Cistanche Deserticola'nın kalite kontrolü için yöntemler

daha fazla bilgi için:ali.ma@wecistanche.com

Shi Ziyi, Wu Yun, Zhu Yuemei ve diğerleri.

Geleneksel Çin tıbbıcistancheetli sapıdırcistanche çöl çiçeğiYC Ma veya Cisanche tubulosa (Schenk) Kuru pullu yapraklı Wight. Böbrek yangını tonlama, özü ve kanı besleyici, bağırsakları ve müshilleri nemlendirme vb. işlevleri vardır. Çoğunlukla böbrek yang eksikliği, öz ve kan eksikliği, iktidarsızlık ve kısırlık, bel ve dizlerde ağrı ve zayıflık, halsizlik için kullanılır. kaslar ve kemikler, bağırsak kuruluğu ve kabızlık. Modern farmakolojik araştırmalar gösteriyor kicistanchecinsel işlevi iyileştirme, Alzheimer hastalığı ve Parkinson hastalığına karşı direnç gösterme, öğrenme ve hafıza yeteneğini geliştirme, yaşlanmayı geciktirme, yorgunluğu giderme, karaciğeri koruma, müshil gibi birçok işlevi vardır [4]. Çok sayıda çalışma, feniletanoid glikozitlerincistanche çöl çiçeğiöğrenme ve hafıza yeteneğini geliştirme, Alzheimer hastalığı ve Parkinson hastalığına direnme üzerinde belirgin etkileri vardır (4, oligosakkaritler ve polioller müshil ve müshil etkisine sahiptir 64). "Çin Halk Cumhuriyeti Farmakopesi" sadece feniletanoid glikozitlerin ekinakozit ve verbaskosit içeriğini ölçer.cistancheçöl çiçeğiancak müshil etkisinin aktif bileşenlerini ölçmez, bu nedenle tıbbi malzemelerin kapsamlı bir analizini yapmak zordur.cistancheçöl çiçeği. Kalite kontrol. Bu sınırlamayı aşmak ve temel işlevler ve göstergeler ile ilgili çok endeksli bir kalite değerlendirme sistemi kurmak içincistancheçöl çiçeği, bu çalışmada, tıbbi materyallerde betain, mannitol, fruktoz, glukoz ve sakaroz için kantitatif bir analiz yöntemi oluşturmak için HPLCELSDP4 kullanılmıştır.cistancheçöl çiçeği. Ayrıca 58 adetcistancheçöl çiçeğifarklı kökenlerden tıbbi malzemeler ve 10 parti tıbbi malzemecistancheSincan'ın Hotan bölgesinde, tıbbi malzemelerin kapsamlı kalite kontrolü ve değerlendirilmesi için bir referans sağlayabilen test edildi.cistancheçöl çiçeğigelecekte.

Cistanche özü faydaları ürünleri için tıklayın

1 Cihaz ve reaktifler

1.1 Enstrümanlar

Sartorius elektronik terazi BT25 S, BS 124 S (Beijing Sartorius Balance Co., Ltd.); Agilent 1100 Yüksek Performanslı Sıvı Kromatografisi; ALLTECH 2000ES Evaporatif Işık Saçılma Dedektörü (EISD); Ultrasonik Temizleyici KQ 250 (Kunshan Ultrasonic Instrument Ltd). 1.2 Reaktifler

Kontrol maddesi: betain (parti: {{0}}, saflık: yüzde 99,2), mannitol (parti: 10053-201304, saflık: yüzde 99,0), D-fruktoz (parti: 111504-201703 , saflık: yüzde 99,8 ), D - Susuz glikoz (parti numarası: 110833-201506, saflık: yüzde 99,9 ), sakaroz (parti numarası: 111507-201303, saflık: yüzde 99,8 ), tümü Çin Ulusal Enstitüsü'nden satın alındı Gıda ve İlaç Kontrolü için.

tıbbi malzemelericistancheçöl çiçeğiİç Moğolistan, Sincan, Gansu ve diğer yerlerde toplam 58 parti toplandı. Pekin Üniversitesi Eczacılık Fakültesi'nden Profesör Tu Pengfei tarafından kurutulmuş etli sapları olarak tanımlandılar.cistancheçöl çiçeğiTablo 3'te gösterildiği gibi Lidangaceae bitkisinin YCMa'sı.

tıbbi malzemelericistancheçöl çiçeğiXinjiang'ın Hotan bölgesinde toplam 10 parti halinde toplandı. Tablo 4'te gösterildiği gibi, Pekin Üniversitesi Eczacılık Fakültesi'nden Profesör Tu Pengfei tarafından, Liedangaceae bitkisinin Cistanche tubulosa (Schenk) Wight'ın pullu yaprakları ile kurutulmuş etli sapları olarak tanımlandılar.

1.3 Reaktifler

Asetonitril kromatografik saftır (Tianjin Boshiqi Technology Development Co., Ltd.), metanol kromatografiktir (Tianjin Saifu Century Technology Development Co., Ltd.) ve su ultra saf sudur.

2 Yöntemler ve sonuçlar

2.1 Kromatografik koşullar

Kromatografik kolon, ShodexAshaipak NH2P-50 4E polimer jel kolonuydu (250 mm x 4.6 mm, 5 um); mobil faz asetonitril-suydu (77∶23); akış hızı 0.7 mL·dak-1 idi; kolon sıcaklığı 25 dereceydi; Işık saçılım dedektörü (ELSD): Sürüklenen tüp sıcaklığı 100 derece ve taşıyıcı gaz akış hızı 3 L·min-1 idi.

2.2 Referans çözeltinin hazırlanması

Uygun miktarda betain, mannitol, fruktoz, glikoz ve sakaroz referans maddesi alın, doğru bir şekilde tartın, su ekleyin ve her başına 25 mg betain, mannitol, fruktoz, glikoz ve sakaroz içeren karışık bir çözelti elde edin. 1 mL, iyice çalkalayın ve alın.

2.3 Test çözeltisinin hazırlanması

Yaklaşık 1.0 g alıncistanchetıbbi toz (4 No'lu elekten geçirilir), doğru bir şekilde tartın, 100 mL kahverengi ölçülü balona koyun, 50 mL yüzde 50 metanol tam olarak ekleyin, sıkıca kapatın, çalkalayın, tartın 30 dakika bekletin ve sonra 40 dakika boyunca ultrasonik olarak (güç 250 W, frekans 35 kHz) çıkarın, çıkarın, soğumaya bırakın, tekrar tartın, kütleyi azaltmak için yüzde 50 metanol ekleyin, iyice çalkalayın ve bırakın duruyor. 5 mL süpernatantı tam olarak aspire edin, 25 mL'lik bir ölçülü balona koyun, yüzde 50 metanol ile işarete kadar seyreltin, iyice çalkalayın ve 0,2 μm mikro gözenekli zardan süzün.

2.4 Belirleme yöntemi

Sırasıyla 5 ve 10 μL referans çözeltisi ve 5 μL test çözeltisi çekin, bunları sıvı kromatografa enjekte edin, tepe alanını kaydedin ve harici standart iki nokta yönteminin logaritmik denklemine göre hesaplayın.

2.5 Sistem uygunluk testi

Madde 2.1 kapsamındaki kromatografik koşullara göre, sırasıyla 5 μ referans çözeltisini ve test çözeltisini doğru bir şekilde çekin ve bunları yüksek performanslı sıvı kromatografisine enjekte edin, Şekil 1'de gösterildiği gibi kromatogramı ölçün ve kaydedin. test numunesinin referans maddesi kromatografik zirveleri ile aynı alıkonma süresini gösterdi, çözünürlük iyiydi ve kromatografik koşullar uygulanabilirdi.

Not: A. Kontrol maddesi; B.cistanche49 örnek; 1. beta süresi ; 2. funda ; 3. mannibol; 4. glikoz ; 5. sucreve

Şekil 1 Referans maddenin HPLC profilleri ve Cistanche No. 49 numunesi

2.6 Doğrusal İlişkilerin İncelenmesi

Referans maddeler olarak uygun miktarlarda betain, manitol, fruktoz, glikoz ve sakaroz alın, bunları doğru bir şekilde tartın ve her 1 mL'de betain 0 içerecek şekilde su ekleyin.496 0 mg, mannitol {{3} }.994 0 mg, meyve 1.0126 mg, glikoz 1.0882 mg ve sakaroz 0.9922 mg. 0.0992, 0.2480, 0.4960, 0.9920, 1.9840, 2.9760 μ, mannitol 0.1988, 0.4970 , 0.9940, 1.9880, 3.9760, 5.9640 μ, fruktoz 0.5063, 1.012 6. 2.025 2. 4.050 4. 5.063 0. Kromatografik koşullar enjekte edildi ve tespit edildi ve pik alanı kaydedildi; daha sonra her referans madde enjeksiyon miktarının logaritma değeri X (ug) apsis olarak kullanıldı ve tepe alanının logaritma değeri Y ordinattı ve standart eğri çizildi. Sonuçlar Tablo 1'de gösterilmektedir.

Tablo 1 Doğrusal ilişki araştırmasının sonuçları

2.7 Hassasiyet testi

Yukarıdaki kromatografik koşullar altında test solüsyonunu (numune No. 49) doğru bir şekilde çizin, sürekli olarak 6 kez enjekte edin, her kromatografik tepe noktasının tepe alanını ölçün ve RSD değerini hesaplayın. Sonuçlar Betain, mannitol, fruktoz, glukoz ve sakarozun pik alanlarının RSD'leri sırasıyla 0.84, yüzde 2.56, yüzde 1.27, yüzde 2.62 ve yüzde 1.52 olup, kullanılan aletin hassasiyetini göstermektedir. bu çalışma iyiydi. 2.8 Tekrarlanabilirlik testi

6 örnek alıncistancheçöl çiçeği(numune No. 49), test solüsyonunu madde 2.3'teki yönteme göre hazırlayın, her kromatografik zirvenin tepe alanını ölçün ve karşılık gelen içeriği hesaplayın. Sonuçlar Betain, mannitol, fruktoz, glikoz ve sakarozun (n=6) ortalama içerikleri yüzde 7,93, yüzde 7,27, yüzde 8,74, yüzde 2,75 ve yüzde 4,81 ve RSD'ler yüzde 2,83, yüzde 1,94, {{ 18}}, sırasıyla yüzde 0,97 ve 2,60. yüzde , yüzde 1.40 , yöntemin iyi bir tekrarlanabilirliğe sahip olduğunu gösterir. 2.9 Stabilite testi

Test solüsyonunu alın (örnek No. 49), ölçüm için hazırlandıktan sonra 0, 4, 8, 12, 16 ve 24. saatlerde enjekte edin ve her kromatografik pikin RSD değerini hesaplayın. Sonuçlar Betain, mannitol, fruktoz, glikoz ve sakarozun RSD'leri sırasıyla yüzde 0, yüzde 1,92, yüzde 1,34, yüzde 2,83 ve yüzde 0,69 idi, bu da test çözeltisinin iyi olduğunu gösteriyor. 24 saat içinde stabilite. 2.10 Kurtarma testi

6 örnek alıncistancheçöl çiçeğiiçeriği bilinen (örnek No. 49), 0.25g'ı doğru bir şekilde tartın, bunları 50mL'lik kahverengi bir ölçülü balona koyun ve 1 konsantrasyonda 25 mL karışık referans solüsyonunu doğru bir şekilde çekin: 1 ({{10}},7900 mg betain içerir). mL-, fruktoz 0.7236 mg"mL-1, mannitol 0.8812 mg·mL-1, glukoz 0.2708 mg·mL-1, sakaroz 0.4883 mg'mL-') numuneye eklendi, ve test çözeltisi, 2.3'deki yönteme göre hazırlandı, yukarıda belirtilen kromatografik koşullara göre saptandı, geri kazanımı hesaplandı, sonuçlar, yöntemin iyi bir doğruluğa sahip olduğunu gösteren Tablo 2'de gösterilmektedir.

Tablo 2: Test edilecek 5 bileşenin numune geri kazanım oranının ölçüm sonuçları (n=6)

3 Tartışma

3.1 İndeks bileşenlerinin seçimi

toplam oligosakkaritlercistancheetkili parçalarıdırcistanchemüshil için. Yazar, bu parçanın kimyasal bileşimini LC-MS ve referans madde ile analiz etmiş ve bu parçanın esas olarak betain, mannitol, fruktoz, glukoz ve sakarozdan oluştuğunu belirlemiştir. Bu nedenle, bu 5 bileşen endeks bileşenleri olarak seçilmiştir.cistancheçöl çiçeğive içerik belirleme yöntemi oluşturulmuştur.

3.2 Kromatografik kolonların seçimi

Test edilecek beş bileşen, betain, mannitol, fruktoz, glikoz ve sukroz, nispeten polardır ve ters fazlı Cn kolonunda tutulamaz. Genellikle, pikler 1-2 dakika içinde görünür ve bileşenler ayrılamaz. Amino kolonları Waters Bonoapar NH, (300 mm × 4,6 mm, 10 μm) ve Phenomenex Bondclone 10 NH, (300 mm × 3,9 mm, 10 μm) şeker ve poliol ayrımı için ve polimer bazlı amino kolonlar Carbohidrat ES ( 250 mm) ×4,6 mm, 5 μm), ShodexAshaipak NH2P-50 4E (250 mm×4,6 mm, 5 μm). Sonuçlar, polimer matris amino kolonunun bu beş bileşeni etkili bir şekilde ayırabildiğini göstermektedir.

3.3 Dedektör seçimi

Test edilecek beş bileşenin belirgin bir UV emilimi yoktur ve UV detektörünün içeriği doğrudan belirlenemez. Bu nedenle, bu makale şeker alkolü bileşenleri için nicel bir analiz yöntemi oluşturmuştur.cistancheçöl çiçeğiHPLC-EISD kullanarak. Sonuçlar, yöntemin yüksek hassasiyete, iyi tekrarlanabilirliğe ve yüksek doğruluğa sahip olduğunu ve kalite kontrolü için kullanılabileceğini göstermektedir.cistancheçöl çiçeğive betain ve şeker alkolleri içeren diğer tıbbi malzemeler.

3.4 Test çözeltisinin hazırlama yönteminin araştırılması

Su, yüzde 30 metanol, yüzde 50 metanol, yüzde 70 metanol, metanol vb. dahil olmak üzere farklı ekstraksiyon çözücüleri sırasıyla karşılaştırıldı. Sonuçlar, yüzde 70 metanol ve metanol çözücünün biraz daha düşük ekstraksiyon hızı dışında, diğer çözücülerde önemli bir fark olmadığını gösterdi, bu nedenle doğrudan seçim yapıldı. "İçeriğin Belirlenmesi" başlığı altında çözücü olarak yüzde 50 metanol kullanılmıştır.cistancheÇin Halk Cumhuriyeti Farmakopesinde, ilgili test solüsyonunun hazırlama yöntemine göre hazırlanmış ve daha sonra şeker alkol bileşenlerini belirlemek için 5 kez seyreltilmiştir.

3.5 Farklı bazlara sahip numunelerin tespiti ve analizi

Bu çalışmada, 58 partide 5 bileşenin içeriğicistancheçöl çiçeğive 10 particistancheçöl çiçeğitıbbi malzemeler belirlendi. 58 partide betain, mannitol, fruktoz, glukoz ve sakarozun kütle fraksiyonlarıcistancheçöl çiçeğiörnekler yüzde 2,73 -17,65 yüzde , yüzde 2,46 -16,34 , yüzde 2,52 {{10}} yüzde 0,74 , yüzde 0,97 -14,06 , yüzde 3,15 -27 yüzde 0,16 ; Mannitol, fruktoz ve glikoz yüzde 1.00 yüzde -13.04 , yüzde 2.98 -8.85 , yüzde 1.09 -5.33cistanchesırasıyla örnekler ve betain ve sukroz tespit edilmedi. Tıbbi materyallerin içerikleri seriler arasında büyük farklılıklar gösterir ve tıbbi materyallerin kalitesini kontrol etmek için içerik belirleme standardı oluşturmanın gerekliliğini öne süren izlenecek bir kural yoktur. Ek olarak, bu yöntem iki türcistanchebaz bitkiler, yani,cistanchebetain ve sakaroz içermez, bu iki bileşenin içeriği daha yüksektir.cistanche çöl çiçeği. Bu aynı zamanda iki tıbbi materyalin doku ve habitat farklılıklarını analiz etmek için bir temel sağlar.cistanche çöl çiçeği. tıbbi malzeme ile karşılaştırıldığındacistanche çöl çiçeği, doku daha yumuşaktır ve yerel olarak "Yumuşak Dayun" olarak bilinirken,cistanchesakaroz (yüzde 3,15 ~ yüzde 27,16) içerdiği için "Chai Dayun" olarak adlandırılır. ).cistanche çöl çiçeğiağırlıklı olarak İç Moğolistan'daki Alxa'da dağıtılırken,cistancheağırlıklı olarak, sıcaklığın Alxa bölgesinden daha yüksek olduğu ve yerel bölgede damla sulamanın kullanıldığı, ancak sıcaklık düştüğünde, Xinjiang'ın Hotan bölgesinde dağıtılmaktadır.cistancheciddi zarar görecektir. Donma hasarı, bir yandan yüksek su içeriği ile belirli bir ilişkiye sahipken, diğer yandan içerdiği maddelerle ilgisi vardır. Betaine 243, tuzluluk, kuraklık, düşük sıcaklık ve güçlü ışık gibi bitkilerin stres direncini arttırmada önemli bir rol oynayan önemli bir ozmotik ayar maddesidir. Bu tam olarak içerdiği yüksek betain içeriğinden kaynaklanmaktadır.cistanche çöl çiçeğituz-alkali, kuraklık ve donma hasarına karşı daha dayanıklı olduğunucistancheve nispeten geniş bir dağılıma sahiptir.

3.6 Analizicistancheçöl çiçeğifarklı kökenlerden örnekler

58 grup çöl arasındacistanchetıbbi malzeme numuneleri, İç Moğolistan'daki Alxa Ligi'nden 45 parti üretildi, Wangyedi (Dengkou İlçesi), İç Moğolistan'dan 3 parti üretildi ve 1 parti bilinmiyordu. 49 parti tıbbi materyalin tamamı, 5 bileşenden oluşan farklı içeriklere sahipti. Ancak, önemli bir fark yoktur. Analizin nedeni, tıbbi malzemelerin hepsinin aynı çöl bölgesinde üretilmiş olması, ekoloji ve coğrafi ortamın benzer olması ve ürün kalitesinin nispeten tekdüze ve istikrarlı olması olabilir. Minqin County, Gansu'da üretilen 3 parti ve Xinjiang'dan 6 parti var. Şekil 2'deki analize göre, İç Moğolistan'da üretilen tıbbi malzemelerle karşılaştırıldığında, temel fark fruktoz ve sakaroz içeriğinde yansıtılmaktadır. Tıbbi malzemelerin sakaroz içeriği nispeten en yüksekti, ancak iki kaynaktan alınan numunelerin düşük miktarı göz önüne alındığında, bu sonucun daha fazla numune toplanarak doğrulanması gerekiyor. 3.7 Özet

Bu çalışmada, müshillerin kalite kontrolü için daha uygun, verimli ve doğru bir yöntem sağlayan 5 aktif müshil bileşeninin aynı anda belirlenmesi için HPLC Wang ISD kurulmuştur.cistanche çöl çiçeğive kalite standardını iyileştirmek ve daha da geliştirmek için bir temel sağladı.cistancheçöl çiçeği. anlamlı referans

Referanslar

【1】 Devlet Farmakopesi Komisyonu. Çin Halk Cumhuriyeti Farmakopesi: A 【M】. Beijing: China Pharmaceutical Science and Technology Press, 2015;135.

【2】 Song Zhihong, Lei Li, Tu Pengfei. farmakolojik aktivitesi üzerine araştırma ilerlemecistancheSergi. Çin Bitkisel Tıbbı, 2003, 34(9); 113415.

【3】 Xue Haiyan. Jiao Danyuan, Yao Haziran Kişniş [J]'deki toplam glukozitlerin farmakolojik etkilerinin araştırma durumu. Çin Klinik Farmakoloji Dergisi, 2018, 34(4): 486-488.

【4】 Bir Chunna, Zhang Hongning, Pu Xiaoping. Nörofarmakolojisinin araştırma ilerlemesicistanche çöl çiçeğiSergi [J]. Çin Eczacılık Dergisi, 2011, 46(12): 887-890.

【5】 Gao Yuhong, Ke Zunji. farmakolojik etkileri üzerine araştırmalarda ilerlemecistanche çöl çiçeğiAlzheimer hastalığının tedavisinde []. Shanghai Journal of Geleneksel Çin Tıbbı, 2018, 52(1): 109-112.

【6】 Zhang Baishun, Zhao Xuewen, Chen Shuanghou, et al. İzole kısımlarının müshil etkisicistanche çöl çiçeğiDeneysel Araştırma □. Çin Geleneksel Çin Tıbbı Dergisi, 2003, 10(1I1): 31-32.

【7】 Zhang Baishun, Chen Shuanghou, Zhao Xuewen, et al.cistanche çöl çiçeğiözü galaktitol Dışkının etkisi üzerine bir doz-yanıt çalışması [J]. Çin Geleneksel Çin Tıbbı Dergisi, 2003, 10 (12): 28-29.

【8】 Gao Yunjia, Jiang Yong, Dai Fang, et al. tıbbi maddeler üzerinde araştırmacistanche çöl çiçeğilaksatifler için Araştırma [J]. Çin'de Modern Çin Tıbbı, 2015, 17(4): 307-311.

【9】 Bao Zhong, Cai Hong, Jiang Yong, et al. üç aktivitecistanche çöl çiçeğifarklı etki faktörleri altında Bileşenlerin Kantitatif Analizi J. Chinese Herbal Medicine, 2013, 44 (22): 32233230.

【10】 Bao Zhong, Cai Hong, Jiang Yong, et al. belirlenmesicistanche çöl çiçeğiHPLCEISD İçeriği Galactitol.Journal of Pharmaceutical Analysis, 2007, 27(7): 1004-1006.

【11】 Zhao Kuijun, Liang Lijuan, Bi Dan, et al. HPLCELSD tespiticistancheve tüp galaktitol içeriğicistanche[J]. Çin Geleneksel Çin Tıbbı Dergisi, 2012, 19(8): 52-54.

【12】 Wang Guiping, Xue Xiaomin, Lu Chao, et al. Betainin bitki stres direncini geliştirme üzerindeki etkisi ve etki mekanizması.Jiangxi Tarım Dergisi, 2014, 26(8): 2226.

【13】 Wang Qingjie, Wang Li. Bitki soğuğa dayanıklılık genleri araştırmalarının gözden geçirilmesi. Kırsal ekonomi ve Teknoloji, 2018, 29(8): 23-25.