Cistanche'den Saflaştırılmış Doğal Biyoaktif Bileşik Ekinekosidin Yaygın Karaciğer Metabolitlerinin Tanımlanması

3.1. Sıçan ve İnsan Karaciğeri S9 Analizinde ekinakozit A miktarının belirlenmesi

ekinakozitA, sıçan ve insan karaciğeri S9 fraksiyonları kullanılarak incelendi ve şu şekilde ölçüldü:Farklı zaman noktalarında HPLC-QQQ/MS. Echinacoside'ın kalan ayetler zaman profiliA, sıçan ve insan karaciğeri S9 fraksiyonu tedavisinde, Şekil'de gösterilmiştir.1. İyi karıştırılmışmodel' ve formül hesaplama [27], tahmin edilen değer Tabloda gösterilmiştir1. Farekaraciğer S9, ekinakozit A'nın ~%75,4'ünü 60 dakika içinde metabolize etti. İnsan karaciğeri S9 metabolize120 dakika içinde ekinacoside A'nın ~yüzde 49,8'i. NADPH varlığında, ekinakozit Aile daha yavaş metabolizet1/2 İnsanlarda=114,92 dakika. EH ilacın fraksiyonuilacın geri dönüşümsüz olarak uzaklaştırıldığı (ekstrakte edildiği) bir geçişte karaciğer tarafından filtrelenir.E olduğunu buldukH sıçan sayısı insanlardan daha yüksekti. Bu sonuç makul,yargılamakt1/2 değerler, çünkü sıçan karaciğerinin daha hızlı metabolize olduğu bildirilmiştir.insan karaciğeri [28]. Sıçan karaciğeri S9, GKB202 kullanan diğer bileşik raporlarla karşılaştırıldığındatheAntrodia sinnamomeamiselyum (t1/2 = 3,68 dakika), şuna göre daha hızlı metabolize edildi: ekinakozit A [29]. 

Şekil 1.ekinekosidSıçan ve insan karaciğerinde kalan zamana karşı profil S9. Veriler şurada sunulur:üçlü ölçümlerin ortalama değerleri.

Önceki rapor, 3 g/kg'ın gözlemlenen-yan-etkisi olmadığını göstermiştir.Sprague–Dawley farelerinde 28-günlük oral beslenmede vücut ağırlığı/gün ekinakozit A ile zenginleştirilmiş HE.Karaciğer hücre metabolizması için mevcut çalışma dozaj girişi, makul bir korelasyon verir,önceki ilein vivoekinakozid A bileşik farmakokinetiği (PK) çalışması [30,31]. yakın tarihli birindein vivorapor, Tsai ve ark. grup fare plazmasında ekinakozid A tespit etti.60 dakikada HE miselinin (50 mg/kg) oral uygulaması [32]. Bu,akımlaboratuvar ortamındateorik olarak gösterdiğimiz bulgular, hala ~ yüzde 24,6 olduğunuSıçan karaciğeri S9 metabolizmasından sonra kalan bileşik. Ayrıca yaklaşık olarak yarısıgeri kalan insan karaciğeri S9'da metabolize edilmemiş ekinakozit A'nın bulunması,tam bileşik yapıların kan dolaşımına girebileceğini, bu da onun oluşumuna katkıda bulunur.nöroproteksiyonda etkilidir. Ortak metabolitlerin sağlayıp sağlamadığı,biyolojik fonksiyon halen araştırılmaktadır ve ayrı bir çalışmada rapor edilecektir.

Cistanche Echinacoside Fonksiyonunu Öğrenmek İçin Buraya Tıklayın

3.2. Sıçan ve İnsanda İn Vitro Metabolit Tayini

Metabolitleri pozitif ve negatif modlarda tanımlamak için ultra performanslı sıvı kromatografisi/dört kutuplu uçuş süresi kütle spektrometresi (UPLC-QTOF/MS) kullanıldı. Bu çalışmada ekinakozid A metabolitlerinin sıçan ve insan karaciğeri S9 metabolitleri ile karşılaştırması Tablo'da gösterilmektedir.2. Ekinekosid A inkübasyonundan sonra yirmi dört metabolit bulundu ve bunlar M1-M24 (Tablo S1) olarak belirlendi. Sıçan ve insan karaciğeri S9 ile inkübasyondan sonra beş ortak metabolit tespit edildi. Toplu hataların hepsiküçük veya eşitdakikada 5 sayfa Zirve alanına dayalı olarak bol miktarda bulunan ilk üç metabolit, Glutasyon konjugasyonu artı Demetilasyon (M6), Demetilasyon (M2) ve Demetilasyon artı Hidrojenasyon (M3) idi. Alkoller Dehidrasyon (M1), Demetilasyon (M2), Demetilasyon artı Hidrojenasyon (M3), 2× Hidroksilasyon (M4), Demetilasyon ve iki Hidroksilasyon (M5) metabolitinin her ikisi de sıçan ve insan karaciğeri S9'da tanımlandı. Echinacoside A'nın önerilen metabolik yolu ve olası metabolitleri Şekil'de gösterilmektedir.2. 

Tablo 2.Ekinekosid A'nın yaygın karaciğer metabolitleri, sıçan ve insan karaciğeri S9'da tespit edilmiştir.UPLC-QTOF/MS.

Ekinakozit A formülünün ana bileşiği C idi.25H36O6. MS spektrumuekinakozit[M artı H]'de A bulunduartı= 433.2573 ve [M artı Na]artı= 455.2405 (Şekil3A). bu10 V çarpışma enerjisi ile MS/MS spektrumu Şekil'de gösterilmiştir.3karşılık gelen BCO eter bağının bölünmesi ([C20H29O2] artı= 301.2162 ve [C20H27O]artı= 283.2052) (Figür3C) [15,32]. Alkol Dehidrasyon metabolitleri (M1) formülü C idi.25H34O5, ekinacoside A'nın bir H'yi kaybetmesiyle2O [33,34]. M1'in MS spektrumu [M artı H]'de bulunduartı= 415.2472 ve [M artı Na]artı= 437.2255. 10V çarpışma enerjisinde, ana ürün iyonlarıvardım/z 283.2036, 215.1701, 181.1249, 135.0817, 119.0856, 105.0709 ve 69.0327 (Şekil4A). iki ürüniyonları, ekinakozit A iyonlarınınkine benzerdi (m/z 283.2036 vem/z 119.0856) ve üretimim/z 301.2162 kayboldu. Susuz M1 olabilirpentoz parçalarındaki su kaybını belirtmek için kullanılır [35]. Demetilasyon metabolitleri (M2)formül C idi24H34O6, ekinacoside A ile metilen (-CH2) [36]. bir çarpışmada40 V enerji, M2'nin MS spektrumu [M artı H]'de bulunduartı= 419.2407. ana ürüniyonlar vardım/z 312.0488, 269.9469, 231.0432, 123.0552 ve 179.0486 (Şekil4B). Üretimdem/z 269.9469, 179.0486, metilenin bölünmesine karşılık geldi (-CH3) ve artıHartı. Demetilasyon artı Hidrojenasyon metabolitleri (M3) formülü C idi.24H36O6 ileAlkende M2 ​​indirgemesi (artı H2) [37–39]. M3'ün MS spektrumu [M artı H]'de bulunduartı= 421.2569 ve [M artı Na]artı= 443.2355. 40 V çarpışma enerjisinde, ana ürüniyonlar vardım/z 353.2141, 277.2183, 147.1172 ve 77.0054 (Şekil4C). üretimm/z 353.2141, 277.2183, Hidrojenasyona karşılık geliyordu. 2× hidroksilasyonmetabolitler (M4) formülü C idi25H36O8 ekinacoside A ile izopropil hidroksilasyonuyan zincir ve siklopenten [40–42]. M4'ün MS spektrumu [M artı H]'de bulunduartı= 465.2461 ve [M artı Na]artı= 487.2315. 20V çarpışma enerjisinde, ana ürün iyonlarım/z 297.1842, 255.1389, 177.1115, 133.0860 ve 89.0597 (Şekil4D). üretimm/z 297.1842 ve 89.0598, Hidroksilasyona karşılık geliyordu. Demetilasyon veiki Hidroksilasyon metaboliti (M5) formülü C idi24H34O8 M11 bir metilen kaybederken(-CH2). M5'in MS spektrumu [M artı H]'de bulunduartı= 451.2413 ve [M artı Na]artı= 473.2158. 40 V'luk bir çarpışma enerjisinde, ana ürün iyonlarım/z 321.1516, 178.1225, 101.0705 ve 59.0601 (Şekil4E). üretimm/z 321.1516, M4'e karşılık geldimetilenin bölünmesi (-CH3) ve artı Hartı.

Her iki HE sporoforundan izole edilen 70 farklı sekonder metabolit vardır.veya miselyum. Bu metabolitler şu şekilde tanımlanır:polisakkaritler, poliketidler,fenoller, terpenoidler vebiyoaktif moleküller [43–45]. Bu ortak metabolitlerin,analiz ettiğimiz miselyumun öncüleri veya ara ürünleri de olabilir.daha önce bahsedilen ikincil metabolitler. Bununla birlikte, M1, M2,M3, M4 ve M5, ekinakozit A ve ikincil arasındaki anahtar ara ürünleri temsil edebilir.Sıçan ve insan çalışmaları için metabolitler. HE miselyumun artan kullanımı nedeniyleişlevsel ek, bu metabolitleri tanımlamak da yararlı biyobelirteçleri ortaya çıkaracaktır.Kolesterol örnek olarak alındığında, çeşitli maddelerin öncüleri veya ara ürünlerikaraciğer enzimleri tarafından üretilen maddeler, oksisterole metabolize edildi;artık sterol metabolizmasında güçlü bir metabolit olarak anlaşılmaktadır vesentez düzenlemesi [46]. 

Figür 3.(A) Ultra yüksek performanslı sıvı kromatografi-tandem ile ekinacoside A'nın MS spektrumudört kutuplu uçuş süresi kütle spektrometresi. (B) Ekinakozit A'nın MS/MS spektrumuultra yüksek performanslı sıvı kromatografi-tandem dört kutuplu uçuş süresi kütle spektrometresi.(C) Ekinekosit A ​​tarafından 10 V'luk bir çarpışma enerjisinde üretilen ürün iyonlarının önerilen yapıları.(a) [C20H29O2]artı= 301.2162, (b) [C20H27O]artı= 283.2052.  : Ana iyon.

Şekil 4.MS ve MSMS spektrumu (A) Alkol Dehidratasyonu (M1), (B) Demetilasyon metabolitleri(M2), (C) Demetilasyon artı Hidrojenasyon metabolitleri (M3), (D) 2 × Hidroksilasyon metabolitleri (M4),(E) Ultra yüksek performanslı bir sıvı kullanılarak Demetilasyon ve iki Hidroksilasyon (M5) metabolitikromatografi-tandem dört kutuplu uçuş süresi kütle spektrometresi. : Ana iyon.

M2 ve M3, sıçan karaciğeri S9 için 60 dakikada tespit edilirken, insan karaciğeri içinkaraciğer S9, M2 ve M3, 10, 30, 60 ve 120 dakikada tespit edildi. M3'ün üretilebileceğini tahmin etmiştik.iki farklı metabolik yolla; biri ekinacoside A'dan M3'e, diğeri türetildiM1'den. Buna karşılık M4 ve M5, 10, 30 ve 60 dakikalık sıçanlarda tespit edildi.karaciğer S9. insandakaraciğer S9, M4 10, 30, 60 ve 120. dakikada tespit edildi. M5 tespit edildi120 dakika. Zamangörünümü, M5 metabolik yolunun M4'ten türetilmiş olabileceğini açıklayabilir.

Bu çalışma, HE miselyum klinik çalışmaları için ek bilgi sağlar.biyoaktif bileşikten metabolik eylem olan eksik bilgi. İçindeyeni randomize, çift kör, plasebo kontrollü çalışma, üç adet 350 mg/g HE misel(5 mg/g ekinakozid A içeren) kapsül müdahalesi, 49 hafta boyunca daha yüksek gösterdiBilişsel Yetenek Tarama Aracı, Mini Mental Durum Muayenesi, VeenstrümantalGünlük Yaşam Aktiviteleri puanlarıolan hastalarda daha iyi bir kontrast duyarlılığı elde edilmiştir.yaş > 50 ve tanımuhtemel alzheimer hastalığı, ile karşılaştırıldığındaplasebo grubu [19]. Ekinacoside A metabolit profilini anlayarak yorumlayabilirizOekinacoside Zenginleştirilmiş HE misel gelişmiş nörobilişsel bozukluk, hangisi olabilirçoğunlukla metabolize edilmemiş bileşikten katkıda bulundu. Ekinacoside A'ya gelince,metabolitleriyi tolere edilir ve nöro-beslenme faydaları elde etmede önemli olabilir, bu dagelecekteki çalışmalarda araştırılmak. 

Bu, metabolik stabilitenin kütle spektrometresi analizini oluşturan ilk çalışmadır.ve sıçan ve insan karaciğeri S9'da bulunan ekinacoside A'nın on beş yaygın metabolitini tanımlayınkesirler. Bu çalışmanın sonuçları, özelliklerin, güvenliğin vebu eşsiz biyoaktif bileşiğin etkinliği. Sonuçlarımız gösteriyor kiekinakozit Aklinikfaydalar bileşik ve metabolitlerinden kaynaklanabilir. Gelecekte, analiz edeceğiztam bir metabolizma veri tabanı oluşturmak için kan, organlar ve dokulardan metabolitler.Bu tür çalışmaların fonksiyonel araştırma gıdalarına, nutrasötik takviyelere vehassas tıp

Tamamlayıcı Malzemeler:Aşağıdakiler şu adreste çevrimiçi olarak mevcuttur:1, Tablo S1: Sıçan ve insan karaciğeri S9'da ekinakozid A metabolitlerinin kimliğiUPLC-QTOF/MS ile.

Yazar Katkıları:Veri yorumlama, Y.-HK, T.-WL, J.-YL, Y.-WC ve T.-JL; metodoloji;Y.-HK, T.-WL ve T.-JL; T.-JL ve C.-CC tarafından yürütülen soruşturma; tarafından sağlanan hammaddeler:Y.-HK, T.-WL, J.-YL, Y.-WC, T.-JL ve C.-CC; görselleştirme: Y.-HK; orijinal taslak hazırlamaY.-HK, T.-WL, T.-JL ve C.-CC tarafından yapıldı; yazma—inceleme ve düzenleme, Y.-HK, T.-JL veC.-CC Tüm yazarlar makalenin yayınlanan versiyonunu okumuş ve kabul etmiştir.

Finansman:Bu araştırma herhangi bir dış finansman almamıştır.

Veri Kullanılabilirliği Bildirimi:Bu çalışmada sunulan ham maddeler ve bileşikler mevcuttur.istek üzerine ilgili yazardan.

Çıkar çatışmaları:Yazarlar herhangi bir çıkar çatışması beyan etmemektedir.

Örnek Durumu:Bileşiklerin örnekleri yazarlardan temin edilebilir.

Referanslar

1. Mitra, V.; Metcalf, J. Karaciğerin fonksiyonel anatomisi ve kan temini.anestezi. Yoğun Bakım Med.2009, 10, 332–333. [çapraz referans] 

2. Alamri, ZZ Karaciğerin metabolizmadaki rolü: Fizyolojik vurgu ile güncellenmiş bir derleme.Int. J. Temel Klinik. Eczane.2018, 7, 2271. [çapraz referans] 

3. Russell-Jones, G. Oral ilaç dağıtımı için reseptör aracılı endositozun potansiyel kullanımı.Av. Uyuşturucu Dağıtımı Rev.1996, 20, 83–97. [çapraz referans] 

4. Shugarts, S.; Benet, LZ Oral olarak uygulanan ilaçların farmakokinetiğinde taşıyıcıların rolü.eczane Res.2009, 26, 2039–2054. [çapraz referans]

5. Richardson, SJ; Nisan, B.; Kulkarni, AA; Moghaddam, İlaç Keşfinde MF Verimliliği: Bir Ekran Olarak Karaciğer S9 Fraksiyon TahliliMetabolik Stabilite için.İlaç Metab. Letonya2016, 10, 83–90. [çapraz referans] 

6. Corsini, A.; Bortolini, M. İlaca Bağlı Karaciğer Hasarı: İlaç Metabolizmasının ve Taşımanın Rolü.J. Clin. Eczane.2013, 53, 463–474. [çapraz referans] [PubMed] 

7. Lam, WW; Chen, J.; Xu, RF; Silva, J.; Lim, H.-K. İlaç Keşfinde Metabolit Tanımlaması. İçindeİlaç Keşfinde Optimizasyon.Farmakoloji ve Toksikolojide Yöntemler; Caldwell, G., Yan, Z., Eds.; Humana Press: Totowa, NJ, ABD, 2014; sayfa 445–459.

8. Prasad, B.; Garg, A.; Takwani, H.; Singh, S. Sıvı kromatografi-kütle spektrometresi ile metabolit tanımlaması.Trac EğilimleriAnal. kimya2011, 30, 360–387. [çapraz referans] 

9. Zhang, D.; Luo, G.; Ding, X.; Lu, C. İlaç keşfinde ilaç metabolizması ve eğiliminin klinik öncesi deneysel modelleri vegelişim.Açta Ecz. Günah. B2012, 2, 549–561. [çapraz referans] 

10. Wang, M.; Gao, Y.; Xu, D.; Konishi, T.; Gao, Q.Hericium erinaceus(Yamabushitake): İşlevsellik geliştirmek için benzersiz bir kaynakgıdalar ve ilaçlar.Gıda İşlevi.2014, 5, 3055–3064. [çapraz referans]

11. Kulübe.; Hui, G.; Li, H.; Guo, Y. Selenyum biyolojik zenginleştirmeHericium erinaceus(Aslan yelesi mantarı) velaboratuvar ortamındabiyo erişimyetenek.Gıda Kimyası2020, 331, 127287. [çapraz referans] 12. Kim, KH; Hayır, HJ; Choi, SU; Lee, KR Isohericenone, Hericium erinaceum'dan yeni bir sitotoksik izoindolin alkaloidi.J. Antibiyotik.2012, 65, 575–577. [çapraz referans] 

13. Han, MA; Tanya, M.; Liu, R.; Rahman, AAHericium erinaceus: Tıbbi değerleri olan yenilebilir bir mantar.J. Tamamlayıcıbütünleşik Med.2013, 10, 253–258. [çapraz referans]

14. O, X.; Wang, X.; Fang, J.; Chang, Y.; Ning, N.; Guo, H.; Huang, L.; Huang, X.; Zhao, Z. Yapılar, biyolojik aktiviteler vepolisakkaritlerin endüstriyel uygulamalarıHericium erinaceus(Aslan Yelesi) mantarı: Bir inceleme.Int. J. Biol. Makromol.2017, 97, 228–237. [çapraz referans] 

15. Kawagishi, H.; Shimada, A.; Shirai, R.; Okamoto, K.; Ojima, F.; Sakamoto, H.; Ishiguro, Y.; Furukawa, S. echinacosides A, B ve CHericium erinaceum misellerinden sinir büyüme faktörü (NGF) sentezinin güçlü uyarıcıları.Tetrahedron Lett.1994, 35, 1569–1572. [çapraz referans] 

16. Lee, KF; Chen, JH; Teng, CC; Şen, CH; Hsieh, MC; Lu, CC; Lee, KÇ; Lee, LY; Chen, WP; Chen, CC; et al. KoruyucuEtkileriCistanche Tubulosave İzole Echinacoside A ile İskemi-Yaralanmanın Neden Olduğu Nöronal Hücre Ölümüne KarşıiNOS/p38 MAPK ve Nitrotirozin inhibisyonu.Int. J. Mol. bilim2014, 15, 15073–15089. [çapraz referans] 

17. Tzeng, TT; Chen, CC; Chen, CC; Tsay, HJ; Lee, LY; Chen, WP; Şen, CC; Shiao, YJ Siyantin Diterpenoid veSesterterpen BileşenleriCistanche TubulosaAPP/PS1'de Alzheimer Hastalığıyla Bağlantılı Patolojileri İyileştirinTransgenik Fareler.Int. J. Mol. bilim2018, 19, 598. [çapraz referans]

Daha fazlasını iste:

E-posta:wallence.suen@wecistanche.com Whatsapp artı 86 15292862950