Cistanche Bazlı Kapsüller Bağırsak Mikrobiyotasını, Serum Metabolitlerini ve SPHK1/S1P1/PI3K/Akt Sinyal Yolunu Modüle Ederek Sıçanlarda Kronik Bakteriyel Olmayan Prostatiti Hafifletir

3.5 DAP Sıçanlarında CBC'nin Serum Metabolomik Analizi

3.5.1 Dışkı Metabolomiklerinin Çok Değişkenli İstatistiksel Analizi

Temel bileşen analizi (PCA), pozitif iyon modunda net grup ayrımlarını ortaya çıkardı.normal, model ve yüksek doz CBC grupları, ileCBC grubu normal gruba daha yakın kümeleniyorve model grubundan daha uzakta. Negatif iyon modunda normal ve model gruplar arasında kısmi örtüşme gözlenirken CBC ile tedavi edilen numuneler hala iyi bir ayrım sergiliyor (Şekil 5).

Kısmi en küçük kareler diskriminant analizi (PLS-DA), her iki iyonizasyon modunda da üç grubun tamamında güçlü bir sınıflandırma etkisini doğruladı.200 zamanlı permütasyon testimodelin güvenilirliğini doğrulayarakQ² kesişimi 0,05'in altında, aşırı uyumun olmadığını gösterir. Aşağı yönlü bir trendR² ve Q² değerleriX ekseni boyunca model stabilitesi daha da doğrulandı (Şekil 6).

CISTANCHE BAZLI FORMÜL ÇAYI

Şimdi al

 

 

 

 

 

3.5.2 CBC'den Etkilenen Diferansiyel Metabolitlerin Tanımlanması

Diferansiyel serum metabolitleri aşağıdakilere göre filtrelendi:VIP > 1PLS-DA'dan,kat değişimi 1'den büyük veya eşit, Vep < 0,05. Eksojen bileşikler hariç tutulduktan sonra,10 önemli endojen metabolitbelirlendi (Tablo 9).

 

3.5.3 KEGG Yolu Zenginleştirme Analizi

Diferansiyel metabolitlerin KEGG zenginleştirme analizi şunu gösterdi:CBC tedavisi temel metabolik yolları modüle edebilirkronik prostatit ile ilişkilidir. Zenginleştirilmiş yollar şunları içeriyordu:

Sfingolipid metabolizması

Retinol metabolizması

Glisin, serin ve treonin metabolizması

Gliserofosfolipid metabolizması

Araşidonik asit metabolizması(Şekil 7)

Bu yolların önemli rol oynadığı bilinmektedir.Bağışıklık düzenlemesi, oksidatif stres ve inflamasyon.

3.5.4 Diferansiyel Metabolitler ile Bağırsak Mikrobiyotası Arasındaki Korelasyon

10 diferansiyel metabolit ile önemli ölçüde değiştirilmiş bakteri taksonları arasında Spearman korelasyon analizi yapıldı. Önemli korelasyonlar şunları içeriyordu:

PA(6-keto-PGF1 /i-20:0): pozitif korelasyonluLaktobasilVeRomboutsia ilealis, olumsuz olarakİhmal edilen timonensis

SM[d16:2/20:4-2OH]: pozitif korelasyonluParaprevotella claraVeRomboutsia ilealis

PS[18:1/20:0]: pozitif korelasyonluRomboutsia ilealis, olumsuz olarakOscillospiraceae

lizoPA(0:0/18:0): negatif korelasyonluLaktobasilVeRomboutsia ilealis, olumlu olarakİhmal edilen timonensis

Üreidoizobütirik asit: negatif korelasyonluParaprevotella clara

16(R)-HETEVe(2R,3R)-2-aminooktadekan-1,3-diol: pozitif korelasyonluİhmal edilen timonensis

Sfingozin: negatif korelasyonluRomboutsia ilealis, olumlu olarakİhmal edilen timonensis

lizoPA(18:0/0:0)VeRetinoil -glukuronid: negatif korelasyonluBifidobacterium hayvanisVeRomboutsia ilealis(Şekil 8)

Bu korelasyonlar şunu gösteriyor:CBC kaynaklı metabolomik değişiklikler ile bağırsak mikrobiyota modülasyonu arasında güçlü bir bağlantı.

 

3.6 SPHK1/S1P1/PI3K/Akt Yolunun CBC Tarafından Düzenlenmesi

Western blot analizi şunu gösterdi:Model grupta SPHK1 ve S1P1 protein ifadeleri önemli ölçüde arttınormal grupla karşılaştırıldığında. CBC (yüksek doz) önemli ölçüdeSPHK1 ve S1P1 protein seviyelerinin aşağı regüle edilmesi. Gruplar arasında SPHK2 ekspresyonu açısından anlamlı bir fark gözlenmedi (Şekil 9, Tablo 10).

Ayrıca,PI3K ve AktModel grubunda ifade seviyeleri önemli ölçüde azalırken,p-PI3K ve p-Aktseviyeleri önemli ölçüde arttı, bu da yol aktivasyonunu gösteriyor. Tam kan sayımı tedavisigeri yüklenen PI3K ve Akt seviyeleriVefosforilasyonunu inhibe etti, azaltılmasıp-Akt/Akt ve p-PI3K/PI3K oranları.

Bu sonuçlar şunu gösteriyorCBC, SPHK1/S1P1/PI3K/Akt sinyal yolunu inhibe ederanti-inflamatuar etkisine katkıda bulunur.

4. Tartışma

Kronik bakteriyel olmayan prostatit (CNP)Tüm prostatit tanılarının %90'ıve aşağıdakileri içeren karmaşık bir etiyoloji ile ilişkilidir:Patojenik mikrobiyal enfeksiyon, oksidatif stres, bağışıklık düzensizliği ve otoimmün tepkiler [20–21].

Son kanıtlar şunu gösteriyorinflamasyon ve otoimmüniteCNP patogenezinde merkezi öneme sahiptirler [22-24].deneysel otoimmün prostatit (EAP) sıçan modeliBu nedenle histopatoloji ve bağışıklık tepkisi açısından insan CNP'sini taklit eden seçilmiştir [25].

Önceki serum farmakokimyası çalışmalarımızda CBC bileşenleri şu şekilde bulundu:dışkıda serumdan daha yüksek bolluk, ima ediyorBirincil etki yolu olarak bağırsak etkileşimi(bkz. CNKI Gelişmiş Yayın Malzemeleri).

CBC Prostat Patolojisini ve İnflamatuar İndeksleri İyileştirir

HE boyama CBC'nin hafiflediğini gösterdilenfosit infiltrasyonu, restore edilmişasiner yapıve arttıglandüler salgılar. CBC önemli ölçüdelökosit sayısında azalmaprostat homojenatlarında ve restore edilmişlesitin vücut yoğunluğu-her iki önemli CNP teşhis belirteci [26-28]. Enflamasyon epitelyal hasara ve lesitin salgısının azalmasına yol açarken, aktive makrofajlar lesitin cisimlerini yutar [29]. CBC bu patolojik değişiklikleri etkili bir şekilde tersine çevirdi.

CBC ayrıcaproinflamatuar sitokinlerin azalması(TNF- , IL-1 , IL-6, IL-8, IL-2, iNOS) veyüksek antiinflamatuar IL-10güçlü anti-inflamatuar etkisini destekler.

 

CBC Bağırsak Mikrobiyota Disbiyozunu Düzenliyor

CNP yakından bağlantılıdırbağırsak mikrobiyota dengesizliğiazaltabilecekkısa zincirli yağ asitleri (SCFA'lar)ve bağırsak bariyerini tehlikeye atarak izin verirLPS translokasyonuve prostat iltihabını tetikleyerekmikrobiyal ilişkili moleküler modeller (MAMP'ler) [30].

Araştırmalar gösteriyor kiCistanche polifenolleriMikrobiyota dengesizliğini iyileştirmek ve dahil olan önemli taksonları modüle etmekinflamatuar barsak hastalığı (IBD)[31]. Bu çalışmada,Lactobacillus ve Bifidobacterium AnimalisEAP sıçanlarında tükendi ancak CBC tedavisinin ardından iyileşti. Bu probiyotiklerin ürogenital inflamasyonu hafiflettiği bilinmektedir [32-33]. Tersine,VeillonellaGenellikle otoimmün koşullarda zenginleştirilen [34], EAP sıçanlarında yükselmiş ve CBC uygulamasından sonra azalmıştır. Benzer şekilde,PrevotellaceaeProstat kanseriyle ilişkili [35], EAP grubunda zenginleştirilmiş ve CBC ile azaltılmıştır.

 

CBC Temel Metabolik Yolları Modüle Ediyor

Metabolomik ortaya çıktısfingozin yüksekliğiEAP sıçanlarında CBC ile önemli ölçüde azalmıştır, bu durumsfingolipid metabolizması. Sfingolipitler önemli yapısal ve sinyal molekülleridir.hücre büyümesi, apoptoz ve bağışıklık düzenlemesi [36].

Sfingozin-1-fosfat (S1P)tarafından sentezlendiSPHK1/2bağlanan güçlü bir lipid aracıdır.S1P reseptörleri (S1PR'ler)bağışıklık hücresi trafiğini düzenlemek için kullanılır veinflamatuar ve otoimmün hastalıklar[37–39]. S1PR modülatörüFTY720 (fingolimod)EAP modellerinde inflamasyonu ve doku hasarını azalttığı gösterilmiştir [40].

S1P ayrıca aşağıdaki gibi aşağı akış yollarını da etkinleştirirPI3K/AktBunlar kronik inflamasyonla ilişkilidir. Bizim çalışmamızda CBCaşağı regüle edilmiş SPHK1 ve S1P1ve engellendiPI3K ve Akt fosforilasyonu, bu kritik eksen üzerinde düzenleyici bir etki olduğunu öne sürüyor.

 

Çözüm

Bu çalışma, bütünleştiricibağırsak mikrobiyota dizilimi ve hedeflenmemiş metabolomik, şunu gösteriyorCistanche Bazlı Kapsüller (CBC)etkili bir şekilde:

Düzeltmekprostat dokusu hasarı

Bastırinflamatuar sitokinler

Eski haline getirmekfaydalı bağırsak florası

Düzenlemeksfingolipid metabolizması

EngelleSPHK1/S1P1/PI3K/Akt sinyali

Bu bulgular şunları sağlar:zorlayıcı kanıtCBC'nin potansiyeli içinKronik bakteriyel olmayan prostatit için çok hedefli bitkisel tedavive bir teklifgenişletilmiş klinik uygulaması için bilimsel temel.