Cistanche Herba Su Ekstraktında Ekinakozidin HPLC ile Tayini

Soyut:

Amaç Aşağıdakiler için bir HPLC yöntemi oluşturulmuştur:ekinekozid tayiniiçindeCistanche'nin su ekstraktıbitki.

Yöntemler Ekinakozit HPLC ile belirlendi. Ayırma, Inertsil ODS-SP C18 kolonunda, asetonitril(A) ve 0%4 fosforik asit çözeltisinden(B) oluşan bir mobil faz ile gradyan elüsyonu yoluyla gerçekleştirildi. Saptama dalga boyu 333 nm'ye ayarlandı ve kolon sıcaklığı 30 dereceydi. Akış hızı 1,0 mL·dak-1 ve enjeksiyon hacmi 10 μL idi. Sonuçlar Ekinakosidin 44.939 7-539.276 4 ug ·mL- 1 konsantrasyon aralığındaki doğrusal ilişkisi iyiydi(r=0.999 8). Geri kazanımlar %94,59-105%31 (RSD= 2%,93,n=9) idi. Cistanche bitkisinin su ekstraktlarındaki ekinakozit içeriği 15.527,7.347,12.267 mg·g-1 idi. Sonuç İyi tekrarlanabilirliğe sahip yerleşik HPLC yöntemi doğru, basit ve uygulanabilirdir. Cistanche herba'nın su ekstraktında ekinekozid tayini için uygundur.

Anahtar Kelimeler:HPLC;Cistanche bitkisinin su ekstraktı; ekinekozit; içeriğin belirlenmesi

Cistanche Deserticola, klinik uygulamada yaygın olarak kullanılan ve "çöl ginsengi" olarak bilinen geleneksel bir Çin tıbbı tonikidir [1]. Çin Farmakopesi'nin 2015 baskısında kaydedilen Cistanche Deserticola, Cistanche Deserticola YC Ma veya Cistanche tubulosa (Schenk) Wight'ın pullu yapraklarıyla birlikte kurutulmuş etli sapıdır. Sıcak, tatlı ve tuzludur ve böbrek ve kalın bağırsak meridyenlerine geri döner. Böbrek yangını besleyici, özü ve kanı yenileyici, bağırsakları ve müshilleri nemlendirici etkileri vardır [2]. "Shen Nong'un Materia Medica'sı", "ortayı güçlendirebileceğini, beş iç organı besleyebileceğini, yin'i güçlendirebileceğini ve özü besleyebileceğini" söylüyor. Cistanche Deserticola esas olarak feniletanoid glikozitler, iridoidler ve bunların glikozitleri, lignanlar ve bunların glikozitleri, polisakkaritler, ester bileşikleri ve alkaloidleri içerir. Feniletanol glikozitler, Cistanche Deserticola'nın ana aktif bileşenleridir. Bunlar arasında ekinakozit ve verbaskosit Çin Farmakopesi'nde Cistanche Deserticola'da listelenmiştir.

Tanımlama ve içerik belirleme için gösterge niteliğindeki bileşenler. Farmakolojik çalışmalar [4], Cistanche Deserticola'nın müshil, karaciğer koruması, anti-osteoporoz, antioksidan, yaşlanma karşıtı ve yorgunluk önleyici gibi çeşitli farmakolojik etkilere sahip olduğunu göstermektedir. Cistanche Deserticola sulu ekstraktı, sıçan osteoblastlarında kemik morfogenetik protein 2 geninin, tartrat dirençli asit fosfatazın, yumurtalıkları alınmış farelerin serumunda osteokalsinin ve kemik iliğinde Smad1, mad5 genleri, dönüştürücü büyüme faktörü vb. ekspresyonunu destekleyebilir. , anti-osteoporoz etkileri vardır [5-6].

Ekinezya, osteoblastların çoğalmasını destekleyebilir ve in vitro kültürde kültürlenen kemik iliği mezenkimal kök hücrelerinin osteoblastlara farklılaşmasını destekleyebilir [7-9]. Son yıllarda, Cistanche Deserticola etanol ekstraktı ve bunun bileşik preparatlarında [10-12] ekinakozit ve verbaskosidin içeriğinin belirlenmesi üzerine çok sayıda araştırma raporu bulunmaktadır, ancak Cistanche Deserticola'da indeks bileşenlerinin içeriğinin belirlenmesi hakkında çok az rapor bulunmaktadır. sulu ekstrakt. Bu çalışmada, Cistanche Deserticola'nın sulu ekstraktındaki ekinezit içeriğini belirlemek için yüksek performanslı sıvı kromatografisi (HPLC) kullanıldı.

1 malzeme

1.1 Araçlar

LC-20AT yüksek performanslı sıvı kromatografisi, SPD-20A dedektörü, SIL-20A otomatik örnekleyici, CTO-10ASvp kolon fırını, LC çözelti sıvı kromatografisi iş istasyonu, Shimadzu Corporation of Japonya; MES125P-OCE-DU elektronik analitik terazi, Sartorius Company, Almanya; SHZ-D (Ⅲ) sirkülasyonlu su çok amaçlı vakum pompası, Henan Yuhua Instrument Co., Ltd.; RC2B SO25 döner buharlaştırıcı soğutma sirkülasyon sistemi, RV 10 D S96 döner buharlaştırıcı, IKA Şirketi, Almanya; DK-S26

Elektrikli sabit sıcaklıkta su banyosu, Shanghai Jinghong Experimental Equipment Co., Ltd.; UPR serisi ultra saf su makinesi, Sichuan Youpu Ultrapure Technology Co., Ltd.

1.2 Tıbbi malzemeler ve reaktifler

Cistanche Deserticola tıbbi malzemesi, parti numarası: 1801001, 1806001, 181001 olan Guangzhou Lingnan Geleneksel Çin Tıbbı Adet Co., Ltd.'den satın alındı. Guangzhou Çin Tıbbı Üniversitesi Üçüncü Bağlı Hastanesi'nin baş geleneksel Çin eczacısı Tu Xingming, bunu tanımladı. Cistanche Deserticola YCMa'nın pullu yaprakları ile kurutulmuş etli sapı gibi. Numune, Guangzhou Çin Tıbbı Üniversitesi'ne Bağlı Üçüncü Hastanenin İlaç Test Odasında saklanmaktadır; Ekinezya Glikozit referans maddesi, içerik %89,7, Çin Gıda ve İlaç Kontrol Enstitüsü, parti numarası: 111670-

201706; asetonitril kromatografik olarak saftır (Merck, Almanya); metanol ve fosforik asit analitik olarak saftır (Tianjin Fuyu Fine Chemical Co., Ltd.); su ultra saf sudur.

2 Yöntemler ve sonuçlar

2.1 Cistanche Deserticola'nın su ekstraktının hazırlanması

Cistanche Deserticola tıbbi malzemesinin kaba tozunu alın, 10 katı damıtılmış su ekleyin, ekstraksiyon için her seferinde 1 saat olmak üzere iki kez ısıtın ve geri akıtın, filtreleyin, süzüntüyü birleştirin ve süzüntüyü döner bir buharlaştırıcıyla konsantre edin ham ilaç içeriği 0,100 g·mL-1'ye tamamlanır ve daha sonra kullanılmak üzere 4 derecede saklanır.

2.2 Kromatografik koşullar ve sistem uygunluğu

Kromatografik sütun: Inertsil ODS SP C18 sütunu (150 mm × 4,6 mm, 5 μm); mobil faz: asetonitril (A)-0.4% fosforik asit çözeltisi (B), gradyan elüsyonu: 0 ~ 5 dakika, %17

A; 5 ~ 25 dakika, %20 A; 25 ~ 30 dakika, %17 A; algılama dalga boyu: 333 nm; sütun sıcaklığı: 30 derece; akış hızı: 1,0 mL·dak-1;

Enjeksiyon hacmi: 10 μL. Bu kromatografik koşullar altında, ekinezyasit ve bitişik bileşen zirveleri arasındaki ayrım 1,5'ten büyüktür ve ekinezyasit zirvesini temel alan teorik plakaların sayısı 4,000'ten az olmamalıdır. Kromatogram Şekil 1'de gösterilmiştir.

2.3 Çözeltinin hazırlanması

2.3.1 Referans madde çözeltisi Uygun miktarda ekinezya referans maddesini tartın, doğru bir şekilde tartın, 10 mL'lik balon jojeye koyun, çözmek için metanol ekleyin ve ml başına 898.794 ug ekinezyasit içeren bir referans madde çözeltisi hazırlayın, 4 derece Daha sonra kullanmak üzere saklayın.

2.3.2 Test çözümü

2.0 mL Cistanche Deserticola sulu ekstraktını hassas bir şekilde ölçün, bir su banyosunda kuruyana kadar buharlaştırın, çözünmesi için metanol ekleyin, 10 mL'lik bir ölçülü şişede hacmine kadar seyreltin, iyice çalkalayın ve filtreleyin 0,22 μm'lik mikro gözenekli bir membran elde edildi.

2.4 Doğrusal ilişkinin incelenmesi

{{0}}.25, 0.50, 1.00, 2.00, 2.50'yi tam olarak ölçün, 3. Madde 2.3.1 kapsamındaki referans solüsyonundan 00 mL, 5 mL'lik ölçülü bir şişeye yerleştirin, hacmi tamamlamak için metanol ekleyin ve 44'lük bir gradyan konsantrasyonu elde edene kadar iyice çalkalayın.{{17} }, 89.879 4. 179.758 8, 359.517 6, 449.397 0, 539.276 4 ug·mL-1 referans çözeltisi, 0,22 μm mikro gözenekli membrandan filtrelendi. 2.2'deki kromatografik koşullara göre ölçün ve pik alanını kaydedin. Referans maddenin kütle konsantrasyonunun abscissa (X, ug·mL-1) ve tepe alanının ordinat (Y) olduğu doğrusal regresyon gerçekleştirin ve regresyon denklemi elde edilir: Y=13 185 .0X-32 273.0, r=0.999 8. Sonuçlar, ekinezyanın 44.939 7 ~ 539.276 4 ug·mL-1 konsantrasyon aralığında iyi bir doğrusal ilişkiye sahip olduğunu göstermektedir.

2.5 Hassasiyet testi

539,276 4 ug ·mL- 1 referans solüsyonu alın, enjekte edin ve 2,2'deki kromatografik koşullara göre sürekli olarak 6 kez ölçün ve pik alanını kaydedin. Sonuçlar, ekinekosid pik alanının RSD'sinin %1,81 olduğunu ve bu durumun iyi bir cihaz hassasiyetine işaret ettiğini gösterdi.

2.6 Stabilite testi

2.0 mL Cistanche Deserticola sulu ekstraktını tam olarak ölçün, bir su banyosunda kuruyana kadar buharlaştırın, çözünmesi için metanol ekleyin, 10 mL'lik ölçülü bir şişeye seyreltin, iyice çalkalayın, bir {{ 7}}.22 μm mikro gözenekli membran, madde 2.2'deki kromatografik koşulları takip edin ve sırasıyla 0 ve 2'ye yerleştirin. , 4, 8, 12, 24 saatlik enjeksiyon ölçümü, tepe alanını kaydedin. Sonuçlar, ekinekosid pik alanının RSD'sinin %1,16 olduğunu gösterdi; bu da test çözeltisinin 24 saat içinde iyi bir stabiliteye sahip olduğunu gösterir.

2.7 Tekrarlanabilirlik testi

2.0 mL Cistanche Deserticola su ekstraktını hassas bir şekilde ölçün ve 2.3.2'deki yönteme göre paralel olarak 6 test çözeltisi hazırlayın. 2.2'deki kromatografik koşullara göre ölçüm için numuneleri enjekte edin ve pik alanını kaydedin. Sonuçlar, RSD'ninekinekozitkütle konsantrasyonu %1,28 idi, bu da yöntemin iyi tekrarlanabilirliğini gösterir.

2.8 Numune geri kazanım testi

9 porsiyon 1,0 mL Cistanche Deserticola su ekstraktını hassas bir şekilde ölçün, 0,8, 1,0 ve 1,2 mL referans çözeltisi (1,552 mg·mL{{11) ekleyin }}) sırasıyla bir su banyosunda kuruyana kadar buharlaştırın, çözünmesi için metanol ekleyin ve 10 mL'lik hacimsel bir şişeye ayarlayın; İyice çalkalayın ve yüksek, orta ve düşük konsantrasyonlu test çözeltileri hazırlamak için 0,22 μm'lik mikro gözenekli membrandan filtreleyin. Her konsantrasyonun 3 kopyasını paralel olarak hazırlayın. 2.2'deki kromatografik koşullara göre ölçün. Zirve alanını kaydedin ve numune geri kazanımını hesaplayın. Oran. Sonuçlar Tablo 1'de gösterilmektedir.

2.9 Örnek içeriğinin belirlenmesi

2.0 mL'lik Cistanche Deserticola sulu ekstraktının 3 kısmını hassas bir şekilde ölçün, bir su banyosunda kuruyana kadar buharlaştırın, çözünmesi için metanol ekleyin, 10 mL'lik hacimsel bir şişeye seyreltin, iyice çalkalayın, süzün 0,22 μm'lik mikro gözenekli bir membran ve 2.2'deki kromatografik koşullara göre ölçüm yapın. Zirve alanını kaydedin ve ekinezya içeriğini hesaplayın. Sonuçlar Tablo 2'de gösterilmektedir.

Tablo 1 Ekinekozidin geri kazanım testlerinin sonuçları

Tablo 2 Cistanche bitkisinin su ekstraktındaki ekinakozit içeriği belirleme sonuçları