, W.; Lu, B.; Cai, Z.; Zhou, F.; Li, M.; Lou, T.; Zhao, Y. Osmanthusfragrans Lour'un Feniletanoid Glikozit Profilleri ve Antioksidan Aktiviteleri. UPLC/PDA/MS ve Simüle Edilmiş Sindirim Modeline göre çiçekler. J. Agric. Gıda Kimyası 2016, 64, 2459-2466. [CrossRef] [PubMed]
17. Li, X.; Ye, X.; Li, X.; Güneş, X.; Liang, Q.; Tao, L.; Kang, X.; Chen, J. Salidroside, NO yolunu inhibe ederek PC12 hücrelerinde MPP artı kaynaklı apoptoza karşı korur. Beyin Araş. 2011,1382, 9-18. [CrossRef] [PubMed]
18. Zhang, L.; Ding, W.; Güneş, H.; Zhou, Q.; Huang, J.; Li, X.; Xie, Y.; Chen, J. Salidroside, PI3K/Akt yolunun aktivasyonu yoluyla PC12 hücrelerini MPP artı kaynaklı apoptozdan korur. Gıda Kimyası Toksikol. 2012, 50, 2591-2597. [CrossRef] [PubMed]
19. Sheng, GQ; Zhang, JR; Pu, XP; anne, J.; Li, CL Verbascosidin PC12 hücrelerinde 1-metil-4- fenilpiridinyum iyonunun neden olduğu nörotoksisite üzerindeki koruyucu etkisi. Avro. J. Pharmacol. 2002, 451,119-124. [Çapraz Referans]
20. Wang, H.; Xu, Y.; Yan, J.; Zhao, X.; Güneş, X.; Zhang, Y.; Guo, J.; Zhu, C. Acteoside, insan nöroblastom SH-SY5Y hücrelerini beta-amiloid kaynaklı hücre hasarına karşı korur. Beyin Araş. 2009, 1283, 139-147. [CrossRef] [PubMed]
21. Min, D.; Jin, YZ; Yong, J.; Zheng, BL; Yao, HW Echinacoside, SHSY5Y nöronal hücrelerini TNFa'nın neden olduğu apoptozdan kurtarır. Çene. Farmakol. Boğa. 2005, 505,11-18.
22. Zhao, Q.; Gao, JP; Li, WW; Cai, DF Parkinson hastalığının subakut MPTP fare modelinde Echinacosit'in nörotrofik ve nöro-kurtarma etkileri. Beyin Araş. 2010,1346, 224-236. [CrossRef] [PubMed]
23. Koo, KA; Sung, SH; Park, JH; Kim, SH; Lee, KY; Kim, YC Callicarpa dikotoma kaynaklı feniletanoid glikozitlerin in vitro nöroprotektif aktiviteleri. Bitki Med. 2005, 71, 778-780. [CrossRef] [PubMed]
24. Liu, YG; Li, X.; Xiong, C.; Yu, B.; Pu, X.; Ye, XS Potansiyel nöroprotektif ajanlar olarak sentetik feniletanoid glikozit türevleri. Avro. J. Med. Kimya 2015, 95, 313-323. [CrossRef] [PubMed]
25. Fu, G.; Pang, H.; Wong, YH Doğal olarak oluşan feniletanoid glikozitler: Yeni terapötikler için potansiyel yol açar. Kör. Med. Kimya 2008, 15, 2592-2613. [CrossRef] [PubMed]
26. Greene, Los Angeles; Tischler, AS Sinir büyüme faktörüne yanıt veren sıçan adrenal feokromositoma hücrelerinin noradrenerjik klonal hattının oluşturulması. Proc. Natl. Acad. bilim ABD 1976, 73, 2424-2428. [CrossRef] [PubMed]
27. Liang, QN; Sheng, YC; Jiang, P.; Ji, LL; Xia, YY; Min, Y.; Wang, ZT Yeni sütten kesilmiş ve genç fare karaciğerinde glutatyon antioksidan sisteminin farkı ve izoline bağlı hepatotoksisiteye katılımı. Kemer Toksikol. 2011, 85, 1267-1279. [CrossRef] [PubMed]
28. Kobayashi, A.; Kang, M.; Okava, H.; Ohtsuji, M.; Zenke, Y; Chiba, T.; Igarashi, K.; Yamamoto, M. Oksidatif Stres Sensörü Keap1, Nrf2'nin Proteazomal Bozulmasını Düzenlemek için Cul3-Tabanlı E3 Ligaz İçin Bir Adaptör Olarak İşler. Mol. Hücre. Biol. 2004,24, 7130-7139. [CrossRef] [PubMed]
29. Cornelius, C.; Crupi, R.; Calabrese, V; Graziano, A.; Milone, P.; Pennisi, G.; Radak, Z.; Calabrese, EJ; Cuzzocrea, S. Travmatik beyin hasarı: Oksidatif stres ve nöroproteksiyon. Antioksit. Redoks Sinyali. 2013, 19, 836-853. [CrossRef] [PubMed]
30. Hou, Z.; Luo, W.; Güneş, X.; Hao, S.; Zhang, Y.; Xu, F.; Wang, Z.; Liu, B. Hidrojen açısından zengin tuzlu su, hafif travmatik beyin hasarından sonra oksidatif hasara ve bilişsel eksikliklere karşı korur. Beyin Araş. Boğa. 2012, 88, 560-565. [CrossRef] [PubMed]
31. Ansari, MA; Roberts, KN; Scheff, SW Bir sıçan TBI modelinde kortekste kontüzyon kaynaklı oksidatif stres ve sinaptik proteinlerin bir zaman süreci. J. Neurotravma 2008, 25, 513-526. [CrossRef] [PubMed]
32. Kuang, R.; Güneş, Y.; Yuan, W.; Lei, L.; Zheng, X. Feniletanoid glikozitlerden biri olan ekinakozitin PC12 hücrelerinde H2O2-indüklenen sitotoksisite üzerindeki koruyucu etkileri. Bitki Med. 2009, 75, 1499-1504. [CrossRef] [PubMed]
33. Scapagnini, G.; Vasto, S.; Abraham, NG; Caruso, C.; Zella, D.; Fabio, G. Gıda polifenolleri ile Nrf2/ARE yolunun modülasyonu: Bilişsel ve nörodejeneratif bozukluklar için bir beslenme nöroprotektif stratejisi. Mol. Nörobiyol. 2011, 44, 192-201. [CrossRef] [PubMed]
34. Kerr, F.; Sofolaadesakin, O.; Ivanov, DK; Gatlif, J.; Gomez, PB; Bertrand, HC; Martinez, P.; Callard, R.; Snoeren, İ.; Cochem, HM Direct Keap1-Alzheimer/s hastalığı için potansiyel bir terapötik hedef olarak Nrf2 bozulması. PLoS Genet. 2017, 13, e1006593. [CrossRef] [PubMed]
35. Hansen, MB; Nielsen, SE; Berg, K. Hücre büyümesi/hücre ölümünü ölçmek için kesin ve hızlı bir boya yönteminin yeniden incelenmesi ve daha da geliştirilmesi. J. İmmünol. Yöntemler 1989, 119, 203-210. [Çapraz Referans]
36. Basın, C. İlaç Keşifinde Sanal Tarama; Crc Press: Boca Raton, FL, ABD, 2005.
37. Müegge, İ.; Martin, YC; Hajduk, PJ; Fesik, SW Zayıf ligandların FK506 bağlayıcı proteine kenetlenmesinde PMF puanlamasının değerlendirilmesi. J. Med. Kimya 1999, 42, 2498—2503. [CrossRef] [PubMed]
38. Kuntz, ID; Blaney, JM; Oatley, SJ; Langridge, R.; Ferrin, TE Makromolekül-ligand etkileşimlerine geometrik bir yaklaşım. J. Mol. Biol. 1982,161, 269-288. [Çapraz Referans]
39. MD, E.; Murray, CW; Oto, TR; Paolini, GV; Mee, RP Deneysel puanlama fonksiyonları: I. Reseptör komplekslerindeki ligandların bağlanma afinitesini tahmin etmek için hızlı bir ampirik puanlama fonksiyonunun geliştirilmesi. J. Bilgisayar Destekli Mol. Des. 1997,11,425-445.
© 2018 yazarlar tarafından. Lisans Sahibi MDPI, Basel, İsviçre. Bu makale, Creative Commons Attribution (CC BY) lisansının (http:ZZcreativecommons.org/licenses/byZ4.0Z) hüküm ve koşulları altında dağıtılan açık erişimli bir makaledir.