FGIN-1-27, sentetik bir mitokondriyal diazepam bağlanma inhibitörü reseptörüdür (MDR)pro-apoptotik, anti-anksiyete ve steroidojenik aktivite sergileyen agonistçeşitli çalışmalarda. Burada rapor ediyoruz, çünküBirincizaman, anti-melanojenik etkinlikile ilgiliFGIN-1-27laboratuvar ortamındaVein vivo. FGIN-1-27 önemli ölçüdebazal inhibe ve -melanosit uyarıcı hormon ( -MSH)-, 1-Oleoil-2-asetil-sn-gliserol (OAG)-ve hücresel toksisite olmaksızın Endotelin-1 (ET-1) kaynaklı melanogenez.Mantar tirozinaz aktivite testi, FGIN-1-27'nin doğrudan inhibe etmediğini gösterdiFGIN-1-27'nin doğrudan bir tirozinaz inhibitörü olmadığını düşündüren tirozinaz aktivitesi. Katalitik aktiviteyi modüle edememesine rağmenmantar tirozinazılaboratuvar ortamında, FGIN-1-27, şu ifade düzeylerini aşağı doğru düzenledi:melanogenezde işlev gören anahtar proteinler. FGIN-1-27 bu işlevleri oynadıPKA/CREB'yi baskılayarak, PKC- ve MAPK yolları. Devre dışı bırakıldığında,MITF, tirozinaz, TRP-1 ve TRP-2 ifadesini azalttı vetirozinaz aktivitesi,SonundaMelanogenezi inhibe eder. Sırasındain vivodeneyler,FGIN-1-27, zebra balığının vücut pigmentasyonunu inhibe ettive azaltılmış UVB kaynaklıkobay derisinde hiperpigmentasyon, ancak melanosit sayısında bir azalma değil.BizimbulgularFGIN-1-27'nin sitotoksisite göstermediğini ve inhibe ettiğini belirttiher ikisinde de melanogenezlaboratuvar ortamındaVein vivomodeller. olarak oldukça yararlı olabilir.daha güvenli cilt beyazlatma maddesi.

İlgili araştırmalara göre,cistanche"ömrü uzatan mucize bitki" olarak bilinen yaygın bir bitkidir. Ana bileşeni, çeşitli etkilere sahip olan cistanoside'dir.antioksidan, antienflamatuvarve bağışıklık fonksiyonunun teşviki. Cistanche ve arasındaki mekanizmacilt beyazlatmakcistanche glikozitlerin antioksidan etkisinde yatmaktadır.melanininsan derisinde katalizlenen tirozinin oksidasyonu ile üretilir.tirozinazve oksidasyon reaksiyonu oksijenin katılımını gerektirir, bu nedenle vücuttaki oksijensiz radikaller melanin üretimini etkileyen önemli bir faktör haline gelir. Cistanche, bir antioksidan olan ve vücuttaki serbest radikallerin oluşumunu azaltabilen cistanoside içerir, böylecemelanin üretiminin engellenmesi.

Cistanche Tubulosa'ya tıklayın

Daha fazla bilgi için: david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501

GİRİİŞ

Melanogenezis derideki melanositlerin en önemli fonksiyonudur. Melanogenezi içeren birkaç kritik faktör açıklığa kavuşturulmuştur (Raposo ve Marks, 2007; Noguchi ve diğerleri, 2014). Melanogenezi düzenleyen anahtar enzim tirozinazdır ve melanin sentezini desteklemek için tirozinazla ilişkili protein 1 (TRP1) ve tirozinazla ilişkili protein 2 (TRP2) ile birlikte hareket eder (Zhu ve diğerleri, 2015). Pigmentasyona dahil olan bir diğer önemli faktör, yalnızca melanositlerin çoğalmasını ve hayatta kalmasını düzenlemekle kalmayan, aynı zamanda tirozinaz, TRP1 ve TRP2 ekspresyonunu da düzenleyen bir mikroftalmi ile ilişkili transkripsiyon faktörüdür (MITF) (Kawasaki ve diğerleri, 2008; Levy ve Fisher, 2011). ). Ultraviyole (UV) ışınlama gibi çevresel uyaranlar melanogenezde çok önemli bir rol oynar (Abdel-Naser ve diğerleri, 2003). UV radyasyonuna maruz kaldığında, aktif keratinositler ve melanositler bir -melanosit uyarıcı hormon ( -MSH), diasilgliserol (DAG) ve endotelin-1 (ET-1) üretirler (D'Mello ve diğerleri, 2016; Bae Harboe ve Park, 2012). -Melanosit uyarıcı hormon ( -MSH), melanositlerdeki melanokortin-1 reseptörüne (MC1R) bağlandığında, siklik adenozin monofosfatın (cAMP) hücre içi seviyelerini artırabilir ve protein kinaz A'yı (PKA)/ (CREB) aktive edebilir. ) yolu, sonunda melanogenezi teşvik eder (Corre ve diğerleri, 2004; Rzepka ve diğerleri, 2016). Diasilgliserol (DAG), tirozinaz aktivitesini artıran ve pigmentasyonu indükleyen melanositlerde protein kinaz C-'nin (PKC-) aktivasyonu için gereklidir (Kim ve diğerleri, 2006; Kawaguchi ve diğerleri, 2012; Yuan ve Jin, 2018) ). 1-Oleoil-2- asetil-sn-gliserol (OAG), PKC-'nin farmakolojik bir aktivatörü olarak yaygın olarak kullanılan sentetik, zar geçirgen bir DAG analoğudur (Rainbow ve diğerleri, 2011). Endotelin-1 (ET- 1), mitojenle aktive olan protein kinaz (MAPK) yolunun aktivasyonu yoluyla melanositlerde melanogenezi indükler (Park ve diğerleri, 2015; Regazzetti ve diğerleri, 2015).

Melanin, cildin ultraviyole radyasyonun cilt kanseri ve yaşlanma gibi zararlı etkilerinden korunmasında önemli bir rol oynamaktadır (Slominski ve ark., 2004). Bununla birlikte, aşırı melanin üretimi ve anormal birikimi melazma, çiller ve koyu lekeler gibi cilt estetiği sorunlarına yol açar (Jadotte ve Schwartz, 2010). Kojik asit ve arbutin dahil olmak üzere aktif beyazlatıcı bileşiklerin birçoğu kozmetik katkı maddeleri olarak zaten onaylanmıştır (Kim ve diğerleri, 2008). Ancak arbutinin sitotoksik etkileri olduğu ve kojik asidin kansere neden olabileceği bildirilmiştir (Singh ve ark., 2016). Bu nedenle, daha etkili ve daha güvenli cilt beyazlatma maddelerinin keşfi çok önemlidir.

Mitokondriyal diazepam bağlanma inhibitörü reseptörü (MDR), lipid ve steroid sentezinin düzenlenmesinde merkezi bir rol oynar ve cilt dahil olmak üzere periferik dokularda yaygın olarak dağılır (Alho ve diğerleri, 1993). Önceki çalışmalarımızda, bir MDR agonisti olan diazepam, PKA/CREB yolu aracılığıyla pigmentasyonu düzenlemiştir (Lv ve ark., 2019). Ayrıca, son bulgular MDR aktivasyonunun zebra balığındaki yeni melanosit sayısını biraz artırdığını öne sürdü (Allen ve diğerleri, 2020). Diazepam ile karşılaştırıldığında, FGIN-1-27 (N,N-Dihexyl-2-(4-fluorofenil)indol-3- asetamid), MDR (Freeman) için nispeten daha yüksek bir afinite ve özgüllük sergiler ve Genç, 2000). FGIN-1–27, proapoptotik ve steroidojenik aktivite göstermiştir (Lacapère ve Papadopoulos, 2003). Son zamanlarda, FGIN-1-27'nin in vivo olarak anti-anksiyete ve anti-panik etkiler ürettiği bildirilmiştir (Lima-Maximino ve diğerleri, 2018). Ancak FGIN-1-27'in in vitro ve in vivo pigmentasyon üzerindeki etkisi bildirilmemiştir.

MALZEMELER VE YÖNTEMLER

Malzemeler

FGIN-1-27(N,N-Diheksil-2-(4-florofenil)indol-3-asetamid), OAG (1-Oleoil-2-asetil-sn) -gliserol) ve PKC- (1:200), p-PKA kedisine (fosfo T197) karşı antikorlar(1:200), PKA kedisi (1:500), p-CREB (1:200), CREB(1:200), p-ERK(1:200), ERK (1:200), p-p38 (1:200), p38 (1:200), p-JNK (1:200),ve JNK (1:200) Santa Cruz Biotechnology'den temin edilmiştir.(Kanada, ABD). Mantardan tirozinaz, -MSH, ET-1(Endotelin-1) ve PTU(N-Feniltiyoüre) elde edildiAladdin'den (Şanghay, Çin). karşı antikorlartirozinaz (1:1,000), TRP-1(1:1,000), TRP-2 (1:1,000), MITF(1:2000) ve -aktin (1:3,000) Abcam'dan elde edildi(Cambridge, BK). Masson-Fontana melanin boyama solüsyonuSenBeiJia Biological Technology'den (Nanjing,Çin). RT-qPCR kitleri Takara Biomedical'den satın alındıTeknoloji (Pekin, Çin). Hücre parçalama tamponu ve BCA proteinitahlil kiti Beyotime Biotechnology'den (Shanghai,Çin).

Hücre Kültürü

Hücre Canlılığı Testi

SK-MEL-2 hücrelerinin ve HEM'in yaşayabilirliği, MTT tahlili aracılığıyla ölçüldü (Zhou ve diğerleri, 2014). SK-MEL-2 hücreleri ve HEM, sırasıyla oyuk başına 2x104 hücre yoğunluğunda 96-kuyu plakalarına kaplandı. SK-MEL-2 hücrelerine ve HEM'e 48 saat boyunca FGIN-1-27 (0, 1, 2, 4, 8, 16 uM) uygulandı. Bir 96-kuyu plakasının her bir oyuğuna 4 saat daha MTT solüsyonu (20 uL) eklendi. Solüsyon uzaklaştırıldıktan sonra her kuyucuğa DMSO (200 uL) eklendi ve absorbans bir mikroplaka spektrofotometre (BioTek Instruments) kullanılarak 570 nm'de incelendi.

Melanin Testi

SK-MEL-2 hücreleri ve HEM, sırasıyla oyuk başına 5×105 hücre konsantrasyonunda 6-kuyu plakalarına kaplandı. 37 derecede 24 saatlik inkübasyondan sonra, SK-MEL-2 hücrelerine ve HEM'e FGIN-1-27 (0, 1, 2, 4 uM) uygulandı. Hücreler 48 saat daha inkübe edildi, PBS ile yıkandı, ardından 20 dakika 4 derece C'de hücre lizis tamponu ile parçalandı ve lizatlar 13,{18}} rpm'de 10 dakika 4 derece C'de santrifüjlendi. Hücre peletindeki toplam melanin, 100 uL NaOH çözeltisinde (1 mol/L, yüzde 10 DMSO içerir) 80 derece C'de 1 saat süreyle çözüldü (Lv ve diğerleri, 2015). Optik absorbans, bir mikroplaka spektrofotometre (BioTek Instruments) kullanılarak 405 nm'de ölçülmüştür.

Tirozinaz Aktivite Testi

Hücresel tirozinaz aktivitesi, daha önce tarif edildiği gibi yürütülmüştür (Lv ve ark., 2020). SK-MEL-2 hücreleri, farklı konsantrasyonlarda FGIN-1-27 (0, 1, 2, 4 uM) veya OAG (200 uM) ile 12 saat veya 48 saat süreyle inkübe edildi ve ardından parçalandı hücre parçalama tamponu ile. Hücre lizatları 13,000 rpm'de 10 dakika 4 derece C'de santrifüj edilerek tirozinaz aktivite tahlili için süpernatan elde edildi. Protein konsantrasyonları, standart olarak sığır serum albümini (BSA) içeren bir BCA kiti ile belirlendi. 100 uL L-DOPA (%0,1) ile karıştırılmış 30 ug protein içeren 100 uL PBS (0,1 M, pH 6,5) ve ardından 37 derecede inkübe edildi 1 saat boyunca C. Optik absorbans, bir mikroplaka spektrofotometre (BioTek Instruments) kullanılarak 475 nm'de ölçülmüştür.

FGIN{{0}}'nin tirozinaz aktivitesi üzerindeki doğrudan etkisi, önceki bir yönteme göre gerçekleştirilmiştir (Tomita ve diğerleri, 2010; Lv ve diğerleri, 2020). Farklı konsantrasyonlarda FGIN-1-27 içeren 100 μL PBS (0,1 M, pH 6,5) mantar tirozinazı (10 birim) ve 50 μL L-tirozin (%0,05) ile karıştırıldı ve ardından 37 derecede 10 dakika süreyle inkübe edildi. Optik absorbans, bir mikroplaka spektrofotometre (BioTek Instruments) kullanılarak 475 nm'de ölçülmüştür.

Masson – Fontana Amonyak Gümüş Boyama

Melanin pigmentinin saptanması için, SK-MEL-2 hücreleri, 2.0 ml kültür ortamı (10 yüzde fetal sığır serumu) her kuyuda. Uygulamadan 48 saat sonra, hücreler 20 dakika boyunca Formalin (%10 nötr tamponlu) ile sabitlendi.

Hücreler ve deri slaytları, Masson-Fontana amonyak gümüş boyama yöntemine göre boyandı (Lee ve diğerleri, 2013). Hücreler ve deri slaytları, oda sıcaklığında 16 saat Masson-Fontana melanin boyama solüsyonu ile inkübe edildi. Daha sonra hücreler ve deri slaytları 3 kez distile su ile durulandı ve 7 dakika hipo solüsyonda inkübe edildi. Damıtılmış suda iyice yıkandıktan sonra, hücreler ve deri slaytları, 7 dakika boyunca nötr bir kırmızı leke ile karşıt lekelendi. Hücreler ve deri slaytları, bir Nikon Ti2-U mikroskobu kullanılarak gözlemlendi.

S-100 için İmmünohistokimya

S-100 immünohistokimyası daha önce tarif edildiği gibi gerçekleştirilmiştir (Lee ve diğerleri, 2013). Slaytlar, oda sıcaklığında 1 saat süreyle yüzde 5 BSA ile bloke edildi ve daha sonra bloke etme solüsyonunda seyreltilmiş anti-S-100 birincil antikorunda (Dako, Carpentaria, CA) gece boyunca 4 derece C'de inkübe edildi. Ertesi gün, Slaytlar TBST ile 4 kez yıkandı ve ikincil bir antikorla (Dako, Carpentaria, CA) inkübe edildi. Daha sonra, kesitleri geliştirmek için slaytlar aminoetil karbazol ile muamele edildi. Cilt slaytları, bir Nikon Ti2-U mikroskobu kullanılarak gözlemlendi.

Ters Transkripsiyon-Kantitatif PCR (RT-qPCR)

RT-qPCR, daha önce açıklandığı gibi gerçekleştirildi (Lv ve diğerleri, 2020). Kısaca, SK-MEL-2 hücre toplam RNA'sı, TRIzol reaktifi kullanılarak ekstre edildi ve spektrofotometrik olarak ölçüldü. Tek sarmallı cDNA, üreticinin talimatlarına göre SuperScript II Ters transkriptaz kullanılarak sentezlendi. SYBR-Green kantitatif PCR analizi, bir ABI PRISM Sekans Tespit Sistemi (Applied Biosystems) ve önceden doğrulanmış primer setleri ile gerçekleştirilmiştir. Tüm numuneler üç kopya halinde çalıştırıldı. Eşik döngüleri, amplifikasyon eğrisinin logaritmik kısmına yerleştirildi ve sonuçlar GAPDH'ye normalleştirildi. İki numune arasındaki kat farkı delta-delta Cq yöntemi ile belirlendi. Mitf geninin primer dizileri 5'-AGAGCAGGGCAGAGAGTGAGTG-3', 5'-AACTTGATT CCAGGCTGATGATGTC-3'' şeklindedir.

Western Blot Analizi

Protein süspansiyonu, yukarıda belirtilen yönteme göre elde edildi. Ekstre edilen hücre içi proteinler (30 ug), SDS-PAGE (yüzde 10 ) ile ayrıldı ve ardından bir ıslak transfer standart protokolü izlenerek bir poliviniliden L florür (PVDF) membranına aktarıldı. Membran, oda sıcaklığında 1 saat yüzde 2.5 BSA kullanılarak bloke edildi, gece boyunca 4 derece C'de uygun birincil antikorlara maruz bırakıldı ve 4 kez TBST ile yıkandı. Membranlar, oda sıcaklığında 1 saat HRP etiketli Keçi Anti-Tavşan IgG'sine (1:1,000) veya Keçi Anti-Fare IgG'sine (1:1,000) maruz bırakıldı ve TBST 4 kez (Liao ve diğerleri, 2017). Membranlar daha sonra çok işlevli bir kemilüminesans görüntüleme sistemi (Tanon 4600) kullanılarak görüntülendi. Aynı lekeden dahili kontroller, anti-aktin ile incelendi.

Zebra Balığında Fenotip Bazlı Değerlendirme ve Melanin İçeriğinin Belirlenmesi

Yetişkin zebrafifishes, aşağıdaki koşullarda bir tankta tutuldu: 28.5 derece, 14/10 saat aydınlık/karanlık döngüsü ile. Embriyolar, sabahları ışık açılarak indüklenen doğal yumurtlamadan elde edildi. Embriyoların toplanması 30 dakikada tamamlandı. Fenotipe dayalı değerlendirme, daha önce açıklandığı gibi yapıldı (Choi ve diğerleri, 2007). Kısaca, senkronize edilmiş embriyolar toplandı ve pipetle dizildi (200 ul embriyo ortamı içeren 96-kuyu plakalarında oyuk başına 3-4 embriyo). FGIN-1-27 ve PTU, yüzde 0,1 DMSO içinde eritildi, ardından 35 ila 60 saat arasında (25 saat maruz kalma) embriyo ortamına eklendi. Zebra balığı melanogenezi üzerindeki etkiler stereomikroskop altında gözlendi.

UVB Kaynaklı Hiperpigmentasyon Kobay Modeli

Laboratuvar Hayvanları Bilimi Enstitüsü'nden (Pekin, Çin) sekiz kahverengi kobay (6 hafta, yaklaşık 300 g) alındı. Gine domuzları, standart laboratuvar koşulları altında, 12 saat aydınlık/12 saat karanlık döngüsüyle (ışıklar sabah 9:00 AM - 9:00 PM) ile sıcaklık kontrollü bir odada ayrı ayrı barındırıldı. sabit sıcaklık (23 ± 3 derece) ve nem (yüzde 50 ± 10). Her bir hayvanın sırtının ayrı bölgeleri (1 cm çaplı daire), 1 hafta boyunca günde bir kez 500 mJ/cm2 UVB'ye (Sigma SH-4, Şangay, Çin) maruz bırakıldı (Fujimoto ve diğerleri, 1988; Lee ve diğerleri, 2013). Daha sonra araç (PEG400/ EtOH 7:3) ve FGIN-1-27 (yüzde 1) hiperpigmente alanlara (daire başına 20 ul çözelti) 3 hafta boyunca günde iki kez verildi. Pigmentasyon derecesi Spektrofotometre (YS3010, 3nh, Shenzhen, Çin) ile ölçüldü. ΔL-değeri, spektrofotometre tarafından ölçülen L-değerine göre aşağıdaki şekilde belirlendi: ΔL L (ölçülen her günde)-L (0. günde). Bu çalışma için tüm hayvan prosedürleri, "Laboratuvar Hayvanlarının Bakımı ve Kullanımı için NIH Kılavuzuna" göre yürütüldü ve Changzhou Üniversitesi hayvan bakımı ve kullanımı komitesi tarafından onaylandı.

İstatistiksel analiz

SONUÇLAR

FGIN-1-27 Engellenmiş -MSH, OAG veya ET-1-SK-MEL-2 Hücrelerinde Uyarılan Melanin Sentezi

FGIN-1-27'nin (Şekil 1A) pigmentasyon üzerindeki etkilerini araştırmadan önce, FGIN-1-27'nin SK-MEL-2 hücre büyümesi üzerindeki etkilerini incelemek için bir hücre canlılığı testi yapıldı. Şekil 1B'de gösterildiği gibi, FGIN-1-27'nin 48 saat sonra 1–16 μM dozlama aralığında SK-MEL- 2 hücrelerinin büyümesi üzerinde hiçbir etkisi olmamıştır. Melanin içeriği tahlilinde, FGIN-1-27 bazal melanogenezi inhibe etti (Şekil 1C). -MSH, melanogenezi önemli ölçüde indükleyen bir hücre içi cAMP asansörüdür (Rzepka ve diğerleri, 2016; Corre ve diğerleri, 2004; Lee ve diğerleri, 2013). FGIN-1-27 ayrıca -MSH kaynaklı melanin sentezini de inhibe etti (Şekil 1C). Tutarlı bir şekilde, Masson–Fontana amonyak gümüş boyaması, FGIN-1-27'nin -MSH'li veya MSH'siz SK-MEL-2 hücrelerinde melanin konsantrasyonunu önemli ölçüde azalttığını gösterdi (Şekil 1D). Ayrıca, OAG bir PKC yükselticisidir ve ET-1, her ikisi de melanin sentezini destekleyebilen bir MAPK yolunun etkinleştiricisidir (Kim ve diğerleri, 2006; Park ve diğerleri, 2015; Regazzetti ve diğerleri, 2015). Şekiller 1E ve 1F'de gösterildiği gibi, FGIN-1-27 ayrıca OAG veya ET-1-endüklenmiş melanogenezi de belirgin şekilde inhibe etti.

FGIN-1-27 Tirozinaz, TRP-1, TRP-2 İfadesini Bastırdı ve Hücresel Tirozinaz Aktivitesini Azalttı

Melanogenez üç kritik enzim tarafından kontrol edilir: tirozinaz, TRP-1 ve TRP-2 (Zhu ve diğerleri, 2015). -MSH ve ET-1, üç önemli melanojenik enzimin ekspresyonunu artırarak melanin sentezini destekledi (Regazzetti ve diğerleri, 2015; Lee ve diğerleri, 2013). FGIN-1-27'nin beyazlatma etkilerinin bu proteinlerin ekspresyonu ile ilişkili olup olmadığını araştırmak için, FGIN-1-27'nin tirozinaz, TRP-1 ve TRP{{10) ekspresyonu üzerindeki etkisini inceledik. }} western-blot analizi yoluyla. Şekil 2A'da gösterildiği gibi, FGIN-1-27 tirozinazı, TRP-1 ve TRP-2 ifadesini -MSH ile veya MSH olmadan bastırdı. FGIN-1-27 ayrıca ET-1- kaynaklı tirozinaz, TRP-1 ve TRP-2 ifade artışını tutarlı bir şekilde tersine çevirdi (Şekil 2B). -MSH ve ET-1'den farklı olarak OAG, hücresel tirozinaz aktivitesini doğrudan artırarak melanogenezi teşvik etti (D'Mello ve diğerleri, 2016). Şekil 2C ve 2D'de gösterildiği gibi, FGIN-1-27 tedavisi 12 saat, OAG kaynaklı hücresel tirozinaz aktivite artışını inhibe etti ve tirozinaz ekspresyonunu etkilemedi. Ayrıca, FGIN-1-27'nin tirozinaz aktivitesi üzerindeki doğrudan etkilerini incelemek için bir mantar tirozinaz aktivite testi yapılmıştır. Şekil 2E'de gösterildiği gibi, FGIN-1-27, mantar tirozinazının enzimatik aktivitelerini etkilemedi. Bu sonuçlar, FGIN-1-27'in tirozinaz, TRP-1 ve TRP-2 ifadesini baskıladığını ve hücresel tirozinaz aktivitesini azalttığını, ancak tirozinazın enzimatik aktiviteleri üzerinde doğrudan bir etkisi olmadığını gösterdi.

FGIN-1-27 MITF İfadesini Azalttı

MITF, tirozinaz, TRP-1 ve TRP-2'nin ifadesini indükleyen ana transkripsiyonel faktördür (Kawasaki ve diğerleri, 2008; Levy ve Fisher, 2011). Şekil 3A'da gösterildiği gibi, FGIN-1-27, MITF transkripsiyonunu inhibe etti. Ayrıca SK-MEL-2 hücreleri, FGIN-1-27 varlığında veya yokluğunda -MSH ile tedavi edildikten sonra MITF ifadesini ölçtük. Şekil 3B'de gösterildiği gibi, -MSH, MITF ifadesini önemli ölçüde desteklemiştir. İlginç bir şekilde, MITF ifadesi, FGIN-1-27 varlığında önemli ölçüde azaldı. FGIN-1-27 ayrıca ET-1-indüklediği MITF ifadesi artışını da tutarlı bir şekilde bastırdı (Şekil 3C). Bu sonuçlar, FGIN-1-27'nin MITF ifadesini engellediğini gösterdi.

FGIN-1-27 PKC- , p-PKA Cat, p-CREB, p-p38 ve p-ERK İfadesini Azalttı

PKA, PKC ve MAPK, melanogenezde kritik iletim yollarıdır (D'Mello ve diğerleri, 2016). İkinci haberci cAMP, CREB'yi fosforile eden PKA'yı aktive edebilir ve sonunda MITF'in ifadesini teşvik edebilir (Corre ve diğerleri, 2004; Rzepka ve diğerleri, 2016). PKC- -bağımlı yol, tirozinazın aktivasyonu yoluyla melanogenezi düzenler (Kim ve diğerleri, 2006; Kawaguchi ve diğerleri, 2012; Yuan ve Jin, 2018). p38, hücre dışı sinyalle düzenlenen protein kinaz (ERK) ve c-jun N-terminal kinazı (JNK) içeren MAPK'nın pigmentasyonu düzenlediği bildirildi (Zhou ve diğerleri, 2014). FGIN-1-27 tarafından melanogenez düzenlemesinin moleküler mekanizmalarını daha iyi anlamak için, pigmentasyona dahil olan transdüksiyon yollarını ölçtük. Şekil 4'te gösterildiği gibi, FGIN-1-27, PKC-, p-PKA cat, p-CREB, p-p38 ve p-ERK'nin ifadesini önemli ölçüde azalttı.

FGIN-1-27 İnsan Melanositlerinde Melanogenezi Engelledi

FGIN-1-27'nin melanogenez üzerindeki inhibisyonu, insan epidermis melanositlerinde (HEM) değerlendirildi. Ek Şekil S1'de gösterildiği gibi, FGIN-1-27'nin 48 saat sonra 1–16 μM'lik bir dozlama aralığında HEM'in büyümesi üzerinde hiçbir etkisi olmamıştır. Şekil 5A'da gösterildiği gibi, FGIN-1-27, HEM'de melanogenezi önemli ölçüde inhibe etti. Western blot analizi, FGIN-1-27'nin HEM'de tirozinaz, TRP-1 ve TRP-2 ifade düzeylerini azalttığını öne sürdü (Şekil 5B). Ek Şekil S2'de gösterildiği gibi, FGIN- 1-27 tedavisi 12 saat, HEM'de OAG'nin neden olduğu hücresel tirozinaz aktivite artışını inhibe etti. Ek olarak, FGIN-1-27 varlığında veya yokluğunda -MSH ile tedavi edilen HEM'den sonra MITF ifadesini ölçtük. Şekil 5C'de gösterildiği gibi, MITF ifadesi, FGIN-1-27 varlığında önemli ölçüde azaldı. Ayrıca, SK-MEL-2 hücrelerinde olduğu gibi, FGIN-1-27-aracılı anti-melanojenikte PKC-, PKA ve MAPK'nın katılımı da HEM'de doğrulandı (Şekil 5D).

Daha fazla bilgi için: david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501