Cistanche Böbrek İskemi-reperfüzyon Hasarını Koruyabilir

İletişim: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-posta:audrey.hu@wecistanche.com

Jan H. Lindeman1, Leonie G. Wijermars1, Sarantos Kostidis2, Oleg A. Mayboroda2, Amy C. Harms3, & et al.

Gecikmiş greft işlevi,iskemi reperfüzyon hasarının tezahürüböbrek nakli bağlamında. Yüzlerce müdahale yapılırkeniskemi reperfüzyon hasarını başarıyla azaltındeneysel modellerde, tüm klinik müdahaleler başarısız olmuştur. Bu keşif amaçlı klinik değerlendirme, üç çalışma grubunda greft üzerinde 36 ardışık arteriyovenöz kan numunesi ile reperfüzyon öncesi ve sonrası 18 doku biyopsisinden elde edilen verileri birleştirerek klinik iskemi reperfüzyon hasarının olası metabolik kökenlerini inceledi. Bu gruplar, gecikmiş greft fonksiyonu olan ve olmayan canlı ve ölü donör greftlerini içeriyordu. Grup tahsisi klinik sonuçlara dayanıyordu. Doku analizi için sihirli açı NMR kullanıldı ve plazma analizi için kütle spektrometrisi tabanlı platformlar kullanıldı. Herşeyböbreklerbir yıl süreyle işlevseldi. Metabolomik verilerin entegrasyonu, gelecekteki gecikmiş aşı fonksiyonunu tanımak için ayrımcı bir profil tanımladı. Bu profil, reperfüzyon sonrası ATP/GTP katabolizması (önemli ölçüde bozulmuş fosfokreatin geri kazanımı ve önemli kalıcı (hipo)ksantin üretimi) ve devam eden önemli doku hasarı ile karakterize edildi. Aktive edilmiş glikoliz, yağ asidi oksidasyonu, glutaminoliz ve otofajiye rağmen ve Krebs döngüsündeki oksoglutarat dehidrogenaz kompleksi seviyesindeki bir kusurla ilişkili olarak başarısız yüksek enerjili fosfat geri kazanımı meydana geldi. Reperfüzyon sonrası metabolik kollaps ile ilişkili iskemi reperfüzyon hasarına bağlı klinik gecikmiş greft fonksiyonu. Bu nedenle, iskemi reperfüzyon hasarına bağlı gecikmiş greft fonksiyonunu söndürme çabaları, ya Krebs döngüsünün bütünlüğünü koruyarak ve/veya metabolik kurtarma yollarını işe alarak metabolik yetkinliği korumaya odaklanmalıdır. Böbrek Uluslararası (2020) 98, 1476–1488; https://doi.org/10.1016/ j.kint.2020.07.026

ANAHTAR KELİMELER: ATP; gecikmiş greft fonksiyonu; glikoliz; iskemi reperfüzyon hasarı; metabolizma; oksidatif fosforilasyon

cistanche etkileri: önlemekiskemi-reperfüzyon hasarı

iskemi reperfüzyon hasarı (IRI)önceden iskemik dokunun reperfüzyonundan sonra artan doku hasarı olgusudur.1,2 Miyokard veya beyin enfarktüsünden sonra organ hasarına3 ve organ nakli sonrası greft hasarına ana katkıda bulunur.4 Sayısız müdahale IRI'yi preklinik modellerde söndürse de, klinik başarı devam etmektedir. ulaşılacaktır.3,4 Bu nedenle, klinik öncesi modeller ve klinik bağlam arasında bir çeviri boşluğu vardır.

Gecikmiş greft fonksiyonu (DGF), aşağıdaki durumlarda IRI'nin tezahürüdür.böbrektransplantasyon.5 DGF, transplantasyondan sonraki ilk hafta veya haftalarda diyaliz ihtiyacı olarak tanımlanır.6 DGF, canlı donör greft prosedürleri bağlamında son derece nadir olmakla birlikte, ölen donör greft transplantasyonlarının yüzde 90'ını etkiler.6 Önceki çalışma, olay DGF ile reperfüzyon sonrası normoksik glikoliz arasında bir ilişki olduğunu göstermiştir.7 Bu gözlem, DGF'nin, reperfüzyon fazındaki mitokondriyal disfonksiyonun bir sonucu olarak greft enerji homeostazındaki bir kusurla ilgili olduğunu ima eder.7 Bu temelde, klinik DGF'nin şunları içerdiğini varsaydık. ve metabolik bir kusur (veya kusurlar) tarafından yönlendirilebilir. Bu çalışmanın amacı, metabolik tepkilerin derinlemesine bir analizini yapmaktı.iskemi-reperfüzyonIRI (DGF) olan ve olmayan. Bu keşifsel metabolik değerlendirme, reperfüze greftlere göre arteriyovenöz konsantrasyon (AV) farklılıklarının sıralı değerlendirmesini ve greft (doku) biyopsilerinin paralel profillenmesini içeren entegre, zamanla çözümlenmiş bir yaklaşıma dayanmaktadır. Üç çalışma grubu dahil edildi: daha sonra IRI olan ve olmayan merhum donör greftlerinden alınan greftler ve canlı donör greftleri. Ölen donör greftlerinin grup dağılımı (sırasıyla +DGF ve –DGF) klinik sonuçları temelinde geriye dönük olarak yapıldı. Canlı donör greftleri referans olarak dahil edilmiştir, çünkü bu greftler reperfüzyonu takiben ani fonksiyonel iyileşme ile ilişkilidir. Metabolik homeostazın birincil yönlerini kapsamak için, bu çalışmanın odak noktası aşağıdaki brüt metabolik kümeler üzerindeydi: nükleotid trifosfat metabolizması, yağ asidi (b)-oksidasyon, glikoliz/glutaminoliz, otofaji, Krebs döngüsü (kusurlar) ve hücre hasarı. Veriler buna göre sunulur.

(Yazışma: Jan H. Lindeman, Cerrahi Bölümü, Leiden Üniversitesi Tıp Merkezi, PO Box 9600, 2300 RC Leiden, Hollanda. E-posta: Lindeman@lumc.nl Alındı ​​20 Ocak 2020; 8 Haziran 2020'de revize edildi; 2 Temmuz'da kabul edildi 2020; 8 Ağustos 2020'de çevrimiçi yayınlandı)

cistanche etkileri: önlemekiskemi-reperfüzyon hasarı

SONUÇLAR

Çalışma örneklemi 53 hastayı içeriyordu. 18 hastadan eşleştirilmiş doku biyopsileri alındı ​​ve 36 hastada sıralı AV örneklemesi yapıldı. Bir hastada hem biyopsi alındı ​​hem de AV örneklemesi yapıldı. 3 çalışma grubu için klinik detaylar Ek Tablo S1A (doku biyopsileri) ve S1B'de (AV örneklemesi) gösterilmiştir. Tüm DGF vakaları, en az 7 günlük bir süre boyunca çoklu diyaliz gerektirdi ve hepsi yeterli fonksiyonel iyileşme gösterdi. DGF'si olmayan ölen donörlerin hiçbiri transplantasyondan sonra diyalize ihtiyaç duymadı. Bir yıllık greft sağkalımı yüzde 100 idi.

İlk olarak, 3 donör grubu için (canlı [referans] donör greftleri, –DGF ölen donör greftleri ve þDGF [IRI] merhum donör greftleri) için metabolik imzalardaki varsayılan farklılıkları araştırdık. {1}}dakika reperfüzyon sonrası zaman noktası (Şekil 1a) vedoku metabolizması(doku biyopsileri) reperfüzyon sonrası 40-dakikalar için zaman noktası (Şekil 1b). Bu zaman noktaları, iskemi veya soğuk depolama sırasında biriken veya koruma sıvısının bileşenleri olan metabolitlerin yıkanmasından (örneğin, canlı donör greftlerinden histidin yıkaması; Ek Şekil S1, H'nin seçici kullanımını gösterir [Histidin] Bu greftlerdeki TK koruma sıvısı.7 Bu zaman noktaları için sonuçlar (z-skorları) Şekil 1a (AV farklılıkları) ve 1b'deki (doku) ısı haritalarında özetlenmiştir. Verilerin gruplandırılması, tüm metabolik verileri kapsayan 6 kümeye göre yapıldı: (i) nükleozid trifosfat katabolizması, (ii) b-oksidasyon, (iii) glikoliz/glutaminoliz, (iv) otofaji, (v) Krebs döngüsü kusurları, ve (vi) hücre hasarı.

AV farklılıkları için ısı haritaları, canlı donör ve –DGF greftleri için paralel metabolik imzaları ve þDGF greftleri için açıkça ayırt edici bir imzayı gösterir (Şekil 1a). Daha az belirgin olmasına rağmen, benzer bir model doku metabolitleri için gözlendi (Şekil 1b). –DGF ve þDGF greftlerinin (canlı donör grefti olmadan) özel haritalanması, benzer sonuçlarla (gösterilmemiştir) sonuçlandı ve bu, canlı donör (referans) verilerinin analize dahil edilmesinin analizin sonuçlarına müdahale etmediğini gösterir. Toplu olarak, veriler renal IRI için brüt metabolik imza sağlar.

Netlik sağlamak amacıyla, tek tek metabolitlerin verileri 6 metabolik küme cinsinden sunulur. Reperfüzyonun ilk dakikaları içinde soğuk depolama sırasında biriken metabolitlerin başlangıçtaki yıkanmasından kaynaklanan paraziti önlemek için, net perfüzyon sonrası salınım veya alım tahminleri 10-ila {{3 için AV farklarının entegrasyonuna dayanır. }}dakika reperfüzyon sonrası zaman aralıkları (eğriler arasındaki alan).

Metabolitlerin ilk kümesi ("nükleosit trifosfat katabolizması") bir sinyal verir.kalıcı post-reperfüzyonDaha sonra DGF (þDGF) içeren greftlerde metabolik yetersizlik ("güç kapatma"). Bu sonuç, þDGF greftlerinde yüksek enerjili fosfat tamponlu fosfokreatinin reperfüzyon sonrası geri kazanımının bozulmasına (P < 0.001;="" şekil="" 2a)="" ve="" kalıcı="" post="" ile="" dayanmaktadır.="" -reperfüzyon="" adenosin="" trifosfat/guanozin="" trifosfat="" (atp/gtp)="" katabolizması.="" sonuncusu,="" hipoksantin="" ve="" ksantinin="" (sırasıyla="" şekil="" 2b="" ve="" c,="" p="">< 0.0001="" ve="" 0.02)="" devam="" eden="" salınımında="" (av="" farkları),="" bu="" aşılardan="" atp="" ve="" gtp'nin="" terminal="" bozunma="" ürünlerinde="" yansıtılır.="" reperfüzyon="" öncesi="" doku="" biyopsilerine="" ilişkin="" veriler,="" iskemik="" depolama="" süresinin="" sonunda,="" canlıda="" bulunan="" en="" düşük="" içerik="" ve="" ölen="" donör="" greftlerinde="" en="" yüksek="" olmak="" üzere="" dereceli="" derecelerde="" inozin="" ve="" hipoksantin="" birikimi="" gösterdi="" (şekil="" 2d="" ve="" e).="" reperfüzyon="" sonrası="" (t="40" dk)="" hipoksantin="" ve="" inozin="" doku="" içerikleri="" 3="" donör="" grubunun="" tümünde="" benzer="" ve="" düşüktü="" (şekil="" 2d="" ve="">

þDGF greftlerinde reperfüzyon sonrası ATP katabolizması, yağ asidi b-oksidasyonunun (Ek Şekil S2), aktive edilmiş glikoliz / glutaminolizin (Şekil 3) ve otofajinin (Şekil 4) belirgin bir reperfüzyon sonrası restorasyonuna rağmen meydana geldi. 3 greft tipinin tümü, doku b-hidroksibutirat içeriğinin (Ek Şekil S2A) tek tip restorasyonunu ve orta zincirli yağ asitlerinin (C8-C12) dolaşımdan seçici olarak temizlenmesini (alımını) gösterdi (Ek Şekiller S1 ve S2B-E), üniform olduğunu gösterir. b-oksidasyonunun eski haline getirilmesi. Bununla birlikte, –DGF ve þDGF ölen donör greftlerinde asetil-karnitin doku birikimi (Ek Şekil S2F) ve þDGF greftlerinden asetilkarnitinin yıkanması (AV farklılıkları) (Ek Şekil S2G, P < 0.03)="" anlamına="" gelir.="" sırasında="" oluşan="" asetil="" gruplarının="" atılmasında="" dereceli="">

Cistanche otu

Glikoliz/glutaminoliz ağlarının haritalanması (Şekil 3) eşit doku glukoz seviyeleri gösterdi (Şekil 4a) ve şDGF donör greftlerinin özel bir özelliği olarak reperfüzyon sonrası kalıcı normoksik glikoliz doğrulandı (yani kalıcı laktat ve piruvat salınımı (Şekil 3b ve c, P).<0.0001 and=""><0.04, respectively)="" and="" release="" of="" the="" transamination="" products="" alanine="" and="" aspartate="" (figure="" 3e="" and="" f,="" p="" <="" 0.02="" and="" <="" 0.0001,="" respectively).="" serine="" (figure="" 4b)="" and="" phosphoserine="" (supplementary="" figure="" 3d)="" released="" from="" þdgf="" grafts="" may="" (partially)="" reflflect="" transamination="" of="" the="" glycolysis="" intermediate="" phosphoglycerate.="" persistent="" post-reperfusion="" glutamate="" release="" (figure="" 3k,="" p="" <="" 0.002),="" selective="" release="" of="" the="" transamination="" products="" alanine="" and="" aspartate="" (figure="" 3e="" and="" f),="" and="" exhaustion="" of="" the="" tissue="" asparagine="" pool="" (figure="" 3j,="" p="" <="" 0.03)="" in="" þdgf="" grafts="" imply="" continued="" post-reperfusion="" glutaminolysis="" (alanine)="" and="" glutamine="" shuttling="" (asparagine="" aspartate)8="" in="" the="" post-reperfusion="" phase="" of="" these="" grafts.="" moreover,="" the="" exclusive="" release="" of="" serine,="" methionine,="" and="" tyrosine="" (figure="" 4a–c,="" all="" ps="" <="" 0.0005),="" along="" with="" disposal="" of="" butyryl="" carnitine="" and="" isovaleryl="" carnitine="" (figure="" 4d="" and="" e,="" p=""><0.006 and=""><0.003, respectively),="" deamination="" products="" of="" the="" branched-chain="" amino="" acids9,10="" from="" þdgf="" grafts,="" but="" not="" from="" the="" other="" graft="" types="" (figure="" 4a–e),="" implies="">reperfüzyon sonrasıbu greftlerde otofaji.11.

Şekil 1|30 dakika sonra donör greft üzerindeki arteriyel-venöz metabolit konsantrasyonu farklılıkları ve reperfüzyondan 40 dakika sonra doku metabolit içeriği için kümelenmiş ısı haritaları. (a) Reperfüzyondan 30 dakika sonra arteriyel-venöz metabolit konsantrasyonları için kümelenmiş ısı haritası. Sütunlar 3 donör grubunu temsil eder (canlı donör greftleri [referans grubu, n=10]; daha sonra gecikmiş greft fonksiyonu olmayan merhum donör greftleri [DGF {–DGF, n=10}] ve daha sonra DGF'li ölen donör greftleri [şDGF, n=16]). Bileşikler, 5 metabolik kümeye göre kümelenir ve her küme içinde, canlı donör grubunun z-skoruna göre sıralanır. Yeşil, greft tarafından net alımı yansıtır ve kırmızı, greftten net salınımı yansıtır. (Devam etti)

Şekil 1 (Devam ediyor) (b) Reperfüzyondan 40 dakika sonra alınan greft biyopsilerinin HR sihirli açısı nükleer manyetik rezonans analizinde tanımlanan doku metabolitleri için kümelenmiş ısı haritası. Sütunlar 3 donör grubunu temsil eder (canlı donör grubu [referans grubu, n=6, daha sonra DGF içermeyen kadavra donör greftleri [–DGF, n ¼ 6] ve geç DGF'li merhum donör greftleri [şDGF, n ¼ 6]). Kırmızı, 3 grubun geometrik ortalamasının üzerindeki doku içeriğini yansıtır ve yeşil, doku içeriğini altındaki bir doku içeriğini yansıtır.

–DGF ve þDGF greftlerinde (Şekil 2f) ve ilk (canlı donör ve –DGF greftleri) ve devam eden (þDGF greftleri) asetilkarnitin salınımında (P < 0)="" reperfüzyon="" sonrası="" asetil-karnitin="" birikimi="" (doku).{{10="" }}3),="" reperfüzyondan="" sonra="" geçici="" (–dgf="" greftleri)="" veya="" kalıcı="" (þdgf="" greftleri)="" bozulmuş="" asetil-koenzim="" a="" bertarafını="" gösterir="" (ek="" şekil="" 2g).="" bu="" birikim,="" abartılı="" glikoliz="" ve="" b-oksidasyondan="" kaynaklansa="" da,="" krebs="" döngüsü="" kusurlarının="" bir="" sonucu="" olarak="" bozulmuş="" asetil="" atılımını="" da="" gösterebilir.="" þdgf="" greftleri="" için,="" ikinci="" mekanizma,="" bu="" greftlerde="" özel="" bir="" özellik="" olarak="" krebs="" döngüsü="" ara="" maddesi="" a-ketoglutarat'ın="" (şekil="" 5c,="" p="">< 0.0005)="" seçici="" ve="" kalıcı="" salınımı="" ve="" þdgf="" greftlerinde="" doku="" süksinat="" geri="" kazanımının="" bozulmasıyla="" desteklenir.="" (şekil="">

Son bir ayrımcı metabolit kümesi, devam eden hücre hasarı ile ilgilidir. Bu küme şunları içerir:reperfüzyon sonrasıurasil salınımı, yerleşik bir hücre hasarı belirteci12,13 (Ek Şekil S3A, P < 0.0001)="" ve="" bunlarla="" ilişkili="" amino="" asit="" türevlerinin="" plazmalojenlerin="" hidrolizi="" (yani="" fosfo-etanolamin,="" etanolamin="" ve="" fosfo-serin;="" ek="" şekil="" s3bd,="" p="">< 0.001;="" ek="" şekil="" s1).="" þdgf="" grubunda="" kolin="" için="" hiçbir="" av="" farkı="" olmamasına="" rağmen="" (p="0.60)," bu="" gözlem="" canlı="" donör="" ve="" –dgf="" grubundaki="" net="" kolin="" alımının="" aksinedir="" (sırasıyla="" p="">< 0.0001="" ve="" 0.02).="" bu="" nedenle,="" þdgf="" greftlerinde="" kolin="" plazmalojenlerinin="" hidrolizi="" kolin="" alımı="" ile="" maskelenebilir.="" böyle="" bir="" mekanizma,="" þdgf="" grubunda="" kolin14'ün="" oksidasyon="" ürünü="" olan="" betain'in="" seçici="" ve="" ilerleyici="" salınımı="" ile="" desteklenir="" (ek="" şekiller="" s3g,="" p=""><>

Önceki gözlemler, olay IRI'sini kalıcı ile ilişkilendirir.reperfüzyon sonrasıMitokondriyal başarısızlık ve glikolitik ve lipolitik yolların aktivasyonu bağlamında ATP katabolizması ve devam eden hücre hasarı (Şekil 6). ATP'nin hücresel homeostaz ve hayatta kalmadaki hayati rolü göz önüne alındığında, yardımcı ATP-rejeneratif yolların (yani mitokondriyal solunumdan bağımsız) işe alınmasının faydalı olacağı düşünülmüştür. Bu bağlamda, geleneksel olmayan yollarla ATP üretebilen bir nükleozid olan inozini düşündük. Şekil 7'de gösterildiği gibi, ne önleyici ne de kurtarıcı inozin iletimi (10 mMol/l'ye kadar olan konsantrasyonlarda), kimyasal olarak indüklenen metabolik felç sonrasında ATP tükenmesini kurtarmadı.

Şekil 3|Reperfüzyon sonrası glikoliz ve glutaminoliz. Arteriyel venöz farklılıklar için eğriler (kırmızı eğri arteriyeldir, mavi eğri venözdür). Doku biyopsileri (çubuk grafikler): beyaz çubuklar reperfüzyon öncesi biyopsileri temsil eder; gri çubuklar reperfüzyon sonrası biyopsileri temsil eder (reperfüzyondan t=40 dakika sonra). *P < 0.05.="" (a)="" doku="" glikoz="" içeriği.="" (b–i)="" glikoliz="" ara="" maddeleri:="" laktat,="" piruvat,="" alanin,="" aspartat="" ve="" asparagin.="" (k,l).="" glutaminoliz,="" glutamin="" ve="" glutamat="" ara="" ürünleridir.="" doku="" nükleer="" manyetik="" rezonansı="" (nmr;="" grup="" başına="" n="6):" (a)="" canlı="" donörde="" doku="" glikozu="" geri="" kazanımı.="" (d,="" f,="" h)="" kararlı="" laktat,="" alanin="" ve="" aspartat="" doku="" içerikleri="" bu="" ara="" ürünlerin="" yıkanmasını="" yansıtır="">

Şekil 3 (devamı) böbrekten. (j) Reperfüzyon sonrası biyopsilerde + gecikmeli greft fonksiyonunda (DFG) ölçülemeyen doku asparajin. Arteriyel-venöz (AV) konsantrasyon farklılıkları (canlı, –DGF ve þDGF gruplarında sırasıyla n=10, 10 ve 16): (b,c) reperfüzyon sonrası kalıcı laktat (P < 0.0001)="" ve="" piruvat="" (p="">< 0.04)="" bu="" greftlerden="" salınır.="" (e)="" þdgf="" greftlerinden="" alanin="" (p="">< 0.02),="" (g)="" aspartik="" asit="" (p="">< 0.0001)="" ve="" (þk)="" glutamat="" salınımı="" (gecikmiş="" greft="" fonksiyonu="" (dgf="" greftleri="" p="">< 0.002'de="" normoksik="" glikoliz="" gösterir)="" glutamin="" (i)="" için="" önemli="" av="" farklılıkları="">

cistanche etkileri: önlemekböbrek hastalıkları

TARTIŞMA

Klinik böbrek transplantasyonu bağlamında gerçekleştirilen bu çalışmadan, IRI'nin (DGF), oksidatif fosforilasyonun reperfüzyon sonrası neredeyse anlık ve kalıcı başarısızlığının ve enerji homeostazını sürdüremeyen aktive edilmiş normoksik glikolizin bir sonucu olduğu resmi ortaya çıkmaktadır. Buna karşılık, yüksek enerjili fosfat havuzları giderek tükenir ve hücresel bütünlük korunamaz, bu da devam eden doku hasarına neden olur.

Bu klinik çalışma, reperfüzyondan hemen önce ve 40 dakika sonra alınan doku biyopsilerinden ve reperfüze greft üzerindeki AV farklılıklarının sıralı değerlendirilmesinden elde edilen metabolik verilerin entegrasyonuna dayanmaktadır. Bu AV farklılıkları yalnızca metabolik (mal) adaptasyonların hızı ve süresi için bir gösterge sağlamakla kalmaz, aynı zamanda eşleştirilmiş doku biyopsilerinde gözlenen eğilimleri yönlendirmeye ve metabolit klirensinin (örn. 15,16 AV yaklaşımının çözünürlüğü, yalnızca orta zincirli yağ asitlerinin seçici alımını göstermekle kalmayıp aynı zamanda doymamış C14 karnitin türlerinin tetradekenoil ve tetradekadienil karnitin olduğunu da gösteren açilkarnitin verileriyle açıkça gösterilmiştir. orta zincirli yağ asitlerine benzer şekilde davranırlar (Ek Veriler S1) ve belirli yağ asidi taşıyıcılarına dayanmayabilir.17 Aslında, veri analizi sürecinde, yalnızca doku biyopsilerine güvenmenin bu çalışmadaki çoğu sonucu gizleyeceği gözlenmiştir. çünkü oluşan metabolitlerin çoğu dolaşıma etkin bir şekilde temizlenir. Stabil arteriyel kan konsantrasyonları, kan homeostazının korunduğunu ve sonuç olarak, salınan veya emilen metabolitlerin etkin bir şekilde atıldığını veya başka bir yerde yeniden doldurulduğunu gösterir.15,16 Gözlemlenen stabil doku içerikleri, ancak açık AV farklılıkları doku bazlı metabolomik değerlendirmelerin geçerliliğine meydan okur. Ölen donör böbrekleri bağlamında ve çalışmanın zaman çerçevesi bağlamında, tüm ölen donör greftleri 40- dakikalık ölçüm aralığı için anürik olduğundan idrar klirensinin engelleyici bir faktör olmadığını unutmayın.

Verilerin eşlenmesi, IRI için tamamen ayrımcı olan bir metabolik ayak izini tanımlar. Spesifik olarak, gelecekteki DGF'li greftlerin reperfüzyon fazı, ciddi şekilde bozulmuş oksidatif fosforilasyon (histotoksik hipoksi)18 ve ATP rejenerasyonunu sürdüremeyen telafi edici normoksik glikoliz ile tek tip ve ayırt edici bir şekilde karakterize edilir. İkinci sonuç, yüksek enerjili fosfat tamponu fosfokreatinin19 tam olmayan geri kazanımına ve devam eden (hipo)ksantin salınımı tarafından yansıtılan kalıcı reperfüzyon sonrası ATP/GTP katabolizmasına dayanmaktadır. Aslında, reperfüzyondan 30 dakika sonra hipoksantin salınımına (AV farklılıkları) dayalı þDGF greftleri için adenosin kayıplarının yaklaşık değeri (yaklaşık olarak rapor edilen reperfüzyon sonrası akış hızlarına dayalıdır,20 ortalamaböbrek dokusukütle,21 ve renal ATP içeriği22), greft ATP havuzunun 30 dakika boyunca neredeyse tükendiğini gösterirreperfüzyon sonrası. ATP havuzunun kritik bir şekilde tükenmesi, hücreyi, ATP üretimini harekete geçiren proton-hareket kuvvetlerinin yeniden kurulmasına tepkisiz hale getiren ve hücreyi kurtarma stratejilerine tepkisiz hale getiren katabolik bir kilitlenme ile sonuçlanabilir.

þDGF greftlerindeki reperfüzyon sonrası ATP eksikliği ve histotoksik hipoksi, þDGF greftlerindeki fosfolipidlerin (plazmalojenler) hidrolizi ile bağlantılı amino asitlerin seçici salınımının altında yatan sebep olabilir. Deneysel çalışmalar plazmalojenlerin ve fosfolipidlerin hidrolizini doku hipoksisinin erken bir özelliği olarak tanımlamıştır23 ve plazmalojenlerin hidrolizi iskemik böbrek hasarı bağlamında tanımlanmıştır.24 Mekanik olarak, bu fenomen membran translokasyonu ve sitozolik kalsiyum aktivasyonu ile bağlantılıdır. fosfolipaz ve bir fosfofruktokinaz düzenleyici element arasındaki hipoksiye dayalı kompleks oluşumundan kaynaklanan bağımsız fosfolipaz A2.25,26 Hipoksi veya ATP tedavisinin tersine çevrilmesi, fosfolipaz-fosfofruktokinaz kompleksini ayırır ve fosfolipaz aktivitesini ortadan kaldırır. Canlı donörden ve –DGF greftlerinden (fosfo-) etanolamin salınımının reperfüzyon sonrası kesilmesi dinamiklerinin yanı sıra þDGF greftlerindeki kalıcı salınımın, farklı derecelerde ve metabolik iyileşme oranlarını yansıtabileceğine dikkat edin. Bununla birlikte, daha önceki raporlar sitozolik kalsiyumdan bağımsız bir fosfolipaz A2,25,26'nın rolünü ima ederken, betain ve (fosfo-)etanolamin için gözlemlenen AV farklılıkları, aynı zamanda tip C-fosfolipazları (fosfo-etanolamin) içeren daha kapsamlı bir fosfolipaz aktivasyonu anlamına gelir. ve D-fosfolipazlar (etanolamin/kolin). Benzer şekilde, doku asparajinin tükenmesi (Şekil 4j) ve þDGF greftlerinden aspartat salınımı (Şekil 4g), ATP tükenmesine bağlı olarak bozulmuş asparajin sentaz aktivitesini yansıtabilir.

Şekil 4|D gecikmeli greft fonksiyonu (DGF) greftlerinde aktive edilmiş reperfüzyon sonrası otofaji. Arteriyel-venöz farklılıklar için eğriler (kırmızı eğri arteriyel, mavi eğri venöz). Doku biyopsileri (çubuk grafikler): beyaz çubuklar reperfüzyon öncesi biyopsileri temsil eder; gri çubuklar reperfüzyon sonrası biyopsileri temsil eder (reperfüzyondan t=40 dakika sonra). *P < 0.05.="" (a–c)="" metionin,="" serin="" ve="" tirozinin="" reperfüzyon="" sonrası="" salınımı="">

Şekil 5|Gelecekte gecikmiş greft fonksiyonuna (DGF) sahip greftlerde reperfüzyon sonrası Krebs döngüsü defekti. Arteriyel-venöz konsantrasyon (AV) farklılıkları için eğriler (kırmızı eğri arteriyel, mavi eğri venözdür). Doku biyopsileri (çubuk grafikler): beyaz çubuklar reperfüzyon öncesi biyopsileri temsil eder; gri çubuklar reperfüzyon sonrası biyopsileri temsil eder (reperfüzyondan t=40 dakika sonra). *P < {{10}}.05.="" (a–h)="" krebs="" döngüsü="" ara="" maddeleri="" için="" av="" farklılıkları="" (canlılarda="" sırasıyla="" n="10," 10="" ve="" 16,="" –dgf="" ve="" þdgf="" grupları):="" a-ketoglutarat'ın="" kalıcı="" salınımı="" (þdgf="" greftlerinden;="" p="">< 0.001)="" .="" (e,g)="" þdgf="" greftlerinde="" reperfüzyon="" sonrası="" doku="" süksinat="" geri="" kazanımı="" yok="" (p=""><>

þDGF greftlerinde reperfüzyon sonrası ATP katabolizması, katabolik yolların kapsamlı aktivasyonuna rağmen meydana geldi: glikoliz, orta zincirli yağ asitlerinin b-oksidasyonu (tüm greft tiplerinde üniform olarak aktive), glutaminoliz (canlı donörde reperfüzyon üzerine geçici olarak aktive edilir ve –DGF greftleri) ) ve aktif otofaji. Aslında, izovaleril- ve butiril karnitinin reperfüzyon sonrası salınımı, dallı zincirli amino asitler izolösin ve lösinin deaminasyon ürünleri, gelecekteki DGF için ayrımcı biyobelirteçler olarak tanımlandı.

þDGF greftlerinden asetilkarnitin ve piruvatın kalıcı salınımı, aktive edilmiş katabolik yolaklar tarafından oluşturulan flaksların oksidatif kapasiteyi aştığını gösterir. Reperfüzyon sonrası ketoglutarat salınımı, öncülü sitrat ve izositratın dolaşımdan net alımı ve başarısız doku süksinat geri kazanımı, bozulmuş oksidatif fosforilasyonun oksoglutarat dehidrojenaz kompleksi seviyesinde bir kusur içerdiğini gösterir. Spesifik olarak, gözlemlenen metabolik ayak izi ve metabolik bozuklukların zaman çerçevesi, kalıcı metabolik düzensizlikte Krebs döngüsünün 27, 28 tersine çevrilebilirliği için bir rol göstermez, bu da kemirgenlerde 28 IRI için gözlenen mekanizmanın insana tam olarak çevrilmediğine dair daha fazla kanıt sağlar. bağlam.29.

Bozulmuş oksoglutarat dehidrogenaz aktivitesi, kompleksin iskemi ile ilişkili hasarından kaynaklanabilir30, ancak aynı zamanda,reperfüzyon sonrasıBozulmuş oksoglutarat dehidrogenaz aktivitesi, kompleksin iskemi ile ilişkili hasarından kaynaklanabilir30, ancak aynı zamanda kofaktörleri asetil-koenzim A, FAD+ ve NAD+'nın reperfüzyon sonrası kullanılabilirliğinin bozulmasını içerebilir veya bunlar tarafından abartılabilir. 31 þDGF greftleri için, reperfüzyon sonrası asetil-koenzim A arınması ve bozulmuş hücresel redoks durumu (bozuk NAD+ mevcudiyeti ile indirgeyici stres) nedeniyle bu tür eksiklikler oluşabilir; bu, þDGF greftlerindeki düşük laktat-piruvat oranı tarafından desteklenen bir kavramdır. 32.

Bu metabolik yaklaşım, solunum zinciri tutulumunun değerlendirilmesine izin vermez. Bununla birlikte, hem solunum kompleksleri I hem de II'de iskemi reperfüzyonu ile ilgili kusurları daha önce tanımlamıştık.7,29 Bu çalışmadaki ve önceki mitokondriyal çalışmadaki verilere dayanarak, klinik renal IRI'nin birincil (veya reperfüzyonun ilk dakikalarında veya öncesinde meydana gelen mitokondriyal Krebs döngü-redoks mekiğine hakaret(ler)i ortaya çıkarmak. ATP seviyelerinin eski haline getirilememesi, hücresel NAD+ ve FAD+ havuzunu aşamalı olarak tüketerek (indirgeyici stres) enerji krizini sürdüren katabolik yolların sürekli ve kapsamlı aktivasyonu ile sonuçlanır.33 Yetersiz mitokondriyal solunumun bu özel bağlamında, pürin inozin faydalı olabilir. . Adenozinden farklı olarak,34 inozin plazmada stabildir; eritrositler35 gibi zorunlu glikolitik hücrelerde (yani mitokondri içermeyen hücreler) ve hipoksik böbrek hücrelerinde36 alternatif bir ATP kaynağı olarak tanımlanmıştır ve reperfüzyondan sonra tükenir. Ne yazık ki, inosin takviyesi, zorunlu bir metabolik kapatmadan sonra hücresel ATP tükenmesini kurtarmadı, IRI'yi söndürmeyi amaçlayan metabolik kurtarma stratejileri için çok az yer bıraktı ve IRI'yi sınırlamak için önleyici stratejilere olan güveni vurguladı.

Tonifiye böbrek cistanche

Bu çalışmada sınırlamalar vardır. Çok sayıda karşılaştırma nedeniyle, çoklu karşılaştırmaların düzenlendiği durumlarda rastgele şans nedeniyle önemli bulguların ortaya çıkma potansiyeli yüksektir. Sonuçlarımız sağlam biyolojik ilişkilerle desteklense de, sonuçlar çoklu karşılaştırmalarla ilgili sorunlarla karıştırılabilir.

Diğer bir sınırlama, çalışmanın klinik örneklere dayalı olmasıdır; bu nedenle, ATP ve redoks durumunun doğrudan değerlendirilmesi için gerekli olan kelepçe dondurması mümkün değildi. Gözlemlenen metabolom, hayvan modellerinde bildirilenden açıkça farklı olduğundan ve bir sistem arızasını yansıttığından, hayvan modellerinde veya respirometri sistemi gibi ex vivo sistemlerde daha ayrıntılı değerlendirmeler yapamadık. Bu çalışmadaki sonuçlar,böbrek; bu nedenle, diğer organlar için sonuçlar farklı olabilir. Bu çalışmadaki nispeten yüksek donör yaşı, Hollanda'daki donör popülasyonunun bir yansımasıdır. Daha da önemlisi, Hollanda için 10-yıllık transplantasyon sonuçları en azından Amerika Birleşik Devletleri gibi daha genç donörlere sahip ülkelerle eşittir.37 Beklendiği gibi þDGF vakalarının çoğu DCD greftleriydi. Benzerini fark ettikmetabolik profillerDBD ve DCD greftleri için; bununla birlikte, bu keşifsel çalışmanın gücü, bu 2 donör tipi arasındaki ince farkları tespit etmek için açıkça çok düşüktür.

Şekil 7|Hem önleyici hem de kurtarıcı inozin tedavisi, adenozin trifosfat (ATP) seviyelerini geri kazanamaz. PK-1 renal hücre çizgisi, ATP-adenosin difosfat (ADP) oranının PercevalHR flfloresan biyosensörü ile stabil bir şekilde transfekte edildi.

Kimyasal olarak indüklenen metabolik felç, rotenon/aktinomisin/2-deoksiglukoz eklenerek indüklendi ve ATP-ADP oranı (göreceli flfloresans) izlendi. Kahverengi, kontrol; siyah, metabolik felç kontrolü; yeşil, önleyici inozin tedavisi (10 mMol/l); kırmızı, inosin kurtarma t=metabolik felç indüksiyonundan 15 dakika sonra.

Sonuç olarak, bu çalışma, klinik renal IRI'den önce, neredeyse ani bir metabolik çöküş ve eşlik eden bir yüksek enerjili fosfat krizinin geldiğini göstermektedir. Bu derin ve kalıcı metabolik eksiklik ve onun anlık doğası (ve bunun sonucunda minimal terapötik fırsat penceresi), ATP'nin mevcudiyetine dayanan herhangi bir farmasötik müdahaleye müdahale edecektir. Bu, klinik öncesi bulguların klinik ortama zayıf çevrilebilirliğini açıklayabilir.2–4 Klinik DGF'nin gözlemlenen metabolomu, sıçanlar,28 fareler,38 ve domuzlar,39,40 için bildirilen metabolik tepkilerle keskin bir tezat oluşturur; dakika reperfüzyon. Bu, kemirgenler ve daha büyük memeliler arasındaki mitokondriyal veya metabolik fizyolojideki temel farklılıklarla ilgili olabilir (örneğin, insan donör böbreklerinde iskemi kaynaklı süksinat birikimi oluşmaz).29 Bu bağlamda, nakledilen tüm böbreklerin maruz kaldığına dikkat çekmek önemlidir. ileiskemi reperfüzyonuve sadece bir greft alt grubu IRI (DGF) geliştirir. Bu çalışmada grup tahsisi (+DGF veya –DGF) geriye dönük olarak yapılmıştır ve bu nedenle iskemi reperfüzyonu ile IRI arasında ayrım yapar. Deneysel modellerde28,38-40 iskemi reperfüzyonunun IRI'yi tetiklemek için yetersiz olduğu göz ardı edilemez.

Sürdürülen ciddi hasara rağmen, tüm þDGF greftleri sonunda iyileşti ve köprüleme müdahalelerinin (örn., diyaliz) mevcut olması koşuluyla dikkate değer bir iyileşme potansiyeli anlamına gelir. Not olarak, beyin ölümü veya kardiyak ölümden sonra ölen donörlerden elde edilen greftlerde DGF için benzer metabolomlar tek tip bir mekanizma ima etse de, 2 donör tipi için uzun vadeli greft sağkalımı üzerinde DGF'nin zıt bir etkisi vardır.41 Aslında, her ne kadar DGF beyin ölümünden sonra ölen donörlerden alınan greftlerin hayatta kalmasını açıkça etkiler, kardiyak donörlerden alınan bu tür greftlerde etkilemez. Bu kontrast, kardiyak ölüm donörlerinden alınan greftlerin daha üstün bir iyileşme potansiyelini yansıtıyor gibi görünmektedir.41

YÖNTEMLER

Leiden Üniversitesi Tıp Merkezi tıbbi etik kurulu çalışma protokolünü onayladı. Her hastadan yazılı bilgilendirilmiş onam alındı. Bu tek merkezli çalışmaya 53 hasta dahil edildi.böbrektransplantasyon: 37'sine kadavra donör greft prosedürü ve 16'sı canlı donör prosedürü uygulandı. Klinik sonuca (DGF) dayanarak, ölen donör greft alıcıları bir þDGF grubuna (n=16) veya –DGF grubuna (n=10) ayrıldı. DGF, transplantasyondan sonraki ilk haftadaki diyaliz ihtiyacı ile tanımlandı.6

Çalışma, reperfüzyonun ilk yarım saati sırasında ardışık arteriyovenöz (AV) kan örneklemesinden ve hemen öncesinde ve 40 dakika sonra toplanan eşleştirilmiş doku biyopsilerinden elde edilen metabolomik verilerin entegrasyonuna dayanmaktadır.

reperfüzyon.

36 hastada greft üzerinden sıralı AV kan örneklemesi yapıldı (Ek Tablo S1A). Renal ven kan örnekleri 30 s ve 3, 5, 10, 20 ve 30. dakikalarda ve arteriyel örnekler reperfüzyondan 0, 10 ve 30 dakika sonra toplanmıştır.42 Reperfüzyon öncesi ve sonrası eşleştirilmiş böbrek biyopsiler, 6 canlı ve 12 ölü donör greftinden reperfüzyondan hemen önce ve 40 dakika sonra elde edildi (Ek Tablo S1B; 1 hastada hem biyopsiler hem de AV numunesi alındı).

Hedeflenen metabolomik analizler, yerleşik kütle spektrometrisi tabanlı platformlar veya sihirli açılı nükleer manyetik rezonans (doku biyopsileri) kullanılarak standart işletim prosedürleri kullanılarak gerçekleştirilmiştir.43 Platformların kapsadığı metabolitler Ek Tablo S1'de özetlenmiştir.

İnozinin metabolik bir çöküş sırasında metabolik açığı kurtarma potansiyeli, PercevalHR flfloresan ATP adenosin difosfat biyosensörü ile stabil bir şekilde transfekte edilmiş proksimal tübül hücre hattında (LLC PK1) test edildi.44.

İstatistiklerle ilgili olarak, her biri için z-skorları temelinde ısı haritaları oluşturulmuştur.metabolit. Doku metabolit içeriğindeki grup içi değişiklikler Mann-Whitney testi ve gruplar arası farklılıklar Wilcoxon testi ile test edildi. AV farklılıkları, doğrusal bir karma model kullanılarak tahmin edildi. Tüm gözlemler teorik ağların parçası olduğu için çoklu test için düzeltme yapılmadı. Hastalar ve yöntemlerle ilgili ayrıntılar Ek Yöntemlerde verilmektedir.

cistanche özü

AÇIKLAMA

Tüm yazarlar rakip çıkarlar beyan etmemiştir.

TEŞEKKÜRLER

Manyetik Rezonans çekirdek tesisi, NTNU Trondheim, Norveç'teki Tıp Fakültesi tarafından finanse edilmektedir. Bu çalışma kısmen Hollanda Böbrek Vakfı (Metabolic Salvage Strategies to Enhance Transplant Outcome, proje17O/11) tarafından finanse edilmiştir.

EK MATERYAL

Ek Dosya (PDF)

Ek Hastalar ve Yöntemler.

Tablo S1. Eşleştirilmiş doku biyopsilerinin alındığı (A) ve AV örneklemesi yapılan işlemlerin (B) hasta ve transplantasyon özellikleri.

Tablo S2. AV örnekleri için platformlar ve metabolitleri kullanılır.

Şekil S1. Tam metabolomik veriler.

Şekil S2. Reperfüzyondan sonra b-oksidasyonunun (orta zincirli yağ asitleri) eski haline getirilmesi.

Şekil S3. Gelecekteki DGF'li greftlerden urasil ve fosfolipid (plazmalojen) ile ilişkili amino asitlerin seçici ve kalıcı reperfüzyon sonrası yıkanması.

Veri Eki 1. Asetilkarnitin, organik asitler ve amino asit platformları için ham AV verileri.

Veri Eki 2. Pürin ve pirimidin platformu için ham AV verileri.

REFERANSLAR

1. Gutteridge JMC, Halliwell B. Hastalıkta reaktif türler: arkadaşlar mı yoksa düşmanlar mı? İçinde: Halliwell B, Gutteridge JMC, ed. Biyoloji ve Tıpta Serbest Radikaller. Oxford, Birleşik Krallık: Oxford University Press; 2015:511–638.

2. Davidson SM, Ferdinandy P, Andreou I, et al. Miyokardiyal iskemi/reperfüzyon hasarını azaltmak için çok hedefli stratejiler: Haftanın JACC incelemesi konusu. J Am Coll Cardiol. 2019;73:89–99.

3. Lefer DJ, Bolli R. Kardiyoprotektif tedavilerin klinik öncesi değerlendirmesi için bir NIH konsorsiyumunun geliştirilmesi (CAESAR): enfarktüs boyutu sınırlaması çalışmalarında bir paradigma kayması. J Cardiovasc Pharmacol Ther. 2011;16:332– 339.

4. Cavaillé-Coll M, Bala S, Velidedeoğlu E, et al. Böbrek transplantasyonunda iskemi reperfüzyon hasarı üzerine FDA çalıştayının özeti. J Nakli miyim. 2013;13:1134–1148.

5. Schröppel B, Legendre C. Gecikmiş böbrek greft fonksiyonu: mekanizmadan translasyona. Böbrek İnt. 2014;86:251–258.

6. Mallon DH, Summers DM, Bradley JA, et al. Renal transplantasyondan sonra gecikmiş greft fonksiyonunu tanımlama: en basiti en iyisidir. Transplantasyon. 2013;96:885-889.

7. Wijermars LG, Schaapherder AF, de Vries DK, et al. Arızalı reperfüzyon sonrası metabolik iyileşme, olay gecikmeli greft fonksiyonu ile doğrudan ilişkilidir. Böbrek İnt. 2016;90:181–191.

8. Zhang J, Fan J, Venneti S, et al. Asparagin, glutamin tükenmesine hücresel adaptasyonu düzenlemede kritik bir rol oynar. Mol Hücre. 2014;56: 205–218.

9. Holecek M. Glutamin, dallı zincirli amino asitler ve protein metabolizması ilişkisi. Beslenme. 2002;18:130–133.

10. Newgard CB, An J, Bain JR, et al. Obez ve zayıf insanları ayırt eden ve insülin direncine katkıda bulunan dallı zincirli amino asitle ilişkili metabolik imza. Hücre Metab. 2009;9:311–326.

11. Drake KJ, Sidorov VY, McGuinness OP, et al. Kardiyak iskemi sırasında metabolik substratlar olarak amino asitler. Exp Biol Med (Maywood). 2012;237: 1369-1378.

12. De Jong JW, Huizer T, Janssen M, et al. Yüksek enerjili fosfatlar ve katabolitleri. İçinde: Piper HM, Preusse CJ, ed. Kalp Cerrahisinde İskemi-Reperfüzyon. Dordrecht, Hollanda: Springer; 1993:295–315.

13. van Os S, de Abreu R, Hopman J, et al. Yakın dönem kuzularda hipoksemi sırasında pürin ve pirimidin metabolizması ve elektrokortikal beyin aktivitesi. Pediatr Arş. 2004;55:1018–1025.

14. Blom HJ, De Vriese AS. Böbrek yetmezliğinde homosistein seviyeleri neden yükselir? Metabolik bir yaklaşım. J Lab Clin Med. 2002;139:262– 268.

15. Ivanisevic J, Elias D, Deguchi H, et al. Arteriovenöz kan metabolomikleri: doku içi metabostazın bir okuması. Bilim Temsilcisi 2015;5:12757.

16. Jang C, Hui S, Zeng X, et al. Domuzlarda ölçülen memeli organları arasındaki metabolik değişim. Hücre Metab. 2019;30:594–606.

17. Bremer J. Karnitin-metabolizma ve işlevleri. Physiol Rev. 1983;63: 1420–1466.

18. Siggaard-Andersen O, Fogh-Andersen N, Gøthgen IH, Larsen VH. Arteriyel ve karışık venöz kanın oksijen durumu. Kritik Bakım Med. 1995;23:1284-1293.

19. Stoica SC. Yüksek enerjili fosfatlar ve insan donör kalbi. J Kalp Akciğer Nakli. 2004;23:S244–S246.

20. Lisik W, Gontarczyk G, Kosieradzki M, et al. Organ allogreftlerinde intraoperatif kan akışı ölçümleri, postoperatif fonksiyonu tahmin edebilir. Nakil İşlemi 2007;39:371–372.

21. Molina DK, DiMaio VJ. Erkeklerde normal organ ağırlıkları: Bölüm II—beyin, akciğerler, karaciğer, dalak ve böbrekler. J Adli Tıp Patol'u muyum? 2012;33:368– 372.

22. Hems DA, Brosnan JT. İskeminin in vivo olarak sıçan karaciğeri ve böbreğindeki metabolitlerin içeriği üzerindeki etkileri. Biochem J. 1970;120:105-111.

23. De Medio GE, Goracci G, Horrocks LA, et al. Gerbil beyinde geçici iskeminin yağ asidi ve lipid metabolizması üzerine etkisi. Ital J Biochem. 1980;29:412–432.

24. Rao S, Walters KB, Wilson L, et al. MALDI doku görüntüleme ile birleştirilmiş SWATH lipidomikleri kullanılarak akut böbrek hasarında erken lipid değişiklikleri. J Physiol Renal Physiol Am. 2016;310:F1136–F1147.

25. Portilla D, Shah SV, Lehman PA, et al. Tavşan proksimal tübüllerinin hipoksik yaralanmasında sitozolik kalsiyumdan bağımsız plazmalojen seçici fosfolipaz A2'nin rolü. J Clin Invest. 1994;93:1609-1615.

26. Hazen SL, Wolf MJ, Ford DA, Brüt RW. Miyokardiyal iskemi sırasında fosfofruktokinazın miyokardiyal membranlarla hızlı ve geri dönüşümlü ilişkisi. FEBS Lett. 1994;339:213–216.

27. Chinopoulos C. Sitrik asit döngüsü hipoksi sırasında hangi yöne döner? a-ketoglutarat dehidrogenaz kompleksinin kritik rolü. J Neurosci Res. 2013;91:1030–1043.

28. Chouchani ET, Pell VR, Gaude E, et al. İskemik süksinat birikimi, mitokondriyal ROS yoluyla reperfüzyon hasarını kontrol eder. Doğa. 2014;515:431–435.

29. Wijermars LG, Schaapherder AF, Kostidis S, et al. Süksinat birikimi ve iskemi-reperfüzyon hasarı: farelerde ama erkeklerde değil, renal iskemi-reperfüzyonda bir çalışma. J Nakli miyim. 2016;16:2741–2746.

30. Tretter L, Adam-Vizi V. Alfa-ketoglutarat dehidrojenaz: oksidatif stresin bir hedefi ve üreticisi. Philos Trans R Soc Lond B Biol Sci. 2005;360: 2335–2345.

31. Heikal AA. Metabolik aktiviteler ve mitokondriyal anomaliler için doğal biyobelirteçler olarak hücre içi koenzimler. Biomark Med. 2010;4:241–263.

32. Sun F, Dai C, Xie J, et al. Sitozolik serbest NAD/NADH oranının tahmininde biyokimyasal sorunlar. PLoS Bir. 2012;7:e34525.

    ---