Cistanche Glikozitler, MiRNA‑483‑3p'yi Düzenleyerek İyi Huylu Prostat Hiperplazisinde Prostatik Fibrozisi Azaltır
Nov 19, 2025
SOYUT
Amaç:Benign prostat hiperplazisinde (BPH) cistanche glikozitlerinin prostatik fibrozis üzerindeki iyileştirici etkilerini ve mikroRNA (miRNA)-483-3p'nin düzenlenmesini içeren mekanizmayı araştırmak.
Yöntemler:Erkek fareler rastgele beş gruba ayrıldı: normal kontrol, BPH modeli kontrolü, finasterid, cistanche glikozitler ve cistanche glikozitler + miRNA‑483‑3p antagonisti. BPH modeli, iki taraflı orşiektomi ve ardından günlük subkutan testosteron propiyonat enjeksiyonu ile oluşturuldu. 30 gün sonra prostat kollajen birikimi Masson trikromu ve Sirius Red boyaması ile değerlendirildi ve hidroksiprolin (Hyp) içeriği ölçüldü. Dönüştürücü büyüme faktörü‑1 (TGF‑1), mitojenle aktifleşen protein kinaz 2 (MK2) ve mitojenle aktifleşen protein kinaz kinaz 6'nın (MKK6) prostat mRNA seviyelerinin yanı sıra miRNA‑483‑3p seviyeleri, kantitatif gerçek zamanlı PCR (qPCR) ile belirlendi. TGF‑1, MK2, fosforile edilmiş MK2 (p‑MK2), MKK6 ve fosforile edilmiş MKK6'nın (p‑MKK6) prostat protein seviyeleri Western blotlama ile değerlendirildi. miRNA‑483‑3p'nin MK2'ye doğrudan bağlanması, bir lusiferaz raportör tahlili kullanılarak incelenmiştir.
Sonuçlar:Normal kontrol grubuna göre BPH modeli kontrol grubu, anlamlı düzeyde artmış prostatik kollajen birikimi gösterdi; TGF‑ 1, MK2 ve MKK6'nın yüksek mRNA seviyeleri; ve daha yüksek TGF‑1, p‑MK2 ve p‑MKK6 protein seviyeleri (tümü P < 0,01), miRNA‑483‑3p seviyeleri ise önemli ölçüde azaldı (P < 0,01). BPH modeli kontrol grubuyla karşılaştırıldığında, cistanche glikozitler miRNA‑483‑3p'yi yukarı regüle etmiş, TGF‑1, MK2 ve MKK6'nın mRNA seviyelerini azaltmış, TGF‑1, p‑MK2 ve p‑MKK6 protein seviyelerini düşürmüş ve prostatik kollajen birikimini hafifletmiştir. Özellikle, miRNA‑483‑3p antagomirinin cistanche glikozitlerle birlikte uygulanması, miRNA‑483‑3p'yi önemli ölçüde azalttı, kollajen birikimini artırdı ve tek başına cistanche glikozidleriyle karşılaştırıldığında TGF‑1, MK2 ve MKK6 mRNA seviyelerinin yanı sıra TGF‑1, p‑MK2 ve p‑MKK6 protein seviyelerini yükseltti (tümü) P<0.01). Lusiferaz tahlili, miRNA‑483‑3p'nin doğrudan MK2'yi hedeflediğini gösterdi.
Sonuç: Cistanche glikozitleri, miRNA‑483‑3p'yi düzenleyerek ve MK2 sinyalini inhibe ederek BPH'de prostatik fibrozisi hafifletir.
Anahtar Kelimeler: Cistanche glikozitleri; miRNA‑483‑3p; prostat;fibrozis; iyi huylu prostat hiperplazisi
En Kaliteli Cistanche Deserticola
BPH Tedavisi için bitki hakkında daha fazla bilgi
Wecistanche Destek Hizmeti-Çin'deki en büyük cistanche ihracatçısı:
E-posta:wallence.suen@wecistanche.com
giriiş
İyi huylu prostat hiperplazisi (BPH)orta yaşlı ve yaşlı erkeklerde sık görülen bir durumdur ve prevalansı yaşla birlikte artar. Raporlar BPH prevalansının 50 yaş üstü erkeklerde %50'yi aştığını göstermektedir. BPH ve ilişkili alt üriner sistem semptomları (AÜSS), yaşam kalitesi ve uzun vadeli sağlık bakım maliyetleri üzerinde önemli yükler oluşturur. Klinik olarak, 5 -redüktaz inhibitörleri ve ‑adrenerjik reseptör blokerleri önerilen farmakoterapilerdir. Ancak ‑blokerler prostat hacmini azaltmaz ve hastaların %25-30'u, 5 -redüktaz inhibitörleriyle AÜSS'de herhangi bir iyileşme göstermez; üstelik %5-7 daha da kötüleşebilir. Thulium lazer prostatektomi gibi cerrahi yenilikler transüretral prostat rezeksiyonu ile karşılaştırıldığında giderek daha fazla kullanılmasına rağmen, postoperatif AÜSS hala %23'ü aşan oranlarda ortaya çıkmaktadır.
Mevcut kanıtlar BPH'de üç ana patobiyolojik süreci öne sürmektedir: glandüler hiperplazi, düz kas kasılması ve prostatik fibrozis. Bu süreçler klinik ilerlemeyi yönlendirmek için bağımsız veya sinerjik olarak hareket eder. BPH sıklıkla (her zaman olmasa da) AÜSS ile birlikte bulunur; Aşırı hücre dışı matris birikimi ile karakterize edilen fibroz, prostat içindeki üretral esnekliği tehlikeye atar ve idrar tıkanıklığına katkıda bulunur. Ancak özellikle organ fibrozunu hedef alan tedavi seçenekleri sınırlı kalıyor.
Cistanche (Cistanche spp.) geleneksel bir tıbbi ve besleyici bitkidir. Karakteristik feniletanoid glikozitleri (burada toplu olarak ekinakosid ve akteozit gibi cistanche glikozitler olarak anılır), antimikrobiyal, hipolipidemik, antialerjik, kardiyotonik, antidiyabetik, antitümör, nöroprotektif, antioksidan ve immünomodülatör etkiler dahil olmak üzere geniş biyoaktiviteler sergiler. Biriken kanıtlar, bu glikozitlerin böbrek, akciğer, kalp ve karaciğer gibi organlarda anti-fibrotik etkilerini göstermektedir. Ancak prostat fibrozisi üzerindeki etkileri bildirilmemiştir. Bu çalışma, cistanche glikozitlerinin prostatik fibroz üzerindeki etkisini incelemiş ve hücre dışı matris yeniden yapılanmasıyla ilgili miRNA‑483‑3p/MK2 eksenine odaklanarak altta yatan mekanizmaları araştırmıştır.
En Kaliteli Cistanche Deserticola
Malzemeler ve Yöntemler
Malzemeler
miRNA‑483‑3p antagomir (kimyasal olarak değiştirilmiş): Shanghai GenePharma Co., Ltd.'den satın alınmıştır (Parti No.: 12953).
Testosteron propiyonat enjeksiyonu: Tianjin Jinyao Pharmaceutical Co., Ltd. (Parti No.: 150822).
Cistanche glikozitler: Shanghai Aladdin Biochemical Technology Co., Ltd. (saflık %98'den büyük veya buna eşit, Parti No.: M14062). Nutrasötik geliştiriciler için not: materyal standartlaştırılmış feniletanoid glikozit fraksiyonuna karşılık gelir; HPLC içeriğine göre spesifikasyonu sağlayın (örn. toplam PEGL'ler, ekinakozit/akteozit).
Finasterid tabletleri: MSD (Hangzhou) Pharmaceutical Co., Ltd. (Seri No.: U011856; 5 mg/tablet).
Lusiferaz raportör tahlil kiti (Seri No.: E2920) ve psiCHECK‑2 vektörü (Geri No.: C8021): Promega (ABD).
qPCR tespit kiti: KAPA Biosystems (Parti No.: KM4101).
Hidroksiprolin (Hyp) tahlil kiti: Nanjing Jiancheng Biyomühendislik Enstitüsü (Seri No.: 20190626).
TGF-1, MK2 ve MKK6'ya yönelik primerler, Wuhan Tianyi Huiyuan Bioteknoloji Co., Ltd. tarafından sentezlendi.
En Kaliteli Cistanche Deserticola
Hayvanlar
Yedi haftalık spesifik patojen içermeyen (SPF) erkek C57BL/6 fareler (22-24 g), Huazhong Tarım Üniversitesi'nden (Üretim Lisansı No.: SCXK Hubei 2015‑0019) elde edildi. Hayvanlar 23 ± 2 derece, %50 ± 5 nem, 12 saat aydınlık/12 saat karanlık döngüsü altında barındırıldı.
Teçhizat
StepOnePlus gerçek zamanlı PCR sistemi (Applied Biosystems, ABD).
Luminoskan 5200110 mikroplaka lüminometre (Thermo Fisher Scientific, ABD).
Deneysel Tasarım ve BPH Modeli
1 haftalık iklimlendirmeden sonra, fareler rastgele (rastgele sayı tablosu) beş gruba (grup başına n=6) ayrıldı: normal kontrol, BPH model kontrolü, finasterid, cistanche glikozitler ve cistanche glikozitler + miRNA‑483‑3p antagomir. BPH modeli, cerrahi hadım etme artı 30 gün boyunca 7,5 mg·kg⁻¹ düzeyinde günlük deri altı testosteron propiyonat enjeksiyonu yoluyla indüklendi. Finasterid grubu günde 1 mg·kg⁻¹ oral finasterid (%0,5 CMC‑Na içinde çözünmüş) aldı. Cistanche glikozitler grubu günlük 100 mg·kg⁻¹ oral cistanche glikozidleri aldı. Kombinasyon grubuna günlük 100 mg·kg⁻¹ oral cistanche glikozitler artı üreticinin talimatlarına göre her 5 günde bir 10 mg·kg⁻¹ miRNA‑483‑3p antagomirin kuyruk damarına enjeksiyonu uygulandı. Normal ve BPH modeli kontrol grupları, ağızdan eşit hacimde %0,5 CMC‑Na aldı.
30 gün sonra farelere intraperitoneal sodyum pentobarbital (80 mg·kg⁻¹) enjeksiyonu yoluyla anestezi uygulandı ve servikal dislokasyonla ötenazi uygulandı. Prostatlar çıkarıldı; Masson trikrom ve Sirius Red boyama için bazı kısımlar sabitlendi ve gömüldü ve taze dokular qPCR, Western blotlama ve biyokimyasal analizler için işlendi. Hayvan prosedürleri, Hubei Laboratuvar Hayvanlarının Yönetimine ilişkin İl Yönetmeliklerine (Operatör Yeterlilik Numarası: TY20190784) uygundur.
En Kaliteli Cistanche Deserticola
Prostat Fibrozisinin Değerlendirilmesi
Kolajen birikimi Sirius Red ve Masson'un trikrom boyaması ile değerlendirildi. Prostat dokusundaki hip içeriği kit talimatlarına göre ölçüldü. Her slayt için, pozitif boyalı alanın yüzdesini hesaplamak amacıyla Image‑Pro Plus 6.0 kullanılarak üç rastgele alan analiz edildi.
MK2 Yolu Etkinliğinin Değerlendirilmesi
qPCR: MK2, TGF-1 ve MKK6'nın prostat mRNA seviyeleri ölçüldü. Astar dizileri:
MK2 (264 bp) ileri 5'-GGAAGTGCCTGCTGAT-3', geri 5'-AGTTGTGACTGGTGGTTT-3';
TGF-1 (153 bp) ileri 5'-AGGAGACGGAATACAGGG-3', geri 5'-ATGAGGAGCAGGAAGGG-3';
MKK6 (146 bp) ileri 5'-CCTCAGACCAGTTCCAC-3', geri 5'-CGCATCTTCTCCCACCA-3'.
Western blot: TGF‑1, MK2, p‑MK2, MKK6 ve p‑MKK6'nın protein seviyeleri, önceden belirlenmiş protokoller izlenerek belirlendi.
miRNA‑483‑3p'nin ölçümü
miRNA‑483‑3p primerleri: ileri 5'-GGGTCACTCCTCCCCT-3', ters 5'-AACTGGTGTCGTGGAGTCGGC-3'; RT primeri 5'-CTCAACTGGTGTCGTGGAGTCGGCAATTCAGTTGAGAAGACGGG-3'. qPCR kit talimatlarına göre gerçekleştirildi.
Lusiferaz Muhabir Testi
MK2 3'UTR, vahşi tip (WT) ve mutant (MUT) raportör plazmitleri oluşturmak için psiCHECK‑2 vektörüne klonlandı. HEK‑293T hücreleri, Lipofectamine 3000 kullanılarak miRNA‑483‑3p ve raportör plazmitlerle birlikte transfekte edildi; kontrol hücreleri boş vektör aldı. 24 saat sonra lusiferaz aktivitesi kit protokolüne göre ölçüldü.
İstatistiksel Analiz
Veriler SPSS 17.0 kullanılarak analiz edildi. Varyansın normalliği ve homojenliği doğrulandıktan sonra tek yönlü ANOVA uygulandı. Sonuçlar ortalama ± SD olarak ifade edildi. Çoklu karşılaştırmalar için LSD post hoc testleri kullanıldı. Farklılıklar P <0.05'te istatistiksel olarak anlamlı kabul edildi.
Sonuçlar
Normal kontrol grubuyla karşılaştırıldığında BPH modeli kontrol grubu, prostatik kollajen birikiminde belirgin artışlar sergiledi; TGF-1, MK2 ve MKK6'nın yüksek mRNA ifadeleri; ve daha yüksek TGF‑1, p‑MK2 ve p‑MKK6 protein seviyeleri (hepsi P < 0,01). miRNA‑483‑3p seviyeleri önemli ölçüde azaldı (P < 0,01).
BPH modeli kontrolüne kıyasla, cistanche glikozitler miRNA‑483‑3p'yi önemli ölçüde yukarı regüle etti, TGF‑1, MK2 ve MKK6'nın mRNA seviyelerini düşürdü, TGF‑1, p‑MK2 ve p‑MKK6'nın protein seviyelerini düşürdü ve prostatik kollajen birikimini hafifletti.
Tek başına cistanche glikozitlerle karşılaştırıldığında, cistanche glikozidlerin miRNA‑483‑3p antagomir ile kombinasyonu miRNA‑483‑3p'yi önemli ölçüde azalttı ve kolajen birikimini artırdı; ayrıca TGF‑1, MK2 ve MKK6 mRNA seviyelerinin yanı sıra TGF‑1, p‑MK2 ve p‑MKK6 protein seviyelerini de arttırdı (tümü P < 0.01).
Lusiferaz raportör tahlili, miRNA‑483‑3p'nin doğrudan MK2'yi hedeflediğini doğruladı.
Tartışma (kısa, nutrasötik odaklı)
Bu çalışma, cistanche glikozitlerinin, kastrasyon/testosteron kaynaklı bir BPH modelinde miRNA‑483‑3p'yi yukarı doğru düzenleyerek ve TGF‑ sinyallemesinin aşağısındaki MK2 yolu aktivitesini baskılayarak prostatik fibrozu zayıflattığını göstermektedir. Mevcut BPH farmakoterapilerinin fibrotik yeniden modellemeye yönelik sınırlamaları göz önüne alındığında, cistanche glikozitler, hücre dışı matris dengesini amaçlayan tamamlayıcı bir nutrasötik stratejiyi temsil edebilir.
Besin takviyesi geliştirmede dikkate alınması gereken hususlar şunlardır:
Standardizasyon: toplam feniletanoid glikozitleri ve işaretleyici bileşikleri tanımlayın (örneğin, HPLC ile %20'den büyük veya eşit ekinakosid, %10'dan büyük veya eşit akteozid).
Doz çevirisi: Farelerde 100 mg·kg⁻¹, vücut yüzey alanı ölçeklendirmesi kullanıldığında yaklaşık 8–12 mg·kg⁻¹ insan eşdeğer dozuna (HED) denk gelir; 60-70 kg'lık bir yetişkin için kabaca 500-800 mg/gün; klinik doğrulama gereklidir.
Kalite ve güvenlik: Kimlik sağlayın (botanik kaynak, kirletici maddeler, ağır metaller, pestisitler) ve ‑blokerler veya 5‑redüktaz inhibitörleriyle olası etkileşimleri değerlendirin.
İddialar: Yapı/işlev iddiaları "idrar akışını ve prostat dokusu dengesini desteklemeye" odaklanmalı ve klinik kanıtı olmayan hastalık tedavisi dilinden kaçınmalıdır.
Sonuçlar
Cistanche glikozitlermiRNA‑483‑3p'yi düzenleyerek ve MK2 sinyalini inhibe ederek BPH'deki prostat fibrozisini hafifletir. Bu bulgular, prostat sağlığı için yardımcı nutrasötikler olarak standartlaştırılmış cistanche ekstraktları üzerine daha fazla çeviri araştırmasını desteklemektedir.
Teşekkür
Bu çalışma Çin Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı (Grant No. 81703594) tarafından desteklenmiştir.
Yazar Bilgileri
Yang Chuhao (1991–), kadın, Wuhan, Hubei, klinik eczacı, MS; ana araştırma alanı: klinik eczacılık. ORCID: 0000-0002-8921-5758; Tel: +86-27-82440854.
