Doğanın Parmak İzi — Isırgan Otu Bitki Kristalleri Formülasyonunun Cilde Nüfuz Etme Analizi

Soyut:

Arka plan: Bitki kristalleri, bitki bazlı formülasyonlar üretmek için yeni bir kavramdır. Prensipleri, bitkilerin parçalarının veya bütününün küçültülmesine dayanır. Bu çalışmada, bir sürfaktanın ısırgan otu yaprağı PlantCrystals üzerindeki etkisi araştırılmıştır. İkinci olarak, dökme malzemenin içeriği ve PlantCrystals formülasyonu karşılaştırıldı. Ek olarak, ilk kez PlantCrystals'ın cilt penetrasyonu araştırıldı.

Yöntemler: Isırgan otu yaprakları yüksek basınçlı homojenleştirme ile öğütüldü. Boyutlar, ışık mikroskobu ve statik ışık saçılımı yoluyla analiz edildi. Öğütmenin etkisini araştırmak için flavonoid ve toplam karotenoid içeriği belirlendi ve formülasyonun antioksidan kapasitesi, toplam polifenol içeriği ve DPPH (1,1-difenil-2-pikrilhidrazil) testi ile ölçüldü. .

Son olarak, cilt penetrasyonu üzerindeki etkisi araştırıldı. Bulgular: Boyut analizi, yüzey aktif maddenin dengeleyici bir etkisi olduğunu gösterdi ve kimyasal analiz, PlantCrystals için daha yüksek flavonoid ve polifenol içerikleri ortaya çıkardı. Formülasyonun stratum corneum'a nüfuz etmesinin umut verici olduğu gösterildi; PlantCrystals, dökme malzemeye kıyasla görsel olarak algılanan daha yüksek floresans ve homojenliğe sahipti. Sonuç: PlantCrystals kavramı, değerli bileşenlerin mevcudiyetini ve penetrasyon etkinliğini iyileştirmiştir. Bitki bazlı formülasyonların cilde nüfuz etme analizi için doğal klorofil floresansının kullanılmasının oldukça etkili olduğu kanıtlanmıştır.

Cilt, insan vücudundaki en büyük organlardan biridir ve yaşlanma belirtileri yaşla birlikte yavaş yavaş ortaya çıkar. Cilt yaşlanması, kuru cilt, artan kırışıklıklar ve azalmış elastikiyet ile karakterizedir. Cistanche çok sayıda flavonoid ve polisakkarit içerir, bu bileşenler anti-oksidasyon, anti-inflamatuar, anti-oksidatif stres ve diğer etkilere sahiptir ve cilt yaşlanmasını önleyebilir ve tersine çevirebilir.

Cistanche'deki flavonoidler, serbest radikallerin oluşumunu ve temizlenmesini engelleyebilir, oksidatif stresin cilt hücrelerine verdiği zararı azaltabilir, cilt hücrelerini koruyabilir ve cildin yaşlanma sürecini geciktirebilir. Çalışmalar, Cistanche'deki polisakkaritlerin cilt hücrelerinin büyümesini ve bölünmesini uyarabildiğini ve cilt elastikiyetini ve parlaklığını artırabildiğini göstermiştir.

Cistanche Deserticola ek ürününü tıklayın

anahtar kelimeler:

antioksidanlar; yaşlanma karşıtı; Bitki Kristalleri; urtica dioica; cilt penetrasyonu.

1. Giriş

Ebedi gençlik ve güzellik, insanlık için her zaman arzu edilen bir şey olmuştur ve bunlara ulaşmak için girişimler eski çağlardan beri yapılmaktadır. Bugün, fikir yaşlanma karşıtı stratejilere çevrildi. Artık hedef, genel sağlığın her zaman korunması değil, sağlıklı bir vücudun kapsamlı bir şekilde desteklenmesi ve yaşa bağlı metabolik mekanizmaların geciktirilmesidir [1,2]. Kozmetik açıdan bakıldığında, anti-aging ağırlıklı olarak insan derisinin görsel algısı ile ilgilidir, çünkü yaşlanma kolayca tanınabilir, örneğin derideki kırışıklıklar veya sarkmalar [1,3].
Bununla birlikte cilt sadece kozmetik açıdan değerlendirilmemeli; en büyük organdır ve vücut ile dış dünya arasındaki bariyerdir [4]. Bozulmamış ve sağlıklı cilt bu nedenle tıbbi açıdan da önemlidir. Foto-yaşlanma (UV ışığına maruz kalma), en yaygın olarak, sigara veya hava kirliliği gibi diğer faktörlerle birlikte cilt yaşlanmasından sorumlu eksojen bir faktör olarak bilinir [5]. Bu faktörlerin kendileri sıklıkla oksidanlardır veya sıklıkla sırasıyla reaktif oksijen türlerinin (ROS) üretimine bağlı süreçleri indükler [1,6].

Ayrıca, bariyer işlevi kaybolmuş, bozulmuş bir stratum korneum (SC), ROS oluşumuna neden olabilir ve böylece altta yatan hücre katmanlarına zarar verebilir, bu da örneğin aşırı yaşlanma, iltihaplanma veya cilt kanseri ile sonuçlanır. Bu nedenle, antioksidanların cilde verilmesi, ROS'un zarar verici etkisini geciktirebilir veya önleyebilir, SC'yi güçlendirebilir ve koruyucu işlevini artırabilir [7,8]. Günümüzde, antioksidanların yaşlanma karşıtı etkisi popülaritesini artırmıştır ve tüketicilerin talepleri sadece bir ürünün etkinliğine ve fiyatına değil, aynı zamanda sürdürülebilirliğe de odaklanmaktadır [9]. Son araştırmalar, bitki malzemelerinin anotlama ile sürdürülebilir bir şekilde rafine edilebileceğini göstermiştir, bu da keşfedilmemiş potansiyeli harekete geçirebilir [10-12].

Bu sonuçlara dayanarak, PlantCrystals, organik çözücülere veya organik atık üretimine ihtiyaç duymadan, tüm malzemeyi daha düşük mikro ve hatta nano boyut aralığına indirerek bitkilerin işlenmesi için yeni bir konsepttir. Sıradan ekstraktlara kıyasla PlantCrystals'ın bir başka avantajı da organik materyalin hücre parçalanmasıdır. Bu, kullanılan malzemenin tüm aktiflerinin serbest kalmasına ve bunların formülasyon içinde tutulmasına yol açar. Aksine, bir ekstrakt, benzer kimyasal özelliklere (örneğin, suda veya etanolde çözünür) sahip bileşenlerin tek bir kısmı veya bir fraksiyonu ile sınırlıdır. Buna göre, bu çalışmada Bitki Kristallerinin üretiminde "Otların Kraliçesi" olarak da adlandırılan ısırgan otu (SN) yaprakları (Urtica dioica) kullanılmış ve cilde uygulanmıştır [13].

Genellikle SN bir idrar söktürücü olarak bilinir, ancak farmasötik etkisi bununla sınırlı değildir. SN'ye çok sayıda sağlık yararı atfedilebilir ve antioksidan, antimikrobiyal, antimitotik, ağrı kesici, anti-enflamatuar ve anti-kanserojenik gibi birçok farmakolojik etkisi için hala araştırılmaktadır [14,15]. Cildi bir hedef olarak ele alan SN, klorofil, karotenoidler ve polifenoller gibi faydalı etkileri olan çok çeşitli bileşenlere sahiptir [15,16]. Literatür, SN ekstraktlarının dermal uygulamasından sonra, örneğin, anti-enflamatuar ve anti-oksidatif [17] gibi birçok olumlu farmakolojik özelliği bildirmektedir.

Şimdiye kadar PlantCrystals cilde hiç uygulanmadı ve analiz edilmedi. PlantCrystals sayısız bitki ile üretilebildiğinden, her numune için bireyselleştirilmiş bir yönteme ihtiyaç duymadan analiz yapmak faydalı olacaktır. Bu sorunun üstesinden gelme yaklaşımı, çoğu bitkide ortak olan bir şeyin kullanılmasıydı: Klorofil (a ve b) (Şekil 1). Klorofil floresansı iyi bilinmektedir ve araştırılmıştır [18]. Histolojik kesitler yeterli miktarda nüfuz etmiş klorofil sergiliyorsa, ki bu floresans mikroskobu ile tanınabilir, bitki bazlı formülasyonların cilt penetrasyonu kolayca analiz edilebilir.

Bu çalışmanın temel amacı, dermal uygulama için bir SN PlantCrystals formülasyonunun geliştirilmesi ve SC penetrasyonunun tahmin edilmesiydi. SN, geçmişte PlantCrystals'a işlenmemişti; sonuç olarak, ilk amaç, kaba malzemeyi daha düşük mikrometreye ve hatta daha küçük boyut aralığına indirebilecek bir sürecin oluşturulmasıydı. Ayrıca, ilave bir sürfaktanın etkisi, formülasyonun elde edilen boyutları ve aglomerasyonu üzerinde değerlendirildi. İkinci olarak, bir toplu süspansiyon ve SN PlantCrystals, polifenol, flavonoid ve karotenoid içeriğini ve antioksidan kapasitesini karşılaştırmak için farklı tahlillerle araştırıldı. İbrahim ve ark. azalmanın aktivite üzerindeki etkisinin seçilen bitkiye ve üretim sürecine bağlı olduğunu göstermiştir [11]. Bu nedenle, uygulanan işlemin formüle edilen tesis için faydalı olduğunu kanıtlamak için işlenmiş malzeme ile dökme malzemenin karşılaştırılması kaçınılmazdır. Bu önkoşullara ulaşıldıktan sonra, dermal uygulama, SC penetrasyonunu tahmin etmek için doğal klorofil flüoresansı tespit edilerek yeni "doğanın parmak izi" konseptiyle kontrol edildi. Bu, bitki bazlı formülasyonların cilde nüfuz etmesini tahmin etmek için hızlı, kolay ve uygun maliyetli bir olasılık sağlayan bir yönteme yol açacaktır.

2. Malzemeler ve Yöntemler

2.1. PlantCrystal Üretimi

Organik kalitede kurutulmuş SN yaprakları, Blank's GmbH and Co. KG (Uplengen, Almanya) tarafından nazikçe sağlanmıştır (Şekil 2A). Daha sonraki işlemler için toz haline getirilmiş bir numune elde etmek üzere kaba malzeme bir kahve değirmeni (CM) (CG9100, AICOK, Guangdong, Çin) ile küçültüldü. Daha sonra, toz numune (Şekil 2B) yüzde 3'lük bir konsantrasyonda (w/w) suda dağıtıldı. Ek olarak, yüzde 3 (ağırlık/ağırlık) oranında FDA onaylı sürfaktan TPGS (-Tokoferol Polietilen Glikol Süksinat, Gustav Parmentier GmbH, Frankfurt a.M., Almanya) içeren bir numune üretildi. Daha iyi işlenebilirlik için parçacıkların şişmesine izin vermek ve daha sonra boyutta herhangi bir değişiklik meydana gelmemesini sağlamak için her iki numune de gece boyunca oda sıcaklığında karıştırıldı (CM artı S).

Bir sonraki adımda, numuneler bir Ultra-Turrax (T 25 digital, IKA-Werke GmbH & Co. KG, Staufen, Almanya) ile bir dakika süreyle 3000'ten 25'e,{ {11}}. Bir sonraki ön öğütme adımı, daha büyük parçacıkların boyutunu daha da azaltmak için bir Miccra D27 (MICCRA GmbH, Heitersheim, Almanya) ile gerçekleştirildi. Numuneler, 7000, 12,000, 18.000 ve 24.000 rpm ile 5 dakika boyunca artan dönüş hızıyla dört kez işlendi.

Nihai partikül küçültme, her biri beş kez 500, 750, 1000 ve 1500 bar'da bir LAB 40 (APV Gaulin, Lübeck, Almanya) ile yüksek basınçlı homojenleştirme (HPH) yoluyla yapıldı (Şekil 2C). İçerik analizi için, ölçümler sırasında TPGS'nin etkisini veya TPGS misel formülasyonu nedeniyle aktif bileşenlerin olası ek ekstraksiyonu veya korumasını hariç tutmak için TPGS'siz numuneler analiz edildi [19]. Cilde nüfuz etme çalışmaları için, PlantCrystals formülasyonunun iyi bir ıslanabilirliğini ve yayılabilirliğini garanti etmek için TPGS içeren numuneler kullanıldı. Bir kontrol olarak, azalmanın etkisini göstermek için, aynı konsantrasyonda gece boyunca şişmiş SN yapraklarının (Şekil 2A) toplu bir süspansiyonu kullanıldı.

2.2. Parçacık Boyutu Analizi

Örneklerin görsel incelemesinde ışık mikroskobu (Olympus BX53, Olympus Cooperation, Tokyo, Japonya) kullanıldı. 1.47 kırılma indeksi ve 0.01 absorpsiyon indeksi ile statik ışık saçılımı (SLS, Mastersizer 3000, Malvern Instruments, Kassel, Almanya) yoluyla daha fazla parçacık boyutu analizi yapıldı. Sonuçlar hacimsel (D(v)) ve sayısal (D(n)) dağılım olarak hesaplanmıştır. Hacim bazlı boyut dağılımı D(v)0.x'tir, toplam hacmin (tüm parçacıkların özetlenmiş hacmi) yüzde x'inin verilen sayıya eşit veya daha küçük boyuttaki parçacıklar tarafından temsil edildiği anlamına gelir.

Bu nedenle, D(v) değeri daha büyük boyutlu parçacıkları üçün gücüne vurgular ve büyük topakların ve parçacıkların kontrol edilmesi için önemlidir. Sayısal tabanlı boyut dağılımı D(n)0,x, parçacıkların yüzde x'inin verilen değere eşit veya daha küçük olduğu anlamına gelir. D(n)-değeri, esas olarak penetrasyon işleminde yer alan numunede mevcut olan partikül boyutlarının ana fraksiyonunu vurguladığından, cilt çalışması açısından büyük önem taşır. Hacimsel ve sayısal sonuçların bir kombinasyonu, numune işleme ve yüzey aktif maddenin büyük boyutlu parçacık fraksiyonları (D(v)) ve ana parçacık boyutu fraksiyonu (D(n)) üzerindeki etkisi hakkında daha fazla fikir vermelidir.

2.3. Toplam Polifenol İçeriği

Örneklerin toplam polifenol içeriğini ve ardından antioksidan kapasitesini değerlendirmek için Folin-Ciocalteu kolorimetrik testi kullanıldı [20]. Önce 100 µL SN süspansiyonu, 200 µL Folin–Ciocalteu reaktifi (Merck KGaA, Darmstadt, Almanya) ve 2 mL saf su ile karıştırıldı ve daha sonra oda sıcaklığında 5 dakika inkübe edildi. Daha sonra 1 mL yüzde 20 (w/v) Na2CO3 eklendi ve 1 saat karanlıkta inkübe edildi. Son olarak, elde edilen reaksiyon karışımı spektroskopik olarak 765 nm'de ölçüldü (Multiskan GO, Thermo Scientific, Dreieich, Almanya). İçeriğin hesaplanması standart olarak gallik asit için yapılmıştır ve sonuçlar gallik asit eşdeğeri (mg GAE) olarak ifade edilmiştir.

2.4. Flavonoid İçeriği

Flavonoid içeriğinin belirlenmesi için, gıda ve bitki numunelerindeki farklı flavonoid bileşiklerini belirlemek için yaygın olarak kullanılan bir spektrofotometrik yöntem olan bir alüminyum kompleksi oluşturma reaksiyonu kullanılmıştır [21]. Ayrıca, her bir seyreltilmiş süspansiyondan 100 uL, kuyulu bir plaka içinde 100 uL yüzde 2 (a/h) AlCl3 etanol çözeltisine ilave edildi ve karanlıkta 1 saat inkübe edildi. Daha sonra numunelerin absorbansları 420 nm'de ölçüldü. İçerik hesaplaması standart olarak quercetin (Biomol GmbH, Hamburg, Germany) ile ilgili olarak yapıldı ve sonuçlar quercetin eşdeğeri (µg QE) olarak ifade edildi.

2.5. Toplam Karotenoid İçeriği

Örneklerin karotenoid içeriği, Rodriguez-Amaya'dan sonraki yöntem kullanılarak karotenoidin belirli bir dalga boyunda spektral absorpsiyonunun ölçülmesiyle belirlendi [22]. Her numunenin absorbansı 450 nm'de ölçülmüştür. Hesaplama -karotenin standart eğrisine (TCI Deutschland GmbH, Eschborn, Almanya) göre yapıldı ve sonuçlar µg -karoten eşdeğeri (µg CE) olarak ifade edildi.

2.6. Antioksidan Kapasite

Antioksidan kapasite, gösterge olarak 1,1-difenil2-pikrilhidrazil (DPPH) serbest radikallerini kullanan DPPH testi kullanılarak değerlendirildi [23]. Kısaca, 0.2 mM metanolik DPPH çözeltisi (Sigma-Aldrich Corporation, St. Louis, MO, ABD) hazırlandı ve 100 uL seyreltilmiş numune bir 96-kuyulu plakaya ilave edildi ve 100 µL DPPH solüsyonu ile karıştırıldı. Plaka karanlıkta 30 dakika inkübe edildi ve absorbans 517 nm'de ölçüldü [23]. Serbest radikal yakalama aktivitesi aşağıdaki denkleme göre hesaplandı:

burada yüzde RSA, yüzde olarak radikal süpürme aktivitesidir, ADPPH, DPPH absorbansıdır ve A numunesi, numune absorbansıdır. Numune konsantrasyonları ve bunlara karşılık gelen RSA yüzdesi, IC50 değerini hesaplamak için bir grafik üzerinde çizildi.

2.7. İstatistiksel analiz

Verilerin istatistiksel analizi, GraphPad Prism® yazılımı (v. 8.3, GraphPad Software, Inc., La Jolla, CA, ABD) kullanılarak yapıldı ve karşılaştırma için bir eşleştirilmiş t-testi uygulandı, burada p-değerleri < {{4 }}.05 istatistiksel olarak anlamlı kabul edildi.

2.8. Cilt Penetrasyonu Tayini

Cilde nüfuz etme çalışması, yerel bir mezbahadan et üretiminin yan ürünleri olarak elde edilen taze domuz kulakları üzerinde gerçekleştirilmiştir. Domuz kulakları, domuz ve insan derisi arasındaki benzerlikten dolayı ex-vivo deri modeli olarak kullanılmaktadır [24-26]. Saf su ile temizlendikten ve kağıt havlu ile dikkatlice kurulandıktan sonra 2x2 cm lik inceleme alanına her bir numuneden 50 mg uygulandı. Daha sonra, formülasyonlar, doymuş bir eldiven kullanılarak 1 dakika boyunca cilde masaj yapılmıştır [27]. Tüm numuneler 32 ◦C'de 6 saat inkübe edildi ve numune kalıntılarını gidermek için cilt yüzeyi ıslak kağıt havlularla dikkatlice silindi.

Ardından, 15 mm çapında punch biyopsiler alındı, Tissue-Tek® (Sakura Finetek Europe BV, Alphen aan den Rijn, Hollanda) içerisine gömüldü ve hemen -80 ◦C'de donduruldu. 20 um kalınlığındaki dikey kesiklerde kriyokesitleme, bir kriyo mikrotom (Mod. 2700, Reichert-Jung, Nußloch, Almanya) ile gerçekleştirildi. Tüm kesiklerin floresan görüntülemesi, Olympus U-HGLGPS ışık kaynağı ve 200-kat büyütme ile donatılmış Olympus CKX53 (Olympus, Japonya) ile gerçekleştirildi. Floresan ışık kaynağının yoğunluğu yüzde 50 olarak ayarlandı. Pozlama süresi tüm görüntüler için 50 ms'de sabit tutuldu. Analiz için seçilen filtre, DAPI HC filtre blok sistemiydi (uyarma filtresi: 540–560 nm, dikroik ayna: 570 nm, emisyon filtresi: 580 nm'den başlayarak (LP)).

3. Sonuçlar ve tartışma

3.1. Bitki Kristallerinin Üretimi ve Parçacık Büyüklüğü Analizi

Kaba SN yapraklı dökme malzemeden PlantCrystals üretimi başarılı oldu. HPH, çok küçük partiküllerle sonuçlandı ve ışık mikroskobu ile bozulmamış hücreler gözlenmedi. Yüzey aktif madde olarak ek stabilizasyon (Şekil 3A) ve TPGS (Şekil 3B) olmadan işlenen numunelerin belirgin bir farklılaşması, ışık mikroskobik incelemeden sonra görsel olarak gözlemlenememiştir. Sürfaktan olarak TPGS'li numune için yalnızca biraz daha düşük topaklaşma eğilimi algılanabilir.

SLS aracılığıyla hacimsel tabanlı parçacık boyutu analizi, öğütme işleminin boyutları birkaç 100 µm'den daha düşük bir çift haneli µm boyut aralığına (D(v){{8) indirebildiğini ortaya çıkardı. }}.50). Numunelerin karşılaştırılması, sürfaktanın öğütülmüş ve şişmiş numune (CM artı S) üzerinde belirgin bir etkiye sahip olduğunu gösterdi. Yüzey aktif madde içermeyen numunenin, TPGS ile stabilize edilmiş numune ile aynı D(v)0.10-değerine sahip olduğu fark edilebilir (Şekil 4), ancak daha yüksek D(v) değerleri için, boyutlar kabaca iki katına çıkarılmıştır . Her iki numune de sürfaktanın eklenmesi dışında aynı şekilde oluşturulduğundan ve işlendiğinden, bu, TPGS'nin şişme sırasında daha büyük numune topaklarını önleyebildiğini gösterir. İşlenen numuneler, TPGS ile stabilize edilmiş numune için belirgin bir aglomerasyonun işareti olarak yorumlanabilecek olan D(v)0.99 dışında tüm D(v) değerleri için benzer sonuçlar gösterdi (Şekil 4). Yine de, D(v)0.99'un önemli ölçüde değişken olduğu ve her zaman en güvenilir parametre olmadığı dikkate alınmalıdır, çünkü bir veya birkaç büyük boyutlu parçacık örneğin numune hazırlama nedeniyle önemli bir etkiye sahip olabilir [28].

Elde edilen boyutlar, Abraham ve diğerleri tarafından yaprak bazlı malzeme için elde edilen sonuçlara kıyasla çok umut vericidir. [11]. SLS ölçümleri, son PlantCrystals formülasyonu için hemen hemen aynı boyutlar ve boyut dağılımları ile sonuçlandı. Abraham ve ark. ile karşılaştırıldığında bu çalışmanın olası bir dezavantajı. ön öğütmenin bu çalışmada o kadar etkili olmaması ve numuneye çok fazla ısı ve hava veren Miccra D27'nin kullanılmasıdır. Öte yandan, HPH döngülerinin sayısı 1000 bar veya daha düşük basınçlarla 18 döngüden 15 döngüye ve basınçla 10 döngüden 5 döngüye düşürüldüğünden, bu çalışmada HPH ile parçacıkların nihai indirgemesi daha nazikti. 1500 bar [11]. Her iki çalışmada da PlantCrystals için elde edilen benzer boyutlar, sonuç olarak ilginç bir teoriye yol açmaktadır: Çok farklı iki işlem uygulandı ve bunun üzerine iki farklı yüzey aktif madde kullanıldı (veya hiç kullanılmadı), ancak sonunda benzer boyutlar elde edildi. Bu, bitki materyalinin HPH yoluyla azalmasının bir dereceye kadar sınırlı olduğu varsayımına yol açar. En azından SN yaprakları (bu çalışma) ve adaçayı/laura yaprakları (Abraham ve ark.) için endikasyonlar çok güçlü görünmektedir ve gelecekteki çalışmalarda araştırılmalıdır [11].

Genel olarak, her iki çalışma da HPH'nin PlantCrystals üretiminde çok verimli olduğunu göstermektedir, ancak piston boşluğunun tıkanmasını önlemek için ön öğütme kaçınılmazdır. Bir yandan en etkili olması gereken, ancak aynı zamanda mümkün olduğu kadar çok içeriği korumak için numuneye mümkün olduğunca az ısı ve hava girmesi gereken üretim sürecinin optimizasyonu için hala potansiyel var. .

Sayısal boyut dağılımı analizi, şişmiş numunenin, TPGS içeren numunelere kıyasla yüzey aktif madde içermeyen numuneler için biraz daha büyük boyutlar içerdiğini tekrar gösterdi (Şekil 5). İşlenen örnek, daha düşük D değerleri (D(n)0.10 ve D(n)0.50) için benzer boyutlara sahipti ve daha yüksek D değerleri için büyük farklılıklar tanınabilirdi ( D(n)0.99.

Süreç, sürfaktanın etkisi ve elde edilen işlenmiş numuneler hakkında daha iyi bir fikir edinmek için, tüm boyut analizleri (D(v), D(n), ışık mikroskobu) dikkate alınmalı ve birleştirilmelidir. Genel olarak, SLS için ölçüm düzeni, bir büyük boyutlu parçacık ile bir parçacık yığını arasında ayrım yapamaz. Ek bir Şekil 5 yapmak mümkündür. İşlenmemiş ve işlenmiş SN örneklerinin sayısal tabanlı boyut dağılımı. Sol üst: Sürfaktansız. Alt, sol: Sürfaktanlı. Sağ: Daha iyi görselleştirme ve karşılaştırma için karşılık gelen PlantCrystals örnekleri için yeniden ölçeklendirilmiş sonuçlar. Süreç, sürfaktanın etkisi ve elde edilen işlenmiş numuneler hakkında daha iyi bir fikir edinmek için, tüm boyut analizleri (D(v), D(n), ışık mikroskobu) dikkate alınmalı ve birleştirilmelidir. Genel olarak, SLS için ölçüm düzeni, bir büyük boyutlu parçacık ile bir parçacık yığını arasında ayrım yapamaz. Aglomerasyon çok güçlü değilse ve örneğin karıştırma hızını veya sonikasyonu değiştirerek ayrıştırılabilirse, topaklanmaları kontrol etmek için ek ölçümler yapmak mümkündür [29,30].

Bununla birlikte, bu prosedürler yaygın olarak kullanılmamaktadır ve istenen etkiyi göstermemeleri mümkündür. Hızlı ve kolay bir çözüm, sıkı aglomerasyonlar için bile hızlı bir varsayım sağlayan ışık mikroskobunun kullanılmasıdır. Mikroskobik analiz ile ilgili olarak, TPGS'siz numune için topaklanmaların daha koyu olduğu ve genel olarak numunenin daha bulanık göründüğü kabul edilebilir. Öte yandan, her iki örneğin tek parçacıkları aynı boyut aralığında görünüyordu (Şekil 3). Bu, SLS ölçümlerinin boyutundaki farklılıkların büyük olasılıkla parçacıkların "gerçek" boyutlarıyla değil, topaklanmayla ilgili olduğu anlamına gelir.

SLS verilerinin yorumlanması için, D(v) değerlerinin daha büyük boyutlu parçacıkları üssel olarak üçün gücüne temsil ettiğini ve vurguladığını bilmek önemlidir, oysa D(n) değeri parçacıkların miktarını temsil eder [ 28]. Sonuçları karşılaştırmak için, yüzey aktif madde içermeyen numunenin D(v)- veya D(n)-değerinin, ilave yüzey aktif madde içeren karşılık gelen D-değerine bölünmesiyle D-değerlerinin bir oranı yapıldı (Tablo 1). 1.{{10}}'den büyük bir oran, sürfaktanın dengeleyici bir etkiye sahip olduğu anlamına gelirken, 1.0'den düşük bir oran, istikrarsızlaştırıcı bir etkiye işaret eder ve 1.0'lık bir oran tam olarak etkisinin olmadığını gösterir.

Kuru öğütülmüş ve şişmiş numune (CM artı S) için, D(v)- değerinin oranındaki güçlü artış, tercihen büyük topaklanmaların TPGS tarafından önlenebileceğini gösterirken, sabit D(n)- oranı değer, TPGS ile stabilizasyonun daha küçük aglomeralar veya tek parçacıklar üzerinde yalnızca küçük bir etkiye sahip olduğunu ortaya koymaktadır. İşlenen numuneler için bunun tersi gözlemlenebilir; D(v) değerinin oranı neredeyse sabittir, ancak D(n) değerinin oranı, daha yüksek D(n) değerleri ile artar. Bu, işlenmiş numuneler söz konusu olduğunda, TPGS'li ve TPGS'siz (D(v)) daha büyük topakların meydana geldiği anlamına gelir. Öte yandan, sürfaktan, tek parçacıkların topaklanmasını engelledi ve ayrıca büyük topaklanmalar en azından belirli bir dereceye kadar azaltılabildi (D(n)).

Genel olarak, bir yüzey aktif madde olarak TPGS'nin boyut veya boyut dağılımı üzerinde önemli bir etkisinin olmadığı özetlenebilir, ancak bir etki fark edilebilir. PlantCrystals formülasyonunun kendi kendini dengeleyen bir etkisi gözlemlenememiştir. Aksine, PlantCrystals formülasyonu sürfaktan ilavesinden fayda sağlamıştır. HPH, PlantCrystals formülasyonlarını üretmek için oldukça etkili bir teknik olduğunu bir kez daha kanıtladı ve ana parçacık boyutunu 1 µm civarında veya altında istenen aralığa indirebildi. Ancak, makinenin tıkanmasını önlemek için kapsamlı ön öğütme adımları gerektirir ve bağımsız bir teknik olarak kullanılamaz [11].

3.2. İçerik Analizi ve Antioksidan Kapasite (AOC) Çalışmaları

Bu bölümde, öğütmenin SN biyoaktifleri, özellikle antioksidanlar üzerindeki etkisini araştırmak için ilk işlenmemiş numune (yığın süspansiyon) ve PlantCrystals üzerinde analiz yapılmıştır. SN, sağlık açısından büyük faydalar gösteren polifenol, flavonoid ve karotenoid içeriği ile iyi bilinir. Diğer birçok aktivitenin yanı sıra antioksidan, antienflamatuar ve antitümör aktivitelerine sahiptirler [23,31,32].

Ek olarak, belirgin antioksidan ve antimutajenik aktiviteye sahip olan yüksek miktarda klorofil içerir; ayrıca bir antiakne ve doku uyarıcı ajan olarak kullanılabilir [33,34]. Tüm bu biyoaktif maddeler, SC'nin bariyer işlevini güçlendirmek için üstün doğal destek görevi görebilir. Öğütme tekniklerinin SN içeriği ve antioksidanlar üzerindeki etkisini araştırmak için çeşitli spektrofotometrik çalışmalar yapılmıştır. Öğütme işleminden önce ve sonra flavonoid ve karotenoid içerikleri ölçüldü. Ek olarak, antioksidan kapasiteyi tahmin etmek için toplam polifenol içeriği ve DPPH testi kullanıldı. İçerik analizi ve testlerin tüm sonuçları Tablo 2'de gösterilmektedir.

İndirgemenin, bitki hücrelerinin yok edilmesiyle bitki bileşenlerinin mevcudiyetini iyileştirmesi ve bunun da aktif bileşiklerin daha fazla salınmasına yol açması ve böylece formülasyonun farmakolojik potansiyelini geliştirmesi bekleniyordu. Bununla uyumlu olarak, flavonoid içeriği için önemli bir gelişme gözlemlendi (p-değeri=0.0165). Dökme malzeme için değer 107 ± 2 ug QE idi ve PlantCrystals süspansiyonu için 288 ± 38 ug QE'ye yükseltilebilir.

Bu nedenle, HPH'nin yığına kıyasla SN PlantCrystals'ın flavonoid mevcudiyetini iki katına çıkardığı belirtilebilir. Bu gelişme, PlantCrystals tekniğinin etkinliğinin altını çizmek için özellikle önemlidir, çünkü ursolik asit ve kersetin gibi SN flavonoidleri, SN'nin cilt üzerindeki yaşlanma karşıtı etkisinden sorumlu olan en önemli aktif maddeler olarak kabul edilir. Bu etki, bileşenlerin elastaz ve kollajenazı inhibe etme yeteneğine dayanmaktadır [17]. Ayrıca, flavonoid içeriğindeki gelişme, Bourgeois ve ark. antioksidan ve yaşlanma karşıtı aktiviteler açısından hidrofilik bir ekstraktın üstünlüğünü göstermiştir [17].

Toplam karotenoid içeriği için elde edilen sonuçlar, homojenizasyon işleminden sonra önemli bir gelişme göstermedi. Bunun olası bir nedeni, formülasyonun karotenoidler gibi lipofilik aktif maddelerin serbest mevcudiyetini desteklemeyen hidrofilik doğasına ek olarak üretim sırasında ısı, hava ve ışığa maruz kalmasıdır [22].

Polifenoller, antioksidan, antimikrobiyal, antiinflamatuar, antiülser, antitümör ajanlar ve diğer birçok etki gibi genişletilmiş sağlık yararları ile iyi bilinmektedir [35-37]. SN, gallik asit, kafeik asit, ferulik asit, kuersetin ve rutin [36,38] gibi farklı polifenol türlerinin zengin bir kaynağı olarak kabul edilir. Formülasyonun daha iyi anlaşılmasını sağlamak için polifenolik içerik analizi yapılmıştır. Bu test aynı zamanda bir antioksidan kapasite testi olarak kabul edilir ve hidrofilik ve lipofilik polifenolleri aynı anda ölçebilir [39]. Flavonoid içeriğinin sonuçlarıyla kıyaslandığında, toplam polifenol içeriği önemli ölçüde iyileştirilebilir (p-değeri=0.0013). PlantCrystals numunesi, dökme malzemeye kıyasla yüzde 65 daha yüksek bir içerik gösterdi. Bu güçlü artış beklenmiyordu çünkü Abraham ve ark. sadece argan tohumları için homojenizasyondan sonra yüzde 1,1'lik bir artış göstermiştir [11]. Bunun açıklaması, bitkilerin farklı antioksidanları olabilir: yani, SN, hidrofilik antioksidanlar ve klorofil açısından zenginken, argan tohumları esas olarak lipofilik antioksidanlar içerir.

DPPH testinin sonuçları, formülasyonun IC50 değerinin PlantCrystals teknolojisi ile iyileştirilemeyeceğini gösterdi. DPPH testi, literatürde yaygın olarak kullanılan etkili bir antioksidan testidir, ancak karotenoid ve klorofil açısından zengin formülasyonlar ile ilgili temel dezavantajı vardır. Bu bileşenlerin varlığı, DPPH ölçümü ile fotometrik olarak çakışır ve yanlış bir pozitif okumaya yol açar. Bu örtüşme, PlantCrystals formülasyonu için beklenmedik şekilde yüksek IC50 değerini açıklayabilir. Önceki PlantCrystals formülasyonları her zaman DPPH testi [10,11,40] aracılığıyla analiz edilen AOC'de bir gelişme sağladığından, bu beklenmiyordu.

Özetlemek gerekirse, HPH, polifenol ölçümleri yoluyla flavonoid içeriğini ve AOC'yi artırabildi, ancak DPPH tahlili yoluyla karotenoid içeriğini ve AOC ölçümünü artıramadı. Bir yandan, daha geniş bir yüzey alanına ve sonuç olarak aktif maddelerin daha iyi bir difüzyonuna ve mevcudiyetine yol açacak olan partikül boyutunun küçültülmesinde olası iyileştirmeler atanabilir. Bitki hücrelerinin HPH ile yok edilmesi, aynı zamanda, aktif bileşenlerin daha iyi bir şekilde serbest kalmasına yol açar.

Öte yandan, azaltma tekniği bileşenlerin fizikokimyasal kararlılığı üzerinde bir etkiye sahiptir. Bu çalışmada kullanılan prosesler, formülasyona belirli bir dereceye kadar ısı ve hava kattı; bu, örneğin oksidasyon nedeniyle hassas bileşenlerin kaybına yol açabilir. Numunenin ışıktan korunması, uygun şekilde soğutulması ve sterilizasyonu, gelecekteki çalışmalarda PlantCrystals üretmek ve değerli bileşenlerin daha iyi korunmasını garanti etmek için daha fazla iyileştirme olabilir.

3.3. Cilt Penetrasyonu Tayini

Bu çalışmanın son bölümünde, SN toplu ve PlantCrystals süspansiyonlarının penetrasyon davranışlarının karşılaştırılması incelenmiştir. Floresan mikroskobu, klorofil tipleri a ve b'nin penetrasyonunu izleyerek SN yaprak örneğinin cilt üzerinde görselleştirilmesini sağladı. SN, bitkinin yeşil renginden sorumlu olan bu doğal boyaları büyük miktarlarda içermesiyle bilinir. Her iki madde de mavi (400–420 nm) ve kırmızı ışığı (640–680 nm) emebilir, bu da yaklaşık 690 ve 740 nm'de klorofil floresansı ile sonuçlanır [41]. Klorofil tarafından flüoresanlanan bu kırmızı ışık, flüoresans mikroskobu kullanılarak izlenebilir.

SN yaprak örneklerinin cilt penetrasyonu çalışmasının sonuçları Şekil 6'da gösterilmektedir. Başlangıçta derinin otofloresansı minimuma ayarlandı (Şekil 6A). İşlenmemiş dökme malzemeden türetilen klorofilin bile SC'de görsel olarak algılanabilir bir flüoresan gösterdiği belirtilmelidir. Ancak cilt penetrasyonu tutarsız ve homojen değildir (Şekil 6B). PlantCrystals formülasyonu, SC'de daha tutarlı ve görsel olarak algılanan daha yüksek bir flüoresans gösterdi (Şekil 6C).

Bitki materyalinin konsantrasyonunun aynı olduğu ve temel farkın partikül boyutu ve yok edilen bitki hücrelerinin sayısı olduğu vurgulanmalıdır. Bu, penetrasyondaki farklılıkların iki etki ile açıklanabileceği anlamına gelir. İlk olarak, hücrelerin parçalanması, daha yüksek bir serbest kloroplast içeriğine yol açacaktır, bu da daha yüksek bir konsantrasyon ve sonuç olarak daha yüksek bir konsantrasyon gradyanı ve gelişmiş penetrasyon ile sonuçlanacaktır [42,43]. İkincisi, çözülemeyen malzeme ve bileşenler, PlantCrystals formülasyonu için çok daha küçüktür ve bu, nanokristallerden bilinen etkilerle karşılaştırılabilir, örneğin, gelişmiş yapışma ve penetrasyon etkinliği. Ek olarak, daha küçük parçacık boyutu ve parçacıkların daha yüksek toplam temas alanı nedeniyle homojenlik geliştirilecektir.

Bununla birlikte, SC'ye nüfuz etme bu çalışmanın hedefiydi ve toplu malzemeye kıyasla PlantCrystals'ta penetrasyon derinliği üzerinde belirgin bir etkinin görsel olarak gözlemlenemediği kabul edilebilir. Klorofilin, HPH'den sonra bile canlı deri laverlerine transdermal penetrasyon göstermesi gerçeği, moleküle Lipinski beş kuralı uygulanarak açıklanabilir. Bu kural başlangıçta, oral uygulamadan sonra ilaçların absorpsiyon veya geçirgenlik davranışını tahmin etmek için kullanılır. Bir ilacın deri penetrasyonunun tahminine ilişkin bu kuralın uygulanması halen tartışılmaktadır (46).

Bir ilacın zayıf geçirgenliğinin, molekül için birden fazla kriter geçerliyse tahmin edilebileceğini belirtir: Beşten fazla hidrojen bağı verici grup, hidrojen bağı alıcı grup, 500 Da'dan fazla moleküler ağırlık veya bir oktanol-su dağılma katsayısı (log P değeri) 5'ten büyük (47. Klorofil a ve b'nin her ikisi de hidrojen bağı donör gruplarının yanı sıra bahsedilen tüm kriterlerle eşleşir (Şekil 1). Bu, moleküller için kendiliğinden zayıf penetrasyon özelliklerini gösterir. Bu nedenle, PlantCrystals sadece klorofilin kıvamını ve cilde nüfuz etme derinliğini belirli bir sınırlı ölçüde iyileştirir.Bununla birlikte, HPH yoluyla PlantCrystals üretimi SC'deki klorofil a ve b miktarını arttırdı.Klorofilin daha homojen bir şekilde nüfuz etmesi ve içine telaffuz edilmesi durumunda varsayılabilir. SC, daha yüksek geçirgenliğe sahip diğer bitki aktifleri büyük ölçüde cilde iletilecektir.

SC'nin bu çalışmanın amaçlanan hedefi olduğu göz önüne alındığında, PlantCrystals teknolojisi birçok doğal bitkinin cilt özellikleri üzerindeki faydalarından yararlanmak için çok umut verici ve çok yönlü bir formülasyon yaklaşımıdır. Bu nedenle, örneğin, birçok bitki, daha sağlıklı bir cilt oluşturmak için korneoterapi ilkeleriyle uyumlu bir nemlendirici etkiye sahiptir [48,49]. Ek olarak, esansiyel yağ asitleri gibi bileşenler de örneğin cilt bariyerini güçlendirme ve onarma gibi olumlu etkilere sahiptir ve hatta penetrasyon artırıcı olarak kullanılabilir [50,51]. Bitki kaynaklı aktiflerin ve eksipiyanların tüm bu olumlu etkileri, herhangi bir atık üretmeden doğal olarak bir PlantCrystals formülasyonuna dahil edilir.

Genel olarak, floresan mikroskobunun bitki bazlı formülasyonların cilt penetrasyonunu tespit edebildiği gösterilebilir. Bu sadece bilimsel açıdan değil, aynı zamanda pazarlama ve müşteri memnuniyeti açısından da ilgi çekicidir, çünkü bitki bazlı bir formülasyonun (örn. ev ilaçları veya cilt maskeleri) etkisi, örn. özel bir UV lambası ile kolayca kanıtlanabilir. kozmetik stüdyolarında tedaviden sonra. Bilimsel bir bakış açısıyla, bu yöntem herhangi bir floresan belirteci eklenmeden bir formülasyonun etkinliğini tahmin etmek için çok hızlı ve uygun maliyetli bir yöntemdir. Yalnızca aktif floresan bileşenlerinin (çoğunlukla klorofil, ancak diğerleri göz ardı edilemez) analiz edilebilmesi dezavantajının yanı sıra, homojenlik ve miktar hakkında genel bir varsayım yapılabilir. Ayrıca, PlantCrystals veya bitki bazlı materyallerle yapılan cilt çalışmaları için, "doğanın parmak izi" kavramı, bir formülasyonun etkisinin (örneğin, kullanılmış baz (jeller, kremler, vb.) orijinal formülasyon veya kimyasal(lar) ilavesi.

4. Sonuçlar

"Doğanın parmak izi" kavramı bu çalışmada değerini kanıtladı. Stratum corneum'da doğal olarak oluşan flüoresan klorofilin saptanması, hem PlantCrystals hem de dökme malzeme için sağlandı. Geliştirilmiş bir SC penetrasyonuna sahip bir SN PlantCrystals formülasyonu geliştirme ana hedefine ulaşıldı ve PlantCrystals formülasyonunun SC penetrasyonu, dökme malzemenin homojen olmayan penetrasyonu ile karşılaştırıldığında homojendi. "Doğanın parmak izi" kavramı, penetrasyonlarını tahmin etmek için kolay ve hızlı bir teknik olarak diğer klorofil açısından zengin bitki formülasyonları için faydalı olmalıdır.

Burada ilk kez açıklanan SN PlantCrystals'ın hazırlanması sırasında, kaba malzemenin ana parçacık boyutu daha düşük mikro boyut aralığına düşürülebilir. Ek bir yüzey aktif madde olarak TPGS, topaklanmayı bir dereceye kadar engellemiştir. PlantCrystals'ın tam potansiyelini harekete geçirmenin anahtarı, boyut analizine göre elde edilen bitki hücrelerinin parçalanmasıdır. Bu teori, aktiflerin geliştirilmiş serbest bırakılması ve belirgin antioksidan aktivite ile vurgulanmıştır. Daha yüksek flavonoid içeriği değerleri ve toplam fenol içeriği kullanılarak ölçülen daha iyi bir AOC, SN PlantCrystals'ı anti-oksidatif cilt tedavisi için umut verici bir formülasyon haline getirir.

Gelecekteki çalışmalar, bu sonuçların yalnızca "otların kraliçesi" ile elde edilemeyeceğini kanıtlamalıdır. AOC'yi ölçmek için ek yöntemler, klorofil bakımından zengin bitki kristallerine uygulanabilirlikleri açısından da test edilmelidir. Bu çalışmada da kullanılan yaygın olarak kullanılan DDPH testi, kullanılan reaktifler ile numunenin karotenoid ve klorofili arasındaki spektrofotometrik örtüşme nedeniyle maalesef bu çalışmada kullanılamadı.

Yazar Katkıları:

Kavramsallaştırma, DK ve CMK; metodoloji, DK, RMA ve SW; biçimsel analiz, DK, RMA ve SW; soruşturma, DK, RMA ve SW; kaynaklar, CMK; veri iyileştirme, DK, RMA ve SW; yazma—orijinal taslak hazırlama, DK, RMA ve SW; yazma—inceleme ve düzenleme, DK, RMA ve JB; görselleştirme, DK, RMA ve SW; süpervizyon, JB; proje yönetimi, CMK; fon alımı, CMK Tüm yazarlar, makalenin yayınlanan sürümünü okudu ve kabul etti.

Finansman:

Çalışma kısmen ZIM projesi tarafından finanse edildi: KF ZF4114903AJ8.

Kurumsal İnceleme Kurulu Beyanı:

Uygulanamaz.

Bilgilendirilmiş Onam Beyanı:

Uygulanamaz.

Veri Kullanılabilirliği Beyanı:

Makalede yer alan tüm veriler.

Teşekkür:

Yazarlar, bu çalışmada kullanılan ısırgan otu örneklerinin bağışı için Blank's GmbH & Co.KG'ye teşekkür eder. Floresan mikroskobunu ücretsiz olarak kullanan Udo Bakowsky'ye de teşekkür etmek isteriz. Yazarlar ayrıca taslağın gözden geçirilmesinde yardımları için Soma Sengupta'ya teşekkür ederler. Reem M. Alnemari, mali desteği için Suudi Arabistan'daki Taif Üniversitesi'ne teşekkür eder.

Çıkar çatışmaları:

Yazarlar herhangi bir çıkar çatışması beyan etmemektedir.

Referanslar

1. Kohl, E.; Steinbauer, J.; Landthaler, M.; Szeimies, R.-M. Cilt yaşlanması J.Eur. Acad. Dermatol. Venereol. 2011, 25, 873–884. [ÇaprazRef]

2. Mohiuddin, AK Skin Aging & Modern Edge Yaşlanma Karşıtı Stratejiler. Int. J. Dermatol. Cilt Bakımı 2019, 1, 8–62. [ÇaprazRef]

3. Trojahn, C.; Dobos, G.; Lichterfeld, A.; Blume-Peytavi, Ü.; Kottner, J. İnsanlarda Yaşlanan Yüz Cildinin Karakterizasyonu: Ekstrinsiği İçsel Biyolojik Fenomenlerden Ayırmak. BioMed Arş. Int. 2015, 2015, 318586. [CrossRef]

4. Grice, EA; Segre, JA Cilt mikrobiyomu. Nat. Rev. Mikrobiyoloji. 2011, 9, 244–253. [ÇaprazRef]

5. Cannarozzo, G.; Fazya, G.; Bennardo, L.; Tamburi, F.; Amoruso, GF; Del Duca, E.; Nisticò, SP Yüz Yaşlanma Tedavisinde Yeni Bir 675 nm Lazer Cihazı: Prospektif Gözlemsel Bir Çalışma. Fotobiyomodül. fotoğraflandı. Lazer Cerrahisi 2021, 39, 118–122. [CrossRef] [PubMed]

6. Farage, MA; Miller, KV; Elsner, P.; Maibach, HI Cilt yaşlanmasında içsel ve dışsal faktörler: Bir gözden geçirme. Int. J. Kozmetik. bilim 2008, 30, 87–95. [CrossRef] [PubMed]

7. Trouba, KJ; Hamadeh, HK; Emin, RP; Germolec, DR Oksidatif Stres ve Cilt Hastalığındaki Rolü. antioksidan. Redoks Sinyali. 2002, 4, 665–673. [CrossRef] [PubMed]

8. Lademann, J.; Vergou, T.; Darvin, ME; Patzelt, A.; Meinke, MC; Voit, C.; Papakostas, D.; Zastrow, L.; Sterry, W.; Doucet, O. Antioksidanların Topikal, Sistemik ve Kombine Uygulamasının İnsan Derisinin Bariyer Özellikleri Üzerindeki Etkisi. Cilt Eczanesi. Fizyol. 2016, 29, 41–46. [ÇaprazRef]

9. Amberg, N.; Fogarassy, ​​C. Kozmetik Pazarında Yeşil Tüketici Davranışı. Kaynaklar 2019, 8, 137. [CrossRef]

10. Griffin, S.; Sarfraz, M.; Feride, V.; Nesim, MJ; Ebokaiwe, AP; Keck, CM; Jacob, C. Organik atıkları boşa harcayacak zaman yok: Nano boyutlandırma, gıda işleme kalıntılarını rafine malzemelere dönüştürür. J. Çevre. Yönetim 2018, 210, 114–121. [ÇaprazRef]

11. İbrahim, AM; Alnemari, RM; Yakup, C.; Keck, CM PlantCrystals—Tıbbi Bitkilerin Geliştirilmiş Biyo-etkililiği için Nano Boyutlu Bitki Malzemesi. Malzemeler 2020, 13, 4368. [CrossRef]

12. İbrahim, AM; Alnemari, RM; Brüßler, J.; Keck, CM Bitki Kristallerini Kullanarak Siyah Çay Atıklarının Antioksidan Kapasitesini İyileştirdi. Molecules 2021, 26, 592. [CrossRef] 13. Mehegan, MA Stinging Nettles—Queen of Herbs. Simyasal Bitkisel Şifa, 1. baskı; Bookbaby: Pennsauken Kasabası, NJ, ABD, 2011.

14. Upton, R. Isırgan yaprağı (Urtica dioica L.): Olağanüstü bitkisel ilaç. J. Herb. Med. 2013, 3, 9–38. [ÇaprazRef]

15. Semalti, M.; Adhikari, L.; Semval, D.; Chauhan, A.; Mishra, A.; Kotiyal, R.; Semalty, A. Isırgan Otunun (Urtica dioica) Fitokimyası ve Farmakolojik Etkileri Üzerine Kapsamlı Bir İnceleme. Curr. gelenek. Med. 2017, 3, 156–167. [ÇaprazRef]

16. Kregiel, D.; Pawlikowska, E.; Antolak, H. Urtica spp.: Olağanüstü Özelliklere Sahip Sıradan Bitkiler. Moleküller 2018, 23, 1664. [CrossRef] [PubMed]

17. Bourgeois, C.; Leclerc, EA; Corbin, C.; Doussot, J.; Serrano, V.; Vanier, J.-R.; Seignuret, J.-M.; Auguin, D.; Pichon, C.; Laine, E.; et al. Isırgan otu (Urtica dioica L.), kozmetik uygulamalar için antioksidan ve yaşlanma karşıtı fitokimyasalların kaynağıdır. Rendus Chim'i karşılaştırır. 2016, 19, 1090–1100. [ÇaprazRef]

18. Maxwell, K.; Johnson, GN Klorofil floresansı—Uygulamalı bir kılavuz. J. Uzm. Bot. 2000, 51, 659–668. [CrossRef] [PubMed]

19. Hosseinzadeh, R.; Khorsandi, K.; Hemmaty, S. Yüzey Aktif Maddelerin Ekstraksiyon Üzerindeki Etkisinin İncelenmesi ve Polifenolik Bileşiklerin Belirlenmesi ve Meyve Ekstraktlarının Antioksidan Kapasitesi. PLoS BİR 2013, 8, e57353. [ÇaprazRef]

20. Gao, X.; Ohlander, M.; Jeppsson, N.; Björk, L.; Trajkovski, V. Olgunlaşma Sırasında Deniz İğdesi (Hippophae rhamnoides L.) Meyvelerinde Antioksidan Etkilerdeki Değişiklikler ve Bitkisel Besinlerle İlişkisi. J. Agric. Gıda Kimyası 2000, 48, 1485–1490. [ÇaprazRef]

21. Ordonez, A.; Gomez, J.; Vatuone, M.; Isla, MI Sechium edule (Jacq.) Swartz ekstraktlarının antioksidan aktiviteleri. Gıda Kimyası 2006, 97, 452–458. [ÇaprazRef]

22. Rodriguez-Amaya, DB Gıdalarda Karotenoid Analizi Rehberi; ILSI Press: Washington, DC, ABD, 2001.

23. Katsube, T.; Tabata, H.; Ota, Y.; Yamasaki, Y.; Anurad, E.; Shiwaku, K.; Yamane, Y. Yenilebilir Bitki Ürünlerinde Antioksidan Aktivite Taraması: Düşük Yoğunluklu Lipoprotein Oksidasyon Deneyi, DPPH Radikal Temizleme Deneyi ve Folin-Ciocalteu Deneyinin Karşılaştırılması. J. Agric. Gıda Kimyası 2004, 52, 2391–2396. [ÇaprazRef]

24. Summerfield, A.; Meurens, F.; Ricklin, ME Domuz derisinin immünolojisi ve insan derisi için bir model olarak değeri. Mol. immünol. 2015, 66, 14–21. [CrossRef] [PubMed]

25. Ranamukhaarachchi, SA; Lehnert, S.; Ranamukhaarachchi, SL; Sprenger, L.; Schneider, T.; Mansur, İ.; Rai, K.; Hafeli, UO; Stoeber, B. Tıbbi cihaz geliştirme için dondurularak muhafaza edilmeden önce ve sonra insan ve domuz derisinin mikromekanik bir karşılaştırması. bilim Rep. 2016, 6, 32074. [CrossRef]

26. Jacobi, U.; Kaiser, M.; Toll, R.; Mangelsdorf, S.; Audring, H.; Otberg, N.; Sterry, W.; Lademann, J. Domuz kulağı derisi: İnsan derisi için bir in vitro model. Cilt Çöz. Teknoloji 2007, 13, 19–24. [CrossRef] [PubMed]

27. Nagelreiter, C.; Mahrhauser, D.; Wiatschka, K.; Skipiol, S.; Valenta, C. Domuz kulağı derisi üzerinde bant sıyırma deneyleri için uygun bir çalışma protokolünün önemi: Lipofilik formülasyonların etkisi ve şerit yapışma bozukluğu. Int. J. Ecz. 2015, 491, 162–169. [CrossRef] [PubMed]

28. Stetefeld, J.; McKenna SA; Patel, TR Dinamik ışık saçılımı: Biyomedikal bilimlerde pratik bir rehber ve uygulamalar. biyografiler. Rev. 2016, 8, 409–427. [CrossRef] [PubMed]

29. Brar, SK; Verma, M. Işık saçan tekniklerle nanopartiküllerin ölçümü. Eğilimler Anal. kimya 2011, 30, 4–17. [ÇaprazRef]

30. Kübart, SA; Keck, CM Nanoparçacıkların lazer difraktometrisi: Sık karşılaşılan tuzaklar ve gözden kaçan fırsatlar. J. Ecz. Teknoloji İlaç Res. 2013, 2, 17. [CrossRef]

31. Kukriç, Z.; Topalic-Trivunoviç, L.; Kukavica, B.; Matos, S.; Paviciç, S.; Boroja, M.; Savic, A. Isırgan otu yapraklarının (Urtica dioica L.) antioksidan ve antimikrobiyal aktivitelerinin karakterizasyonu. Acta Dönemi. Teknoloji 2012, 2012, 257–272. [ÇaprazRef]

32. Pereira, L. Biyoaktif Maddelerin Kaynağı Olarak Yosunlar ve Cilt Bakımı Tedavisi—Kozmesötikler, Algoterapi ve Talasoterapi. Kozmetik 2018, 5, 68. [CrossRef]

33. Hayes, M.; Ferruzzi, MG Diyet klorofil türevlerinin biyoyararlanımı ve kemopreventatif mekanizmaları hakkında güncelleme. Nutr. Res. 2020, 81, 19–37. [CrossRef] [PubMed]

34. Şarkı, BH; Lee, DH; Kim, M.Ö. ku, SH; Park, EJ; Kwon, İH; Kim, KH; Kim, KJ Akne vulgaris tedavisinde klorofil-a kullanan fotodinamik terapi: Randomize, tek kör, bölünmüş yüz çalışması. J. Am. Acad. Dermatol. 2014, 71, 764–771. [CrossRef] [PubMed]

35. Gülçin, İ.; Küfrevioğlu, OI; Oktay, M.; Büyükokuroğlu, ME Isırgan otunun (Urtica dioica L.) antioksidan, antimikrobiyal, antiülser ve analjezik aktiviteleri. J. Ethnopharmacol. 2004, 90, 205–215. [CrossRef] [PubMed]

36. Uroviç, S.; Pavliç, B.; Ağrıç, S.; Popov, S.; Saviç, S.; Petronijeviç, M.; Radojkoviç, M.; Cvetanovic, A.; Zekoviç, Z. Farklı analitik yaklaşımlarla elde edilen ısırgan otu yapraklarının kimyasal bileşimi. J. İşlev. Yiyecekler 2017, 32, 18–26. [ÇaprazRef]

37. Ghaima, K.; Haşim, NM; Ali, SA Isırgan Otu (Urtica dioica) ve Hindiba (Taraxacum officinale) Etil Asetat Ekstraktının Antibakteriyel ve Antioksidan Aktiviteleri. J. Uygulama eczane bilim 2013, 3, 96–99. [ÇaprazRef]

38. Orçiç, D.; Franciskoviç, M.; Bekvalac, K.; Svirçev, E.; Ayı, İ.; Lesjak, M.; Mimica-Duki´c, N. Tandem kütle spektrometrik algılama ile birleştirilmiş yüksek performanslı sıvı kromatografisi ile Urtica dioica ekstraktlarındaki bitki fenoliklerinin kantitatif tayini. Gıda Kimyası 2014, 143, 48–53. [ÇaprazRef]

39. Everette, JD; Bryant, QM; Yeşil, AM; Abbey, YA; Wangila, GW; Walker, RB Çeşitli Bileşik Sınıflarının Folin−Ciocalteu Reaktifine Yönelik Reaktivitesinin Kapsamlı Çalışması. J. Agric. Gıda Kimyası 2010, 58, 8139–8144. [ÇaprazRef]

40. Griffin, S.; Tittikpina, NK; Al-Marby, A.; Alkhayer, R.; Denezhkin, P.; Witek, K.; Gbogbo, KA; Batavila, K.; Duval, RE; Nesim, MJ; et al. Atığı Değere Dönüştürmek: Umut Vaat Eden Antimikrobiyal Aktivitelere Sahip Solanum incanum L. ve Pterocarpus erinaceus Poir'in Nano Boyutlu Doğal Bitki Materyalleri. Eczacılık 2016, 8, 11. [CrossRef]

41. Guidi, L.; Tattini, M.; Landi, M. Kloroplast, Klorofili Aşırı Işığa Karşı Nasıl Korur? Klorofilde; Jacob-Lopes, E., Zepka, LQ, Queiroz, MI, Eds.; InTech: Londra, Birleşik Krallık, 2017.

42. Scheuplein, RJ; Boş, IH Derinin Geçirgenliği. Fizyol. Rev. 1971, 51, 702–747. [CrossRef] [PubMed]

43. Godin, B.; Touitou, E. Transdermal cilt teslimi: in vivo, ex vivo ve hayvan modellerinden insanlar için tahminler. Av. Uyuşturucu Dağıtımı Rev. 2007, 59, 1152–1161. [CrossRef] 44. Pyo, S.; Meinke, MC; Keck, CM; Müller, RH Rutin—Nanokristal Teknolojisi (smartCrystals) ile Artan Antioksidan Aktivite ve Cilt Penetrasyonu. Kozmetik 2016, 3, 9. [CrossRef]

45. Vidláˇrová, L.; Romero, Birleşik Krallık; Hanuš, J.; Štepánek, F.; Müller, RH Dermal penetrasyon geliştirme için Nanokristaller — Bir model olarak kurkumin kullanan konsantrasyonun ve altta yatan mekanizmaların etkisi. Avro. J. Ecz. Biyofarm. 2016, 104, 216–225. [CrossRef] [PubMed]

46. ​​Chaulaman, B.; Jain, A.; Tiwari, A.; Verma, A.; Jain, SK Transdermal yolla protein ilaçlarının pasif iletimi. artif. Hücreler Nanomed. Biyoteknoloji 2018, 46, 472–487. [CrossRef] [PubMed]

47. Lipinski, CA; Lombardo, F.; Hakimiyet, BW; Feeney, PJ İlaç Keşfi ve Geliştirme Ortamlarında Çözünürlüğü ve Geçirgenliği Tahmin Etmek İçin Deneysel ve Hesaplamalı Yaklaşımlar. Av. Uyuşturucu Dağıtımı Rev. 1997, 23, 3–25. [ÇaprazRef]

48. Gediya, S.; Mistry, R.; Patel, U.; Mübarek, M.; Jain, H. Bitkisel Bitkiler: Kozmetik Olarak Kullanılır. J. Nat. Üretim Bitki Kaynağı. 2011, 1, 24–32.

49. Kapoor, S.; Saraf, S. Kuru Cilt Yönetimi İçin Bitkisel Ekstraktlar İçeren Nemlendiricinin Formülasyonu ve Değerlendirilmesi. Eczacılık. J.2010, 2, 409–417. [ÇaprazRef]

50. Dorni, AC; Amalraj, A.; Gopi, S.; Varma, K.; Anjana, S. Bitkilerden yeni kozmesötikler—Endüstri rehberliğinde bir inceleme. J. Uygulama Res. Med. Aromat. Bitkiler 2017, 7, 1–26. [ÇaprazRef]

51. Herman, A.; Herman, AP Esansiyel yağlar ve transdermal ilaç dağıtımı için bir deri penetrasyonu arttırıcı olarak bileşenleri: Bir gözden geçirme. J. Ecz. Eczane. 2014, 67, 473–485. [ÇaprazRef]

For more information:1950477648nn@gmail.com