Çin Tıbbı Cistanche Vücuttaki Bileşenlerin Kimyasal Bileşimi ve Analizi Ⅲ

Bölüm 2 Cistanche Deserticola'nın kimyasal bileşimi üzerine nitel çalışma

Cistanche, kuru pullu yaprak etli sapıdır.Cistanche Deserticola YC.MaVe Cistanche tubulosa (Schenk) R.Wight. Böbrek-yang'ı besleyen ünlü geleneksel Çin ilaçlarından biridir. Şu işlevlere sahiptir:besleyici böbrek-yang, özü ve kanı yenileyici, nemlendirici özelliği vardır. Müshil etkisi vardır ve sıklıkla iktidarsızlık, kısırlık, bel ve diz ağrıları, kas ve kemik zayıflığı, bağırsak kuruluğu ve kabızlık vb. tedavisinde kullanılır. Anti-inflamatuar gibi farmakolojik etkileri vardır. demans, anti-Parkinson hastalığı, serebral iskemiden korunma, öğrenme ve hafıza yeteneklerinin iyileştirilmesi. Maddi temelin açıklığa kavuşturulması amacıylaCistanche Deserticola'nın etkinliği, bu bölümde, kapsamlı bir şekilde karakterize etmek için HPLC ve LC-IT-TOF-MS kullanılmaktadır.Cistanche'nin kimyasal bileşenleri. Çeşitli kimyasal bileşen türlerinin parçalama kurallarının sistematik bir özetine dayanarak, Cistanche Deserticola'nın özellikleri sistematik olarak analiz edilmektedir. Güvenilir kaynaklardan zengin veriler sağlamak için kimyasal bileşimderinlemesine açıklamatıbbi özelliklerindenCistanche Deserticolain vivo.

CISTANCHE'IN ÇALIŞMASI NE KADAR SÜRER?

Bölüm 1 Deneysel Malzemeler

1.Enstrüman

Shimadzu HPLC-IT-TOF-MS sıvı kütle spektrometresi (2 LC-20ADXR pompası, SIL-20AC otomatik örnekleyici, CTO-20AC sütun fırını, SPD-M20A UV dedektörü ile donatılmıştır, DGU-20A3R dekontaminasyon Gaz makinesi, CBM-20A denetleyici, ESI iyon kaynağı, Shimadzu Şirketi, Japonya), Milli-Q ultra saf su arıtma sistemi (Milipore Şirketi, ABD): Mettler ME204 elektronik analitik terazi ( Mettler Toledo Şirketi, İsviçre).

2. Reaktifler

Kromatografi dereceli ve kütle spektrometri dereceli metanol, asetonitril ve kütle spektrometri dereceli formik asit, Thermo-Fisher Company'den (Pittsburgh, PA, ABD) satın alındı. Su, laboratuvarda (Millipore, Bedford, MA, ABD) üretilen Milli-Q ultra saf suydu. Geri kalan reaktiflerin tümü analitik sınıftadır.

Salidrosid, 6-deoksikatalpol, 8-epi-loganik asit, ekinakosid, akteozid, izosid Verbaskosid (izoakteosid) ve pinoresinol- -D-glukopiranosid (pinoresinol- -D-glukopiranosid) Her ikisi de Profesör Tu Pengfei'nin Pekin Üniversitesi Doğal ve Biyomimetik İlaçlar Temel Laboratuvarı'ndaki araştırma grubu tarafından sağlandı. Sarkozit F (cistanosideF), Chengdu Mansite Bioteknoloji Co., Ltd.'den satın alınmıştır; cistanoside A (sistanoside A), 2'-asetillakteosid (2'-asetillakteosid), 2'-asetilpoliumosid (2'-asetilpoliumoside), cistanosid Poliglukozid (poliumoside) ), cistanoside E (cistanosideE), isocistanoside E (izocistanosideE), cistanoside C (cistanosideC), isocistanoside C (izocistanosideC) ve cistanoside D (cistanosideD) hepsi Shanghai Shidande Bioteknoloji Co., Ltd.'den satın alınmıştır, tubulosid A (tubulosideA) ve tubulosid B (tubulosideB), Chengdu Weikeqi Bioteknoloji Co., Ltd.'den satın alındı.

Bölüm 2 Deneysel İçerik

1. Numune hazırlama

1.1 Referans maddesinin hazırlanması

Yukarıdaki "Bölüm 1 Deneysel Malzemeler"de yer alan çeşitli referans maddelerinin uygun miktarlarını tam olarak tartın ve DMSO ile 10 mM stok çözeltileri hazırlayın. Her stok solüsyonundan 2 mL'yi tam olarak pipetleyin ve 2 μM karışık kontrol solüsyonu yapmak için %25 asetonitril ile seyreltin. 1.2 Test çözeltisinin hazırlanması

Cistanche Deserticola'nın sulu ekstraktı laboratuvarımız tarafından hazırlandı ve örnek, Pekin Çin Tıbbı Üniversitesi, Geleneksel Çin Tıbbı Okulu, Geleneksel Çin Tıbbı Modernizasyon Araştırma Merkezi'nde saklandı. 20 mg Cistanche Deserticola tozu alın, çözündürmek için 40 mL su ekleyin, vorteksleyin ve karıştırın, 10000 rpm'de 10 dakika santrifüj edin ve süpernatantı alın. Yani test çözümü elde edilir.

3. Kütle spektrometresi koşulları

Elektrosprey iyon kaynağı (ESI), tarama modu, pozitif ve negatif iyonları aynı anda taramak ve çok seviyeli kütle spektrometresini otomatik olarak tetiklemek içindir. Pozitif iyonlar için MS'~MS' kütle tarama aralığı m/z50~800 ve negatif iyonlar için m/z100~1000'dir. Püskürtme odasının voltajları sırasıyla 4,5kV ve -3,5kV'dir: atomize edici gaz (Nz) akış hızı 1,5Lmin'dir; kurutma gazı basıncı 110MPa'dır; algılama voltajı 1,55 kV'dur; Kavisli solvent giderici tüpün (CDL) ve ısıtma modülünün sıcaklıkları 200 derecedir. Çarpışma odası basıncı 1,5e-Pa'dır; iyon tuzağı basıncı 2,8e-Pa'dır; pozitif ve negatif ilk aşamaların tekrar sayısı 1, iyon birikim süresi 30 ms'dir; Pozitif ve negatif ikinci aşamaların tekrar sayısı 2, iyon biriktirme süresi ise 20 ms'dir. ; Çarpışma kaynaklı ayrışma (CID) enerjisi %50'dir.

Bölüm 3 Sonuçlar ve Tartışma

Sütun seçimi

Daha iyi kromatografik ayırma elde etmek için, ACEUltraCore 2.5 SuperC8 kromatografik kolon (3.0x150mm, 2.5 um, Advance Chromatography Technologies Ltd., Aberdeen, İskoçya) gibi farklı üreticilere ve spesifikasyonlara ait kromatografik kolonları kapsamlı bir şekilde taradık. Shiseido Capcell Core Ci8 (2,1 mm x 150 mm, 2,7μm), Waters Acquity UPLC HSS T3 sütunu (2,1 x 100 mm, 1,8 μm, Milford, MA, ABD) ve Capcell Core ADME sütunu (2,1x150 mm, 2,7μm, Shiseido Corporation, Japonya). Sistematik karşılaştırma yoluyla, Capcell Core ADME kromatografik kolonu (2,1x150mm, 2,7μm, Shiseido Co., Ltd., Japonya) kullanıldığında her kromatografik sinyalin daha iyi ayrılabileceği bulunmuştur (Şekil 3-1).

2. Sıvı faz koşullarının seçimi

Ana kimyasal bileşenlerden dolayıCistanche Deserticolafeniletanol glikozitler, lignanlar, iridoidler ve diğer bileşiklerdir, genellikle negatif iyon koşulları altında daha iyi yanıt verir. Cistanche Deserticola'nın su ekstraktındaki düşük seviyeli kimyasal bileşenleri tanımlamak amacıyla, gücü arttırmak için mobil faza asitlerin eklenmesi gerekebileceği tahmin edilmektedir. Bu nedenle, bu deneyde araştırma için mobil faz sistemleri olarak su-metanol, su-asetonitril, 0%1 formik asit su-metanol ve 0%1 formik asit su-asetonitril kullanıldı. İyi bir tepe şekli ve büyük bir tepe kapasitesi ile en iyi ayırma etkisine 0%0.1% formik asit su-asetonitrilin sahip olduğu bulunmuştur, bu nedenle %0.1 formik asit su ve asetonitril seçilmiştir. mobil aşama. 3. Kimyasal bileşenlerin kalitatif analizi. Cistanche Deserticola'daki çeşitli bileşik türlerinin kütle spektrometresi parçalanma kurallarını araştırmak için mevcut 19 referans maddesini kullanın. Karışık referans maddeleri, ADME sütununda 340 nm'de PDA kromatogramları ve pozitif ve negatif iyon modlarında BPC grafikleridir. Bkz. Şekil 3-1. İlgili literatürü PubMed, RSC, CNKl, Springer, ScienceDirect, VIP ve Wanfang vb. aracılığıyla inceledik ve Cistanche Deserticola'nın kimyasal bileşenlerinden oluşan kendi oluşturduğumuz bir veri tabanı oluşturduk. Kütle spektrometresi parçalanma kurallarının ve bilinen bileşiklerin alıkonma sürelerinin karşılaştırılmasına dayanarak, Cistanche Deserticola'da ön olarak 45 bileşik belirledik. Tablo 3-1'da gösterildiği gibi 31 feniletanol glikozit, 9 iridoid, 3 benzil glikozit ve 2 lignan içeren bileşikler.

Referans maddenin gizlilik süresi, MS spektrumu ve MS spektrumu karşılaştırılarak bileşik 11, 12, 13, 17, 21, 22, 24, 25, 26, 28, 29, 32, 33, 36, 37, 38 genipin, cistanchein F, cistancheosid E, ekinezyasit, krizantosid, cistanchein A, tuberosin A, larchresinol 4-0- -D glukozit, sığırkuyruğu glikozitleri, izokannabinoid glikozit, pinoresin monometil eter glikozit, 2'asetil verbaskozit, cistanche glikozit olarak doğru bir şekilde tanımlandı C, izosistankozit C, tüberozin B ve cistanche glikozit D.

Bu deney, Cistanche Deserticola'nın su ekstraktındaki karmaşık kimyasal bileşenleri hızlı ve doğru bir şekilde sistematik olarak analiz etmek için HPLC-IT-TOF-MS teknolojisini kullanır; bu, Cistanche Deserticola'nın kapsamlı kalite analizi ve in vivo farmakolojik maddeler üzerine araştırma için bir temel sağlar.

Şekil 3-1 Karışık referans madde kromatogramı Üstte: Pozitif iyon modunda BPC tablosu: Altta: Negatif iyon modunda BPC tablosu

Şekil 3-1 Karışık referans madde kromatogramı Üstte: Pozitif iyon modunda BPC tablosu: Altta: Negatif iyon modunda BPC tablosu