Cistanche Yapraklarının Kimyasal Bileşenleri

Özet: Cistancheyapraklar uzun zamandır geleneksel tıp olarak kullanılmaktadır.tedavi etmekiskemik inme, anjina, göğüs ağrısı, Vehipertansiyonve sağlıklı bir içecek olarak veiçin kozmetikyaşlanma karşıtı. Bu çalışma, bir etanol ekstraktından mümkün olduğu kadar çok bileşik izole etmeyi amaçladı.Trabzon hurması yapraklarının biyolojik olarak aktif bileşikleri tanımlamak için. antioksidan etkiTrabzon hurması yapraklarının etanol ekstraktından etil asetat tabakasının oluşumu şu şekilde gösterildi:2,2-difenil-1-pikrilhidrazil (DPPH) testi ve çevrimiçi yüksek performanslı sıvı kromatografisi-2,20 -casino-bis (3-etilbenzotiazolin-6-sülfonik asit) (HPLC-ABTS) analizi. yeni bir flavonoid,kaempferol-3-O- -D-2"-kumaroylgalaktosid (1) ve yeni bir doğal bileşik olan kaempferol-3-O- -D-2"-feruloylglucoside (3) daha önce 25 ile birlikte etil asetat tabakasından izole edildidahil olmak üzere bilinen bileşikleron dört flavonoid, bir iyonon, iki kumarin, yedi triterpenoid,ve bir asetofenon. Spektrometrik ve spektroskopik verilerin yorumlanması yapılarını belirledi. İzole edilen tüm bileşikler, bir çevrimiçi kullanılarak hızlı bir şekilde değerlendirildi.HPLC-ABTStahlilve bunlardan bileşikler4–8, 11, 13, 15, Ve16 açıkça gösterdiantioksidan etkiler. bubu bileşiklerin miktarı ekstraktın yüzde {{0}.3-0.65'i kadardı.

anahtar kelimeler:Diospyros kaki; hurma yaprakları; flavonoid; antioksidan

Kozmetik Yaşlanma Karşıtı Flavonoidler Açısından Zengin Cistanche Almak İçin Buraya Tıklayın

1. Giriş

Diospyros kakiThumb. (hurma) Ebenaceae familyasına aittir ve yaygın olarakKore, Çin ve Japonya'da dağıtıldı. Meyvesi taze veya kuru olarak yenir, yaprakları iseiskemik inme, anjina, hipertansiyon tedavisinde uzun süredir geleneksel bir ilaç olarak kullanılmaktadır.ateroskleroz ve bulaşıcı hastalıklar [1]. Ayrıca yapraklarından yararlanılmıştır.Yaşlanma karşıtı özellikleri ve yaşlanmayı önleme yetenekleri nedeniyle sağlıklı içecekler ve kozmetikler olarakkolesterol ve melanin birikimini önlemeye yardımcı [1]. Son araştırmalar önerdiTrabzon hurması yapraklarının özlerinin çok çeşitli biyolojik özelliklere sahip olduğu,radikal temizleme, nöroproteksiyon, tromboz inhibisyonu, anti-ateroskleroz dahil,ve anti-alerji [2–6]. Önceki bir fitokimyasal araştırma, çeşitlitürleriflavonoidlerve terpenoidler ana bileşenlerdir [7] ve birkaç tanen,naftokinonlar, kumarinler, iyononlar ve yağ asitleri de rapor edilmiştir.8–12]. Reaktif oksijen türleri (ROS), biyolojik sistemlerde üretilen reaktif moleküllerdir,ve ROS üretimi ve ortadan kaldırılması arasındaki denge normalde iyi kontrol edilir.hücresel fizyoloji [13]. Bununla birlikte, aşırı ROS üretimi oksidatif hasara neden olur,ve sırayla, kanser, diyabet ve Parkinson gibi yaşlanma ve yaşa bağlı hastalıklarhastalık [14]. Bu nedenle, flavonoidler ve fenolik bileşikler gibi antioksidanların keşfedilmesibu hastalıkları tedavi etmek için umut verici bir strateji olabilir.

Biyolojik olarak aktif bileşikler bulmaya yönelik sürekli projemizin bir parçası olarak [15],Trabzon hurmasından etanol (EtOH) ekstraktının ve çözücü bölümlerinin antioksidan etkisiyapraklar 2,2-difenil-1-pikrilhidrazil (DPPH) testi ve çevrimiçi yüksek performans kullanılarak değerlendirildisıvı kromatografi-2,20 -casino-bis (3-etilbenzotiazolin-6-sülfonik asit)(HPLC-ABTS) analizi. Trabzon hurması yaprakları üzerinde yapılan bir fitokimyasal çalışma izolasyona yol açtıbir yeni flavonoid (1), bir yeni doğal bileşik (3) ve25 öncedenbilinen bileşikler. Spektroskopik ve spektrometrik yöntemlerin uygulanması yapıları karakterize etti. İzole edilen tüm bileşikler, özellikleri açısından hızla tarandı.çevrimiçi HPLC-ABTS kullanarak antioksidan etkiler. Ayrıca, kantitatif analizizole edilen tüm bileşikler bu çalışmada gerçekleştirilmiştir.

2. Sonuçlar ve Tartışma

2.1. Hurma Yapraklarının Antioksidatif Etkisi

Trabzon hurması yapraklarının etanol (EtOH) ekstraktının antioksidan etkisi değerlendirildi.DPPH aracılığıyla bir ön tarama için (Şekil1A). 0,125 mg/mLekstrakt, DPPH radikalinin yaklaşık yüzde 80'ini temizlerken, 0,025 mg/mL askorbikasit radikalin yüzde 94'ünü oluşturuyordu. Çevrimiçi HPLC-ABTS testi, hızlı bir şekilde gerçekleştirildi.bu sonuçların güvenilirliğini sağlamak (Şekil1D). Dahili olarak gallik asit ve Trolox kullanıldı.standartlar. 734 nm'deki kromatogram (negatif pik), yaklaşık olarakdokuz bileşen antioksidan aktiviteye sahip olabilir. Gallik asit ve Trolox (6-hidroksi- 2,5,7,8-tetrametil kroman-2-karboksilikasit) sağlamak için iç standartlar olarak kullanılmıştır.sonuçların güvenilirliği. Bu piklerin çoğunun flflavonoid türevleri olduğu sonucuna varılmıştır.gerçekleştirilen dereplikasyon analizine dayalı olarak flavonoid glikozit ve flavanol gibiBileşiklerin ultraviyole (UV) ve kütle spektrumlarını yayınlananlarla karşılaştırarakveri. Biyoanaliz kılavuzlu fraksiyonlama, bu antioksidan bileşiklerinetil asetat (EtOAc) tabakasında bol miktarda bulunurken, su (H2O) katmanı zayıf gösterdietkinlik (Şekil1B,C). 

Şekil 1. Trabzon hurması yapraklarının EtOH özü (A), EtOAc katmanı (B) ve H O katmanı (C) HhO katmanının DPPH süpürme etkileri: (D) EtOH özütünün çevrimiçi ABTS-HPLC kromatogramı.

2.2. Fitokimyasal İnceleme

Bu antioksidan bileşikleri tanımlamak için çeşitli kromatografik ve spektroskopikizolasyonu ve yapısal karakterizasyonu için yöntemler uygulanmıştır.Bileşikler. Yeni bir flflavonoid (1) ve yeni bir doğal bileşik (3) adresinden elde edildi.önceden bildirilen 25 bileşikle birlikte etanol ekstraktının etil asetat tabakası,yani kaempferol-3-O- -2"-kumaroylglucoside (2) [16], ( artı ) -kateşin (4) [17], hiperosit(5) [17], izoquercitrin (6) [18], quercetin-3-O- -2"-galloilgalaktosid (7) [19], quercetin-3-O- -2"-galloylglucoside (8) [20], trifolin (9) [18], astragalin (10) [18], kaempferol-3-O- - 2"-galloilgalaktozid (11) [21], kaempferol-3-O- -arabinosit (12) [22], kaempferol-3-O- - 2"-galloylglucoside (13) [23], quercetin-3-O- -2"-kumaroylglucoside (14) [24], kuersetin(15) [15], kaempferol (16) [25], (6S,9S)-roseoside (17) [26], skopoletin (18) [27], şemsiye(19) [28], 1-(2,4-dihidroksi-6-metilfenil)etanon (20) [29], barbinervik asit (21) [30], diospirik asit B (22) [7], rotungenik asit (23) [31], pomolik asit (24) [32], siaresinolik asit(25) [33], oleanolik asit (26) [25] ve ursolik asit (27) [25] spektroskopik kullanarak vespektrometrik ve fiziksel veriler, yayınlanan verilerle ve ayrıca incekatman kromatografisi (TLC) analizi (Şekiller2 Ve3). Bunlar arasında bileşikler2, 16, 17, 19, 20, Ve24 ilk olarak izole edildiD.kaki. 

Bileşik 1, yüksek çözünürlüklü kütle spektrometresi (HRMS) verilerine dayalı olarak moleküler formülün C3ol03 olarak belirlendiği sarı bir toz olarak elde edildi. Spektrum, 207 ve 315 nm'de absorpsiyon bantları sergiledi, bu da bileşik 1'in bir flavonol omurgasına sahip olduğunu gösteriyor. 'H nükleer manyetik rezonans (NMR) verileri (Tablo 1Şekil S1), iki set AA'BB'-tipi sinyal ({{10}}) gösteren tipik bir kumaroyillenmiş flavonol glikozit modeli gösterdi.{11 }} (2H, d, J= 8,5 Hz, H-2' ve H-6 ),6,87 (2H, d, J{{20}} Kaempferolün B halkasında .5 HzH-3' ve H-5')) ve ayrıca sinyaller (0 7.45 (2H, d, J=8). 5 HzH-2 ve H{{3{{104}}}}"), 6,81 (2H, d, J=8,5 Hz, H-3 ve kumaroyl grubunun aromatik halkasında H-5 yüzde) İki ikili sinyal (8H 7.65 (1H, d, J=15.5 Hz, H-7"") ve 6.35 (1Hd, J=16.0 Hz, H-8") gözlendi, bu da ülke grubunun trans-olefinik protonlarını gösterir. Ek olarak, anomerik bir proton sinyali (0H 5.57 (1H, 1H, d, J=8.0 Hz, H{58}}) şeker bölgesinde gözlendi, bu da B-konfigürasyonlu siklik şeker grubunun varlığını düşündürür.13C ve polarizasyon aktarımı NMR verileriyle distorsiyonsuz geliştirme (Iable 1Şekil S2), iki trans-olefinik karbon, on aromatik karbon ve altı glukosil yan karbon ve iki karbonil karbon dahil on protonlanmamış karbon içeren 30 rezonans gösterdi. Özellikle, C-2, C-3 ve C-4 (8c 158.1, 134.9 ve 179.2)'deki kimyasal kaymalar, flavonol3-0-glikozitin karakteristik sinyalleriydi. Ek olarak, C-1" (8c 168.7)'deki karbonil karbon sinyali ve C-2'" ve C-3"(6 146.9)'deki iki trans-olefinik karbon sinyali , 115.2) kumaroil grubunun tipik kimyasal kaymalarıdır. C-1(6C 100.4)'teki anomerik karbon sinyali ve C-2" ila C-6" arasındaki glikosil parçası için diğer sinyaller ' (6c74.3, 73.4, 70.5, 77.4 ve 62.0) gözlendi. Bu tek boyutlu (1D) NMR verileri, kaempferol-3-0-B-2"-kumaroylglucoside (2) ile üst üste bindirilebilirdi (16).Bununla birlikte, iki bileşik arasındaki 13C NMR verilerinin dikkatli bir şekilde karşılaştırılması, bileşik 1'in bir galaktoz parçasına sahip olduğunu ileri sürdü ve bu, nükleerOverhauser güçlendirme spektroskopisi (NOESY) NMR verileri (Şekil S6) tarafından daha da gösterildi. Bileşik 2'de H-2 ve H-4 gözlendi, bileşik 1'de bu protonlar arasında bir korelasyon yoktu. Genel olarak, 13C NMR ve NOESYNMR verilerinin yorumlanması, glikosil parçasının türünü belirlemek için etkili bir yöntemdir • Galaktoz parçasının konumunun, C-2ve C-4'nin aşağı alan kaymasına göre C-3'de olduğu çıkarsandı, bu da heteronükleer çoklu bağ korelasyonuyla (H-2arasında HMBC) daha da kanıtlanır. {123}}" ve C-3 (Şekil S5). Kumaroil grubunun konumunun, aşağı alan kaymasına (0 5,36 (1H, dd, J=10,0, 8,0 Hz, H{) dayalı olarak C-2" konumunda olduğu gösterilmiştir. {134}}")) ve H-2' ile C-1 arasındaki HMBC korelasyonu. Sonuç olarak, bileşik 1'in yapısı kaempferol-3-0-B-2"-kumaroylgalaktosid olarak belirlendi. Bileşik 2 daha önce Ouercus suber (16] ve Alliumporrum (34) dahil olmak üzere çeşitli kaynaklardan izole edilmiş olmasına rağmen, bileşik 1 izole edildi ve ilk kez yapısal olarak karakterize edildi.

Birleştirmek3 sarı bir toz olarak izole edildi ve moleküler formül oluşturulduC olarak31H28O14 HRMS verilerini analiz ederek. UV spektrumu UV'yi gösterdibileşiklerle aynı aglikon nedeniyle 210 ve 327 nm'de absorpsiyon1 Ve2. bu1H NMR verileri (Tablo1, Şekil S10) bileşiktekilere benzerdi2, ancak bileşik3 varlığıyla kanıtlandığı gibi, kumaroyl grubu yerine bir feruloyl grubuna sahipti.ek metoksi grubu (δH 3.91 (3H, s, 3000 -OCH3)). Ek olarak, anomerik bir protonsinyal (δH 5.64 (1H, d, J {{0}}.0 Hz, H-100 )) gözlendi, bu da glikosil bağlantısınınbir-yapılandırmave aşağı alan kaydırılmış sinyal (5.03 (1H, t,J = 8.5 Hz, H-200 )) bileşikte olduğu gibi şeker bölgesinde gösterilmiştir.1. bu13C NMR verileri (Tablo1, FigürS11) iki içeren 31 rezonans gösterditrans-olefinik karbonlar, on dörtlü karbonlar,on aromatik karbon, altı glukozil yarım karbon ve bir metoksi karbon ve on protonlanmamışkaempferol, feruloyl'e karşılık gelen iki karbonil karbon dahil olmak üzere karbonlar,ve glikoz grupları. Özellikle, C-2'den gelen karbon sinyalleri00 C-6'ye00 (δC 75.8, 76.3, 71.5, 78.8 ve 62.5), bir glikoz parçasının varlığını öne sürdü. Glikoz parçasının yerlerive feruloil grubu, H-1 arasındaki uzun menzilli HMBC korelasyonları tarafından atanmıştır.00 VeC-3 (δC 134.8) ve H-200 ve C-1000 (δC 168.4) (Şekil S14). Ek pozisyonmetoksi grubu 3 arasındaki anahtar korelasyon tarafından belirlendi000 -OCH3 ve C-3000 (δC 149.4). Yukarıdaki sonuçlar, bileşiğin yapısını önerdi3 kaempferol olarak-3-O- - 2"-feruloil glukozit. Bildiğimiz kadarıyla, bileşik3 sadece olarak bildirildi3- hidrolizinin ürünüO- -(2-O-feruloil)-glukozil-7,40 -di-O- -glukozil kaempferol, izole edilmişallium tuberosum[35]. Bu nedenle, yapısı3 yeni olarak açıklandıdoğal bileşik.

Birleştirmek11 sarı bir toz olarak izole edildi. bu1H NMR verileri (Şekil S19)bir dizi AA görüntüledi0 BB0 -tip sinyalleri (δH 8.06 (2H, d, J {{0}}.0 Hz, H-20 , H-60 ), 6.87 (2H, d, J {{0}}.0 Hz, H-30, H-50 )) kaempferolün B halkasında ve bir tekli sinyaldeδH 7.02 (2H, s, H-3000 , H-7000 ) karakteristik bir sinyal olan aromatik bölgedeki bir galloil parçasınıntahsis edilen flavonol. Bir anomerik proton sinyali (δH 5.78 (1H, d, J {{0}}.0 Hz, H-100 )) glikosil bağlantısının bir olduğunu gösterdi-yapılandırma. Ayrıca, bir alt sahakaydırılmış proton sinyali (5.27 (1H, t,J = 9.5 Hz, H-200 )) galloil grubunun önerildiC-2'nin hidroksil grubuna bağlandı00 çünkü bu kaymaya atfedilebiliranizotropik etkisiO-galloil kısmı [21]. bu13C NMR verileri (Şekil S20)tahsis edilmiş flavonol glikozidi gösteren 26 rezonans sergiledi. Karbon sinyalleriC'den-200 C-6'ye00 (δC 71.1, 72.7, 68.2, 76.0 ve 60.1) bir galaktozun varlığını önerdiparça. Bu nedenle, bileşiğin yapısı11 kaempferol olduğu onaylandı-3-O- -200 - galloylgalaktosit. Bileşik olmasına rağmen11 daha önce çeşitli kaynaklardan izole edilmiş,içermekD.kaki[21,36], sadece11H NMR ve MS verileri daha önce rapor edilmişti. Böylece,the13C NMR verileri ilk kez bu çalışmada rapor edildi

2.3. İzole Bileşiklerin Antioksidatif Aktiviteleri

İzole edilen tüm bileşikler, hızlı onleme yöntemi kullanılarak antioksidan etkileri açısından değerlendirildi.antioksidana hangi bileşiklerin katkıda bulunduğunu belirlemek için hat HPLC-ABTS analiziTrabzon hurması yapraklarının etkisi. Bileşikler4–8, 11, 13, 15, Ve16 güçlü antioks gösterdiyönlendirici faaliyetler (Şekil4). Bu bileşiklerin çoğu kaempferol ve quercetin idi.türevler, ancak bazı türevler (1–3, 9, 10, 12, Ve14) etkinlik göstermedi. buyapı-etkinlik ilişkisi tam olarak belirlenmemiş ancak kısmen ortaya konulmuştur. İçindeözellikle, quercetin ve kaempferol ile galloil parçaları (7, 8, 11, Ve13) bulundugüçlü aktivitelere sahiptir, ancak kumaroyl veya feruloyl parçalarına sahip olanlar (1–3 Ve16) yapmadıherhangi bir etkinliği gösterin.

Şekil 4.İzole edilmiş bileşiklerin radikal süpürme aktiviteleri (4–8, 11, 13, 15, Ve16) çevrimiçi olarak değerlendirildiHPLC-ABTS testi.

2.4. İzole Bileşiklerin Kantitatif Analizi

EtOAc'de çözünür ekstrakttaki tüm izole bileşiklerin kantitatif analiziTrabzon hurması yapraklarının antioksidan etkilerinin olabileceğini doğrulamak için yapıldı.Bu aktif bileşiklerin neden olduğu Diyot dizisi tespiti ile spesifik bir HPLC yöntemi veeş zamanlı belirleme için evaporatif ışık saçılımı detektörü geliştirilmiştir.27 bileşikten İzole edilmiş tüm triterpenoidlerin içeriği,ekstrakt ve bunlardan siaresinolik asit (25), oleanolik asit (26) ve ursolikasit (27) önceki çalışmalarda bildirildiği gibi önemli bir kısmını oluşturdu [7]. buflavonoidlerin içeriği yaklaşık yüzde 5.4 idi ve bunların aktif bileşiklerinkileryüzde 3,2 idi (Tablo2). Özellikle kaempferolün içeriği-3-O- -200 -galloilgalaktosid(9), kempferol-3-O- -2"-galloylglucoside (10), izoquersitrin (13) ve quercetin-3-O- -2"- galloylglucoside (15) yüzde 0,3'ten fazlaydı. Analitik yöntem, biryeterli gösterilen yöntemin uygunluğunu sağlamak için basit doğrulama prosedürüözgüllük, doğrusallık, doğruluk ve kesinlik.

Daha fazlasını iste:

E-posta:wallence.suen@wecistanche.com Whatsapp artı 86 15292862950