Cistanche Tubulosa Sulu Ekstraktının Bağırsak Bozukluğu Olan Farelerin Bağırsak Mikrobiyotası Üzerindeki Etkileri

1. Giriş

Bağırsak mikroorganizmaları esas olarak bağırsak lümeninde ve mukozal tabakada kolonize olur ve malzeme ve enerji değişimi, dönüşüm ve diğer işlemler yoluyla konakçıyla karşılıklı etkileşime girer. Diyet gibi çevresel mesajları genetik ve bağışıklık sinyalleriyle bütünleştiren ve sonuç olarak konağın metabolizmasını, bağışıklığını, sinir sistemini ve enfeksiyonlara tepkisini etkileyen sinyal merkezleridir [2]. Normalde bağırsak florası ile konakçılar arasında dinamik bir denge vardır; ancak bağırsak disbiyozu sağlık/hastalık dengesinde değişikliklere, bağışıklık bozukluklarına ve çok sayıda hastalığa neden olabilir [3]. Bağırsak mikrobiyotasındaki orta dereceli değişiklikler konakçı için kabul edilebilir; ancak bu yine de bakteriyofajlar, bakteriyosinler ve oksidatif stres gibi diğer ağırlaştırıcı faktörlerdeki değişiklikleri artırmak için fırsatlar sağlayabilir [4].

BAĞIRSAK BAĞIRSAK MİKROBİYOTA PHGS'NİN GELİŞTİRİLMESİ İÇİN CISTANCHE TUBULOSA %75 ECH %30 ACT %12

Önceki çalışmalar göstermiştir kiCistanche tubulosa'nın etanol ekstraktıGeleneksel bir Çin bitkisel formülü olan (CT), sıçanlarda bağırsak mikrobiyal bileşimini düzenleyebilir [5] ve CT'nin toplam glikozitleri, düzensiz bağırsak mikrobiyotasını ayarlar [6]. Esas olarak Tamarix türlerinin köklerinde parazitlenen Cistanche türlerine “çöl ginsengi” de denmekte olup, Cistanche Deserticola (CD) ve Cistanche tubulosa (CT) bitkilerinin saplarından oluşan bir tonik bitkisel ilaç olarak kullanılmaktadır. ]BuAntioksidan maddeler olan [8, 9] CT feniletanol glikozitlerinin (PHG'ler) ana kimyasal bileşenlerinin üreme fonksiyon bozukluğunu iyileştirdiği [10], hepatik yıldız hücre aktivasyonunu baskıladığı, TGF'deki sinyal yollarının iletimini bloke ettiği bulunmuştur{{3} }/SMAD [11] ve sıçanlarda sığır serum albümininin neden olduğu hepatik fibrozisi önler [12]. CT'deki 100'den fazla bileşen arasında polisakkarit de bol miktarda içeriğe sahip önemli maddelerden biridir [13, 14]. Önceki çalışmalar, C. Deserticola polisakkaritlerinin melanositlerde melanogenezi indüklediğini, oksidatif stresi azalttığını [15], sıçanlarda antioksidan ve antiinflamatuar süreçleri düzenleyerek bilişsel işlev bozukluğunu hafiflettiğini [16], PC12 hücrelerini OGD/RP kaynaklı hasara karşı koruduğunu göstermiştir [17] ],in vivo olarak ekinekozid emilimini arttırınve bağırsak mikrobiyotasını etkiler [18].

Probiyotikler, sağlık açısından yararları olan ve yeterli miktarlarda uygulandığında gastrointestinal sistemde mikrobiyal denge sağlayan, patojen olmayan canlı mikroorganizmalardır (19).Bumakrofajların, doğal öldürücü (NK) hücrelerin ve antijene özgü sitotoksik T lenfositlerin aktivasyonu ve çeşitli sitokinlerin suşa özgü ve doza bağlı bir şekilde salınması ile karakterize edilen spesifik olmayan hücresel bağışıklık tepkilerini artırabilirler [20]. Probiyotik suşları, TJ modülasyonu yoluyla bağırsak epitelinin özelliklerini iyileştirir ve spesifik probiyotik suşlarının, müsin ekspresyonunu düzenlediği, dolayısıyla mukus tabakasının özelliklerini etkilediği ve bağırsak bağışıklık sistemini dolaylı olarak düzenlediği gösterilmiştir [21]. Laktik asit bakterisi (LAB) ve Bifidobacterium türleri birçok alanda kullanılan başlıca probiyotiklerdir [22-26].BuSağlıkla ilgili işlevlerinde önemli bir faktör olan antioksidan kapasiteleri ile sağlık yararları çoktur [27]. Probiyotikler metal iyonlarını oksidasyonu katalize etmelerini önlemek için şelatlayabilir [28, 29]; ayrıca antioksidan enzimlerin ekspresyonunu artırabilir [30, 31], antioksidan aktiviteye sahip çeşitli metabolitler üretebilir [32, 33], antioksidan sinyal yollarına aracılık edebilir [34-36] ve reaktif oksijen türleri (ROS) üreten enzimleri düzenleyebilirler. Bağırsak mikroorganizmalarının oksidatif strese tepkisi [37].

Yakın zamanda yapılan bir çalışma, CD polisakkaritlerininbazı laktik asit bakterilerinin büyümesini teşvik ederinsan sağlığına fayda sağlayabilir [38]. Ancak CD'deki polisakkaritlerin içeriği CT'dekinden farklıdır [7, 39] ve bu farklılık bağırsak mikroorganizmaları üzerinde farklı etkilere yol açabilir. Ayrıca, CD polisakkaritleri NRF2/HO-1 yolunu [15] aktive ederek oksidatif stresi azaltabilse de, tek bir polisakkaritin etkileri CT'deki çoklu kompozisyonların genel etkisinden farklı olabilir.BuBizim için CT sulu ekstraktlarının bağırsak mikroorganizmaları üzerindeki etkilerinin kesin olarak tanımlanması gerekmektedir. Ek olarak, PHG'ler ayrıca oksidatif strese direnebilir [40] ve Keap1/Nrf2/HO-1 yolunu aktive ederek lipopolisakkarit aracılı inflamatuar yanıtları baskılayabilir [41].Bubu nedenle CT sulu ekstraktının etkisinin belirlenmesi büyük değer taşır. Ek olarak, sulu CD ekstraktının bazı bileşenlerinin oksidatif stres ve bağırsak florası üzerindeki etkileri, oksidatif strese karşı direncin bağırsak florasındaki değişikliklerle ilişkili olabileceğini düşündürmektedir.

Yukarıda belirtilen konulardaki bilgi boşluklarını doldurmak için CT sulu ekstraktının bağırsak florası bozukluğu olan farelerin bağırsak mikrobiyotası üzerindeki etkilerini araştırdık.BuBu sonuçlar, CT'nin bağırsak florasını değiştirdiği ve bağırsaklara oksidatif strese karşı direnç kazandırdığı olası mekanizmalar hakkında değerli bilgiler sağlayacaktır.

2. Malzemeler ve Yöntemler

2.1. Deney Hayvanları.

18-22 g ağırlığında toplam 18 SPF sınıfı erkek C57BL/6J fare, SCXK (yeni) 2018-0003 lisans numarasıyla Xinjiang Tıp Üniversitesi Deneysel Hayvan Merkezi'nden satın alındı.BuStandart koşullar altında kafeslerde barındırıldılar: 12 saat aydınlık/karanlık fotoperiyodu, 23 ± 2 derece sıcaklık ve %55 ± 5 nem.BuHayvanlara ticari bir diyet (%51 nitrojen içermeyen ekstrakt, %25 ham protein, %4,6 ham yağ, %6,5 ham kül, %4,0 ham lif ve %8,9 nem) ve musluk suyu verildi.BuHayvanlar, Ulusal Sağlık Enstitülerinin Laboratuar Hayvanlarının Bakımı ve Kullanımı Kılavuzunda açıklanan önerilere göre tedavi edildi.

BAĞIŞIKLIĞI GELİŞTİRMEK İÇİN DOĞAL CISTANCHE TUBULOSA PHGS75% ECH 30% ACT 12%

2.2. Sulu Ekstraktın Ekstraksiyonu.

Hotan Dichen Pharmaceutical Bioteknoloji Co., Ltd. tarafından sağlanan kurutulmuş C. tubulosa dilimleri toz haline getirildi ve parçacık boyutları 20 ila 40 ağ gözü arasında olan granüller seçildi.BuEkstraksiyon koşulları şu şekildeydi: 1:19 katı sıvı oranı, 80 derece sıcaklık, 6 dakika mikrodalga süresi, 16 dakika ultrasonik süre, 400 W mikrodalga gücü ve 400 W ultrasonik güç.BuSulu ekstraktın ana bileşenlerinin içerikleri HPLC (Agilent 1260 Infinity II, California, ABD) ile ölçüldü. Kısaca, standart ekinekozit (0,2 mg/mL) ve akteozit (0,2 mg/mL) maddeleri, referans madde çözeltisi olarak hizmet etmek üzere %50 metanol içerisinde çözüldü.Butr, 1 g CT sulu ekstraktı 100 mL %50 metanol içerisinde çözüldü ve 30 dakika beklemeye bırakıldı.BuEkstrakt çözeltisi 10 dakika boyunca 250 W ve 35 kHz'de ultrasonla işlendi ve ardından 12000 rpm/dakikada santrifüjlendi.BuSüpernatan, 0,45 μm mikro gözenekli filtre membranı ile filtrelendi.BuReferans madde çözeltisi ve süzüntü daha sonra aşağıdaki koşullarda HPLC ile tespit edildi: dolgu maddesi olarak oktadesil silan bağlı silika jel, mobil faz A olarak metanol ve mobil faz B olarak %0.1 formik asit.BuKolonun sıcaklığı 30 derece, tespit dalga boyu 330 nm ve enjeksiyon hacmi 10 μL olarak ayarlandı.

2.3. Deneyler.

Bir haftalık adaptasyondan sonra, 18 fare rastgele altı gruba ayrıldı: A (orta doz CT sulu ekstraktı eklenmiş olarak normal), B (CT sulu ekstraktı olmadan normal), C (sulu ekstraktı olmayan model), D ( yüksek doz CT sulu ekstrakt eklenmiş model), E (orta doz CT sulu ekstrakt eklenmiş model) ve F (düşük doz CT sulu ekstrakt eklenmiş model).BuGruplara şu şekilde muamele edildi: normal grup normal salin solüsyonu ile ıslatıldı, model grubu sefiksim (30 mg/kg, Shiyao Group Ouyi Pharmaceutical Co., Ltd., Shijiazhuang, Çin) ve normal salin solüsyonu (yüksek) ile ıslatıldı -doz grubuna sefiksim ve 221.14 mg/kg CT sulu ekstraktı, orta doz grubuna sefiksim ve 165.54 mg/kg sulu ekstrakt, düşük doz grubuna ise sefiksim ve 110.57 mg/kg sulu ekstrakt uygulandı. sulu ekstraktın.Bue A grubu 165.54 mg/kg sulu ekstraktla ıslatıldı ve sefiksim eklenmedi. Sefiksim günlük olarak öğlen saatlerinde uygulandı ve diğer maddeler her gün saat 15:00'te uygulandı. Deneyler sırasında C, D, E ve F grupları bağırsak bozukluklarının model durumunda tutuldu.BuDışkılar her yedi günde bir steril, çalışılabilir bir masa üzerinde toplandı ve -20 derecede saklandı.

2.4. Fare Kolonunun Histopatolojik Gözlemi.

Deneyin sonunda fareler servikal dislokasyonla öldürüldü ve kolon içerikleri steril, çalıştırılabilir bir masa üzerinde toplandı ve -80 derece C'de saklandı; aynı zamanda kolonik doku örnekleri %10 nötr formalinde sabitlendi.BuNumuneler, gradyan konsantrasyonu kullanılarak dehidre edildi, ksilen kullanılarak hyalinize edildi, parafine gömüldü, kesitlere ayrıldı ve hematoksilen-eozin ile boyandı. Kolon mukozasındaki morfolojik değişiklikler optik mikroskop kullanılarak gözlemlendi ve karşılaştırıldı. Kolondaki villus uzunluğu ve kript derinliği ölçüldü ve villus uzunluğunun kript derinliğine oranı (V/C değeri) hesaplandı (51).

2.5. DNA Ekstraksiyonu ve Kütüphane Oluşturma.

Üreticinin protokolüne göre EZNA ®Soil DNA Kiti (Omega Bio-Tek, Norcross, GA, ABD) kullanılarak dışkıdan DNA ekstrakte edildi. DNA kalitesi bir florometre (QuantiFluor™–ST, Promega Corporation, ABD) kullanılarak belirlendi. 16'lı rDNA'nın V3-V4 bölgesindeki eşleştirilmiş primerler, bölgeyi çoğaltmak ve 466 bp DNA fragmanı üretmek üzere tasarlandı.Bue ileri primer 341F (-5- CCTACGGGNGGCWGCAG-3-) idi ve ters primer 806R (-5-GGACTACHVGGGTATCTAAT-3-) idi. Her PCR hacmi 25 μL idi ve 2,5 μL 10 × PCR tamponu, 2 μL dNTP, her primerden 1 μL ve 20-30 ng şablon DNA içeriyordu.Butr'de, diziliş kitaplıkları oluşturmak için dizine alınmış bağdaştırıcılar amplikonların ucuna eklendi.BuKütüphaneler bir QuantiFluor™ florometre kullanılarak doğrulandı ve 10 nmol'e kadar ölçüldü.

2.6. 16s rRNA Gen Sıralaması ve Mikrobiyal Topluluk Analizi.

Bue Illumina platformu (Illumina MiSeq), 2 x 250 bp eşleştirilmiş uç verileri elde etmek için kullanıldı. Operasyonel taksonomik birimler (OTU'lar), Uparse yazılımı kullanılarak standart kümeleme yoluyla %97 benzerlikle elde edildi.BuOTU'ları Greengene veritabanı Sürüm 13.5 ile hizalamak ve tür açıklaması gerçekleştirmek için RDP sınıflandırıcının saf Bayesian atama algoritması kullanıldı.BuBağırsak mikrobiyotasının alfa çeşitliliği Shannon ve Simpson endeksleri kullanılarak hesaplandı ve gruplar arasındaki farklar Doğrusal diskriminant analizi Etki Boyutu (LEfSe) ile analiz edildi.Bue beta çeşitliliği, Bray-Curtis farklılıklarının temel koordinat analizi (PCoA) ile analiz edildi. PICRUSt2, bağırsak mikrobiyomunun mikrobiyal metabolik kapasitesini tahmin etmek için kullanıldı [42].

2.7. İstatistiksel Veri Analizi.

Tek yönlü ANOVA için SPSS 20 kullanılmış ve deneysel veriler X ± S; X ortalama değeri, S ise standart sapmayı gösterir.

METABOLİK DEĞİŞİKLİKLERİ YÖNETMEK İÇİN DOĞAL CISTANCHE TUBULOSA PHGS75% ECH 30% ACT 12%

3. Sonuçlar

3.1. 8e CT Sulu Ekstraktın Kolon Morfolojisi Üzerine Etkisi.

Bue temsili bileşikler (ekinekozit ve akteozit) ve CT ekstraktının konsantrasyonları HPLC ile doğrulandı (Şekil S1). Sulu ekstraktın bağırsak üzerindeki etkisini belirlemek için CT sulu ekstraktı ile muameleyi takiben kolon villusunun uzunluğunu ve girintilerin derinliğini araştırdık.BuNormal ve yüksek doz gruplarındaki (A, B ve D) kolon villusları daha uzun ve parmağa benzerken, model ve düşük doz gruplarındaki (C ve F) kolon villusları kısaydı ve kolonun uçları villi kırılmıştı (Resim 1). Buna göre, yüksek doz CT sulu ekstraktı, model grubundaki farelerle karşılaştırıldığında bağırsak bozuklukları olan farelerde kolon villusunun uzunluğunu önemli ölçüde arttırdı ve resesus derinliğini azalttı (P < 0.01). Buna karşılık, resesus derinliği yüksek doz grubu ile normal grup arasında anlamlı farklılık göstermedi (P> 0.05) (Tablo S1).BuBu sonuçlar, yüksek dozda CT sulu ekstraktının bağırsak bozuklukları olan farelerin kolonundaki morfolojiyi iyileştirebileceğini gösterdi.

3.2. 8e CT Sulu Ekstraktının Bağırsak Mikrobiyotasının Çeşitliliği Üzerindeki Etkisi.

Kolon içindeki morfolojik değişikliklerin potansiyel nedenini araştırmak ve CT sulu ekstraktı ile tedavinin ardından bağırsak mikrobiyotasındaki değişiklikleri araştırmak için 16s rRNA gen dizilimi gerçekleştirdik. Ham verilerden 77.734 ila 125.144 arasında değişen ortalama 100.553 etkili etiket elde edildi (Tablo S2).BuBu etiketler 4932 OTU'da kümelendi (Tablo S3). Daha sonra bu OTU'lara dayanarak bağırsak mikrobiyotasının çeşitliliğini analiz ettik.Bue Shannon ve Simpson endeksleri A grubu (CT sulu ekstraktı ile normal) ve B grubu (CT sulu ekstraktı olmadan normal) arasında hiçbir fark göstermedi (Şekil 2(a)).Busefiksim tedavisi uygulanmayan farelerde CT sulu ekstraktının bağırsak mikrobiyotasının çeşitliliği üzerinde hiçbir ek yararlı veya zararlı etkisinin olmayabileceği belirtilmektedir. Ancak model grubundaki (C) çeşitlilik normal gruplara göre azalma eğilimi gösterdi.BuYüksek ve orta doz CT sulu ekstraktları ile tedavi edilen fareler, çeşitlilik iyileşmesi belirtileri gösterirken, düşük doz CT sulu ekstraktı ile tedavi edilen farelerde böyle bir fenomen gözlenmedi (Şekil 2(a)). Bu arada PCoA, yüksek dozda (D) ve orta dozda (E) CT sulu ekstraktları uygulanan normal grupların (A ve B) ve bağırsak bozukluğu gruplarının, model grubundaki ve gruptakilerden daha kısa numuneler arası mesafelere sahip olma eğiliminde olduğunu ortaya çıkardı. düşük doz CT sulu ekstrakt takviyesi grubu (F) (Şekil 2(b)).BuBu sonuçlar CT sulu ekstraktının yardımcı olabileceğini gösterdibağırsak mikrobiyotasının çeşitliliğini geliştirmekbağırsak bozuklukları olan farelerde.

3.3. CT Sulu Ekstrakt ile Tedavi Edilen Bağırsak Mikrobiyotasının Bileşimindeki Değişiklikler.

BuMikrobiyota kompozisyon profilleri farklı gruplar arasında karşılaştırıldı. Filum düzeyinde, model gruptaki Proteobakterilerin göreceli bolluğu diğer gruplara göre daha yüksekti (Şekil 3(a)).BuProteobakterilerdeki artış, model farelerin mikrobiyomunun sefiksim tarafından değiştirildiğini ve artan Proteobakteri prevalansının, bozulmuş bağırsak florasının merkez belirteci olması nedeniyle CT sulu ekstraktının bağırsak mikrobiyotasına fayda sağlayabileceğini ileri sürdü [43-45]. Ek olarak, cins düzeyinde, model grubunda Lactobacillus'un göreceli bolluğu, normal ve yüksek doz gruplarına kıyasla azalmıştır; ancak orta ve düşük doz grubuna kıyasla arttı (Şekil 3(b)).BuBu sonuçlar, yüksek doz CT sulu ekstraktının Lactobacillus cinsinden bazı bakterilerin büyümesini destekleyebileceğini gösterdi.

Çalışılan gruplar arasındaki farklı mikrobiyota, LEfSe analizine göre daha da belirlendi.Buanaliz, sefiksim tedavisinden sonra Turicibacter, Alphaproteobakteriler, Asidobakteriler, Betaproteobakteriler ve Chloroflexi'nin göreceli bolluklarının önemli ölçüde arttığını, buna karşın Lactobacillus, Eubacterium_nodatum_ grubu, Pseudonocardiales'in göreceli bolluklarının önemli ölçüde arttığını göstermiştir. ve Christensenellaceae_R-7_grubu normal gruptakilerle karşılaştırıldığında önemli ölçüde azaldı (Şekil 4(a)). Çarpıcı bir şekilde, model grubu yüksek doz CT sulu ekstraktı ile desteklendiğinde, Muribaculaceae, Lactobacillus, Kineosporiaceae, Eubacterium nodatum grubu ve Pedobacter'in göreceli bolluğu, model grubundakilerle karşılaştırıldığında önemli ölçüde arttı. Bu arada, Rhodobacter, Ruminococcaceae UCG_013, Roseburia, Ruminiclostridium_9 ve Candidatus Stoquefichus'un göreceli bolluğu, model grubundakilerle karşılaştırıldığında önemli ölçüde azaldı (Şekil 4(b)).

3.4. Bağırsak Mikrobiyotasının CT Sulu Ekstrakt ile Tedaviye İlişkin İşlevleri.

Bağırsak mikrobiyotasının metabolik yollarını tahmin etmek için PICRUSt2 yazılımını kullandık ve normal grup, diğer gruplardaki değişiklikleri analiz etmek için referans olarak kullanıldı. Sefiksim tedavisi altında, etilbenzen bozunmasının göreceli bolluğu, siderofor grubu ribozomal olmayan peptidlerin biyosentezi ve ksenobiyotiklerin sitokrom P450 yollarıyla metabolizması arttı; yüksek ve orta doz CT sulu ekstraktları ile tedaviden sonra bunların göreceli bolluğu normal seviyelere döndü. Bu arada, sefiksim tedavisi altında siyanoamino asit metabolizma yolunun göreceli bolluğu azaldı; ancak yüksek doz CT sulu ekstraktı ile tedaviden sonra arttı. Ayrıca genel olarak sefiksim tedavisinden sonra farklı metabolit yollarındaki değişiklikler normal gruptakilerle karşılaştırıldığında anlamlıydı; ancak CT sulu ekstraktının eklenmesi aşırı değişiklikleri önleyebildi (Şekil 5).

4. Tartışma

Kolon morfolojisi büyüme, sindirim ve emilim, bağışıklık düzenlemesi ve bağırsak hasarının onarımı ile değiştirilebilir [46-50].Bue V/C oranı, bağırsak yolunun sindirim durumunu kapsamlı bir şekilde yansıtabilir ve bağırsak yolunun sindirim ve emilim kapasitesiyle doğrudan orantılıdır [51, 52]. Bu çalışmada villus ve girinti biyopsisi ve istatistiksel veriler, yüksek doz sulu ekstraktın kolon içindeki kusurlu morfolojiyi kısmen iyileştirebildiğini gösterdi.

Sulu ekstraktın bağırsak morfolojisini nasıl değiştirdiğini ve bağırsak mikrobiyotasını nasıl etkilediğini araştırmak için bağırsak florasındaki değişikliklerden geriye doğru çalıştık. Düzensiz bağırsak florasının merkez belirteci olan Proteobakterilerin göreceli bolluğunun, sefiksim tedavisi uygulanmayan duruma kıyasla sefiksim tedavisi altında arttığını bulduk.BuDiğer merkez belirteçleri Bacteroidetes ve Firmicutes'in göreceli bolluğunda önemli bir değişiklik olmadı, ancak bunlar

insan bağırsağında gruplar baskındır; Bacteroidetes/Firmicutes oranının obez kişilerde zayıf insanlara göre azaldığı ve bu oranın iki tür düşük kalorili diyet uygulayan kişilerde kilo kaybıyla birlikte arttığı bulunmuştur [38, 41, 43-45, 48, 53, 54]. Bu arada, obezite ile ilişkili olan Turicibacter [55], diğer gruplarla karşılaştırıldığında model grupta önemli ölçüde yüksekti. Özellikle model farelerdeki bağırsak mikrobiyotasının çeşitliliği, CT sulu ekstraktının eklenmesiyle iyileştirildi. Farklı tedaviler altındaki farelerde bazı spesifik bağırsak bakterilerine dikkat çektik; örneğin Lactobacillus ve Muribaculaceae, model grubundakilerle karşılaştırıldığında yüksek doz CT sulu ekstraktı ile tedavi edilen grupta artan iki ana bakteri cinsiydi (Şekil 4). Son çalışmalar, CT sulu ekstraktlarının polisakkaritlerinin önemli özelliklere sahip olduğunu göstermiştir.

konak sağlığına fayda sağlayabilecek bazı laktik asit bakterilerinin büyümesi [43]. Buna paralel olarak Muribaculaceae, uzun ömürle bağlantılı probiyotik organizmalardır [57].BuBu, CT sulu ekstraktının bağırsak mikrobiyotasını iyileştirdiği mekanizmanın, probiyotik organizmaların büyümesinin desteklenmesi veya korunması olabileceğini öne sürdü. Dikkate değer bir diğer bakteri ise YE57 bakterisiydi. Her ne kadar yüksek doz CT sulu ekstraktı, bu çalışmada YE57 bakterisinin göreceli bolluğunu desteklese de (Şekil 4), önceki çalışmalar, normal bağırsaktaki bolluğunun, yüksek konsantrasyonlu bitkisel çay kalıntısı ile tedavi edilen bağırsaktakinden daha yüksek olduğunu bulmuştur. [58] ve XOS (ksilooligosakkaritler) ile birleştirilmiş Bacillus licheniformis ile yapılan müdahaleden sonra bolluğunun azaldığını [59] göstermiştir.BuBu bakterinin bağırsak mikrobiyotasındaki rolü daha fazla çalışmayı hak ediyor. Ayrıca, bu çalışmadaki nispeten küçük numune sayısı, yanlış pozitif ve yanlış negatif ölçümüne neden olabilir ve tanımlanan bakteriyel belirteçleri doğrulamak için daha büyük numuneler üzerinde gelecekte çalışma yapılması önerilmektedir.

CT sulu ekstrakt bileşimi, bağırsak bozuklukları olan farelerin bağırsak mikrobiyotasındaki bileşim ve fonksiyonel değişiklikler üzerindeki etkileri açısından önemli olabilir. PHG'ler ÇH ve BT'de bulunan yaygın aktif bileşenlerdir ve ekinekozit BT'de majör PHG olarak tanımlanmıştır [60]. Geçtiğimiz yıllarda, ekinakozidin yaşlanma karşıtı ve nöroprotektif etkiler, kalp fonksiyonunun iyileştirilmesi, hiperlipidemi ve hipergliseminin azaltılması ve obezitenin neden olduğu diyabet ve metabolik sendromun önlenmesi gibi birçok farmakolojik aktiviteye sahip olduğu gösterilmiştir. . Bağırsak mikrobiyotasının metabolik yollarında değişiklikler tespit ettik.BuSefiksim tedavisi, etilbenzen bozunması ve siderofor grubu ribozomal olmayan peptitlerin biyosentezi ile ilişkili bakterilerin zenginleşmesine yol açarken, yüksek ve orta doz CT sulu ekstraktı ile yapılan tedaviler, bu ekstraktın ilgili bakteri topluluğunu düzenlediğini göstererek bu değişiklikleri hafifletebilir. bu işlevlere. Ek olarak, yüksek doz sulu ekstrakt ile tedavi altında siyanoamino asit metabolizma yolu ile ilişkili bakteriyel zenginleşmenin artması ve bunun model farelerdeki zenginleşmesinin azalması, CT sulu ekstraktının siyano amino asit metabolizmasını destekleyebileceğini gösterdi.Buİlgili metabolitlerdeki değişiklikler bu sulu ekstreye farmakolojik aktiviteler sağlayabilir.

CT sulu ekstraktının bağırsak mikrobiyotasının bileşimini ve fonksiyonunu değiştirme mekanizması karmaşık olmasına rağmen, potansiyel mekanizma hakkında spekülasyon yapmak için bazı ipuçları vardır. Hem laktik asit bakterilerinin hem de CT sulu ekstraktlarının oksidatif stresi antagonize edebildiği rapor edilmiştir. Enflamasyon sırasında ortaya çıkan oksidatif stres, bağırsak mikrobiyal çeşitliliğini güçlü bir şekilde azaltarak ve spesifik bakterilerin çoğalmasını teşvik ederek bağırsak bozukluklarını şiddetlendiren yaygın bir faktördür (4). Tam tersine, reaktif oksijen türleri aynı zamanda nitrat ve tetratiyonat solunumu yoluyla bakteri gruplarının seçici büyümesini de destekler [66-68]; örneğin Enterobacteriaceae familyasından bakteriler, inflamasyon sırasında oksidatif koşullar altında bağırsak florasının bileşimindeki değişikliklerin bir sonucu olarak hızla büyüyebilir [69, 70]. Çoğu canlı organizma, oksijen radikallerini temizlemek için enzimatik savunmalar, enzimatik olmayan antioksidan savunmalar ve onarım mekanizmaları geliştirir [71]. Ancak bu doğal antioksidan sistemler genellikle canlı organizmalarda oksidatif hasarı önlemek için yeterli değildir. Bütillenmiş hidroksianizol ve bütillenmiş hidroksitolüen dahil olmak üzere çeşitli ek sentetik antioksidanlar oksidasyonu azaltmak için yaygın olarak kullanılmıştır, ancak bunların güvenliği sorgulanmıştır [72, 73]. Bu nedenle araştırmacılar, doğal olarak oluşan maddelerden elde edilen daha güvenli ve daha doğal antioksidanlar bulmaya yöneldiler. Hem polisakkaritlerin hem de laktik asit bakterilerinin oksidatif stresi ortadan kaldırma yetenekleri nedeniyle, CT sulu ekstraktlarının bağırsak mikrobiyotası üzerindeki kesin antioksidan mekanizmasının belirlenmesi, gelecekte daha fazla araştırma yapılmasını gerektirir.

Sonuç olarak, CT sulu ekstraktının şunları yapabildiğini bulduk:bağırsak bağırsak mikrobiyotasını iyileştirinçeşitliliği teşvik ederek bağırsak bozuklukları olan farelerde,metabolik değişiklikleri düzenlemekve bağırsak mikrobiyotasının yapısının yeniden şekillendirilmesi ve bu sonuçların gelecekte ilgili ilaçların geliştirilmesi için bir referans sağlayabilmesi.

BAĞIRSAK MİKROBİYOTA PHGS YAPISININ YENİLENMESİ İÇİN DOĞAL CISTANCHE TUBULOSA %75 ECH %30 ACT %12