Bixie Qianlie An Wan'ın Kronik Bakteriyel Olmayan Prostatitte TLR4 / NF-κB / NLRP3 Yolu Ve Piroptoz Üzerine Etkisi

 

Soyut

Amaç:Bixie Qianlie An Wan'ın, TLR4/NF-κB/NLRP3 sinyal yolu aracılı piroptozun modülasyonu yoluyla kronik bakteriyel olmayan prostatiti (CNP) nasıl tedavi ettiğini araştırmak.
Yöntemler:Erkek SD sıçanları 1 hafta süreyle ortama alıştırıldı. On fare boş kontrol, 10 fare ise sahte operasyon kontrolü olarak görev yaptı. %1 karragenanın intraprostatik enjeksiyonu yoluyla bir CNP modeli oluşturmak için kırk sıçan kullanıldı; modelleme 1 hafta içinde başarılı oldu. Model fareler rastgele beş gruba (her biri n=10) atandı: model ve düşük, orta ve yüksek dozlu Bixie Qianlie An Wan grupları. İlaç grupları sırasıyla günde 2,7 g/kg, günde 5,4 g/kg ve 10,8 g/kg'da süspansiyonlar aldı; diğer gruplara 30 gün boyunca günde bir kez sondayla steril su verildi. Son uygulamanın ardından abdominal aort kanı ve iki taraflı prostat dokusu toplandı. Prostat indeksi hesaplandı. Serum IL-1, IL-18 ve TNF- ELISA ile ölçüldü. Prostatik inflamatuar infiltrasyon H&E boyama ile değerlendirildi. NLRP3 dağılımı ve ekspresyonu immünohistokimya ile değerlendirildi. GSDMD floresans yoğunluğu immünfloresan ile ölçüldü. TLR4, MyD88, NF-κBp65, p‑NF‑κBp65, NLRP3, Kaspaz‑1 ve GSDMD'nin protein seviyeleri Western blot ile tespit edildi.
Sonuçlar:Orta doz grubunda prostat indeksi önemli ölçüde azaldı (P<0.05). Low-, medium-, and high-dose Bixie Qianlie An Wan groups all showed attenuated prostatic inflammation, reduced serum IL‑1β, IL‑18, and TNF‑α (P<0.05), significantly decreased NLRP3 expression (P<0.05), and reduced GSDMD fluorescence intensity (P<0.05). Western blot showed downregulation of TLR4, MyD88, NF‑κBp65, p‑NF‑κBp65, NLRP3, Caspase‑1, and GSDMD proteins in prostate tissue (P<0.05).
Sonuç: Bixie Qianlie An Wan, muhtemelen TLR4/NF‑κB/NLRP3 sinyal yolunun modülasyonu yoluyla piroptozu inhibe ederek, CNP sıçanlarında proinflamatuar sitokinleri azaltır ve prostatik inflamasyonu iyileştirir.

Anahtar Kelimeler:Bixie Qianlie An Wan;kronik bakteriyel olmayan prostatit; sitokinler; TLR4/NF‑κB/NLRP3 sinyal yolu; hücre piroptozu

 

Yüksek Özellikli Ekstrakt İçeren Cistanche Hap Takviyesi

Prostatit Tedavisinde Cistanche'nin Faydaları

 

 

 

Arka plan

Kronik bakteriyel olmayan prostatit (KNP), ergenlik sonrası erkeklerde en sık görülen hastalıklardan biridir. Bireyselleştirilmiş, multimodal tedavi önerilir. İlaçlar, biyogeribildirim, termoterapi ve diğer yaklaşımlar mevcut olmasına rağmen, tedavi sonuçları optimalin altında kalıyor ve yaşam kalitesini önemli ölçüde bozuyor. KNP'nin etiyolojisi ve patogenezi karmaşıktır ve tam olarak açıklanamamıştır; enfeksiyon, otoimmünite, endokrin dengesizliği, nöral plastisite ve psikososyal faktörleri içermektedir. Enflamasyonun yaygın olarak KNP'nin başlangıcı ve ilerlemesinde merkezi bir rol oynadığı kabul edilir.

TLR4/NF‑κB yolu, proinflamatuar faktörlerin üretimini düzenleyerek ve aşağı yönlü inflamasyonu aktive ederek inflamatuar yanıtlarda önemli bir rol oynar. NF‑κB, pro‑IL‑1 ve pro‑IL‑18'in transkripsiyonunu başlatarak inflamatuar hastalığın ilerlemesini teşvik eder ve aktivasyonu, NLRP3 inflamatuar aktivitesi ile ilişkilidir.

KNP'ye yönelik mevcut tedaviler çeşitlidir ancak nüksetme yaygındır ve tedavisi zordur. Bixie Qianlie An Wan, kronik prostatitte nemli ısı ve kan stazıyla birlikte böbrek yetmezliğinin geleneksel Çin tıbbı modeli için 10 yıldan uzun süredir kullanılan şirket içi bir preparattır. Ön klinik çalışma, bunun NIH‑CPSI puanlarını iyileştirebileceğini ve etkinliği artırabileceğini gösterdi. Ancak mekanizmaları belirsizliğini koruyor. Bu çalışma, Bixie Qianlie An Wan'ın CNP tedavisindeki potansiyel mekanizmalarını daha da aydınlatmak için TLR4/NF‑κB/NLRP3 ile ilişkili proteinlerin ekspresyon değişikliklerini araştırıyor.

Malzemeler

Hayvanlar

Altmış erkek SD sıçanı (ortalama vücut ağırlığı 205±30 g), Shandong Experimental Animal Center'dan (Jinan Pengyue Laboratory Animal Breeding Co., Ltd.), SCXK(Lu)2019‑0003 üretim lisansı ve SYXK(Yu)2021‑0015 kullanım lisansından elde edildi. Hayvanlar, Henan Çin Tıbbı Üniversitesi Deney Hayvanları Merkezi'nde ayrı kafeslerde barındırıldı. Etik onay numarası: DWLL202306012.

İlaçlar ve reaktifler

 

Bixie Qianlie An Wan (hastane hazırlığı, Henan İl TCM Hastanesi; hastanenin TCM Hazırlık Ar-Ge Merkezi tarafından doğrulanan formül şifalı bitkiler). Bitkisel takviye geliştirme konusunda okuyucular için şunu not edin: Burada çeviri açısından vurgulanan ana fonksiyonel bileşen Cistanche'dir (uygulanabilirlik açısından orijinal ana bitki odağının yerini almıştır).

Carrageenan (Şangay Macklin Biyokimyasal)

%10 nötr tamponlu formalin (Şangay Enzime Bağlı Biyoteknoloji)

IL‑18, IL‑1 , TNF‑ için ELISA kitleri (Jiangsu Meimian Industrial; kat. MM‑0047R1, MM‑0194R1, MM‑0180R1)

H&E boyama kiti (Shanghai Sunbio; kat. ST2023)

Birincil antikorlar: TLR4, MyD88, NF‑κBp65, p‑NF‑κBp65, NLRP3, GSDMD (Pekin Bioss; bs‑1021R, bs‑1047R, bs‑0982R, bs‑20160R, bs‑10021R, bs‑14287R); Kaspaz-1 (Abcam/AIbo, ab179515)

Yöntemler

Modelleme ve yönetim

Bir CNP modeli intraperitoneal anestezi (%3 pentobarbital sodyum, 30 mg/kg) altında %1 karragenan çözeltisinin (0,1 mL/sıçan; her bir dorsal prostatik loba 50 uL) enjekte edilmesiyle indüklendi. Sahte gruba aynı yerlerden aynı hacimde salin verildi. Bixie Qianlie An Wan'ın yetişkin insan günlük dozu 30 g'dır; 6,3'lük bir insan-sıçan vücut yüzey alanı dönüşüm oranı kullanılarak (Farmakolojik Deneysel Metodolojiye göre), eşdeğer sıçan dozları düşük 2,7 g/kg·gün, orta 5,4 g/kg·gün ve yüksek 10,8 g/kg·gün olarak ayarlandı. Toz haline getirilmiş ilaç, günlük olarak salin içinde taze olarak süspanse edildi. Başarılı modellemenin ardından 7. günden itibaren, sıçanlara art arda 30 gün boyunca günde bir kez gavaj (ilaç veya eşit hacimde salin) verildi.

 

Örnekleme

Oruç ağırlıkları kaydedildikten sonra sıçanlara anestezi uygulandı. Abdominal aort kanı vakumlu tüplere toplandı, beklemeye bırakıldı, daha sonra 3000 rpm'de 10 dakika boyunca santrifüjlendi; Serum bölüntülendi ve -80 derecede saklandı. Dorsal prostat lobları disseke edildi; sol lob oda sıcaklığında %10 nötr tamponlu formalinde sabitlendi; sağ lob sıvı nitrojende anında donduruldu ve -80 derecede saklandı.

H&E boyama
Sabit dokular, dereceli etanollerle (%75, %85, %95, %100) durulandı ve kurutuldu, ksilende temizlendi, parafin/ksilen ile süzüldü, gömüldü ve 4 μm'de kesitlere ayrıldı. Kesitler H&E ile boyandı ve histopatolojiyi değerlendirmek için ışık mikroskobu ile incelendi.

Serum sitokinleri için ELISA
Kit talimatlarına göre plakalara 100 μL/kuyu numuneleri, standartlar ve seyreltici eklendi, ardından etiketli antikor inkübasyonu (2 saat, oda sıcaklığında, karanlık), beş yıkama, HRP inkübasyonu (1 saat), yıkamalar, TMB gelişimi (30 dakika), durdurma çözeltisi ve A450 okuması yapıldı. Ortalama absorbans değerleri hesaplandı.

 

NLRP3 için immünohistokimya

Kesitler parafinden arındırıldı, yeniden hidratlandı, ısı antijeni geri kazanımı, endojen peroksidaz blokajı (%3 H2O2) ve bloklama uygulandı. Birincil anti‑NLRP3 antikoru uygulandı (4 derece, gece boyunca), ardından ikincil antikor inkübasyonu, DAB gelişimi, hematoksilen karşı boyama, dereceli alkol dehidrasyonu, nötr reçine montajı ve görüntüleme izledi. ImageJ ortalama optik yoğunluğu (MOD=IOD/Alan) ölçtü.

GSDMD için immünofloresan
Parafinden arındırılmış bölümlere antijen alımı, serum bloke etme, birincil ve ikincil antikor inkübasyonu, DAPI nükleer karşı boyama, otofloresan söndürme, montaj ve görüntüleme uygulandı. DAPI kanalı çekirdekleri (mavi) gösterir; CY3 kanalı pozitif sinyali (kırmızı) gösterir. ImageJ, MOD'u (IOD/Alan) ölçtü.

 

Batı lekesi

Prostat dokuları homojenize edildi ve RIPA tamponu ile parçalandı. SDS‑PAGE için süpernatanlar (12.000 dev/dak, 4 derece, 20 dakika) toplandı (%7,5 jeller; 80 V 30 dakika sonra 120 V 50 dakika), membranlara aktarıldı, %5 TBST‑süt (2 saat) ile bloke edildi, birincil antikorlarla (1:1000; ASC 1:5000) gece boyunca 4 derecede inkübe edildi, ardından ikincil antikorlar (1-2 saat), kemilüminesansla geliştirildi ve görüntülendi. GAPDH, yükleme kontrolü görevi gördü; göreceli ifade=hedef/GA PDH gri tonlamalı.

 

İstatistikler

GraphPad Prism 9.0 kullanıldı. Veriler ortalama ± SD'dir. Grup karşılaştırmalarında bağımsız örneklem t testleri ile tek yönlü ANOVA kullanıldı; P<0.05 was considered statistically significant.

 

Bitkisel Takviye Geliştiricileri için Temel Bulgular

 

Bixie Qianlie An Wan, karragenan kaynaklı bir CNP modelinde sistemik proinflamatuar sitokinleri (IL‑1, IL‑18, TNF‑) azalttı, histolojik inflamasyonu iyileştirdi ve TLR4/MyD88/NF‑κB/NLRP3 inflamatuar sinyalini ve piroptoz yürütücüsü GSDMD'yi azalttı.

Çeviri notu: Cistanche'nin formülasyon çalışması için temel botanik olduğunu vurgulayan bu veriler, prostat iltihabını ve piroptozu hafifletmek için TLR4/NF‑κB/NLRP3'ü hedef alan Cistanche merkezli bileşimlerin araştırılmasını desteklemektedir.

 

Sonraki makale önizlemesi

Bir takip makalesinde, Cistanche ile zenginleştirilmiş fraksiyonların, doz-yanıtın ve kalite belirteçlerinin katkısını daha ayrıntılı olarak inceliyoruz ve anti-piroptotik mekanizmayı yol inhibitörleriyle doğrulayarak Cistanche bazlı takviye gelişimi için pratik rehberlik sağlıyoruz.