ABSTＲACT

Amaç: Genel olup olmadığını açıklığa kavuşturmakcistanositler(GC'ler) iyileşirBilişsel işlev bozukluğuhızlı yaşlanan farelere (SAMP8) spesifik androjen reseptörlerine (AＲ) aracılık edereksinaptik proteinin ekspresyonunun düzenlenmesi． 

Yöntemler: Toplam 76 7-aylık erkek SAMP8 fareleri rastgele olarak model grubuna, GC grubuna, GC'ler + flutamid (F) grubuna, GC'ler + fulvestrant (ICI) grubuna, F grubuna ve ICI grubuna ayrıldı. Her gruptaki farelerin öğrenme ve hafıza fonksiyonları Morris su labirenti ile test edildi. Test etmek için Western blot ve RT-PCR kullanıldı.sinaptofizinin ekspresyon seviyesi(SYN), postsinaptik yoğunluk – 95 (PSD – 95) ve her gruptaki farelerin beyinden türetilen nörotrofik faktörü (BDNF).

Sonuçlar:GC'ler SAMP8 farelerinin öğrenme ve bilişsel işlevlerini önemli ölçüde geliştirdi.

GC grubuyla karşılaştırıldığında, GC + F grubu ve GC + ICI grubundaki farelerin öğrenme ve hafıza işlevi önemli ölçüde azaldı. Western blot ve RT-PCR sonuçları, GC grubunda BDNF, SYN ve PSD-95 ekspresyon seviyesinin, Model grubuyla karşılaştırıldığında protein seviyesi ve gen seviyesinde önemli ölçüde arttığını gösterdi ( P ＜ 0． {{ 11}}5) . GCs + F ve GCs + ICI grubunda SYN ekspresyon seviyesi arttı ve BDNF ve PSD - 95 ekspresyon seviyeleri, GCs + F ve GCs + ICI grubunda GCs grubuyla karşılaştırıldığında anlamlı derecede azaldı ( P ＜ 0． 05) ．

Sonuç: GC'ler, SAMP8 farelerinde sinaptik plastisiteyi arttırmak için spesifik olarak AＲ'ya aracılık edebilir, bu da öğrenme ve bilişsel işlevi geliştirir.

ANAHTAR KELİMELER:Genel cistanositler; Androjen reseptörü; Sinaptik plastisite; SAMP8 fareleri

Cistanche takviyesi Bilişsel İşlev İyileştirme Diyet takviyesi PhGs75% Ech 30% Act 12%

Alzheimer hastalığı(AD) yaygın birnörolojik dejeneratif hastalıkklinik olarak ilerleyici bilişsel işlev azalması ve zihinsel ve psikolojik durumdaki değişikliklerle karakterizedir [1]. Araştırmalar erkek Alzheimer hastalarında testosteron düzeylerinin normal erkeklere göre önemli ölçüde düşük olduğunu bulmuştur.

hastaların bilişsel işlevlerisonrasında değişen derecelerde iyileştirildiketon replasman tedavisi[2], bu durum androjen düzeylerinde yaşa bağlı azalmaların yaşlı erkeklerde AH için bir risk faktörü olabileceğini göstermektedir.

Cistanche Deserticola toplam glikozitler (genel cistanositler, GC'ler), AD ile ilgili öğrenmeyi geliştirebilen Cistanche Deserticola'nın ana özlerinden biridir veBilişsel işlev bozukluğu[3]. Ek olarak, GC'lerin gavaj yoluyla uygulanması hayvanlarda testosteron düzeylerini önemli ölçüde arttırmıştır [4]. GC'ler ayrıca yang'ı teşvik etme işlevine sahiptir ve

Androjen benzeri farmakodinamik etkiler. Önceki çalışmalar, testosteronun AD model hayvanların öğrenme ve bilişsel işlevlerini iyileştirebildiğini ve bu sürecin spesifik androjen reseptörünün (androjen reseptörü, AR) aracılı olmasına dayandığını bildirmiştir [5].

Alzheimer hastalarında bilişsel işlev bozukluğunun sinaptik plastisite ile yakından ilişkili olduğu iyi bilinmektedir. Bununla birlikte, GC'lerin sinaptik plastisiteyi düzenlediği ve dolayısıyla öğrenme ve bilişsel işlevleri iyileştirdiği spesifik mekanizma hala belirsizdir. Bu çalışma, GC'lerin sinaptik plastisiteyi etkilemek için spesifik ARＲ'ye aracılık edip etmediğini ve böylece AD'de öğrenme ve bilişsel işlevleri iyileştirip iyileştirmediğini araştırmayı amaçladı.

1 Malzemeler ve yöntemler

1.1 Deney hayvanları ve ekipmanları

Erkek 3-aylık SAMP8 fareleri, Pekin Üniversitesi Tıp Fakültesi'nden (SCXK [Beijing] 2016-0010) satın alındı ​​ve 7 aylık olana kadar büyütüldü. Hayvanlar (24±1) derecede temiz bir ortamda tutuldu ve

Hayvanlara doğal aydınlatma, yiyecek ve suya ücretsiz erişim sağlandı ve deney hayvanlarının kullanımına yönelik 3R ilkelerine uygun olarak insani bakım sağlandı. Bu deneysel çalışma, Baotou Tıp Fakültesi Deney Hayvanları Etik Kurulu (Baotou Tıp Fakültesi No. 20201102) tarafından onaylandı.

Deneydeki ana reaktifler şunlardır:Cistanche Deserticola toplam glikozitler(GC'ler, Xi'an Ciyuan Biological Co., Ltd.); androjen reseptör antagonisti-flutamid (Sigma Company, ABD); östrojen reseptör antagonisti-fulvestrant (ICI 182780, ABD) Med Chem Express); Tavşan anti-fare BDNF antikoru,

PSD-95 antikoru, SYN antikoru, -aktin antikoru (Amerika Birleşik Devletleri'nin Proteintech Şirketi); protein elektroforez çözeltisi, protein transfer çözeltisi, TEMED, akrilamid tamponu, amonyum persülfat, Tris (Beijing Solebao Technology Co., Ltd.); cDNA Sentezi kiti, Yetenek floresansı kantitatif tespiti

Reaktif kiti (Tiangen Biochemical Technology Co., Ltd.), vb. Ana deney ekipmanı, dikey plaka elektroforez tankı, elektroforez aparatı, transfer tankı, boya giderme çalkalayıcı (Beijing Liuyi Bioteknoloji Co., Ltd.), protein jel görüntüleme analiz sistemini içerir. (Shanghai Tanon Technology Co., Ltd.), gerçek zamanlı floresan kantitatif PCR cihazı (ABD Roche) vb.

1. 2 Gruplandırma ve yönetim

Besleme işlemi sırasında iki fare doğal olarak öldü ve geri kalan 78 fare rastgele olarak model grubu, GC grubu, GC + flutamid (F) grubu, GC + fulvestrant (ICI) grubu, F grubu, ICI olarak ayrıldı.

Her biri 13 hayvandan oluşan gruplar. Model grup, F grubu ve ICI grubu dışındaki diğer gruplara 30 gün boyunca sürekli olarak 50 mg/(kg·gün) dozunda GC uygulandı.

GC'lerin uygulanmasından sonraki 24. günden itibaren, GC'ler + flutamid (F) grubuna ve GC'ler + fulvestrant (ICI) grubuna, GC'lerin uygulanmasından 30 dakika sonra intraperitoneal F (5 mg/kg/d) enjeksiyonu yapıldı. sondayla. ), ICI (1 mg/kg/gün), 7 gün boyunca sürekli enjeksiyon. Farelerin maksimum mide hacminin 0,5 mL, 1 kez/gün olmasını sağlamak için doz konsantrasyonunu ayarlayın.

1. 3 Morris su labirenti testi

Fareler su ortamına bir gün önceden adapte oldu. Morris su labirenti 6 gün sürdü. İlk 5 gün konumlandırma ve navigasyon testiydi. Fareler, dört çeyreğin her birinde günde bir kez, her seferinde 1 dakika süreyle eğitildi. Her antrenman aralığı 15 dakika olup, kayıtlar aynı anda kaydedildi. Hayvan konumlandırma ve navigasyon testinin kaçış gecikmesi; 6. gün platformu sudan çıkarın ve uzay araştırma testi yapın. Platform geçişlerinin sayısını ve farenin hedef çeyreğinde geçirilen sürenin yüzdesini kaydedin. hedef kadran) ve uzaysal keşif yüzme yörüngesi (uzaysal prob testinin yüzme yörüngesi) ve diğer göstergeler.

1. 4 Western blot tespiti

SYN, PSD-95 ve BDNF sinapsla ilişkili proteinlerin ifadesi. Morris su labirenti testinden sonra tüm farelere rutin olarak anestezi uygulandı, kafaları kesildi, beyinleri çıkarıldı ve hipokampusları çıkarıldı. Hipokampal doku protein parçalandı, 4 derecede ultrasonla parçalandı, 30 dakika buz üzerinde bırakıldı ve 15 dakika boyunca 4 derecede 12 000 devir/dakikada santrifüjlendi. Süpernatan alınmış ve protein konsantrasyonu BCA yöntemi kullanılarak ölçülmüştür. Proteini yükledikten sonra, 80 V sabit voltajda istifleme jeli elektroforezi, 120 V sabit voltajda ayırma jeli elektroforezi ve 300 mA sabit akışta ıslak transfer gerçekleştirin; PVDF membranını çıkarın, oda sıcaklığında 80 dakika boyunca %5 yağsız sütle bloke edin ve membranı üç kez TBST ile yıkayın. 15 dakika/zamanda birincil antikor, gece boyunca 4 derecede bir çalkalama masası üzerinde inkübe edildi; Ertesi gün membran 3 kez TBST ile yıkandı.

Sekonder antikor, oda sıcaklığında 2 saat boyunca 15 dakika/saat inkübe edildi, ardından ECL renk gelişimi gerçekleştirildi ve bir kemilüminesans görüntüleme sistemi ile görüntüleme gerçekleştirildi. -aktin dahili referans olarak kullanıldı ve bandın optik yoğunluk değeri Image J yazılımı kullanılarak analiz edildi.

1. 5ＲRT－PCRＲTespit

SYN, PSD-95 ve BDNF'nin mRNA ifadesi, Trizol ekstraksiyon yöntemine göre hipokampal doku toplam RNA'sından ekstre edildi ve ters transkripsiyondan sonra cDNA üretildi. Göreli floresans kantitatif tespiti için Talent floresan kantitatif tespit kiti kullanıldı. Deney üç kez tekrarlandı ve sonuçlar 2 - ΔΔCT'ye dönüştürülerek analiz edildi. Fare -aktin, SYN, PSD-95 ve BDNF primerleri Shanghai Sangon Company tarafından tasarlanmıştır ve primer dizileri Tablo 1'de gösterilmektedir.

1. 6 İstatistiksel analiz

İşleme için SPSS 25. 0 istatistik yazılımı aracılığıyla, istatistiksel grafikler çizmek için Graphpad Prism 8 yazılımı kullanıldı ve birden fazla numunenin ikili ortalamalarını karşılaştırmak için tek yönlü ANOVA kullanıldı. P < 0. 05, farkın istatistiksel olarak anlamlı olduğu anlamına gelir.