Cistanche Tubulosa'nın Acteoside ve Echinacoside Tayini

[Soyut]Amaç: Cistanche Tubulosa'da yüksek performanslı sıvı kromatografisi ile belirleme yöntemini (etkinlik bileşeni devlet tarafı ve ekinezya- tarafı) oluşturmak. Cistanche tubulosa'da iki habitat, dört konukçu ve dört kümedeki ana bileşen içeriğini karşılaştırmak. Cistanche tubulosa türlerinin kullanımı hakkında bilimsel kanıt sağlamak. Yöntemler: Kromasil C18 (4,6 mm×250 mm, 5 μm) kromatografik kolon kullanılarak; Mobil faz: metanol, asetonitril-1 yüzde asetik asit (14∶9∶77); Akış hızı: 1.0 mL·dak-1; 334 nm algılama dalga boyu; Sütun sıcaklığı 30 dereceydi Sonuçlar: Testte iki bileşenin iyi bir lineer standart eğri aralığı vardı (r=0.999,9). Ortalama geri kazanım oranı yüzde 96,89 ve yüzde 100,7 ve RSD yüzdesi yüzde 0,91 ve yüzde 1,96 oldu. Analiz sonuçları, Cistanche tubulosa'da farklı bölgelerde, partilerde ve konaklarda ana etkinlik bileşeni içeriği (echinacoside ve stateside) arasında önemli bir fark olduğunu göstermiştir. Sonuç: Yöntem basit, doğru ve tekrarlanabilirdir. Cistanche tubulosa'nın tıbbi değeri için deneysel bir temel sağlar.

[Anahtar kelimeler] Cistanche tubulosa; akteosit; Ekinekosid; içerik belirleme

Cistanche Deserticola deneyi

Cistanche ürünlerini incelemek için tıklayın

【Daha fazlasını isteyin】 E-posta:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

Cistanche Deserticola, ilk kez "Shennong Materia Medica Classic"te kaydedilmiştir ve böbrek güçlendirici ve yang güçlendirici reçetelerde en sık kullanılan ilaçlardan biridir. Son yıllarda, Cistanche Deserticola'nın büyük ölçekli kazısı, vahşi kaynakların hızla azalmasına yol açtı. Cistanche Deserticola'nın yerine, Sincan'da üretilen boru şeklindeki çiçek Cistanche Deserticola, ülkenin arzının yüzde 60'ını oluşturuyor.

Cistanche tozu

Ekinakozit ve ergosterol glikozitler gibi feniletanol glikozitler, Cistanche tubulosa'nın ana farmakolojik bileşenlerinden biridir. Ekinosidin nöroprotektif etkileri [3], osteoprotektif etkileri [4] ve yaşlanma karşıtı etkileri [5] vardır. Ergosteroside, hafıza bozukluğunu iyileştirme, Alzheimer hastalığını tedavi etme ve androjen benzeri etkilere sahip olma etkilerine sahiptir. Borulu Cistanche: Tamarix L.'nin [8-9] çeşitli bitkilerinin barındırdığı Hongliu Dayun olarak da bilinir. Yazar, Cistanche Deserticola'daki yukarıdaki iki bileşenin içeriğini belirlemek için HPLC yöntemini kullanmıştır. Belirleme yöntemi ve sonuçları, bu ilacın kalite kontrolü ve tıbbi değeri için bilimsel bir temel sağlar.

Feniletanol glikozit, Cistanche Deserticola'nın ana aktif bileşenidir.

1 Alet ve test ilacı

Reaktif ve test ilacı: Echinacetin (parti numarası 111670-200401), ergosterol (parti numarası 111530-200505), China Institute for the Control of Pharmaceutical and Biological Products tarafından sağlanan referans madde. Asetonitril ve metanol kromatografik olarak safken, su ultra saf sudur; Diğer tüm reaktifler analitik saftır. Cistanche Deserticola'nın tüm tıbbi materyalleri, İç Moğolistan Tıp Üniversitesi'nden Profesör Ju Aihua tarafından toplandı ve tanımlandı. Alet: Amerikan Agilent 1100 yüksek performanslı sıvı kromatografisi.

2 Yöntem ve Sonuçlar

2.1 Kromatografik koşullar ve sistem uyarlanabilirlik testi

Kromatografik kolon: Kromasil C18 kromatografik kolon (4,6 mm × 250 mm,5 μm); Mobil faz: asetonitril metanol yüzde 1 asetik asit solüsyonu (9:14:77); Saptama dalga boyu 334 nm'dir; Akış oran: 1,0 mL · dak-1; Kolon sıcaklığı 30 derece ; Enjeksiyon hacmi 20 μ L. Ekinezya glikozitlerinin hesaplanmasına göre teorik plaka sayısı 5000'den az olmamalıdır. İki farmakolojik bileşenin ayrılma derecesi bitişik tepe noktalarından 1,5'ten büyük bir ayrılma derecesi ile iyidir.(Bkz. Şekil 1-3)

Şekil 1 Ekinesetin Referans Maddesinin Kromatogramı

Şekil 2 Ergosterol referans maddesinin kromatogramı

Şekil 3 Cistanche Deserticola'nın Kromatogramı

2.2 Numune solüsyonunun hazırlanması

Yaklaşık 0,5 g Cistanche Deserticola tozunu (60 gözenekli elekten elenmiş) doğru bir şekilde tartın ve 100 mL'lik kahverengi bir erlen içine koyun. Doğru şekilde 50 mL mobil faz ekleyin, kütleyi tartın, 40 dakika sonikasyon uygulayın ve oda sıcaklığına yerleştirin; Kütleyi tekrar tartın, ağırlık kaybını telafi etmek için hareketli fazı kullanın, iyice çalkalayın, süzün, süzüntüyü tekrar alın ve bir kenara koyun.

2.3 Referans çözeltinin hazırlanması

Uygun miktarda Ekinesetin ve ergosterol referans malzemelerini doğru bir şekilde tartın ve 1 mL'de sırasıyla yaklaşık {{0}},14 mg Ekinesetin ve 0,10 mg ergosterol içeren bir çözelti hazırlamak için mobil faz ekleyin.

2.4 Doğrusal ilişki denetimi

Sırasıyla 6,4 mg ekinezya referans maddesini ve 3,0 mg ergosterol referans maddesini tam olarak tartın, bunları 10 mL'lik bir balon jojeye koyun, mobil faz ile seyreltin ve eşit şekilde çalkalayın; 0.1, 0.25, 0.5, 1.0, 2.0 ve 3.0 mL'yi doğru şekilde emdirin sırasıyla 5 mL'lik bir balon jojeye aktarın, mobil faz ile ölçeğe kadar seyreltin ve çalkalayın; Sırasıyla 20 μ L numunesi enjekte edin ve yukarıdaki kromatografik koşullara göre ölçün. Y ekseni tepe alanını temsil eder ve X ekseni enjeksiyon hacmini temsil eder. Standart bir eğri çizin. Ölçülen veriler Ekinesetin miktarının 0,26 μ g-7,75 μ olduğunu göstermektedir. Zirve alanı ile enjeksiyon hacmi arasında g arasında iyi bir doğrusal ilişki vardır ve regresyon denklemi Y=831,41X21'dir. 88, R2=0.9999; Ergosterol glikozit miktarı 0,30 μ g-7,50 μ'dir Pik alanı ile enjeksiyon hacmi arasında g arasında iyi bir doğrusal ilişki vardır ve regresyon denklemi Y=671,53X artı 158,71, R{ {39}}.9999.

Cistanche Deserticola'nın ana kimyasal bileşeni olan Echinoside

2.5 Kesinlik testi

0,5 g yukarıdaki tıbbi tozu doğru bir şekilde tartın, test solüsyonunu "2.2"de açıklanan yönteme göre hazırlayın, art arda 6 kez enjekte edin ve 2 bileşenin pik alanlarını kaydedin. Ekinekosidin pik alanının RSD yüzdesi yüzde 1,46'dır; Ergosterol glikozit içeriği yüzde 1,62'dir.

2.6 Stabilite testi

{{0}},5 g numune tozu alın ve test solüsyonunu "2.2"de açıklanan yönteme göre hazırlayın. Numuneyi hazırlandıktan sonra 0, 1, 2, 4, 8 ve 12 saat sonra enjekte edin. Sonuçlar, Ekinesetin pik alanının RSD yüzdesinin yüzde 1,5 olduğunu gösterdi; Ergosterol glikozit içeriği yüzde 2.0'dır.

2.7 Tekrarlanabilirlik testi

Minfeng, Hotan, Sincan'da üretilen aynı partiden her biri yaklaşık 0,5 g ağırlığındaki 6 toz numunesini doğru bir şekilde tartın. Pik alanını "2.2" altındaki yönteme göre hazırlayın ve ölçün. 6 numunedeki ekinakozidin pik alanının RSD yüzdesini yüzde 1,85 ve ergosterol yüzde 1,93 olarak hesaplayın.

2.8 Numune Ekleme ve kurtarma testi

Minfeng, Hotan, Sincan'da üretilen aynı partiden 6 tıbbi toz numunesini doğru bir şekilde tartın ve her numune yaklaşık 0,1 g ağırlığındadır. Belirli bir miktarda Echinacetin ve ergosterol ekleyin ve "2.2" de açıklanan yönteme göre test solüsyonunu hazırlayın. Ortalama iyileşme oranları sırasıyla yüzde 96,89 ve yüzde 100,7 idi; RSD yüzdesi sırasıyla yüzde 0,91 ve yüzde 1,96 idi. (Bkz. Tablolar 1-2)

Tablo 1 Ananas Suyu Glikozit Geri Kazanım Testinin Sonuçları

Tablo 2 Ergosterol glikozit geri kazanım testinin sonuçları

2.9 Numune Tayini

Her tüpten Cistanche Deserticola'nın tıbbi tozunu alın ve "2.2"deki yönteme göre çalıştırın. Ölçülen sonuçlar Tablo 3'te gösterilmiştir.

Tablo 3 Cistanche Deserticola'da Echinacetin ve Ergosteroside Tayini

3 Tartışma

3.1 Mobil faz seçimi

İki set mobil faz karşılaştırıldı: 1) metanol asetonitril yüzde 1 asetik asit çözeltisi (14:9:77); (2) Metanol: yüzde 1 formik asit (21.5:78.5). Sonuçlar, mobil faz (1) ile elüsyonun orta düzeyde nispi tutma süresi, daha az safsızlık tepe noktası ve iki bileşenin iyi ayrılması ile sonuçlandığını gösterdi.

3.2 Ekstraksiyon koşullarının seçimi

Farklı ekstraksiyon yöntemlerinin (ısıtma reflü, ultrason) ve ekstraksiyon sürelerinin (40 dk, 50 dk) aktif bileşenlerin içeriği üzerindeki etkileri, ekstraksiyon çözücüsü olarak mobil faz kullanılarak karşılaştırıldı. Son olarak, en yüksek içeriğin ısıtma ve 50 dakika geri akıştan sonra ölçülmesine rağmen, kötü tepe şekli nedeniyle başka seçeneğin olmadığı bulundu. 40 dakika ultrason ve 50 dakika ultrason ile ölçülen içerik benzerdir, bu nedenle ekstraksiyon koşulu olarak 40 dakika ultrason seçilmiştir.

3.3 Araştırma gösterdi

Çin otu cistanche

Farklı konakçıların ve habitatların, Cistanche Deserticola'daki ekinakozit ve ergosterol içeriğinde önemli farklılıklara sahip olması, tıbbi materyalin kalitesinin önemli ölçüde lokasyon ve konaktan etkilendiğini göstermektedir. Bu nedenle, Cistanche tubulosa'nın tıbbi malzemesinin orijini, konakçısı ve kalitesi arasındaki ilişkinin sistematik olarak incelenmesi, en uygun konakçı bitkilerin seçilmesi ve Cistanche tubulosa'nın kalitesinin değerlendirilmesi için büyük önem taşımaktadır.

referans

[1] Chen Fei, Chen Zhuo, Xing Xuefei ve diğerleri. Cistanche Deserticola [J] ile ilgili araştırma ilerlemesi. İlaç Değerlendirme Araştırması, 2013, 36 (6): 469-475

[2] Song Hailong, Jia Xiaoguang, Xie Haihui. Cistanche tubulosa'nın [J] kimyasal bileşenleri üzerine araştırma ilerlemesi. Sincan Geleneksel Çin Tıbbı, 2010, 28 (01): 76-78

[3] ZHU M,LUC,LIW. Ekinakozide geçici maruz kalma, Trk sinyalini etkinleştirmek ve neu－ ronal hücreleri rotenondan korumak için yeterlidir [J].J Neurochem,2013,124(4): 571-580. [4] LIF YANG X,YANG Y,etal. Yumurtalıkları alınmış sıçanlarda ekinakozidin antiosteoporotik aktivitesi [J].Phytomedicine, 2013,20(6):549-557.

[5] XIE H,ZHU H,CHENG C,ve ark. Echinacoside, insan fibroblastik hücrelerinin MRC-5[J] hücresel yaşlanmasını geciktirir. Pharmazie,2009,64(11):752-754.

[6] Park Jinghua, Pu Xiaoping, Ma Jian ve diğerleri. Coeliaosid [J] ile skopolamin kaynaklı bellek edinim bozukluğunun iyileştirilmesi. Çin Farmakoloji Bülteni, 2001, 17 (6): 625-626

[7] Lai Qinghai, Wang Linlin, Ding Hui ve diğerleri. Osteoporozun Cistanche Deserticola [J] ile tedavisine ilişkin araştırma ilerlemesi. Liaoning Geleneksel Çin Tıbbı Üniversitesi Dergisi, 2016, 18 (3): 102-104

[8] Wang Changlin, Guo Yuhai, Tu Pengfei ve diğerleri. Farklı Tamarix [J] türleri üzerinde parazitik Cistanche Deserticola'nın RAPD analizi. Çin Geleneksel Çin Tıbbı Dergisi, 2009, 34 (3): 264-268

[9] Huang Xiaofang, Xu Rong, Chen Jun ve ark. Cistanche Deserticola [J] Chinese Journal of Traditional Chinese Medicine, 2012, 37 (19): 2831-2835