Cistanche Deserticola'nın Toplam Glikositleri, MCAO/R Sıçanlarında Nrf- 2/Keap-1 Yolu Yoluyla Nörovasküler Rejenerasyonu İndükleyerek Nörolojik Fonksiyon İyileşmesini Destekliyor
Feb 27, 2023
Arka plan:
Geleneksel Çin Tıbbı Cistanche Deserticola'nın kardiyovasküler ve serebrovasküler hastalıklar için geçerli olduğu bildirilmiştir. Bununla birlikte, iskemik inmeden korunmaya yönelik aktif bileşenleri net değildir. C. Deserticola'nın iskemik inmeye karşı aktif bileşenlerini ve potansiyel mekanizmalarını keşfetmeyi amaçladık.
Yöntemler:
Orta serebral arter oklüzyon-reperfüzyon (MCAO/R) sıçan modelinde C. Deserticola ekstrelerinin, toplam glikozitlerin (TG'ler), polisakkaritlerin (PS'ler) ve oligosakkaritlerin (OS'ler) beyin koruyucu etkilerini araştırdık. 2, 3, 5-Trifeniltetrazolyum klorür (TTC) boyaması serebral enfarktüs hacmini değerlendirmek için kullanıldı ve kan-beyin bariyeri (BBB) geçirgenliğini değerlendirmek için Evans blue testi benimsendi. Ardından, CD31, a-SMA, PDGFRb, SYN, PSD95, MAP-2, ZO-1, claudin-5, occludin, Keap-1 ve Nrf{{ 13}} western blotlama veya immünofloresan kullanılarak analiz edildi ve MDA, SOD, CAT ve GSH-Px aktiviteleri kitler kullanılarak analiz edildi.
Sonuçlar:
TG tedavisi, model grubuyla karşılaştırıldığında nörolojik eksiklik skorlarını ve enfarktüs hacimlerini önemli ölçüde azalttı, anjiyogenezi ve nöral yeniden şekillenmeyi destekledi ve kan-beyin bariyeri bütünlüğünü etkili bir şekilde korudu. Ayrıca, TG'ler beyinde MDA seviyelerini önemli ölçüde azaltmış ve antioksidan aktiviteleri (SOD, CAT ve GSH-Px) arttırmıştır. Bu arada, TG'ler, Keap-1 ifadesini önemli ölçüde azalttı ve Nrf-2 nükleer yer değiştirmeyi kolaylaştırdı. Aksine, PS ve OS grupları için herhangi bir koruyucu etki gözlemlenmemiştir.
Çözüm:
TG'ler, MCAO/R'nin neden olduğu beyin hasarına karşı C. Deserticola'nın ana aktif bileşenleridir ve koruma esas olarak Nrf-2/Keap-1 yolu yoluyla sağlanır.
TıklamakDoğal Cistanche Deserticola Özü ürünü
GİRİİŞ
Felçler dünyada önemli bir ölüm ve sakatlık nedeni olarak kabul edilmektedir (Donnan ve ark., 2008). Tüm inme vakalarının yaklaşık yüzde 87'si iskemik inme tarafından tetiklenmektedir (Ovbiagele ve Nguyen-Huynh, 2011). Şu anda, iskemik inme tedavisinde kullanılan en etkili ajan ve tek FDA onaylı ilaç, bir rekombinant doku plazminojen aktivatörüdür. Bununla birlikte, dar terapötik zaman penceresi ve ciddi bir hemorajik komplikasyon riski nedeniyle çok sayıda inme hastası bu ilaca yanıt veremez (Lee ve diğerleri, 2012; Schellinger ve Kohrmann, 2014). Trombolitik tedavinin en büyük zorluğu, beyin hasarının ve fonksiyon tahribatının ana nedeni olarak kabul edilen iskemi/reperfüzyon (I/R) hasarıdır. Serebral iskemi sonrası reperfüzyon, beyin kanaması riskini arttırırken nörovasküler hasara yol açar ve kan-beyin bariyerine zarar veren aşırı reaktif oksijen türleri (ROS) üretir (Alluri ve ark., 2015). Birkaç çalışma, BBB'nin bozulmasının iskemik inme patogenezinin ana nedeni olduğunu doğrulamıştır (Cao ve ark., 2016b).
BBB esas olarak endotel hücreleri, perisitler, astrositler, nöronlar ve bazal membranlardan oluşur. BBB'nin temel bileşenleri, sıkı bağlantılarla birleştirilen, böylece eksojen molekülleri beyne sınırlayan serebral mikrovasküler endotelyal hücrelerdir. Sıkı bağlantıların patolojik değişiklikleri—özellikle okludin, claudin-5 ve zonula occludens-1 (ZO-1)—iskemik inme sırasında BBB işlevini, özellikle bariyer geçirgenliğini önemli ölçüde etkiler (Liu et al. diğerleri, 2014; Hu ve diğerleri, 2018; Liu ve diğerleri, 2019). I/R dönemlerinde aşırı ROS, beyin nöronlarının doğrudan hasar görmesine yol açan ana faktörlerden biridir (Ding ve ark., 2014). Aşırı ROS üretimi, belirli bağlantıların bozulmasına ve BBB'nin bozulmasına yol açar, bu da eksojen moleküllerin BBB yoluyla beyne girmesine ve beyin hasarının şiddetlenmesine yol açar (Cheon ve diğerleri, 2016; Zhang QY ve diğerleri, 2017). Bu nedenle, BBB'nin antioksidanlar tarafından korunması, reperfüzyon hasarını önlemenin potansiyel bir yolu olarak görülmüştür.
BBB'nin parçalanmasının yanı sıra, I/R nörovasküler hasara ve nöronal ölüme neden olabilir (Jung ve diğerleri, 2010). İnme sırasında artan nöronal hücre ölümü, oksidatif stresten kaynaklanabilir (Chi ve diğerleri, 2018) ve çok sayıda çalışma, ROS'un felç şiddetini ve nörolojik hasarı şiddetlendirdiğini göstermiştir (Kondo ve diğerleri, 1997; Crack ve diğerleri, 2001; Çatlak ve diğerleri, 2006). Klinik deneyler tatmin edici sonuçlar vermese de nöroproteksiyon, akut iskemik inmenin tedavisi için hala umut verici bir stratejidir (Moretti ve ark., 2015). Bu nedenle, felçleri tedavi etmek için etkili nöroproteksiyon ilaçları bulmak, felçli hastalar için bir faydadır.
Geleneksel Çin tıbbı (TCM), vücudun iç dengesizliğine müdahale etmek için önlemler alır (Gaire, 2018). İskemik inmelerin karmaşık patogenezi nedeniyle, TCM'nin ve aktif bileşenlerinin çok faktörlü etkisi inmelerin tedavisinde kritik bir rol oynar. Moğolistan ve Kuzeybatı Çin'deki kurak veya yarı kurak bölgelerde yaygın olan Cistanche Deserticola YC Ma, Çin'de 1,000 yılı aşkın süredir unutkanlık ve depresyon gibi çeşitli hastalıkların tedavisinde yaygın olarak kullanılan bir GÇT bitkisidir. . Modern farmakolojik çalışmalar, C. Deserticola'dan elde edilen ham ekstraktların, öğrenme ve hafıza işlevini güçlendirme, nöroproteksiyon, bağışıklığı güçlendirme, antioksidan, yaşlanma karşıtı ve yorgunluk önleyici etkiler gibi çok sayıda farmakolojik aktivite gösterdiğini göstermiştir (Ko ve Leung, 2007; Wang ve ark. , 2012; Li ve diğerleri, 2015). C. Deserticola'nın kimyasal analizi, ana bileşenlerinin feniletanoid glikozitler, iridoid glikozitler, polisakkaritler ve oligosakkaritleri içerdiğini göstermiştir (Jiang ve Tu, 2009). Bununla birlikte, beyin koruması için C. Deserticola'nın aktif bileşenleri çok net değildir.
C. Deserticola'nın nöroprotektif özelliği, Alzheimer hastalığının yanı sıra inme ve depresyon gibi bilişsel ilişkili hastalıklarda terapötik potansiyelini ifade eder (Wang ve diğerleri, 2017). Bununla birlikte, C. Deserticola'nın aktif bileşenleri ve etki mekanizmaları da dahil olmak üzere inmeler üzerindeki etkisine ilişkin araştırmalar çok sınırlıdır.
Mevcut çalışmada, C. Deserticola'dan elde edilen üç ekstraktın, toplam glikozitlerin (TG'ler, feniletanoid glikozitler ve diğer glikozitler), polisakkaritlerin (PS'ler) ve oligosakkaritlerin (OS'ler) serebral I/R yaralanmaları üzerindeki koruyucu etkisini araştırdık. Bulgularımız, C. Deserticola'nın doğru klinik uygulamasına katkıda bulunabilir ve iskemik inme tedavisi için aday bir ajan sağlayabilir.
MALZEMELER VE YÖNTEMLER
Kimyasallar ve tepkimeler
Cistanche Deserticola'nın sapları, İç Moğolistan'daki Alashan'dan satın alındı ve yazarlardan biri (P.-F. Tu) tarafından tanımlandı. TG'ler, PS'ler ve OS'ler daha önce bildirilen yöntemimize göre hazırlandı (Gao ve diğerleri, 2015). TG'lerin kantitatif analizi, daha önce açıklandığı gibi (Li ve diğerleri, 2019) yüksek performanslı sıvı kromatografisi (HPLC) ile gerçekleştirildi ve kromatogramı, Şekil 1'de gösterilmektedir. TG'lerin ana bileşenleri, ekinacoside, tubuloside A, acteoside, isoacteoside, ve 2'-asetilakteosid; içerikleri sırasıyla 163,05 mg/g, 4,125 mg/g, 41,66 mg/g, 22,655 mg/g ve 12,045 mg/g'dir. HPLC ve fenol-sülfürik asit analizi ile belirlendiği üzere, sırasıyla PS ve OS içerikleri yüzde 69,42 ve yüzde 65,24'tür (Zhang A. ve diğerleri, 2018; Shi ve diğerleri, 2019).
Echinacoside (A0282), tubuloside A (A0942), acteoside (A0280), isoacteoside (A0281) ve 2'-asetilakteosid (A0943) standart referansları Chengdu Must Biotechnology'den (Sichuan, Çin) satın alınmıştır. Tüm standartların saflıkları yüzde 98'in üzerindedir. Nissl boyama H&E kitleri Boster'dan (Wuhan, Çin) satın alındı. Edaravone (T0407-1), Target Mol'den (Şangay, Çin) satın alındı. Tavşan anti-sıçan MAP-2 (ab32454), Nrf-2 (ab31163), PDGFRb (ab32570), Keap-1 (ab66620) ve fare anti-sıçan CD31 (ab24590) satın alındı Abcam Inc'den (Cambridge, MA, ABD). Tavşan anti-sıçan Claudin5 (BS1069), ZO-1 (BS9802M) ve Occludin (BS72035), Bioworld Technology'den (Nanjing, Çin) satın alındı. Cell Signaling Technology Inc. (Boston, MA, ABD), tavşan anti-sıçan Synapsin-1 (SYN,5297T), PSD95 (3450T), a-Smooth Muscle Actin (a-SMA,19245T) kaynağıydı. GAPDH (HRP{34}}), Proteintech Group, Inc.'den (Chicago, ABD) satın alınmıştır.
Sekonder antikorlar, Zhongshan Golden Bridge Biotechnology (Pekin, Çin) tarafından sağlandı. Hoechst 33258, Beyotime'den (Jiangsu, Çin) temin edildi.
Hayvanlar
Sprague-Dawley fareleri (erkek, 250-300 g ağırlığında) Vital River Laboratuvar Hayvan Teknolojisinden (Pekin, Çin) alındı ve 12 saat aydınlık/karanlık döngüsünde tutulan klimalı bir odaya yerleştirildi. Tüm hayvan deneyleri, hayvan araştırması ARRIVE yönergelerine göre yapıldı (Kilkenny ve diğerleri, 2010; McGrath ve diğerleri, 2010) ve Pekin Üniversitesi Sağlık Bilimleri Merkezi Kurumsal Hayvan Bakımı ve Kullanımı Komitesi (LA2019123) tarafından onaylandı.
Hayvan Deney Protokolleri
Sıçanlar, daha önce açıklandığı gibi (Wang ve diğerleri, 2018) MCAO/R'ye tabi tutuldu. Kısaca, sol ana karotid arter (CCA), eksternal karotid arter (ECA) ve dahili karotid arter (ICA) açığa çıkarıldı ve ECA'dan ICA'nın ortasına ulaşana kadar bir 3-0 naylon monofilament sütür yerleştirildi. serebral arter (MCA). 1.5 saatlik MCA oklüzyonundan sonra filament çıkarılarak reperfüzyon simüle edildi. Cerrahi işlem sırasında tüm sıçanların vücut ısısı 37.0 derecede tutuldu.
İlaç İdaresi
Sıçanlar, açıklandığı gibi (Jiang ve diğerleri, 2014) SPSS yazılımı sürüm 22. 0 kullanılarak rastgele altı gruba ayrıldı: normal grup (NOR); model grubu (MOD); edaravon grubu (pozitif ilaç, 6 mL/kg, EDI); TG grubu (280 mg/kg, TG'ler); PS grubu (280 mg/kg, PS) ve OS grubu (280 mg/kg, OS) TG'ler, PS'ler ve OS'ler, 14 gün boyunca MCAO/R'den sonra günde bir kez uygulandı. NOR ve MOD grupları normal salinle tedavi edildi. Hayvan sayıları Tablo 1'de gösterilmiştir.
Ağırlık ve Modifiye Nörolojik Eksiklik Skorlarının (NSS) Ölçümü
Vücut ağırlığı, 14. günde bir ADVENTURE™ Dijital Tartı (OHAUS, New Jersey, ABD) kullanılarak izlendi. Kitle, FJ Wang'ın (Wang ve ark. 2018) tarif ettiği yönteme göre küçük revizyonlarla değerlendirildi.
2, 3, 5-Trifeniltetrazolyum Klorür (TTC) Boyama
Enfarktüs hacmi daha önce açıklandığı gibi ölçüldü (Wang ve diğerleri, 2015). Kısaca, beyinler eşit aralıklı yedi koronal bloğa (2 mm) bölündü. Bu kesitler %2 TTC (Coolaber, Beijing, China) ile 37 derecede 15 dakika boyandı. Enfarktüs hacmi (yüzde)=(ipsilateral iskemik hemisfer hacmi -kontralateral iskemik hemisfer hacmi)/kontralateral iskemik hemisfer hacmi × 100.
Nissl ve H&E Boyama
Sıçanlara derin anestezi uygulandı ve ardından tüm beyin hızla kafatasından çıkarıldı ve yüzde 4 paraformaldehit kullanılarak sabitlendi ve parafin mumuna gömüldü ve 7 um kalınlığında dilimler halinde kesildi. Kesitler Nissl ve H&E ile boyandı. Bu çalışmada, ışık mikroskobu ile her doku örneğinde altı rastgele 200 × 200 µm alan yakalandı. Nissl'in cesetlerinin sayısı, IPP yazılımı sürüm 6.0 (Media Cybernetics, Bethesda, ABD) ile sayıldı.
Evans Mavi Testi
Sıçanlara MCAO/R'den sonra yüzde 2 EB (Coolaber Science & Technology Co., LTD) enjekte edildi. İki saat sonra, sıçanlara anestezi uygulandı ve ardından tüm beyin hızla çıkarıldı ve aseton içinde homojenleştirildi. Süpernatanlar, bir 800 TS absorbans okuyucu (BioTek, ABD) tarafından 620 nm'de analiz edildi.
Katalaz (CAT), Süperoksit Dismutaz (SOD), Malondialdehit (MDA) ve Glutatyon Peroksidaz (GSH-Px) Aktivitelerinin Ölçümü
Tüm serum numuneleri 4,000 x rpm'de 15 dakika 4 derecede santrifüjlendi ve ardından üreticinin talimatları izlenerek MDA, CAT, SOD ve GSH-Px aktivitelerini saptamak için analiz edildi (Jiangsu Meimian Industrial Co., Ltd, Çin).
Western Blot Analizi
Her sıçandan toplanan beyin dokuları (100 mg) homojenleştirildi ve RIPA parçalama tamponunda parçalandı ve ardından bir BCA kiti (Beijing TransGen Biotech Co., Ltd.) kullanılarak protein konsantrasyonunu saptamak için analiz edildi. Doku toplam proteinleri, yüzde 10 SDS-PAGE jellerine yüklendi ve bir nitroselüloz zara aktarıldı. Zar, yüzde 5 yağsız süt kullanılarak bloke edildi, ardından gece boyunca 4 derecede birincil antikorlarla inkübe edildi. Membran daha sonra ikincil bir antikorla inkübe edildi. Western blot analizi, Kodak Dijital Görüntüleme Sistemi (5200 Multi, Tanon, Çin) kullanılarak analiz edildi.
İmmünofloresan Analizi
CD31, a-SMA, ZO-1, claudin5, oklüdin, PDGFRb, SYN, PSD95, MAP-2, Nrf-2 ve Keap-1 için immünofloresan boyama yapıldı. Nrf-2, CD31, a-SMA, ZO-1, claudin5, okludin, PDGFRb, SYN, PSD95, MAP-2 ve Keap-1'e karşı birincil antikorlar 1'e seyreltildi :200 ve 1:100, sırasıyla. Alexa Flur 488 fare anti-tavşan IgG'sinin ve rodamin (TRITC) keçi anti-tavşan IgG'sinin ikincil antikorlarının her ikisi de 1:200'e seyreltildi. Çekirdekler, Hoechst 33258 ile boyandı. Görüntüler, Vectra® Polaris™ Otomatik Kantitatif Patoloji Görüntüleme Sistemi (PerkinElmer, ABD) kullanılarak alındı. Protein ifadesi, IPP yazılımı sürüm 6.0 kullanılarak analiz edildi.
İstatistiksel analiz
Tüm veriler ortalama ± SD olarak tanımlandı. İstatistiksel analiz için SPSS yazılımı sürüm 22.0 yapıldı. Farklı grupları karşılaştırırken tek yönlü ANOVA kullanıldı. P < 0.05, istatistiksel fark olarak kabul edildi.
SONUÇLAR
TG'ler MCAO/R Sıçanlarında Vücut Ağırlığını Artırır ve Beyin Hasarlarını Azaltır
TG'ler, PS'ler, Oss ve EDI ile 14 günlük tedaviden sonra, I/R sıçanlarının vücut ağırlıkları, nörolojik kusurları ve enfarktüs hacimleri değerlendirildi. Sonuçlar, MOD grubundaki vücut ağırlıklarının büyük ölçüde azaldığını, TG'ler, PS'ler ve EDI gruplarında azalan ağırlıkların arttığını gösterdi (Şekil 2A). Nörolojik eksiklik puanları, EDI ve TG'ler tarafından önemli ölçüde düşürüldü (Şekil 2B). NOR grubu farelerde beyin dilimleri koyu kırmızıydı ve enfarktüs yoktu, MOD grubu farelerinde ise ipsilateral geniş bir serebral enfarktüs görüldü. TG tedavisinden sonra enfarktüs hacimleri önemli ölçüde azaldı (Şekil 2C, D). PS'ler ve OS'ler tedavisi, yukarıdaki indeksler üzerinde bariz bir etki göstermedi. Yukarıdaki veriler, TG'lerin I/R'nin neden olduğu serebral hasarı önemli ölçüde azaltabildiğini, ancak PS'ler ve OS'lerin yapamadığını gösterdi.
TG'ler, MCAO/R Sıçanlarında Histopatolojik Hasarı İyileştiriyor
TG'lerin, PS'lerin ve OS'lerin tedavisinin histopatolojik hasar üzerindeki bazı etkilerini belirlemek için, patolojik hasarı ortaya çıkarmak için H&E boyaması yapıldı. NOR grubundaki beyinlerin histomorfolojik yapıları düzenli olarak düzenlendi. TG gruplarındaki morfoloji değişiklikleri, MOD grubundakilerden daha hafifti. Bununla birlikte, PS'ler ve OS'ler tedavi grupları, morfoloji değişikliklerinde önemli bir iyileşme göstermedi (Şekil 3).
TG'ler, I/R'nin Uyarıldığı Sıçanlardan Sonra Nöronal Hasarı Hafifletiyor
Nissl boyama, iskemik bölgenin penumbrasındaki nöronların histopatolojik değişikliklerini gösterdi. Şekil 4'te gösterildiği gibi, normal nöronlar net bir nükleolusa ve bozulmamış bir yapıya sahipti. MOD grubunda, nöronlar genişlemiş hücreler arası boşluklara sahipti. Güzel bedenler kayboldu, küçüldü ve derinden lekelendi. Ancak, bu değişiklikler EDI, TG'ler ve PS'ler gruplarında nadiren gözlendi. Bu sonuçlar, TG'lerin ve PS'lerin iskemi/reperfüzyon kaynaklı nöronal hasarı önemli ölçüde azaltabileceğini gösterdi.
TG'ler, I/RT ile Tedavi Edilen Sıçanlardan Sonra BBB Bozulmasını Azaltır
Evans mavisi testi, BBB geçirgenliğinin değişimini araştırmak için klasik bir yöntemdir. Deney sonuçları, MOD grubunda Evans mavisinde artış gözlenirken, TG'lerde ve EDI ile tedavi edilen sıçanlarda Evans mavisinde önemli ölçüde azalma olduğunu gösterdi. Ayrıca, PS'ler ve OS terapi grupları arasında anlamlı bir fark yoktu (Şekil 5). Bu sonuçlar, TG'lerin BBB bozulmasını önemli ölçüde azaltabileceğini gösterdi.
TG'ler, I/R Yaralı Sıçanlarda Anjiyogenezi Teşvik Eder
Daha yeni çalışmalar, anjiyogenezin akut iskemik inme sonrası nörolojik fonksiyonel iyileşme ve prognostik sonuçlarda kritik bir rol oynadığını göstermektedir (Yuen ve ark., 2015). TG'lerin, PS'lerin ve OS'lerin anjiyogenez üzerindeki etkilerini değerlendirmek için kapiller sayılarını ölçmek için CD31 ve a-SMA kullanıldı. İmmünofloresan boyama, MOD grubunun I/R sıçanlarının iskemik bölgelerinin penumbrasında CD31 (Şekil 6A, B) ve aSMA (Şekil 6C, D) ifadelerinde normal farelere kıyasla belirgin bir azalmaya neden olduğunu gösterdi. Bu sonuç, I/R'nin iskemik hemisferlerin korteks penumbrasında vasküler hasara neden olabileceğini gösterdi. Bununla birlikte, TG'ler ve EDI tedavisi, artan CD31 ve a-SMA ifadelerinin gösterdiği gibi, kılcal yoğunluğu, anjiyojenezi ve arteriyogenezi önemli ölçüde artırdı. Bu sonuçlar, TG'lerin I/R sıçanlarının iskemik penumbrasında anjiyogenezi destekleyebileceğini ancak PS'lerin ve OS'lerin bunu yapamayacağını göstermektedir.
TG'ler, I/R Yaralanmış Sıçanlarda Sıkı Bağlantı Proteinlerinin İfadesini Artırır
BBB bozulması, beyin su içeriğini ve doku şişmesini yükselterek beyin hasarına yol açabilir. Sıkı bağlantı proteinleri, BBB'nin önemli yapısal bileşenleridir (Tenreiro ve diğerleri, 2016; Jiang ve diğerleri, 2018). İnmeden sonra TG'lerin, PS'lerin ve OS'lerin tedavisinin BBB bütünlüğünü etkileyip etkilemediğini test etmek için ZO-1, claudin-5 ve oklüdin ifadeleri, immünofloresan analizi ile gerçekleştirildi. Sonuçlar, MOD grubunda claudin-5, okludin ve ZO-1 ifadelerinin gözle görülür şekilde azaldığını gösterdi. Ancak, uygulamadan 14 gün sonra önemli ölçüde arttı. PS'ler ve OS'ler grupları, bu protein ifadelerinde önemli bir değişiklik göstermedi (Şekil 7). Bu veriler, TG'lerin sıkı bağlantı protein ifadelerini düzenleyebileceğini ve I/R yaralanmasından sonra BBB bütünlüğünü koruyabileceğini gösterdi.
TG'ler, I/R Yaralı Sıçanlarda Kılcal Damarlardaki Perisit Kapsamını Artırır
Kılcal damarlardaki perisit kaplama, KBB bütünlüğünün korunmasında kritik bir rol oynar (Armulik ve diğerleri, 2010; Daneman ve diğerleri, 2010). Bu nedenle, perisit kapsamının TG'ler, PS'ler ve OS tedavisi ile artırılıp artırılamayacağını test ettik. İmmünofloresan yoğunluk analizi sonuçları, MOD grubunda hem PDGFRb hem de CD31 ekspresyonlarının önemli ölçüde azaldığını gösterdi. TG'lerin I/R farelerine uygulanması, PDGFRb ve CD31'in ekspresyon yoğunluklarını önemli ölçüde iyileştirdi ve hatta arttırdı, ancak PS'ler ve OS'ler tedavi gruplarında hiçbir fark gözlenmedi (Şekil 8). Bu nedenle, TG'lerin tedavisi, perisit kapsamını önemli ölçüde artırabilir. Bu bulgular ayrıca, TG'lerin I/R'den sonra BBB'nin bütünlüğünü koruyabildiğini doğruladı.
TG'ler, I/R Yaralı Sıçanlarda Nöral Yeniden Modellemeyi Teşvik Eder
Çok sayıda araştırmaya göre, inme sonrası nörogenez, fonksiyonel iyileşmeyi önemli ölçüde artırabilir (Grefkes ve Ward, 2014; Zhang ve diğerleri, 2019). Sinaptofizin (SYN), postsinaptik yoğunluk 95 (PSD-95) proteinleri ve mikrotübülle ilişkili protein 2 (MAP-2), korteksin iskemik penumbrasındaki nöronal plastisiteyi incelemek için belirteçler olarak kullanıldı. TG'lerin, PS'lerin ve OS'lerin I/R ile yaralanmış sıçanlarda nörojenez üzerindeki etkilerini değerlendirmek için SYN, PSD95 ve MAP-2 ifadeleri için immünofloresan ve western blot yapıldı. Şekil 9 ve 10'da gösterildiği gibi, 14 günlük reperfüzyondan sonra I/R farelerinde SYN, PSD95 ve MAP-2 ekspresyon seviyeleri, NOR farelerine kıyasla azalırken, TG'ler ve PS'lerin iyileşmesi önemli ölçüde artabilir. ifade seviyelerini düzenler. OS grubu, MOD grubu ile karşılaştırıldığında anlamlı bir değişiklik göstermedi. Veriler, TG'lerin ve PS'lerin tedavisinin, I/R yaralanmasından sonra nöral yeniden şekillenmeyi önemli ölçüde destekleyebildiğini gösterdi.
TG'ler I/R Yaralanmış Sıçanlarda Nrf-2'i Değiştirir ve-1 Keap İfadelerini Değiştirir
Oksidatif stres, I/R yaralanmasındaki ana patojenik mekanizmadır (Ya ve ark., 2018; Yu ve ark., 2018). Çalışmalar, Nrf-2'nin antioksidan tepkilerin ana düzenleyicisi olduğunu doğruladı (Thompson ve diğerleri, 2015). I/R yaralanmasından sonra Nrf-2 ve Keap-1 aracılı oksidatif tepkileri araştırmak için, Keap-1'nin nükleer translokasyonunun yanı sıra sitoplazmik ifadesini de değerlendirdik. Bu arada, I/R ile yaralanmış farelerin beyin dokularında Nrf-2 ifadesi de test edildi (Şekil 10 ve 11). İmmünofloresan analizine göre, Nrf-2'nin esas olarak NOR grubundaki sitoplazmada yer aldığı bulundu. TGs grubunda, Nrf-2'nin sitoplazmik lokalizasyondaki ifadesi, çekirdekte aşağı, ancak yukarı doğru düzenlenmişti ve Keap-1 ifadesinin de azaldığı gözlendi. Veriler, TG'lerin beyin korumasının Nrf-2 ve Keap-1 modülasyonu ile ilişkilendirilebileceğini gösterdi.
TG'ler, I/R Yaralı Sıçanlarda Beyin Dokusu Oksidatif Stresini Azaltır
TG'lerin antioksidan etkilerini doğrulamak için, I/R ile yaralanmış sıçanlarda SOD, CAT, GSH-Px ve MDA aktiviteleri değerlendirildi. Şekil 12'de, normal sıçanlara kıyasla MOD grubunda MDA içeriği belirgin şekilde artmış ve aynı zamanda SOD, CAT ve GSH-Px aktiviteleri azalmıştır. Tersine, TG tedavisi MDA içeriğinde önemli bir azalmaya ve SOD, CAT ve GSH-Px aktivitelerinde bir artışa yol açtı. Bu sonuçlar ayrıca TG'lerin antioksidasyon aktivitesini doğruladı.
TARTIŞMA
Pek çok çalışma, TCM C. Deserticola'nın öğrenme, hafıza ve bağışıklığı güçlendirme gibi kapsamlı biyolojik aktivitelere sahip olduğunu öne sürmektedir (Dong ve diğerleri, 2007; Jiang ve Tu, 2009; Wang ve diğerleri, 2017; Xia ve diğerleri, 2018). Bununla birlikte, nöroproteksiyon için C. Deserticola'nın aktif bileşenleri belirsizliğini koruyor. Mevcut çalışma, MCAO/R modelinde iskemik inmeye karşı C. Deserticola'nın aktif bileşenlerini taramayı amaçlamaktadır. C. Deserticola'dan (TG'ler, PS'ler ve OS'ler) üç ekstrakt, bunların MCAO/R fareleri üzerindeki etkilerinin yanı sıra olası mekanizmaları değerlendirmek için kullanıldı. İnme yaygın bir akut serebrovasküler hastalıktır. Epidemiyolojik araştırmalar inmenin erkeklerde kadınlara göre daha yaygın olduğunu göstermektedir (Sealy-Jefferson ve ark. 2012; Guzik ve Bushnell, 2017).
Bu nedenle deneyimizde testler için erkek sıçanlar benimsendi. Sonuçlarımız, I/R indüksiyonunun oksidatif stresi ve enfarktüs hacmini hızlandırdığını, BBB'yi kırdığını ve sinir ve serebrovasküler yaralanmaya yol açtığını kanıtladı. Taramadan sonra, TG'lerin enfarktüs hacmini azalttığı ve nöral yeniden şekillenmeyi ve anjiyogenezi desteklediği bulundu. Ayrıca, TG'lerin I/R yaralanmasından sonra BBB bütünlüğünü koruduğu gözlendi. Aksine, PS'ler ve OS'ler, I/R yaralanmasını önemli ölçüde azaltmaz. Bu nedenle, TG'ler, potansiyel olarak Nrf2/Keap-1 yolunu aktive ederek nöral yeniden modellemeyi, anjiyogenezi ve BBB bütünlüğünü teşvik ederek nöroproteksiyon için C. Deserticola'nın ana aktif fraksiyonu olarak kabul edilir.
Artan kanıtlar, etkili kollateral dolaşımın kurulmasının, enfarktüs ve iskemik penumbra oluşumunu önlemek için önemli ölçüde önemli olduğunu ve iskemik inmenin erken bir aşamasında kritik bir tedavi olduğunu göstermektedir (ElAli, 2016; Iwasawa ve ark., 2016). İskemik enfarktüs sonrası vasküler endotel hücrelerinin ve düz kas hücrelerinin çoğalması, kollateral dolaşımın kurulmasını belirler.
Bununla birlikte, iskemi modellerinin ortak bir fenomeni vardır; yani, beyin mikro damarlarında yaygın olarak bulunan oksidatif stres. Çalışma verileri, çok sayıda antioksidanın BBB'nin işlevini ve anjiyogenezin özelliklerini bozabileceğini göstermiştir (Mentor ve Fisher, 2017). CD31 ve a-SMA, sırasıyla vasküler endotel hücrelerinin ve düz kas hücrelerinin belirteçleridir (Saboor ve diğerleri, 2016). C. Deserticola ekstraktlarının yukarıda belirtilen hücre proliferasyonunun etkisini araştırmak için serebral iskemik penumbra homojenatındaki CD31 ve a-SMA ifadelerini inceledik. Verilerimiz, TG'lerin CD31 ve a-SMA'nın ifadelerini çarpıcı bir şekilde geliştirdiğini gösterdi. Ancak, PS'ler ve OS grupları arasında anlamlı bir fark yoktu. Bu nedenle, TG'lerin CD31 ve a-SMA'nın ifadelerini artırarak anjiyogenezi teşvik ederek beyin hasarını azaltabileceği, oysa PS'ler ve OS'lerin beyin hasarına karşı böyle bir koruma sağlamadığı sonucuna vardık. Bu sonuçlar ayrıca, yalnızca TG'lerin serebral I/R hasarını önleyebileceğini doğruladı.
İskemik inme, nöronal plastisitedeki bozulma veya beyin alanlarının yeniden şekillenmesinden kaynaklanan serebral iskeminin bir sonucu olarak düşünülebilir. İnme hastalarının çoğu nörolojik defisitlerden muzdariptir. Nörojenezi aktive etmek, felçli hastaların nörolojik fonksiyonlarını iyileştirmeleri için umut verici bir stratejidir (Cramer ve Chopp, 2000). Nörogenez, beyin I/R hasarından sonra nörolojik fonksiyon iyileşmesine doğrudan katılır (Zhang ve diğerleri, 2019). Önceki araştırmalar, TG'lerin hipokampal piramidal hücrelerin hayatta kalma oranını iyileştirebileceğini ve nörojenezi indükleyebileceğini göstermektedir (Lian ve diğerleri, 2017). Oksidatif stres, Parkinson, inme ve benzeri birçok hastalık sırasında nöronların kaybına neden olur (Duan ve Si, 2019; Singh ve ark., 2019). Nrf-2, başta SOD, MDA, CAT ve glutamil sistein ligazlar, vb. dahil olmak üzere promotör bölgelerinde nöro-koruma ile ilgili birçok geni kopyalar (Satoh ve diğerleri, 2006). Sinaptik oluşum ve nörotransmisyon ile yakından ilişkili olan SYN, PSD-95 ve MAP-2 proteinleri, iskemik penumbra bölgesindeki araştırma nöronal plastisitesinin belirteçleri olarak kabul edilebilir. Çalıştıktan sonra, TG'lerle tedavinin PSD95, SYN ve MAP-2 ifadelerini önemli ölçüde artırabildiğini bulduk; bu da, TG'lerin serebral korumasının I/R sırasında gelişmiş nöronal plastisite ile ilişkili olduğunu gösterir. Ancak, PS'ler ile OS grupları arasında bariz bir fark olmaması üzücü. Bu sonuçlar, TG'lerin serebral I/R hasarından sonra nöroplastisiteyi artırabileceğini gösterdi.
Felç hastalarında yapılan görüntüleme araştırmaları, BBB disfonksiyonunun periskemik beynin çarpıcı bir özelliği olarak düşünülebileceğini göstermiştir (Bang ve diğerleri, 2007). Sitoplazmik proteinler, transmembran proteinler ve kılcal endotel hücreleri arasındaki bağlantı adezyon moleküllerinden oluşan TJ'ler, BBB bütünlüğünün korunmasında çok önemlidir (Ye ve diğerleri, 2019). Bunlar arasında ZO-1, claudin-5 ve okludin, TJ'lerdeki en önemli proteinlerdir. Artan kanıtlar, iskeminin neden olduğu KBB geçirgenliğinin artmasının genellikle ZO-1, claudin-5 ve okludin değişiklikleriyle ilişkili olduğunu göstermektedir (Cao ve diğerleri, 2016a; Page ve diğerleri, 2016; Yu ve diğerleri, 2017; Liu ve diğerleri, 2018).
Bu çalışmada sonuçlar, TG'lerin MCAO ile indüklenen beyin dokularında ZO-1, claudin-5 ve oklüdin proteinlerinin ifadelerini önemli ölçüde artırabilmesine rağmen, ne PS'lerin ne de OS'lerin bunu yapmadığını gösterdi. BBB, serebral endotel hücrelerinden oluşur ve perisitlerle yakından ilişkilidir (Nyul-Toth ve diğerleri, 2016). Perisitler, BBB bütünlüğü için hayati öneme sahiptir (Bell ve diğerleri, 2010). İskemik inme akut fazda perisit ölümünü ve beyin endotel hücrelerinden ayrılmayı tetikleyerek mikrovaskülatürün dengesini bozar ve KBB özelliklerini değiştirir (Zechariah ve ark., 2013). Verilerimiz, TG'lerin kılcal damarlardaki perisit kapsamını artırabileceğini ve ZO-1, claudin-5 ve oklüdin ifade düzeylerini artırabileceğini gösterdi. Bu fenomenler, TG'lerin serebral I/R yaralanmasından sonra BBB bütünlüğünü etkili bir şekilde koruyabileceğini kanıtladı. Özet olarak, TG'ler, anjiyogenezi teşvik etmek, nöronal plastisiteyi geliştirmek ve BBB'nin bütünlüğünü korumak gibi birçok yolla serebral hasarı azaltabilir.
Ardından, TG'nin beyin korumasının altında yatan mekanizmayı keşfetmek için sinyal yolunu araştırdık. İ/R hasarı süreci çok faktörlüdür ve bu nedenle patogenezde çok sayıda mekanizma yer alır. Oksidatif stres, BBB yapı hasarı, vasküler endotel disfonksiyonu ve iskemik nöronal hasarın şiddetlenmesi gibi I/R kaynaklı beyin hasarına (Suda ve ark., 2013) katkıda bulunan temel bir risk faktörüdür (Xiong ve ark., 2015; Çağlayan ve diğerleri, 2019; Priestley ve diğerleri, 2019).
Böylece oksidatif stres, I/R kaynaklı beyin hasarında çekici bir terapötik hedef haline gelmiştir. E2-ilgili faktör-2 (Nrf-2) tarafından aracılık edilen Faz 2 enzimleri, nöronların kendilerini oksidatif strese karşı korudukları önemli bir araç olarak kabul edilmiştir (Suzuki ve Yamamoto , 2015; Ya ve diğerleri, 2018). Artan kanıtlar, I/R sırasında Nrf-2 aktivasyonunun nöroproteksiyon için potansiyel bir terapötik hedef olduğunu göstermektedir (Ding ve diğerleri, 2015; Zhang R. ve diğerleri, 2017). Endojen antioksidan savunmanın önemli bir düzenleyicisi olan Nrf-2, heme oksijenaz 1 (HO-1) ve NAD(P)H kinon oksidoredüktaz 1 (NQO1) gibi diğer antioksidan enzimlerin düzeyine aracılık eder, SOD, CAT, GSH ve MDA (Siow ve diğerleri, 2007; Ding ve diğerleri, 2014). Ayrıca Nrf-2, anjiyogenezde önemli bir düzenleyici rol oynar. Mevcut çalışma, Nrf-2'in vasküler gelişim sürecinde önemli ölçüde artırılabileceğini ve etkinleştirilebileceğini göstermektedir (Wei ve diğerleri, 2013).
Daha önce açıklandığı gibi (Jiang ve Tu, 2009), TG'ler, örneğin ekinakozit, tübülosid A, akteozid, izoakteosid ve 2'-asetilakteosid gibi çok sayıda biyoaktif bileşik içerir ve bunların bazıları serebral I/R hasarından sonra nöroprotektif işlevler gösterir ( Peng ve diğerleri, 2016). Echinacoside, antioksidasyon, anti-yaşlanma, nöroproteksiyon, anti-inflamasyon, sikatrizasyonun teşviki, hepatoproteksiyon, kemik oluşumunun teşviki ve anti-tümör aktiviteleri gibi pek çok farmakolojik etkiye sahiptir (Yu ve diğerleri, 2016; Li ve diğerleri, 2018; Zhang Y. ve diğerleri, 2018; Ji ve diğerleri, 2019; Xu ve diğerleri, 2019).
Son zamanlarda ekinacoside, merkezi sinir sisteminde güçlü bir antioksidan olarak tanımlanmıştır (Lu ve diğerleri, 2016). Echinacoside, iskemi beyin hasarında MDA içeriğini azaltabilir ve SOD ve GSHPx aktivitelerini iyileştirebilir ve moleküler yerleştirme analizi, echinacoside'ın Keap-1'e bağlanarak Nrf-2 nükleer translokasyonuna yol açabileceğini gösterdi (Li et al., 2018). Xia çalışması, acteoside'nin oksidatif stresi hafifleterek MCAO/R farelerinde nörolojik eksiklikleri iyileştirmek için enfarktüs hacmini ve beyin suyu içeriğini azaltabileceğini gösterdi (Xia ve diğerleri, 2018). Diğer çalışmalar, izoakteozidin H2O2-işlenmiş V79-4 hücrelerde hücresel antioksidan enzimler, SOD ve CAT aktivitelerini artırabileceğini göstermiştir (Chae ve diğerleri, 2005). TG'lerde bulunan aktif bileşiklerin yukarıdaki raporlarına dayanarak, TG'lerin antioksidasyon yolları yoluyla iskemik inmeye karşı koruma sağlayabileceği sonucuna varmak mümkündür.
Feniletanoid glikozitlerin (PhG'ler), Nrf2/ARE yolu aracılığıyla PC12 hücrelerinde H2O2-indüklü apoptoz üzerindeki nöroprotektif etkilerini bildirdim (Li ve diğerleri, 2018). Bu PhG'ler, Nrf2 nükleer translokasyonunu tetikleyerek ve HO-1, NQO1, glutamat-sistein ligaz katalitik alt birimi (GCLC) ve glutamat-sistein ligaz değiştirici alt birimi (GCLM) ifadelerini artırarak önemli ölçüde bastırıldı (Li ve diğerleri, 2018) ; Gong ve diğerleri, 2019).
Bu nedenle, bu bulgular, Nrf-2/ARE yolunun, nöronal hücreler üzerinde PhG'lerin aracılık ettiği koruyucu etkilerde çok önemli bir rol oynadığını göstermektedir. Benzer şekilde, bu çalışmada, TG'lerin I/R sıçanlarında MDA seviyesini azaltabildiğini ve SOD, CAT ve GSH-Px seviyelerini artırabildiğini bulduk. Bu arada TG'ler, çekirdekteki Nrf2 ifadesini yukarı doğru düzenleyebilir, sitoplazmada karşılık gelen ifadeyi aşağı doğru düzenleyebilir ve Keap-1 ifadesini önemli ölçüde azaltabilir. Bu nedenle, Nrf-2/Keap-1 yolu, TG aracılı nöroprotektif etkilerde yer alabilir. Bu yolun daha fazla doğrulanması, gelecekte oksijen-glukoz yoksunluğu/reoksijenasyon yaralanma modelleri ile in vitro hücre kültürü ile gerçekleştirilecektir. Ayrıca çalışmamızda C. Deserticola ekstreleri 14 gün aralıksız olarak uygulanmıştır. Yetişkin nörojenezi, 14 günlük reperfüzyon sırasında nöroprotektif etkilerin yorumlanmasını etkileyeceğinden, nörojenez, CT'lerin nöroprotektif etkisini araştırırken mevcut deney tasarımımızın dışında tutulamaz. Bu araştırmamızın kısıtlılığıdır.
Sonuç olarak, anjiyogenezi ve nörojenezi artırabilen ve ayrıca I/R yaralanması sıçanlarında BBB'nin bütünlüğünü koruyabilen, ancak PS'ler ve OS'ler değil, C. Deserticola'dan elde edilen TG'lerdir. Etkilere, Nrf-2/Keap-1 yolunun etkinleştirilmesi aracılık edebilir.
VERİ KULLANILABİLİRLİK BEYANI
Bu makalenin sonuçlarını destekleyen ham veriler, herhangi bir kalifiye araştırmacıya gereksiz bir çekince olmaksızın yazarlar tarafından sağlanacaktır.
ETİK BEYANI
Bu çalışma, Pekin Üniversitesi Hayvan Deneyleri Yönergesine göre gerçekleştirilmiştir. Çalışma protokolleri, Pekin Üniversitesi Sağlık Bilimleri Merkezi'ndeki (LA2019123) Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Kurulu tarafından onaylandı.
YAZAR KATKILARI
Araştırmayı YJ, KZ ve PT tasarladı. FW araştırmayı gerçekleştirdi. FW ve RL verileri analiz etti. FW, RL ve JC el yazmasını ve HPLC analizini yazdı. JC, KZ, YJ ve PT taslağı revize etti.
FİNANSMAN
Bu çalışma, Ulusal Anahtar Araştırma ve Geliştirme Projesi (2017YFC1702400, 2019YFC1711000), Çin Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı (81773932) ve Çin Ulusal Anahtar Teknoloji Ar-Ge Programı " Yeni İlaç İnovasyonu " (2018ZX09711001-008-003 tarafından desteklenmiştir. ).
REFERANSLAR
Alluri, H., Anasooya Shaji, C., Davis, ML ve Tharakan, B. (2015). Kan-beyin bariyeri işlev bozukluğunu incelemek için bir in vitro iskemi-reperfüzyon yaralanma modeli olarak oksijen glukoz yoksunluğu ve reoksijenasyon. J.Vis. Tecrübe. 99, e52699. doi: 10.3791/52699
Armulik, A., Genove, G., Mae, M., Nişancıoğlu, MH, Wallgard, E., Niaudet, C., et al. (2010). Perisitler kan-beyin bariyerini düzenler. Doğa 468 (7323), 557–561. doi: 10.1038/nature09522
Bang, OY, Buck, BH, Saver, JL, Alger, JR, Yoon, SR, Starkman, S., ve diğerleri. (2007). T2* geçirgenlik manyetik rezonans görüntüleme kullanılarak rekanalizasyon tedavisinden sonra hemorajik transformasyonun tahmini. Ann. Nörol. 62 (2), 170– 176. doi: 10.1002/ana.21174
Bell, RD, Winkler, EA, Sagare, AP, Singh, I., LaRue, B., Deane, R., ve diğerleri. (2010). Perisitler, yetişkin beyninde ve beyin yaşlanması sırasında anahtar nörovasküler fonksiyonları ve nöronal fenotipleri kontrol eder. Nöron 68 (3), 409–427. doi: 10.1016/j.neuron.2010.09.043
Çağlayan, B., Kılıç, E., Dalay, A., Altunay, S., Tuzcu, M., Erten, F., et al. (2019). Alil izotiyosiyanat, farelerde travmatik beyin hasarında Nrf2/HO-1 ve NF-kappaB yollarını modüle ederek oksidatif stresi ve iltihabı hafifletir. Mol. Biol. 46 (1), 241–250. doi: 10.1007/s11033-018-4465-4
Cao, G., Jiang, N., Hu, Y., Zhang, Y., Wang, G., Yin, M., ve diğerleri. (2016a). Ruscogenin, TXNIP/NLRP3 enflamatuar aktivasyonunu ve MAPK yolunu baskılayarak serebral iskemi kaynaklı kan-beyin bariyeri disfonksiyonunu azaltır. uluslararası J. Mol. bilim 17 (9), 1–17. doi: 10.3390/ijms17091418
Cao, G., Ye, X., Xu, Y., Yin, M., Chen, H., Kou, J., ve diğerleri. (2016b). YiQiFuMai toz enjeksiyonu, farelerde fokal serebral iskemi-reperfüzyon hasarından sonra kan-beyin bariyeri işlev bozukluğunu ve beyin ödemini iyileştirir. İlaç Des. Dev. orada 10, 315–325. doi: 10.2147/dddt.S96818
Chae, S., Kim, JS, Kang, KA, Bu, HD, Lee, Y., Seo, YR, ve diğerleri. (2005). Clerodendron trichotomum'dan izoacteoside'nin antioksidan aktivitesi. J. Toksikol. çevre. Sağlık A 68 (5), 389–400. doi: 10.1080/15287390590900750
Cheon, SY, Cho, KJ, Kim, SY, Kam, EH, Lee, JE ve Koo, BN (2016). Apoptoz sinyal düzenleyici kinaz 1'in blokajı, beyin endotel hücrelerinde matris metaloproteinaz 9 aktivitesini ve iskemik yaralanmadan sonra nöronlarda müteakip apoptozu zayıflatır. Ön. Hücre Sinir Bilimi. 10, 213. doi: 10.3389/fncel.2016.00213
Chi, H., Chang, HY ve Sang, TK (2018). Başlıca nörodejeneratif hastalıklarda nöronal hücre ölüm mekanizmaları. uluslararası J. Mol. bilim 19 (10), 1–18. doi: 10.3390/ ijms19103082
Crack, PJ, Taylor, JM, Flentjar, NJ, de Haan, J., Hertzog, P., Iannello, RC, ve diğerleri. (2001). İskemi/reperfüzyon hasarına yanıt olarak glutatyon peroksidaz-1 (Gpx-1) devre dışı bırakılmış fare beyninde artan enfarktüs boyutu ve şiddetlenen apoptoz. J. Neurochem. 78 (6), 1389–1399. doi: 10.1046/j.1471- 4159.2001.00535.x
Crack, PJ, Taylor, JM, Ali, U., Mansell, A. ve Hertzog, PJ (2006). NF-kappaB'nin, iskemi-reperfüzyon hasarına yanıt olarak glutatyon peroksidaz-1 devre dışı bırakılmış farede nöronal hücre ölümündeki potansiyel katkısı. İnme 37 (6), 1533–1538. doi: 10.1161/01.Str.0000221708.17159.64
Cramer, SC ve Chopp, M. (2000). İyileşme, ontogeniyi özetler. Trendler Nörobilim. 23 (6), 265–271. doi: 10.1016/sn0166-2236(00)01562-9
Daneman, R., Zhou, L., Kebede, AA ve Barres, BA (2010). Embriyogenez sırasında kan-beyin bariyeri bütünlüğü için perisitler gereklidir. Doğa 468 (7323), 562–566. doi: 10.1038/nature09513
Ding, Y., Chen, M., Wang, M., Wang, M., Zhang, T., Park, J., ve ark. (2014). İskemik beyin hasarında asetil-11-keto-beta-Boswellik asit ile nöroproteksiyon, Nrf2/HO-1 savunma yolunu içerir. bilim Rep.4, 7002. doi: 10.1038/srep07002
Ding, Y., Chen, M., Wang, M., Li, Y. ve Wen, A. (2015). 11- keto-beta-boswellic asit ile tedavi sonrası serebral iskemi-reperfüzyon hasarını iyileştirir: potansiyel bir mekanizma olarak Nrf2/HO-1 yolu. Mol. Nörobiyol. 52 (3), 1430–1439. doi: 10.1007/s12035-014-8929-9
Dong, Q., Yao, J., Fang, JN ve Ding, K. (2007). Cistanche Deserticola YC Ma'dan iki soğuk suda ekstrakte edilebilir polisakaritin yapısal karakterizasyonu ve immünolojik aktivitesi. Karbonhidrat. Res. 342 (10), 1343–1349. doi: 10.1016/j.carres.2007.03.017
Donnan, GA, Fisher, M., Macleod, M. ve Davis, SM (2008). Felç. Lancet 371 (9624), 1612–1623. doi: 10.1016/sn0140-6736(08)60694-7
Duan, Q. ve Si, E. (2019). MikroRNA-25, bir fare modelinde Nrf2 sinyal yolu yoluyla KLF2'yi aşağı doğru düzenleyerek Alzheimer hastalığında Abeta1-42-indüklü hipokampal nöron hasarını şiddetlendirir. J. Hücre Biyokimyası. 120 (9), 15891–15905. doi: 10.1002/jcb.28861
ElAli, A. (2016). İskemik inmeyi takiben yaralanma ve onarım arasındaki ince dengeyi kontrol etmede nörovasküler ünite sinyalinin anlamı. Nöral Yenileyici. Res. 11(6), 914–915. doi: 10.4103/1673-5374.184485
Gaire, BP (2018). İskemik felçte bitkisel ilaç: zorluklar ve beklentiler. Çene. J. Entegre Med. 24 (4), 243–246. doi: 10.1007/s11655-018-2828-2
Gao, Y., Jiang, Y., Dai, F., Han, Z., Liu, H., Bao, Z., ve diğerleri. (2015). Cistanche Deserticola YC Ma'daki laksatif bileşenler üzerine çalışma. Mod. Çene. Med. 17 (04), 19–22 artı 26. doi: 10.13313/j.issn.1673-4890.2015.4.003
Gong, X., Xu, Y., Ren, K., Bai, X., Zhang, C. ve Li, M. (2019). Paraboea martini'den elde edilen feniletanoid glikozitler, sıçan feokromositoma (PC12) hücrelerini hidrojen peroksit kaynaklı hücre hasarından korur. Biyosci. Biyoteknoloji biyokimya 83 (12), 2202–2212. doi: 10.1080/09168451.2019.1654359
Grefkes, C. ve Ward, NS (2014). İnme sonrası kortikal yeniden yapılanma: ne kadar ve ne kadar işlevsel? Sinirbilimci 20 (1), 56–70. doi: 10.1177/ 1073858413491147
Guzik, A. ve Bushnell, C. (2017). İnme epidemiyolojisi ve risk faktörü yönetimi. Süreklilik (Minneap Minn) 23 (1, Serebrovasküler Hastalık), 15–39. doi: 10.1212/con.0000000000000416
Hu, S., Wu, Y., Zhao, B., Hu, H., Zhu, B., Sun, Z., ve diğerleri. (2018). Panax notoginseng Saponinler, PI3K/Akt/Nrf2 antioksidan sinyal yolunun aktivasyonu yoluyla serebral mikrovasküler endotel hücrelerini oksijen-glikoz yoksunluğu/reperfüzyon kaynaklı bariyer disfonksiyonuna karşı korur. Moleküller 23 (11), 1–17. doi: 10.3390/moleküller23112781
Iwasawa, E., Ichijo, M., Ishibashi, S. ve Yokota, T. (2016). İskemik inmede kollateral dolaşımın akut gelişimi ve terapötik beklentiler. Nöral Yenileyici. Res. 11(3), 368–371. doi: 10.4103/1673-5374.179033
Ji, S., Li, S., Zhao, X., Kang, N., Cao, K., Zhu, Y., ve diğerleri. (2019). Alzheimer hastalığında feniletanoid glikozitlerin, Torenoside B ve Savatiside A'nın koruyucu rolü. Tecrübe. orada Med. 17 (5), 3755–3767. doi: 10.3892/item.2019.7355
Jiang, Y. ve Tu, PF (2009). Cistanche türlerinde kimyasal bileşenlerin analizi. J. Kromatr. 1216 (11), 1970–1979. doi: 10.1016/ j.chroma.2008.07.031
Jiang, T., Yu, JT, Zhu, XC, Wang, HF, Tan, MS, Cao, L., ve diğ. (2014). Akut metformin önkoşullaması, AMPK'ye bağlı otofajinin ön aktivasyonu ile fokal serebral iskemiye karşı nöro koruma sağlar. Br. J. Pharmacol. 171 (13), 3146–3157. doi: 10.1111/bph.12655
Jiang, X., Andjelkovic, AV, Zhu, L., Yang, T., Bennett, MVL, Chen, J., ve ark. (2018). Kan-beyin bariyeri disfonksiyonu ve iskemik inme sonrası iyileşme. prog. Nörobiyol. 163-164, 144–171. doi: 10.1016/j.pneurobio.2017.10.001
Jung, JE, Kim, GS, Chen, H., Maier, CM, Narasimhan, P., Song, YS, et al. (2010). İnmede reperfüzyon ve nörovasküler disfonksiyon: temel mekanizmalardan nöroproteksiyon için potansiyel stratejilere. Mol. Nörobiyol. 41 (2-3), 172–179. doi: 10.1007/s12035-010-8102-z
Kilkenny, C., Browne, WJ, Cuthill, IC, Emerson, M. ve Altman, DG (2010). Biyolojik bilim araştırma raporlamasını iyileştirme: hayvan araştırmalarını raporlamak için ARRIVE yönergeleri. PLoS Biol. 8 (6), e1000412. doi: 10.1371/günlük. bio.1000412
Ko, KM ve Leung, HY (2007). ATP üretim kapasitesinin, antioksidan aktivitenin ve immünomodülatör aktivitelerin Çin Yang ve Yin güçlendirici bitkiler tarafından arttırılması. Çene. Med. 2, 3. doi: 10.1186/1749-8546-2-3
Kondo, T., Reaume, AG, Huang, TT, Carlson, E., Murakami, K., Chen, SF, ve diğerleri. (1997). CuZn-süperoksit dismutaz aktivitesinin azalması, geçici fokal serebral iskemiden sonra nöronal hücre hasarını ve ödem oluşumunu şiddetlendirir. J. Neurosci. 17 (11), 4180–4189. doi: 10.1523/JNEUROSCI.17-11-04180
Lee, M., Saver, JL, Alger, JR, Hao, Q., Starkman, S., Ali, LK, et al. (2012). Posterior dolaşım iskemik inmede kan-beyin bariyeri geçirgenliği bozuklukları: sıklık ve hemorajik transformasyonla ilişkisi. J. Neurol. bilim 313 (1-2), 142–146. doi: 10.1016/j.jns.2011.08.048
Li, N., Wang, J., Ma, J., Gu, Z., Jiang, C., Yu, L., ve diğerleri. (2015). Orta derecede Alzheimer hastalığı olan hastalarda uzak bitki tedavisinin nöroprotektif etkileri. Kanıta Dayalı Tamamlayıcı Altern. Med. 2015, 103985. doi: 10.1155/2015/103985
Li, M., Xu, T., Zhou, F., Wang, M., Song, H., Xiao, X., ve diğerleri. (2018). Nrf2/ARE yolu yoluyla PC12 hücreleri üzerinde H(2)O(2) ile indüklenen apoptoz üzerinde dört feniletanoid glikozidin nöroprotektif etkileri. uluslararası J. Mol. bilim 19 (4), 1–17. doi: 10.3390/ijms19041135
Li, R., Zhao, M., Tu, P. ve Jiang, Y. (2019). Cistanches Herba'da beş feniletanoid glikozitin tek bir işaretleyici ile çok bileşenli kantitatif analizi kullanılarak eş zamanlı tayini. J. Chin. eczane bilim 28 (08), 537–546. doi: 10.5246/jcps.2019.08.051
Lian, J., Wang, L., Zhao, F., Lin, S., Yan, X., Jia, J., ve diğerleri. (2017). Cistanche glikozitlerinin yaşlanmayla hızlandırılmış farelerde sinaptik morfolojik plastisite üzerindeki etkileri. J. Baotou Medl Coll. 33 (08), 78–80. doi: 10.16833/j.cnki.jbmc.2017.08.036
Liu, Y., Wang, D., Wang, H., Qu, Y., Xiao, X. ve Zhu, Y. (2014). HET0016'nın serebral iskemi/reperfüzyon sonrası beyin ödemi ve kan-beyin bariyeri disfonksiyonu üzerindeki koruyucu etkisi. Beyin Res. 1544, 45–53. doi: 10.1016/ j.brainres.2013.11.031
Liu, P., Zhang, R., Liu, D., Wang, J., Yuan, C., Zhao, X., ve diğerleri. (2018). Kalıcı fokal iskemi sıçan modelinde kan-beyin bariyeri geçirgenliği ve sıkı bağlantı protein değişikliklerinin zaman süreci araştırması. J. Physiol. bilim 68 (2), 121– 127. doi: 10.1007/s12576-016-0516-6
Liu, S., Chang, L. ve Wei, C. (2019). Sonik kirpi yolu, farelerde iskemik felçten sonra kan-beyin bariyerinin bozulmasına karşı Tongxinluo kapsülünün neden olduğu korumaya aracılık eder. Temel Klinik. Eczacılık Toksikol. 124 (6), 660– 669. doi: 10.1111/bcpt.13186
Lu, CW, Lin, TY, Huang, SK ve Wang, SJ (2016). Echinacoside, sıçan serebrokortikal sinir terminallerinde voltaja bağlı Ca(2 artı ) girişini ve protein kinaz C'yi baskılayarak glutamat salınımını inhibe eder. uluslararası J. Mol. bilim 17 (7), 1–13. doi: 10.3390/ijms17071006
McGrath, JC, Drummond, GB, McLachlan, EM, Kilkenny, C. ve Wainwright, CL (2010). Hayvanları içeren deneyleri raporlama yönergeleri: ARRIVE yönergeleri. Br. J. Pharmacol. 160 (7), 1573–1576. doi: 10.1111/j.1476-5381.2010.00873.x
Mentor, S. ve Fisher, D. (2017). Agresif antioksidan indirgeyici stres, beyin endotel hücre anjiyogenezini ve kan-beyin bariyeri fonksiyonunu bozar. Curr. Nörovask Res. 14 (1), 71–81. doi: 10.2174/1567202613666161129113950
Moretti, A., Ferrari, F. ve Villa, RF (2015). İskemik inme için nöroproteksiyon: mevcut durum ve zorluklar. Eczacılık orada 146, 23–34. doi: 10.1016/j.pharmthera.2014.09.003
Nyul-Toth, A., Suciu, M., Molnar, J., Fazakas, C., Hasko, J., Herman, H., ve diğ. (2016). Serebral korteks ve beyaz maddedeki kan-beyin bariyerinin moleküler yapısındaki farklılıklar: bir in silico, in vitro ve ex vivo çalışma. Am. J. Physiol. Kalp Sirk. Fizyol. 310 (11), H1702–H1714. doi: 10.1152/ajpheart.00774.2015
Ovbiagele, B. ve Nguyen-Huynh, MN (2011). İnme epidemiyolojisi: hastalık mekanizması ve tedavisine ilişkin anlayışımızı ilerletmek. Nöroterapötikler 8 (3), 319–329. doi: 10.1007/s13311-011-0053-1
Sayfa, S., Munsell, A. ve Al-Ahmad, AJ (2016). Serebral hipoksi/iskemi, kök hücre kaynaklı insan beyni mikrovasküler endotel hücrelerindeki sıkı bağlantı komplekslerini seçici olarak bozar. Sıvı Bariyerleri CNS 13 (1), 16. doi: 10.1186/ s12987-016-0042-1
Peng, F., Chen, J., Wang, X., Xu, C., Liu, T. ve Xu, R. (2016). Buhar işleme ile cistanche Deserticola dilimlerinde feniletanoid glikozit seviyeleri, antioksidan aktivite ve diğer kalite özelliklerindeki değişiklikler. kimya eczane Boğa. (Tokyo) 64 (7), 1024–1030. doi: 10.1248/CPB.c16-00033
Priestley, JRC, Fink, KE, McCord, JM ve Lombard, JH (2019). Protandim ile NRF2 aktivasyonu, tuzun neden olduğu vasküler disfonksiyonu ve mikrovasküler seyrelmeyi azaltır. Mikro sirkülasyon, 26 (7), e12575. doi: 10.1111/misc.12575
Saboor, F., Reckmann, AN, Tomczyk, CU, Peters, DM, Weissmann, N., Kaschtanow, A., et al. (2016). Nestin eksprese eden vasküler duvar hücreleri, pulmoner hipertansiyon gelişimini sağlar. Avro. Nefes al. J.47 (3), 876–888. doi: 10.1183/13993003.00574-2015
Satoh, T., Okamoto, SI, Cui, J., Watanabe, Y., Furuta, K., Suzuki, M., ve diğerleri. (2006). Elektrofilik [elektrofilik düzeltme] faz II indükleyiciler tarafından nöroproteksiyon için Keap1/Nrf2 yolunun aktivasyonu. İşlem Natl. Acad. bilim ABD 103 (3), 768–773. doi: 10.1073/pnas.0505723102
Schellinger, PD ve Kohrmann, M. (2014). Rekombinant doku tipi plazminojen etkinleştirici ile intravenöz tromboliz için 4.5-saatlik bir zaman penceresi oluşturulur. İnme 45 (3), 912–913. doi: 10.1161/strokeaha.113.002700
Sealy-Jefferson, S., Wing, JJ, Sanchez, BN, Brown, DL, Meurer, WJ, Smith, MA, ve diğerleri. (2012). İnme riskinde yaşa ve etnik kökene özgü cinsiyet farklılıkları. Gen Med. 9 (2), 121–128. doi: 10.1016/j.genm.2012.02.002
Shi, Z., Wu, Y., Zhu, Y., Cui, Wang, M., Yin, H., ve diğerleri. (2019). Cistanches Herba'da HPLC-ELSD ile betain, mannitol, fruktoz, glukoz ve sukrozun kantitatif tayini. Mod. Çene. Med. 32 (6), 1–11. doi: 10.13313/ j.issn.1673-4890.20190320006
Singh, D., Reeta, KH, Sharma, U., Jagannathan, NR, Dinda, AK ve Gupta, YK (2019). Sıçanlarda iskemi-reperfüzyon hasarı üzerinde monometil fumaratın nöro-koruyucu etkisi: Peri-enfarktüs bölgesinde Nrf2/HO1 yolağının rolü. Nörokimya. uluslararası 126, 96–108. doi: 10.1016/j.neuint.2019.03.010
Siow, RC, Ishii, T. ve Mann, GE (2007). 4-hidroksinonenal tarafından antioksidan gen ekspresyonunun modülasyonu: Nrf2/ARE transkripsiyon yolunun ateroprotektif rolü. Redox Rep. 12 (1), 11–15. doi: 10.1179/ 135100007x162167
Suda, S., Katsura, K., Kanamaru, T., Saito, M. ve Katayama, Y. (2013). Valproik asit, oksidatif stres ve inflamasyonun inhibisyonu yoluyla sıçan beynindeki iskemi-reperfüzyon hasarını hafifletir. Avro. J. Pharmacol. 707 (1-3), 26–31. doi: 10.1016/j.ejphar.2013.03.020
Suzuki, T. ve Yamamoto, M. (2015). Keap1-Nrf2 sisteminin moleküler temeli. Serbest Radikal. Biol. Med. 88 (Bölüm B), 93–100. doi: 10.1016/j.freeradbiomed.2015.06.006
Tenreiro, MM, Ferreira, R., Bernardino, L. ve Brito, MA (2016). Kan-beyin bariyerinin yaralanmaya karşı hücresel tepkisi: Beyin rejenerasyonu için potansiyel biyobelirteçler ve terapötik hedefler. Nörobiyol. Dis. 91, 262–273. doi: 10.1016/j.nbd.2016.03.014
Thompson, JW, Narayanan, SV, Koronowski, KB, Morris-Blanco, K., Dave, KR ve Perez-Pinzon, MA (2015). İskemik mitokondriyal nöroproteksiyona yol açan sinyal yolları. J. Bioenerg. biyomembr. 47 (1-2), 101–110. doi: 10.1007/s10863-014-9574-8
Wang, T., Zhang, X. ve Xie, W. (2012). Cistanche Deserticola YC Ma,"Çöl ginseng": bir inceleme. Am. J. Chin. Med. 40 (6), 1123–1141. doi: 10.1142/s0192415x12500838
Wang, X., Wang, S., Wang, J., Guo, H., Dong, Z., Chai, L., ve diğerleri. (2015). Geçici ve kalıcı sıçan serebral iskemi modelinde enjeksiyon için xueshuantong'un (liyofilize) nöroprotektif etkisi. Kanıta Dayalı Tamamlayıcı Altern. Med. 2015, 134685. doi: 10.1155/2015/134685
Wang, D., Wang, H. ve Gu, L. (2017). Geleneksel Çin ot cistanche'nin antidepresan ve bilişsel iyileştirme faaliyetleri. Kanıta Dayalı Tamamlayıcı Altern. Med. 2017, 3925903. doi: 10.1155/2017/3925903
Wang, FJ, Wang, SX, Chai, LJ, Zhang, Y., Guo, H. ve Hu, LM (2018). Salvianolik liyofilize enjeksiyonla birleştirilmiş Xueshuantong enjeksiyonu (liyofilize), oksidatif stresin zayıflaması yoluyla sıçanlarda fokal serebral iskemi/reperfüzyon hasarına karşı koruma sağlar. Açta Eczacılık. Günah. 39 (6), 998–1011. doi: 10.1038/aps.2017.128Wei, Y., Gong, J., Thimmulappa, RK, Kosmider, B., Biswal, S. ve Duh, EJ (2013). Nrf2, uç hücre oluşumunu ve vasküler dallanmayı düzenlemek için endotelde hücre özerk olarak hareket eder. İşlem Natl. Acad. bilim ABD 110 (41), E3910–E3918. doi: 10.1073/pnas.1309276110
Xia, D., Zhang, Z. ve Zhao, Y. (2018). Acteoside, fokal serebral iskemi-reperfüzyon hasarı olan sıçanlarda oksidatif stresi ve nöronal apoptozu azaltır. Biol. eczane Boğa. 41 (11), 1645–1651. doi: 10.1248/bob.b18-00210
Xiong, W., MacColl Garfinkel, AE, Li, Y., Benowitz, LI ve Cepko, CL (2015). NRF2, nörodejenerasyon ve akut sinir hasarında nöronal sağkalımı destekler. J. Clin. Yatırım. 125 (4), 1433–1445. doi: 10.1172/jci79735
Xu, HT, Zhang, CG, He, YQ, Shi, SS, Wang, YL ve Chou, GX (2019). Schnabelia centifolia (Benth.) PDCantino'dan elde edilen feniletanoid glikozitler, osteoblastların çoğalmasını teşvik eder. Fitokimya 164, 111–121. doi: 10.1016/j.phytochem.2019.05.003
Ya, BL, Liu, Q., Li, HF, Cheng, HJ, Yu, T., Chen, L., ve diğerleri. (2018). Ürik asit, Nrf2'yi aktive ederek ve nörotrofik faktör ekspresyonunu düzenleyerek fokal serebral iskemi/reperfüzyon kaynaklı oksidatif strese karşı koruma sağlar. Oksit. Med. Cell Longev 2018, 6069150. doi: 10.1155/2018/6069150
Ye, ZY, Xing, HY, Wang, B., Liu, M. ve Lv, PY (2019). DL-3-bütil ftalit, kan-beyin bariyerini sıkı bağlantı proteinlerinin yukarı regülasyonu yoluyla iskemi/hipoksi hasarına karşı korur. Çene. Med. J. (İng.) 132 (11), 1344–1353. doi: 10.1097/cm9.0000000000000232
Yu, Q., Li, X. ve Cao, X. (2016). Sıçanlarda iskemi-reperfüzyon kaynaklı miyokard enfarktüsünde Cistanche Deserticola'dan feniletanoid glikozit açısından zengin ekstraktın kardiyoprotektif etkileri. Ann. Vasc. cerrahi 34, 234–242. doi: 10.1016/j.avsg.2016.04.002
Yu, N., Wang, Z., Chen, Y., Yang, J., Lu, X., Guo, Y., ve diğerleri. (2017). Eldeki on iki Jing-well noktasındaki kan alma ponksiyonunun, kan-beyin bariyerinin sıkı bağlantılarını koruyarak kalıcı orta serebral iskeminin neden olduğu serebral ödem üzerindeki iyileştirici etkisi. BMC Tamamlayıcı Altern. Med. 17 (1), 470. doi: 10.1186/s12906-017-1979-6
Yu, W., Gao, D., Jin, W., Liu, S. ve Qi, S. (2018). Propofol, fokal serebral iskemi-reperfüzyon hasarında süksinatın iskemik birikimini azaltarak oksidatif stresi önler. Nörokimya. Res. 43 (2), 420–429. doi: 10.1007/ s11064-017-2437-z
Yuen, CM, Chung, SY, Tsai, TH, Sung, PH, Huang, TH, Chen, YL ve diğerleri. (2015). Ekstrakorporeal şok dalgası, beyin enfarktüsü hacmini etkili bir şekilde azaltır ve akut iskemik felçten sonra sıçanda nörolojik işlevi iyileştirir. Am. J. Çeviri Res. 7 (6), 976–994.
Zechariah, A., ElAli, A., Doeppner, TR, Jin, F., Hasan, MR, Helfrich, I., et al. (2013). Vasküler endotel büyüme faktörü, beyin kılcal damarlarının perisit kapsamını arttırır, sonraki fokal serebral iskemi sırasında serebral kan akışını iyileştirir ve metabolik penumbrayı korur. İnme 44 (6), 1690–1697. doi: 10.1161/strokeaha.111.000240
Zhang, QY, Wang, ZJ, Sun, DM, Wang, Y., Xu, P., Wu, WJ, et al. (2017). Görev süresinin iskemik inme üzerindeki yeni terapötik etkileri: BBB bütünlüğünün yeni mekanizmaları. Oksit. Med. Cell Longev 2017, 7150376. doi: 10.1155/2017/7150376
Zhang, R., Xu, M., Wang, Y., Xie, F., Zhang, G. ve Qin, X. (2017). Nrf2-inmede oksidatif strese karşı savunma için umut verici bir terapötik hedef. Mol. Nörobiyol. 54 (8), 6006–6017. doi: 10.1007/s12035-016-0111-0
Zhang, A., Yang, X., Li, Q., Yang, Y., Zhao, G., Wang, B., ve diğerleri. (2018). Cistanche Deserticola'dan suda ekstrakte edilebilen polisakkaritlerin in vitro ve in vivo bir bitki adjuvanı olarak immünostimülatör aktivitesi. PLoS Bir 13 (1), e0191356. doi: 10.1371/journal.pone.0191356
Zhang, Y., Wang, K., Chen, H., He, R., Cai, R., Li, J., ve diğerleri. (2018). Isodon terricolous (D.Don) Kudo'nun kökünden elde edilen antiinflamatuar lignanlar ve feniletanoid glikozitler. Fitokimya 153, 36–47. doi: 10.1016/ j.phytochem.2018.05.017
Zhang, K., Zhang, Q., Deng, J., Li, J., Li, J., Wen, L., ve diğerleri. (2019). ALK5 sinyal yolu, Gadd45b yoluyla sıçanlarda serebral iskemi/reperfüzyondan sonra nörojenez ve fonksiyonel iyileşmeye aracılık eder. Hücre Ölüm Dis. 10 (5), 360. doi: 10.1038/s41419-019-1596-z
Çıkar çatışması:
Yazarlar, araştırmanın potansiyel bir çıkar çatışması olarak yorumlanabilecek herhangi bir ticari veya finansal ilişki olmaksızın yürütüldüğünü beyan eder.
İşleme editörü, inceleme sırasında yazarlar KZ ve YJ ile başka bir işbirliği olmasa da ortak bir ilişki beyan etti.
Telif Hakkı © 2020 Wang, Li, Tu, Chen, Zeng ve Jiang. Bu, Creative Commons Atıf Lisansı (CC BY) koşulları altında dağıtılan açık erişimli bir makaledir. Diğer forumlarda kullanılmasına, dağıtılmasına veya çoğaltılmasına, orijinal yazar(lar) ve telif hakkı sahibi(ler)nin atıfta bulunulması ve bu dergideki orijinal yayına, kabul edilen akademik uygulama ile atıfta bulunulması koşuluyla izin verilir. Bu şartlara uymayan hiçbir kullanım, dağıtım veya çoğaltmaya izin verilmez.
For more information:1950477648nn@gmail.com
