Ekinakozit, Osteoblastik MC3T3‑E1 Hücrelerinde Deksametazon Tarafından İndüklenen Büyüme İnhibisyonunu ve Apoptozu Bastırır

İletişim: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-posta:audrey.hu@wecistanche.com

Soyut.

Glukokortikoidler (GC'ler), kronik hastalıkları tedavi etmek için yaygın olarak kullanılmaktadır. GC'lerin uzun süreli ve/veya aşırı dozda uygulanması, GC'nin neden olduğu osteoporoz (GIOP) dahil olmak üzere insan sağlığı üzerinde birçok yan etkiye sahiptir. Bu soruşturmada amaç,cistanche kaynaklı ekinakozit(ECH), deksametazonla tedavi edilen murin osteoblastik MC3T3-E1 hücrelerine etki eder. ECH'yi bulduk(cistanche kaynaklı ekinakozit) (5, 10, 20, and 40 mg/l) inhibited dexamethasone (1,000 nM)-suppressed cell viability as demonstrated by Cell Counting Kit-8 (CCK-8) assay. The dose of 10 mg/l was selected for the following experiments because this dose had a better effect than the dose of 5 mg/l, and the doses >10 mg/l bu doza benzer bir etkiye sahipti. ECH(cistanche kaynaklı ekinakozit)(10 mg/l) veya pifitrin‑ (PFT- ) (bir p53 inhibitörü, 20 µM), Annexin V/propidium iyodür (PI) çift etiketli akış sitometrisi analizinde gösterildiği gibi deksametazonla indüklenen MC3T3-E1 apoptozunu baskıladı . ECH(cistanche kaynaklı ekinakozit)veya PFT tedavisi ayrıca deksametazonun Bcl-2 ekspresyonunu inhibe etme etkisini ve deksametazonun p53 ve Bax ekspresyonunu uyarma eylemini de hafifletti. Ayrıca, lentivirüs aracılı-p53 aşırı ekspresyonu, ECH'nin etkilerini tersine çevirdi.(cistanche kaynaklı ekinakozit)deksametazonla tedavi edilen MC3T3-E1 hücrelerinde, ECH'nin(cistanche kaynaklı ekinakozit)ap53-bağımlı yol yoluyla deksametazonla tedavi edilen osteoblastlarda indüklenen anti-apoptotik etkiler. Özetle, ECH(cistanche kaynaklı ekinakozit)deksametazon tarafından indüklenen osteoblastik hücre apoptozuna karşı koruyucu bir etkiye sahiptir, bu da ECH'nin(cistanche kaynaklı ekinakozit)GIOP tedavisinde klinik uygulama potansiyeline sahip olabilir.

Cistanche Deserticola'nın birçok etkisi vardır, daha fazlasını öğrenmek için buraya tıklayın

giriiş

Glukokortikoidler(GC'ler) sıklıkla inflamasyon, kanser ve otoimmün bozukluklar dahil olmak üzere geniş bir yelpazedeki kronik hastalıkları tedavi etmek için kullanılır (1). Bununla birlikte, GC'lerin uzun süreli ve/veya aşırı dozda uygulanmasının hipertansiyon, hiperglisemi, glokom, osteonekroz ve osteoporoz (2-4) gibi birçok yan etkisi vardır. GC kullanımının kemik kaybını ve kırık riskini arttırdığı açıktır (3-6). GC'ler, osteoblastların apoptozunu indükleyebilir ve bu hücrelerin işlevini bozabilir. Örneğin, bir GC hormonu olan deksametazon, osteoblastik MC3T3-E1 hücrelerinde p53 ekspresyonunu yükselterek hücre apoptozisine neden olabilir (7,8). Osteoblast apoptoz, kemik oluşumunun azalmasına yol açar. GC ile indüklenen osteoporozun (GIOP) tedavisi için bifosfonatların (alendronat ve risedronat) (9,10) oral kullanımı tanıtıldı. Bununla birlikte, düşük yapışma oranları, oral bifosfonatların etkinliğini sınırlar. Diğer ilaçların da uygunsuz uygulama [zoledronik asit (11)] ve yüksek maliyet [PTH 1-34 (teriparatid) (12,13)] gibi sınırlamaları vardır. Sonuç olarak, GİOP için yeni tedavi seçeneklerinin geliştirilmesine ihtiyaç vardır.

Cistanche kaynaklı ekinakozit (ECH)geleneksel Çin tıbbından izole edilen bir feniletanoid glikozittirbitkiCistanches(14). ECH(cistanche kaynaklı ekinakozit)hücre proliferasyonunu teşvik ederek ve inflamatuar yanıtı, reaktif oksijen türleri (ROS) üretimini ve hücre apoptozunu inhibe ederek nöron sistemi (15-20), karaciğer (21,22) ve akciğer (23) üzerinde koruyucu etkileri vardır. Her ne kadar ECH(cistanche kaynaklı ekinakozit)ayrıca osteoblastik kemik rejenerasyonunu destekleyebilir ve sıçan modellerinde (24,25) olağanüstü antiosteoporotik aktiviteye sahiptir, ECH'nin etkilerini açıklayan mevcut kayıt yoktur.(cistanche kaynaklı ekinakozit)GC kaynaklı osteoblastik hücre apoptozunda. Böylece, ECH'nin etkisini araştırdık.(cistanche kaynaklı ekinakozit)deksametazon ile indüklenen osteoblastik hücre apoptosisi üzerine etki eder ve MC3T3-E1 hücrelerindeki ön mekanizmayı aydınlatır.

Malzemeler ve yöntemler

yetiştirme nın-nin hücreler. Çin Bilimler Akademisi'nin (Şangay, Çin) Hücre Bankası, murin osteoblastik MC3T3-E1 hücrelerini sağladı. Hücrelerin büyümesi, yüzde 10 fetal bovin serumu (FBS; Gibco; Thermo Fisher Scientific, Inc., Grand Island, NY, ABD) içeren -minimal esansiyel ortamda (-MEM) (Hyclone; GE Healthcare, Logan, UT, ABD) gerçekleşti. ) ve penisilin/streptomisin (Beijing Solar Science and Technology Co., Ltd., Beijing, China). Hücrelerin bakımı, 37˚C sıcaklıkta, yüzde 95 hava ve yüzde 5 karbondioksit içeren bir ortamda gerçekleştirildi.

buüretmenın-ninlentivirüsp53'ü aşırı ifade eder. p53 ekspresyon yapısı oluşturmak için, murin p53 geninin protein kodlayan dizi (CDS) bölgesi sentezlendi ve içine yerleştirildi.ekoRİ/BamGenewiz, Inc. (Pekin, Çin) tarafından sağlanan lentiviral ekspresyon vektörü pLVX-puro'nun (Clontech Laboratories, Inc., Palo Alto, CA, ABD) HI kısıtlama bölgeleri. Yapı, DNA dizilimi ile doğrulandı. 293T hücreleri (Shanghai GeneChem Co., Ltd., Şanghay, Çin), Lipofectamine 2000 (Invitrogen: Thermo Fisher) yoluyla viral paketleme plazmitleri ve p53 ekspresyon plazmiti (pLVX-p53) veya kontrol plazmiti (pLVX) dahil olmak üzere bir plazmit karışımı ile transfekte edildi. Scientific, Inc., Carlsbad, CA, ABD) üreticinin talimatlarına dayanmaktadır. Viral süpernatan, transfeksiyondan 48 saat sonra toplandı ve MC3T3-E1 hücrelerini enfekte etmek için kullanıldı. p53 ekspresyonunun değerlendirilmesi, viral enfeksiyondan 48 saat sonra yapıldı.

NicelpolimerazZincirreaksiyon(qPCR). Toplam RNA ve MC3T3-E1 hücrelerini ayırmak için TRIzol reaktifi (Invitrogen: Thermo Fisher Scientific, Inc.) ve RevertAid™ First Strand cDNA Sentez kitini (Thermo Fisher Scientific, Inc., Rockford, IL, ABD) kullandık. toplam RNA'yı ters transkripsiyon için üreticinin talimatlarına göre. p53 mRNA seviyesi, ABI Prism 7300 Sekans Tespit Sistemi (Applied Biosystems: Thermo Fisher Scientific, Inc., Foster City, CA, ABD) üzerinde qPCR yoluyla tespit edildi. Primerler şu şekildeydi: p53 için 5'-CCC CTGTCATCTTTTGTCCCT-3' ve 5'-AGCTGGCAGAAT AGCTTATTGAG-3', 5'-CTGCCCAGAACATCA TCC-3' ve 5'-CTCAGATGCCTGCTTCAC{{ GAPDH için 18}}'.

Ardından, 2 aracılığıyla p53 mRNA seviyelerini değerlendirdik.^-Dahili kontrol olarak GAPDH ile ΔΔCT yöntemi (26).

Western blotlama. MC3T3-E1 hücrelerinin lizizi, proteaz inhibitörleri (Beijing Solarbio Science & Technology Co., Ltd.) ile radyoimmünopresipitasyon deney tamponunda gerçekleştirildi ve lizatların santrifüjü, 9,600 xg'de 4˚C sıcaklıkta 15 dakika sürdürüldü Böylece yağış giderilebilir. Daha sonra protein miktarını BCA tahlil kiti (Thermo Fisher Scientific, Inc.) ile değerlendirdik. Yüzde 10 veya 15'lik bir SDS-PAGE üzerine eşit miktarda protein ilave edildi ve bir nitroselüloz membrana (EMD Millipore, Bradford, MA, ABD) aktarıldı. Membranlar yüzde 5 yağsız süt ile bloke edildi ve birincil antikorlarla problandı. Fosfat tamponlu salin (PBS) ile 3 kez yıkandıktan sonra, yaban turpu peroksidazla konjuge sekonder antikor (1:1,000; kat no. A0208; Beyotime Biyoteknoloji Enstitüsü, Şanghay, Çin) ile membranların inkübasyonu gerçekleştirildi. . Gelişmiş bir kemilüminesans (ECL) kiti (EMD Millipore) aracılığıyla western blot testleri gerçekleştirdik. GAPDH iç standart olarak kullanıldı. Birincil antikor kaynakları aşağıdaki gibidir: Her ikisi de Santa Cruz Biotechnology, Inc.'den (Santa Cruz, CA, ABD) Bax (Sc-493) ve Bcl-2 (Sc-492); p53 (no. 2524) ve GAPDH (no. 5174) Cell Signaling Technology, Inc.'den (Danvers, MA, ABD).

Deneysel gruplama. Uygun deksametazon dozunu belirlemek için, MC3T3-E1 hücrelerinin tedavisi, bir dizi deksametazon (0, 1, 10, 100 ve 1,000 nM; Sigma) ile gerçekleştirildi. -Aldrich; Merck KGaA, St. Louis, MO, ABD). Hücreleri inkübe ettikten 48 saat sonra, hücre proliferasyonunu saptamak için Cell Counting Kit-8 (CCK-8) testleri yapıldı.

Uygun ECH dozunu seçmek için(cistanche kaynaklı ekinakozit), MC3T3-E1 hücrelerinin tedavisi 1,000 nM deksametazon ve çeşitli dozlarda ECH (0, 2.5, 5, 10, 20 ve 40 mg/l; Şangay Aladdin Biyokimyasal Technology Co., Ltd., Şanghay, Çin). Normal koşullar altında (sahte) büyütülen hücreler kontrol olarak kullanıldı. 48 saatlik kültürden sonra CCK-8 tahlili yapıldı.

Diğer tüm deneyler için, MC3T3-E1 hücreleri beş gruba ayrıldı: grup 1 (sahte), hücreler normal koşullar altında kültürlendi; grup 2, hücreler, pLVX lentivirüs ile transdüksiyona tabi tutulmuştur; grup 3, 10 mg/l ECH ile kültürlenen hücreler(cistanche kaynaklı ekinakozit); grup 4, 20 uM pifitrin- içeren hücreler (PFT-; Selleck Chemicals, Houston, TX, ABD); grup 5, pLVX-p53 lentivirüs ile transdükte edilmiş ve 10 mg/l ECH ile tedavi edilmiş hücreler(cistanche kaynaklı ekinakozit). 2-5 gruplarındaki hücreler, 1,000 nM deksametazon ile tedavi edildi. Hücre apoptozu ve protein ekspresyonu, 48 saatlik kültürden sonra ölçüldü.

Hücreproliferasyon tahlili.MC3T3-E1 hücrelerini 96-kuyu plakalarına 3x10'da tohumladık³hücreler/kuyu ve bunları bir gecede normal koşullarda kültürlendi. Hücreler belirtildiği gibi tedavi edildi. 48 saatlik kültürden sonra, üreticinin talimatlarına göre CCK8 (Signalway Antibody LLC, College Park, MD, ABD) testi yapıldı. Kısaca, her kuyudaki kültür ortamı, ortamdaki 100 ul yüzde 10 CCK-8 solüsyonu ile değiştirildi. Hücreleri 37°C sıcaklıkta 1 saat süreyle inkübe ettikten sonra, bir mikroplaka okuyucu ile 450 nm dalga boyunda absorbansı değerlendirdik. Kontrol kuyularına bağlantılarla nispi hücre canlılığı (yüzde) hesaplandı.

Hücreapoptoz değerlendirmesi. Üreticinin talimatlarını izleyerek erken apoptoz geçiren hücreleri ölçmek için Annexin V-FITC hücre apoptoz kitini (Beyotime Biyoteknoloji Enstitüsü) kullandık. Kısaca, tedavi edilen hücrelerin toplanması tripsinizasyon yoluyla gerçekleştirildi. Hücreler, PBS ile yıkandı ve Anneksin bağlama tamponu ile yeniden süspanse edildi. Hücrelerin inkübasyonu, Annexin V-FITC ile 4˚C sıcaklıkta 15 dakika süreyle gerçekleştirildi, ardından 4˚C'de propidium iyodür (PI) ile 5 dakika inkübasyon yapıldı. Sağ alt kadrandaki hücreler (Annexin V-FITC pozitif ve PI negatif), aktif olarak erken apoptoz geçiren olarak kabul edildi.

istatistikselanaliz. Veriler, üç bağımsız deneyin tümü için ortalama ± SD'dir. Gruplar arasındaki farklılıkları GraphPad Prism yazılımı (sürüm 6.0; GraphPad Software, Inc., San Diego, CA, ABD) aracılığıyla analiz etmek için Tukey'nin çoklu karşılaştırma testi ve tek yönlü varyans analizi yapıldı. P<0.05 was="" considered="" to="" indicate="" a="" statistically="" significant="">

Sonuçlar

Kuruluşnın-nina uygun doznın-nindeksametazon.Uygun deksametazon dozunu belirlemek için, MC3T3-E1 hücreleri, 48 saat boyunca artan miktarlarda deksametazon (0, 1, 10, 100 ve 1,000 nM) maruz bırakıldı. . Şekil 1'de gösterildiği gibi, CCK-8 testi ile nispi hücre canlılığı belirlendi, düşük konsantrasyonlarda deksametazon (1 ve 10 nM) ile tedavi edilen hücrelerde arttı ve yüksek konsantrasyonlarda deksametazon (100) maruz kalan hücrelerde önemli ölçüde azaldı. ve 1,000 nM).

En önemli azalma, 1,000 nM deksametazon içeren hücrelerde gözlendi. Bu nedenle, sonraki deneylerde 1,000 nM deksametazon seçilmiştir.

ECH'nin Etkisi(cistanche kaynaklı ekinakozit)deksametazonla indüklenen hücre büyümesi inhibisyonu üzerine. Daha sonra ECH'nin etkisini araştırdık.(cistanche kaynaklı ekinakozit)deksametazon kaynaklı hücre büyümesi inhibisyonu üzerine. MC3T3-E1 hücrelerinin tedavisi, 1,000 nM deksametazon ve çeşitli dozlarda ECH ile gerçekleştirildi.(cistanche kaynaklı ekinakozit)(0, 2.5, 5, 10, 20 ve 40 mg/l; Şekil 2). Tedaviden 48 saat sonra, ECH ilavesi(cistanche kaynaklı ekinakozit)5, 10, 20 ve 40 mg/l dozlarında deksametazon kaynaklı hücre hasarını önemli ölçüde azalttı. ECH(cistanche kaynaklı ekinakozit)10 mg/l'lik bir dozda, 5 mg/l'lik bir dozdan daha belirgin bir etkiye sahiptir. 10, 20 ve 40 mg/1 ECH ile tedavi edilen hücrelerde hücre canlılığı benzerdi(cistanche kaynaklı ekinakozit). Bu nedenle, 10 mg/l ECH(cistanche kaynaklı ekinakozit)aşağıdaki deneylerde kullanılmıştır.

Lentivirüs oluşturarak p53'ün aşırı ekspresyonu. Deksameta sone, p53'ü yukarı regüle edebilir, böylece osteoblast apoptozunu indükleyebilir (8). ECH'nin etkilerini incelemek için(cistanche kaynaklı ekinakozit) on dexamethasone-induced p53 expression, we constructed a lentivirus encoding p53 (pLVX-p53) and transduced the virus into MC3T3-E1 cells. The expression of p53 was analyzed at 48 h after transduction. Fig. 3 shows that p53 mRNA and protein levels were increased to >Kontrol virüsüne (pLVX) sahip hücrelere kıyasla pLVX-p53-dönüştürülmüş hücrelerde 2 kez. p53, ECH(cistanche kaynaklı ekinakozit) deksametazon kaynaklı apoptoz üzerinde. MC3T3-E1 hücreleri, Plavix veya pLVX-p53, 10 mg/l ECH(cistanche kaynaklı ekinakozit), 20 uM PFT- (bir p53 inhibitörü) ve 1,000 nM deksametazon ve ardından hücre apoptozu Annexin V-FITC apoptoz kiti ile ölçülmüştür. Şekil 4A'da gösterildiği gibi, deksametazon tedavisi, normal koşullar altında (sahte) kültürlenen hücrelere kıyasla hücre apoptozunu dikkate değer şekilde indüklemiştir. ECH(cistanche kaynaklı ekinakozit) ve PFT tedavisi, MC3T3‑E1 hücrelerini deksametazon kaynaklı apoptoza karşı önemli ölçüde korumuştur. Ek olarak, p53 aşırı ekspresyonu, ECH'nin koruyucu etkilerini tersine çevirdi(cistanche kaynaklı ekinakozit).

Önemli apoptoz düzenleyicileri olarak Bcl-2 ve Bax'ın p53 tarafından düzenlendiği bilinmektedir (27). Western blotlama, p53 ve Bax protein ekspresyonunun değişikliklerinin hücre apoptoz değişiklikleri ile tutarlı olduğunu, buna karşın Bcl-2 ekspresyonunun ters yönde değiştiğini gösterdi (Şekil 4B ve C). Özellikle, p53'ün protein seviyeleri, ECH tarafından önemli ölçüde bastırıldı.(cistanche kaynaklı ekinakozit)ve p53'ü aşırı eksprese eden ve deksametazon ile tedavi edilen hücrelerde PFT tedavisi (Şekil 4C). Bu veriler, ECH'nin(cistanche kaynaklı ekinakozit)p53 ekspresyonunu inhibe ederek deksametazon kaynaklı apoptoz üzerinde koruyucu etkiler gösterebilir.

Cistanche echinacoside'ın etkileri

Tartışma

ECH'nin anti-apoptoz işlevi(cistanche kaynaklı ekinakozit)D-galaktozamin (D-GalN) ve lipopolisakkarit (LPS) tarafından indüklenen akut karaciğer hasarı modelinde ve tümör nekroz faktörü- veya 1-metil{{6 tarafından indüklenen insan nöroblastom (SH-SY5Y) hücrelerinde tanımlanmıştır. }}fenilpiridinyumiyon (MPP artı ) (17,22,28). Deksametazon tedavisinin proliferasyonu engelleyebildiği ve MC3T3-E1 hücre apoptozunu indükleyebildiği bildirilmiştir (8,29). Mevcut çalışmada, yüksek konsantrasyonlarda deksametazon'a (100 ve 1,000 nM) maruz kalan hücrelerde bağıl hücre canlılığı, önceki bir çalışma ile tutarlı olarak önemli ölçüde azalmıştır (8). Ek ECH tedavisi (5-40 mg/l), deksametazonla baskılanmış hücre canlılığını önemli ölçüde inhibe etti. Ayrıca, deksametazon maruziyeti (1,000 nM), ECH tedavisinin önemli ölçüde sınırladığı MC3T3-E1 hücre apoptozunu uyardı. Rapor, ECH'nin deksametazon ile indüklenen osteoblast hücre apoptozisine karşı nasıl korunduğuna dair ilk tasviri verdi ve ECH'nin GIOP'ta klinik uygulama potansiyeline sahip olabileceğini öne sürdü.

Ayrıca, ECH'nin koruyucu etkilerinin ön mekanizmasını keşfetmeye çalıştık.(cistanche kaynaklı ekinakozit). Deksametazon, p53 transkripsiyonunu artırabilir, böylece osteoblastların apoptozunu ve hücre döngüsü durmasını indükleyebilir (8). p53, SH-SY5Y hücrelerinde (28) ECH tarafından aşağı regüle edilir. Burada, PFT- (bir p53 inhibitörü) ECH ile benzer koruyucu etkilere sahipken, p53 aşırı ekspresyonu ECH'nin koruyucu etkilerini tersine çevirmiştir. Farklı koşullar altında p53 protein ekspresyonunun değişiklikleri, hücre apoptozunun değişiklikleri ile uyumluydu. Bu sonuçlar, ECH'nin, p53 ekspresyonunu inhibe ederek deksametazon kaynaklı osteoblastik hücre apoptozu üzerinde koruyucu etkiler gösterebileceğini göstermektedir. Bcl-2 ve Bax gibi Bcl-2 familyası proteinleri mitokondriyal membranın geçirgenliğini değiştirebilir, efektör kaspazları aktive edebilir ve hücre apoptozisine neden olabilir (30). p53'ün Bcl-2 ve Bax'ı (27) düzenleyebildiği iyi bilinmektedir. Burada, PFT- veya ECH ile tedavi(cistanche kaynaklı ekinakozit) deksametazonun anti-apoptozis proteini Bcl-2 seviyeleri üzerindeki inhibitör etkilerini ve ayrıca deksametazonun pro-apoptozis proteini Bax seviyeleri üzerindeki uyarıcı etkilerini hafifletirken, p53 aşırı ekspresyonu ECH'nin etkilerini tersine çevirdi. Bu sonuçlar ayrıca p53'ün ECH'nin koruyucu işlevine dahil olduğunu gösterdi.

Özetle, ECH'nin(cistanche kaynaklı ekinakozit)deksametazon tarafından indüklenen osteoblastik hücre apoptozu üzerinde umut verici bir koruyucu etkiye sahiptir, bu da ECH'nin GIOP tedavisinde klinik uygulama potansiyeline sahip olabileceğini düşündürür.

Ekinakozitin cistanche üzerindeki etkileri

Referanslar

1. Buttgereit F, Burmester GR ve Lipworth BJ: Optimize edilmiş glukokortikoid tedavisi: Eski bir mızrağın keskinleştirilmesi. Lancet 365: 801-803, 2005.

2. Schäcke H, Döcke WD ve Asadullah K: Glukokortikoidlerin yan etkileriyle ilgili mekanizmalar. Pharmacol Ther 96: 23-43, 2002.

3. Fukushima W, Fujioka M, Kubo T, Tamakoshi A, Nagai M ve Hirota Y: Femur başının idiyopatik osteonekrozunun ülke çapında epidemiyolojik araştırması. Clin Orthop Relat Res 468: 2715-2724, 2010.

4. Civitelli R ve Ziambaras K: Glukokortik soğuk kaynaklı osteoporozun epidemiyolojisi. J Endocrinol Invest 31 (Ek): 2-6, 2008.

5. Gudbjornsson B, Juliusson UI ve Gudjonsson FV: Günlük klinik uygulamada steroid kaynaklı osteoporozu önlemek için uzun süreli steroid tedavisinin yaygınlığı ve karar verme sıklığı. Ann Rheum Dis 61: 32-36, 2002.

6. van Staa TP, Geusens P, Pols HA, de Laet C, Leufkens HG ve Cooper C: Oral glukokortikoid kullanan hastalarda uzun vadeli kırık riskini tahmin etmek için basit bir puan. QJM 98: 191-198, 2005.

7. Rickard DJ, Sullivan TA, Shenker BJ, Leboy PS ve Kakhdan I: Deksametazon ve BMP ile sıçan kemik iliği stromal hücre kültürlerinde hızlı osteoblast farklılaşmasının indüksiyonu-2. Dev Biol 161: 218-228, 1994.

8. Li H, Qian W, Weng X, Wu Z, Li H, Zhuang Q, Feng B ve Bian Y: Glukokortikoid reseptörü ve deksametazon tarafından sıralı P53 aktivasyonu, osteoblastik MC3T3-E1 hücrelerinin apoptoza ve hücre döngüsü durmasına aracılık eder. PLoS One 7: e37030, 2012.

9. Stoch SA, Saag KG, Greenwald M, Sebba AI, Cohen S, Verbruggen N, Giezek H, West J ve Schnitzer TJ: Glukokortikoid kaynaklı kemik kaybı olan hastalarda haftada bir oral alendronat 70 mg: A 12- aylık randomize, plasebo kontrollü klinik çalışma. J Rheumatol 36: 1705-1714, 2009.

10. Wallach S, Cohen S, Reid DM, Hughes RA, Hosking DJ, Laan RF, Doherty SM, Maricic M, Rosen C, Brown J ve diğerleri: Kortikosteroid tedavisi alan hastalarda risedronat tedavisinin kemik yoğunluğu ve vertebra kırığı üzerindeki etkileri. Calcif Tissue Int 67: 277-285, 2000.

11. Reid DM, Devogelaer JP, Saag K, Roux C, Lau CS, Reginster JY, Papanastasiou P, Ferreira A, Hartl F, Fashola T, ve diğerleri; HORIZON araştırmacıları: Glukokortikoid kaynaklı osteoporozun (HORIZON) önlenmesi ve tedavisinde zoledronik asit ve risedronat (HORIZON): Çok merkezli, çift kör, çift yapay, randomize kontrollü bir çalışma. Lancet 373: 1253-1263, 2009.

12. Langdale BL, Rajzbaum G, Jakob F, Karras D, Ljunggren O, Lems WF, Fahrleitner-Pammer A, Walsh JB, Barker C, Kutahov A, ve diğerleri: Menopoz sonrası kadınlarda kırık oranı ve sırt ağrısında azalma ve yaşam kalitesinde artış teriparatid ile tedavi edilenler: 18-Avrupa Forster Gözlem Çalışmasından (EFOS) elde edilen aylık veriler. Calcif Tissue Int 85: 484-493, 2009.

13. Saag KG, Zanchetta JR, Devogelaer JP, Adler RA, Eastell R, Bakınız K, Krege JH, Krohn K ve Warner MR: Glukokortikoid kaynaklı osteoporoz tedavisinde teriparatidin alendronata karşı etkileri: Randomize, çift ​​kör, kontrollü deneme. Artrit Rheum 60: 3346-3355, 2009.

14. Jia Y, Guan Q, Guo Y ve Du C: Ekinakozit, hücre proliferasyonunu uyarır ve dönüştürücü büyüme faktörü- 1 ekspresyonunun yukarı regülasyonu yoluyla bağırsak epitelyal MODE-K hücrelerinde hücre apoptozunu önler. J Pharmacol Sci 118: 99-108, 2012.

15. Kuang R, Sun Y, Yuan W, Lei L ve Zheng X: Feniletanoid glikozitlerden biri olan ekinakozitin PC12 hücrelerinde H(2)O(2) ile indüklenen sitotoksisite üzerindeki koruyucu etkileri. Planta Med 75: 1499-1504, 2009.

16. Kuang R, Sun Y ve Zheng X: Ekinakozidin H2O2-'nun neden olduğu PC12 hücre hasarı üzerindeki koruyucu etkisinde rol oynayan nitrik oksidin baskılanması. Nat Prod İletişim 5: 571-574, 2010.

17. Deng M, Zhao JY, Tu PF, Jiang Y, Li ZB ve Wang YH: Ekinakozit, SHSY5Y nöronal hücrelerini TNFalfa kaynaklı apoptozdan kurtarır. Eur J Pharmacol 505: 11-18, 2004.

18. Geng X, Tian X, Tu P ve Pu X: Parkinson hastalığının fare MPTP modelinde ekinakozitin nöroprotektif etkileri. Eur J Pharmacol 564: 66-74, 2007.

19. Zhao Q, Gao J, Li W ve Cai D: Parkinson hastalığının subakut MPTP fare modelinde ekinakozitin nörotrofik ve nöro-kurtarma etkileri. Beyin Res 1346: 224-236, 2010.

20. Zhu M, Lu C ve Li W: Ekinakozide geçici olarak maruz kalmak Trk sinyalini etkinleştirmek ve nöronal hücreleri rotenondan korumak için yeterlidir. J Neurochem 124: 571-580, 2013.

21. Wu Y, Li L, Wen T ve Li YQ: Ekinakozidin sıçanlarda karbon tetraklorür kaynaklı hepatotoksisite üzerindeki koruyucu etkileri. Toksikoloji 232: 50-56, 2007.

22. Li X, Gou C, Yang H, Qiu J, Gu T ve Wen T: Ekinakozit, farelerde apoptoz ve inflamasyonun inhibisyonu yoluyla D-galaktozamin artı lipopolisakarit kaynaklı akut karaciğer hasarını iyileştirir. Scand J Gastroenterol 49: 993-1000, 2014.

23. Zhang Y, Xing J, Ai T, Wen T, Guan L ve Zhao J: Ekinakozitin sıçanlarda oleik asidin neden olduğu akut akciğer hasarına karşı korunması. Free Radic Res 41: 798-805, 2007.

    ---