Soyut

Amaç:moleküler mekanizmayı araştırmak içinCistanche bazlı Bushen Kaixuan Tongluo Formülüsiklik adenozin monofosfat (cAMP) sinyal yolunu düzenleyerek diyabetik böbrek hastalığı (DKD) olan farelerde böbrek koruyucu etki gösterir.

Yöntemler:Otuz spesifik patojen içermeyen (SPF) erkek db/db faresi, 3 hafta boyunca uyarlanabilir bir şekilde beslendi. Rastgele kuyruk damarı kan şekeri düzeyleri 11,1 mmol·L⁻¹'den büyük veya ona eşit olan ve idrar mikroalbümin/kreatinin oranı 30 mg·g⁻¹'den büyük veya eşit olan fareler başarıyla modellenmiş olarak kabul edildi. Modellenen fareler rastgele beş gruba atandı (grup başına n=6): model grubu, düşük, orta ve yüksek dozlu Bushen Kaixuan Tongluo Formülü grupları (7, 14 ve 28 g·kg⁻¹·d⁻¹) ve bir irbesartan grubu (20 mg·kg⁻¹·d⁻¹). Boş grup olarak altı db/m fare kullanıldı.

Tedavi intragastrik uygulama yoluyla 12 hafta sürdü. Genel durumları, vücut ağırlığı ve böbrek fonksiyon göstergeleri izlendi. Müdahale sonrasında açlık kan şekeri (AKŞ) ölçüldü. Serum kreatinin (SCr), kan üre nitrojeni (BUN), idrar mikroalbümini (uALB), albümin-kreatinin oranı (ACR), aspartat aminotransferaz (AST), alanin aminotransferaz (ALT), toplam kolesterol (TC), trigliseritler (TG), leptin (LEP), glikosile edilmiş serum proteini (GSP) ve insülini (INS) değerlendirmek için otomatik bir biyokimyasal analiz cihazı kullanıldı.

Böbrek dokusu histopatolojisi HE, PAS ve Masson trikrom boyama kullanılarak değerlendirildi. İmmünohistokimya (IHC), protein kinaz A (PKA) ve cAMP yanıt elemanı bağlayıcı proteinin (CREB) ifadelerini tespit etti. Western blot, PKA, fosforile edilmiş PKA (p-PKA), CREB, fosforile edilmiş CREB (p-CREB) ve Bcl-2 seviyelerini analiz etti. PKA, CREB ve Bcl-2'nin mRNA ifadelerini değerlendirmek için gerçek zamanlı PCR kullanıldı.

Sonuçlar:Boş grupla karşılaştırıldığında, model grubu uyuşukluk, azalmış aktivite ve önemli ölçüde artan vücut ağırlığı gösterdi (P<0.01). Biochemical markers such as BUN, uALB, ACR, AST, ALT, TC, TG, FBG, LEP, GSP, and INS were significantly increased (P<0.01), while SCr showed an upward trend without statistical significance.

Model grupla karşılaştırıldığında formülle tedavi edilen gruplarda genel durum iyileşmesi ve vücut ağırlığında azalma eğilimi görüldü. BUN, uALB, ACR, TC, GSP ve INS önemli ölçüde azaldı (P<0.05), while SCr, AST, ALT, TG, and LEP decreased without statistical significance.

Histopatolojik analiz, model grubunun glomerüler bazal membran kalınlaşması, mezanjiyal matris genişlemesi ve tübülointerstisyumda kollajen birikmesi gibi klasik DKD özelliklerini sergilediğini ortaya çıkardı. Bu patolojik değişiklikler tüm tedavi gruplarında hafifletildi.

IHC sonuçları, model grubunda p-PKA ve p-CREB ifadelerinin önemli ölçüde azaldığını gösterdi (P<0.01). Compared with the model group, the medium-dose formula group had significantly increased p-PKA (P<0.01) and a non-significant upward trend in p-CREB.

Western blot, p-PKA/PKA, p-CREB/CREB ve Bcl-2 seviyelerinin model grupta önemli ölçüde azaldığını gösterdi (P<0.05), but significantly increased in the medium-dose formula group (P<0.01).

Gerçek zamanlı PCR, model grubunda (P) PKA, CREB ve Bcl-2 mRNA'nın aşağı regülasyonunu doğruladı<0.05), and significant upregulation in the medium-dose formula group (P<0.05).

Sonuçlar:Cistanche bazlı Bushen Kaixuan Tongluo Formülüdb/db farelerinde karaciğer ve böbrek fonksiyonlarını iyileştirir, lipid ve glukoz metabolizması bozukluklarını düzeltir. Böbrek koruyucu etkisi, böbreklerin düzenlenmesiyle ilişkilidir.cAMP/PKA/CREB sinyal yoluböbrek fibrozisini ve oksidatif stresi azaltır, böylece böbrek fonksiyonunu korur.

 

 

 

 

Cistanche bazlı Bushen Kaixuan Tongluo Formülükaraciğer ve böbrek fonksiyonunun iyileştirilmesi

Daha fazla ayrıntı için resme tıklayın

Anahtar Kelimeler

Diyabetik böbrek hastalığı (DKD);
Bushen Kaixuan Tongluo Formülü;
Cistanche;
cAMP sinyal yolu;
Geleneksel Çin Tıbbı (TCM)

 

Cistanche bazlı çözüm

 

Arka plan

Diyabetin en ciddi mikrovasküler komplikasyonlarından biri olan diyabetik böbrek hastalığı (DKD), dünya çapında son dönem böbrek hastalığının (ESRD) önde gelen nedenidir. Artan yaygınlığı, halk sağlığı sistemleri için önemli bir zorluk teşkil etmektedir. DKD özellikleri arasında ilerleyici glomerüler mesangial matriks genişlemesi, tübülointerstisyel fibrozis ve kalıcı proteinüri bulunur. Patogenez, glikoz ve lipid metabolizma bozuklukları, oksidatif stres ve çeşitli sinyal yollarının anormal aktivasyonu arasındaki karmaşık etkileşimleri içerir.

Mevcut birinci basamak tedaviler öncelikle glomerüler hipertansiyonu azaltmaya ve erken proteinüriyi geciktirmeye yardımcı olan renin-anjiyotensin sistemi (RAS) inhibitörlerini içerir. Bununla birlikte, %30-40'ının SDBY'ye ilerlediği yerleşik tübülointerstisyel fibrozisli hastalarda daha az etkilidirler.

Bu nedenle, yeni DKD mekanizmalarını araştırmak ve etkili, güvenli terapötik hedefleri bulmak acil klinik ve bilimsel ilgi uyandırmaktadır. Geleneksel tıp, daha az yan etkiyle çok hedefli düzenleme sunarak kronik böbrek hastalığında uzun süreli kullanıma daha uygun hale getiriyor.Cistanche bazlı Bushen Kaixuan Tongluo Formülüsemptomları iyileştirdiği ve hastalığın ilerlemesini geciktirdiği önceki klinik çalışmalarda gösterilen, DKD için ampirik olarak doğrulanmış bir bitkisel karışımdır.

Ancak moleküler mekanizması, özellikle de anahtar sinyal yollarıyla etkileşimi tam olarak anlaşılamamıştır. Kanıtlar şunu gösteriyor:cAMP/PKA/CREByol renal fibrozisi hafifletebilir ancak ilgili çalışmalar sınırlıdır. Bu çalışma bunun nasıl gerçekleştiğini açıklamak için bu yola odaklanmaktadır.Cistanche bazlı formülDKD'yi iyileştirir.

 

Malzemeler ve Yöntemler

1. Hayvanlar

30 erkek db/db fare (7 haftalık, SPF sınıfı, vücut ağırlığı: 37,58±0,62 g)

6 yaş uyumlu db/m fare (vücut ağırlığı: 24,38±0,35 g)

Satıcı: Jiangsu Huachuang Xinnuo Pharmaceutical Technology Co., Ltd.

Lisans: SCXK (Su) 2020-0009 ve SYXK (Jing) 2020-0033

Etik onayı: BUCM2024041506-2090

2. Bitkisel Bileşim

Bushen Kaixuan Tongluo Formülü şunları içerir (gram olarak):
Cistanche(ham Astragalus'un yerine geçer) 45, Salvia miltiorrhiza 30, Hirudo 6, Saposhnikovia 20, Bombyx batryticatus 15, Cicada slough 15, Polygonatum sibiricum 10, Rehmannia glutinosa 20, Cornus officinalis 20, Rosa laevigata 20, Euryale ferox (kızarmış) 30, Rubus chingii 30, Cnidium monnieri 20, Achyranthes bidentata 30, Dioscorea karşıtları 20.

Tüm şifalı bitkiler lisanslı bir eczacı tarafından doğrulandı ve su kaynatma yoluyla hazırlandı, vakum altında indirgendi ve bir toz oluşturmak üzere püskürtülerek kurutuldu. Nihai konsantrasyon 1,43 g·mL⁻¹ ham bitkiydi.

3. Reaktifler ve Cihazlar

(Ayrıntılı listeler için orijinal metne bakın.)

 

Deneysel Tasarım

Model Değerlendirmesi

3 haftalık adaptif beslenmeden sonra, rastgele kan şekeri 11,1 mmol·L⁻¹'den büyük veya eşit ve ACR'si 30 mg·g⁻¹'den büyük veya eşit olan fareler başarılı DKD modelleri olarak kabul edildi.

Gruplama ve Dozajlama

Boş grup (db/m): su

Model grubu: su

Düşük doz: 7 g·kg⁻¹·d⁻¹

Orta doz: 14 g·kg⁻¹·d⁻¹

Yüksek doz: 28 g·kg⁻¹·d⁻¹

İrbesartan grubu: 20 mg·kg⁻¹·d⁻¹

Süre: 12 hafta boyunca ücretsiz beslenme ve içme.

---

Numune Toplama ve Analizi

İdrar:24 saatte toplandı, santrifüj edildi ve –20 derecede saklandı

Kan:Orbital ekstraksiyon yoluyla toplandı, santrifüj edildi ve –80 derecede saklandı

Böbrekler:Patoloji (formalinle sabitlenmiş), protein (sıvı nitrojen) ve gen ekspresyonu (dondurulmuş) için bölünmüştür

---

Tespit Yöntemleri

Biyokimyasal Analiz:SCr, BUN, AST, ALT, TC, TG, INS, LEP, GSP ve uALB

Histopatoloji:HE, PAS, Masson boyama

IHC:p-PKA ve p-CREB protein ekspresyonu

Batı Lekesi:p-PKA, PKA, p-CREB, CREB, Bcl-2, -aktin

Gerçek Zamanlı PCR:PKA, CREB ve Bcl-2'nin mRNA ifadesi

---

Tablo 1. Primer Dizileri

Gen	İleri Astar (5′–3′)	Ters Astar (5′–3′)	Uzunluk (bp)
PKA	GCTGGAGATGGTGAAACGGGA	CGTCCTTGAGTCCTCACATTC	671
CREB	AGCAGCTCATGACACATCATC	AGTCCTTCAGGAAGACTGAACT	152
Bcl-2	GCTACCCTGTGGATGACTTCGC	CCCACCCCGAACTCAAAGAAGG	147
GAPDH	AGGTCGGTGTGAACGGATTTG	GGGGTCGTTGATGGCAACA	95