Cistanche Deserticola'dan Bir Mannoglukanın Kimyasal Özellikleri

İletişim: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-posta:audrey.hu@wecistanche.com

1. Malzemeler

İki farklı üreticiden atlar için sırasıyla 10 mg/g (A) veya 20 mg/g (B) ivermektin içeren oral macunlar kullanıldı. İvermektin için kantitatif tahlil yapıldı ve içerik, beyan edilen konsantrasyonun yüzde 104.4-107.7'siydi.

2. Çözünme testi

Test Ph. Eur ile yapıldı. kürek aparatı (Pharma Test, Heinberg, Almanya), 75 rpm veya 50 rpm çalkalamalarda, 37 -0.5 C'de. Sodyum lauril sülfat (BDH Chemicals, Poole, İngiltere) yüzde 0,5 (w /v) bir çözünme ortamı (900 mi) olarak sulu çözelti kullanıldı. Macun (4 g A veya 2 g B), bir kanüllü (A) bir şırınga ile kaba yerleştirildi veya numune, çözünme ortamının (B) yüzeyine damlatıldı. Zaman aralıklarından (15, 30, 45, 60 dakika ve 2 saat sonra) bir çözünme ortamı numunesi alındı ​​(2 mi), bir cam filtreden süzüldü ve analiz edildi.

3. HPLC analizi

İvermektin tayini, Ph. Eur. Analiz edilen çözeltiler metanol (1:10) ile seyreltildi. HPLC sistemi bir oktadesil sütunundan (250 -4 mm; 5 mm; Lichrospher RP-18; Merck), bir entegratör D-12500 A, bir UV-Vis L{{7} detektöründen oluşuyordu. }, pompa L-6200A (Merck-Hitachi, Darmstadt, Almanya). Bir asetonitril: metanol: su (64:24:16) karışımı, 1.9 ml/dk'lık bir akış hızıyla mobil faz olarak kullanıldı. Enjekte edilen numunenin hacmi 20 ml idi ve saptama 254 nm'de yapıldı.

4. Çözünürlük çalışmaları

Maddenin bir girişi, sıkıca kapatılmış cam şişelerde uygun bir çözücü (Tablo 1) ile 20 saat 37 0.1°C'de çalkalandı. Süspansiyonlar süzüldü ve süzüntü, metanol içinde seyreltildikten sonra HPLC ile analiz edildi. .

5. Asidik çözeltide stabilite

HCl {{0}}.1 M içindeki ivermektin çözeltileri sıkıca kapatılmış cam şişelerde 20°C ve 37°C'de saklandı. Çözeltilerin kromatogramları t=0'da ve 1, 2 ve 6 saat sonra kaydedildi. İvermektinin alanı (tutma süresi 10.5 dakika) ve ek tepeler hesaplandı.

Referanslar

Endüstri için FDA Kılavuzu: SUPAC-SS steril olmayan yarı katı dozaj formları. Ölçek büyütme ve onay sonrası değişiklikler: kimya, üretim ve kontroller; in vitro salım testi ve in vivo biyoeşdeğerlik belgeleri. Mayıs 1997. Katı oral ürünlerin çözünme testi için FIP yönergeleri (1997) Dissolute. Teknoloji. 4: 5-14. Siewert M, Dressman J, Brown C, Shah VP (2003) Yeni/özel dozaj formlarının çözünme/in vitro salım testi için FIP/AAPS yönergeleri, AAPS PharmSciTech, 4 (1) makale 7 Modern Çin Tıbbı Araştırma Merkezi, Okul Farmasötik Bilimler Bölümü, Pekin Üniversitesi Sağlık Bilimleri Merkezi, Pekin, Çin

Xiang mei Wu, Pengfei Tu Alındı ​​13 Şubat 2004, kabul edildi 4 Nisan 2004, Prof. Dr. Pengfei Tu, Modern Geleneksel Çin Tıbbı Araştırma Merkezi, Farmasötik Bilimler Okulu, Peking Üniversitesi Sağlık Bilimleri Merkezi, No. 38, Xueyuan Yolu , Haidian Bölgesi, Pekin 100083, Çin Pengfeitu@bjmu.edu.cn Pharmazie 59: 815–816 (2004)

Yeni bir manoglukancistanche çöl çiçeğiÇin'den karakterizedir. Bileşik, mitojen kaynaklı T ve B lenfosit proliferasyonunun hafif bir şekilde uyarılmasından sorumludur.

cistanche çöl çiçeğiYC Ma, Çin'in kuzeybatısında yaygın olarak bulunan dikotiledon bitkisi Haloxylon ammodendron Bunge'nin köklerinde büyüyen bir holoparazittir. Doğu tıbbında önemli bir tonik olduğu için birçok aktif bileşen ve farmakolojik aktivite iddia edilmiştir (Karasawa ve ark. 1986; Yoshizawa ve ark. 1990). Bu özellikler, bazı polisakkarit bileşenleriyle ilişkili olabilir.cistancheki henüz araştırılmamış. Mitojenik pektik polisakaritler ve nötr polisakaritler izole edilmiş ve karakterize edilmiştir.cistanche çöl çiçeğiMoğolistan'dan (Radna ve diğerleri 1996; Anna ve diğerleri 1997; Bozena ve diğerleri 1999). Burada yeni bir manoglukanın kimyasal özelliklerini rapor ediyoruz.cistanche çöl çiçeğiMitojen kaynaklı T ve B lenfosit proliferasyonunun hafif uyarılmasından sorumlu olan Çin'den. saplarından sonracistanche çöl çiçeğiYC Ma yüzde 95 etanol ile özütlendi, tortuyu çıkarmak için soğuk damıtılmış su kullanıldı. Soğuk su özü, EtOH ile çökeltildi, protein çıkarıldı ve diyaliz edilerek ham polisakarit CCDP elde edildi. Ham polisakarit, glikoz (yüzde 89.2) ve mannoz (1{{58}) içeren protein içermeyen bir polisakarit (CDP-6) verecek şekilde bir DEAE kolonu ve bir Sephadex G-150 kolonu üzerinde fraksiyonlara ayrıldı. },4 yüzde ) ve ortalama Bay'in 6,8 -104 olduğu tahmin ediliyor. Polisakkarit CDP-6 [a 20 D 42 (c 1, H2O) gösterdi. Şekerlerin mutlak konfigürasyonları, TMS (– )-2-bütil glikozitlerin GC'si ile belirlendi. CDP-6 metillendi (Needs ve diğerleri 1993), hidrolize edildi, alditol asetatlara dönüştürüldü ve GC ve GC-MS ile analiz edildi (Tablo). Bu sonuç, metilasyon analizinden elde edilen molar oran verileriyle birlikte, CDP-6'nin ağırlıklı olarak 1,6-bağlı bir Glcp'ye ve O{{'da dallanmış daha küçük bir ölçüde bağlantılı bir omurga 1,6- olduğunu gösterdi. 24}} mannoz. Kısmi hidrolizden iki polimerin (CDP-6-1, CDP-6–2) metilasyon analizi, CDP-6'nin 1,6-bağlı glukosil kalıntılarından oluşan bir omurgaya sahip olduğunu ve 1,6-bağlı mannosil kalıntıları, mannozun O-3'sında terminal, 1,6- bağlantılı glukosil kalıntısı ve 1,3,{{38} içeren dallar ile ikame edilmiştir. }bağlı mannosil kalıntıları. Molar oranlara ve literatüre göre (Bozena ve diğerleri 1999; Bacon ve diğerleri. 1996), CDP-6'nin 13C NMR spektrumu, a-d-Glcp'nin (C{{45) anomerik karbonlarından dolayı sinyaller gösterdi. }} 98,4 ppm'de), bd-Map (104,3–104,9 ppm'de C-1) ve ad-Map (C-1, 1000,0 ppm'de). D2O'daki CDP-6-2'nin 1H NMR spektrumu, ad-Glcp'ye (4.94-4.95 ppm'de H-1) ve a- d-Map'e (H-1) karşılık gelen proton sinyallerini gösterdi. 4,96–5,00 sayfa/dk). D2O'daki CDP-6-2'nin 13C NMR spektrumu, aD-Glcp'ye (98.6 ppm'de C-1) ve 98.4ppm'de ad-Map'e (C-1) karşılık gelen proton sinyallerini gösterdi. Mannoglukanların 1,4-bağlı glukopirannan ve 1,4-bağlı mannopyrannan omurgasına sahip olduğu bildirilmektedir (Radjabi Nassab ve diğerleri 1984; Tanabe ve diğerleri 2000). CDP-6, a-1,6-bağlı Glcp ve b-1,6-bağlantılı Harita omurgası ile bazı farklı yapısal özelliklere sahiptir ve manoglukan dalları ile ikame edilmiştir. (İncir.). kullanımını araştırmak içincistanche çöl çiçeğihalk hekimliğinde CDP-6'nin T ve B hücre sistemleri üzerindeki etkisi değerlendirildi. Mitojen kaynaklı T ve B lenfosit proliferasyonunu hafifçe uyardığı bulundu.

Deneysel

1. Genel prosedürler

Optik dönüş, bir W22-1S otomatik polarimetre ile ölçülmüştür. IR spektrumları, bir Perkin-Elmer 599B spektrometresi üzerinde belirlendi. GC analizi, bir FID detektörü ile donatılmış bir Agilent HP6890N cihazında gerçekleştirilmiştir. GC-MS, bir Finnigan Trace GC-MS cihazında gerçekleştirildi. Homojenlik ve Mr of CDP-6, üzerinde gerçekleştirilen standart dekstranların elüsyon hacminin kalibrasyon eğrisinden tahmin edildi.

Shodex KS-805 sütunlu bir Agilent 1100 serisi cihaz.1H NMR ve 13C NMR spektrumları, bir INOVA-500 cihazı ile kaydedildi. Protein içeriği, Bradford yöntemiyle analiz edildi (Andre ve diğerleri, 1975). Monosakaritler, hidrolize edildikten (2 M TFA, 2 saat, 110°C), indirgendikten ve asetatlandıktan sonra alditol asetatları açısından analiz edildi. Hidrolizatlar, BuOH-EtOAc-izopropil alkol-HOAC––H2Opiridin (3.5: 10: 6: 3.5 : 3: 3) içinde yüzde 5 sodyum dihidrojen fosfat içeren bir silika jel plakası üzerinde TLC kullanılarak analiz edildi ve orcinol püskürtülerek şekerler tespit edildi. -H2SO4. Elde edilen alditol asetatlar, bir HP-5 kapiler kolonu (30 m 0.32 mm) kullanılarak GLC ile analiz edildi. CDP-6, Ciucanu yöntemiyle metillendi, ardından hidroliz edildi ve GC-MS ile kısmen metillenmiş alditol asetatlar olarak analiz edildi. Kısmi hidrolizden sonra ürünler diyaliz edildi ve ayrıldı, iki polimer, CDP-6-1 ve CDP-6–2 elde edildi.

2. Bitki materyali

Bitki, Ağustos 2001'de Çin'deki İç Moğolistan Eyaletinden toplandı ve Pekin Üniversitesi Sağlık Bilimleri Merkezi, Eczacılık Bilimleri Okulu, Doğal Tıp Bölümü'nden Hu-Biao Chen tarafından tanımlandı. Bu bitkinin bir makbuz örneği [E-1-(9)], Pekin Üniversitesi Farmasötik Bilimler Okulu'nda saklandı. 3. Polisakkarit CDP'nin ekstraksiyonu, izolasyonu ve saflaştırılması-6cistanche çöl çiçeğiYC Ma (1500 g), geri akış altında yüzde 95 etanol (6 L) ile özümlendi. Kurutulmuş etanolde çözünmeyen kalıntı, 12 saatte bir soğuk damıtılmış su ile üç kez yumuşatıldı. Soğuk su özü süzüldü ve süzüntü santrifüjlendi. Dört hacim EtOH ile çökeltmeden sonra (karıştırma ve 24 saat 4°C'de bekleme), çökelti ürünü (35.5 g) elde edildi. Çökeltideki protein Savage yöntemiyle çıkarıldı. Damıtılmış suda çözündürüldükten sonra kalıntı (25.5 g) diyalize edildi ve liyofilize edildi (verim: 10.6 g). Ham polisakarit (8 g) damıtılmış su (100 mL, yüzde 8 a/h) içinde çözündürüldü ve bir DEAE kolonu (70 5 cm, 1.5 L başına 0-2 M NaCl gradyanı) kullanılarak ayrıldı. Suyla yıkanmış bir fraksiyon (600 mg) elde edildi. Bir numune (250 mg), bir Sephadex G- 150 kolonu (4 - 80 cm, 1600 mL, fraksiyon başına 5 mL) üzerinde kolon jel-geçirgenlik kromatografisiyle saflaştırıldı. CDP-6 (1500–1600 mL) fraksiyonları toplandı, diyalize alındı ​​ve dondurularak kurutuldu. Sephadex G-25 (60 1 cm) ile tuzdan arındırıldıktan sonra. CDP-6 (110 mg) elde edildi ve HPSGC ile tek bir pik olarak belirlendi.

Teşekkür:Yazar, Pekin Üniversitesi Sağlık Bilimleri Merkezi Temel Tıp Bilimleri Okulu'ndan Dr. Baomei Shao ve Prof. Xiaoming Gao'ya CDP-6'nin immünomodülatör aktivitesini ölçtüğü için teşekkür eder.