Demir Takviyesi Yaşlanmayı Geciktirir ve Mitokondriyal Fonksiyonu Güçlendirerek Hücresel Ömrü Uzatır Ⅱ
Mar 23, 2023
3.2. Demir Takviyesi Oksidatif Stres Direncini Artırır
Hücresel yaşlanma ile ilişkilidirartan oksidatif stresbiyolojik sistemlere zarar veren ve yaşa bağlı hastalıkları azaltan [34]. Demir takviyesi yaşlanmayı geciktirdiği için etkisini araştırdık.oksidatif stres. biz bir kullandıkoksidatif stresindükleyici bileşik, hidrojen peroksit (H2O2), hücrelerin oksidatif direncini test etmek için. Hücreler önce demir varlığında SD ortamında durağan faz aşamasına (72 saat) kadar büyütüldü. Bundan sonra, hücreler yıkandı ve farklı konsantrasyonlarda H ile inkübe edildi.2O2 YPD ortamında ve 24 saat boyunca büyüdü.oksidatifstres direnci, H2O2-ile işlenmiş hücrelerin hücre büyümesi, işlenmemiş kontrolle karşılaştırılarak analiz edildi. Demir takviyeli hücrelerin kontrole kıyasla oksidatif strese dirençli olduğunu bulduk (Şekiller2a ve S3). Demir takviyesinin oksidatif strese karşı direnç sağladığını doğrulamak için, H ile demir ve hücre büyümesine BPS eklendi.2O2 analiz edildi. BPS'nin eklenmesi, demir takviyeli hücrelerin oksidatif stres direncini azalttı (Şekil2B). Bu sonuçlar, yaşlanmayı geciktirmede ve hücresel yaşam süresini uzatmada demir takviyesinin rolü ile ilişkilidir.
3.3. Demir Takviyesi Mitokondriyal Fonksiyonları Güçlendirir
Mitokondri, demir kullanımı ve metabolizması için ana hücresel merkezdir [35-38]. Mitokondriyal fonksiyonlardaki düşüş yaşlanma ile ilişkilidir [39-43]. Demir, demir-kükürt kümeleri ve heme içeren proteinler dahil olmak üzere birçok mitokondriyal proteinin kofaktörü olarak görev yapar [44-46]. Bu demir içeren proteinler, mitokondriyal trikarboksilik asit (TCA) döngüsünde ve elektron taşıma zincirinde (ETC) yer alır (Şekil 3a). Demir takviyesi ile hücresel yaşam süresindeki artışın mitokondriyal fonksiyonlar gerektirip gerektirmediğini araştırdık. Bunu test etmek için mitokondriyal TCA döngü genlerinin ifadesini analiz ettik. Demir takviyesinin, birkaç TCA döngü geninin ekspresyonunu önemli ölçüde indüklediğini bulduk (Şekil 3b ve S4a). TCA döngüsü metabolitleri -ketoglutarat ve oksaloasetat, mitokondride kataplerotik reaksiyonlarla glutamat ve aspartat üretebilir (Şekil 3a). Bu amino asitler, proteinlerin, lipidlerin ve nükleotitlerin biyosentezinde kullanılır [47-49]. İlginç bir şekilde, demir takviyeli hücrelerde glutamat (GDH1 ve GDH3) ve aspartat (AAT1 ve AAT2) biyosentetik genlerinin ekspresyonu azalmıştır (Şekil 3c). Bu ifade profili, demir takviyesinin, TCA döngüsü ara maddelerinin tüketimi yerine korumayı desteklediğini öne sürer. Bu fikirle uyumlu olarak, mitokondriyal anaplerotik yol genlerinin (PYC1, PYC2 ve GDH2) gen ekspresyonu, demir takviyeli hücrelerde önemli ölçüde artmıştır (Şekil 3c). PYC1 ve PYC2, piruvatı oksaloasetata dönüştüren piruvat karboksilazı kodlar. GDH2, glutamattan -ketoglutaratı sentezleyen glutamat dehidrojenazı kodlar. Birlikte, bu sonuçlar, demir takviyesinin hücreleri, anaplerozu destekleyen ve katalerozun TCA döngüsü metabolitlerini artırmasını önleyen bir metabolik durumda yapılandırdığını göstermektedir.
Figür 3.Demir takviyesi mitokondriyal fonksiyonları geliştirir. (a) Mitokondriye genel bir bakışTCA (trikarboksilik asit) döngüsü ve ETC (elektron taşıma zinciri) ile majör kataplerotik veanaplerotik reaksiyonlar gösterilmektedir. (b) Prototrofik maya suşu 100 ile inkübe edildiµM FeSO4 ve bir SD ortamında 30°C'de 8 saat büyütüldü◦C. RNA, kültürlerden ekstrakte edildi vebelirtilen TCA döngü genlerinin ifadesi, kantitatif RT-PCR ile analiz edildi. (c) İfadekataplerotik genlerin analizi (GDH1, GDH3, AAT1,VeAAT2) ve anaplerotik genler (PYC1, PYC2,VeGDH2) kantitatif RT-PCR ile yapıldı. (d) ETC genlerinin ekspresyon analizi,kantitatif RT-PCR. İstatistiksel anlamlılık (*p < 0.05) was determined by Student's t-Ölçek.
TCA döngüsü reaksiyonları NADH ve FADH üretir2 ETC kompleksleri I ve II tarafından oksitlenen ve TCA döngüsünün işlevselliği için gerekli olan (Şekil3A). RağmenS. cerevisiaekompleks I'den yoksundur, indirgeyici eşdeğerler NADH dehidrojenazlar yoluyla solunum zincirine aktarılır. Süksinat dehidrogenaz merkezi bir rol oynar ve hem TCA döngüsüne hem de ETC kompleksi II'ye katılır (Şekil3A). Çarpıcı bir şekilde, süksinat dehidrogenazın ifadesi (SDH1VeSDH2) analiz edilen tüm TCA döngü genleri arasında oldukça yukarı regüle edildi (Şekil3b,d). Bu sonuçlar, TCA döngü akışının belirli bir ara ürünü biriktirmek yerine ETC'ye doğru devam ettiğini göstermektedir. Benzer şekilde, ETC komplekslerinin diğer tüm genlerinin ekspresyonu, demir takviyeli hücrelerde yüksek oranda yukarı regüle edildi (Şekil3D). ETC, ifadesini düzenleyen reaktif oksijen türlerinin (ROS) üretimi ile ilişkilidir.SOD2gen [50]. Mitokondriyal süperoksitin ana temizleyicisi olan bir manganez-süperoksit dismutazı (MnSOD) kodlar.SOD2gen ekspresyonu, ETC genlerinin ekspresyonu ile tutarlı olan demir takviyeli hücrelerde (Ek Şekil S4a) yukarı doğru düzenlenmiştir. ETC kompleksleri I, III ve IV'ün proton pompaları tarafından üretilen mitokondriyal membran potansiyelini (MMP) ayrıca analiz ettik. Demir takviyesinin hücrelerin MMP'sini arttırdığını bulduk (Ek Şekil S4b). Daha sonra floresan mikroskobu kullanarak mitokondri yapısını inceledik. Demir takviyesinin mitokondri parçalanmasını önlediğini bulduk (Ek Şekil S4c). Toplamda, bu sonuçlar demir takviyesinin hücrelerin mitokondriyal fonksiyonlarını güçlendirdiğini göstermektedir.
3.4. Demir Takviyesi Hücre Ömrünün Uzatılması için Gerekli ATP Düzeyini Artırır
Mitokondriyal TCA döngüsü reaksiyonları, elektronları ETC'ye aktaran ve oksidatif fosforilasyon (OXPHOS) yoluyla adenozin trifosfat (ATP) üreten indirgeyici eşdeğerler NADH ve FADH2 üretir (Şekil3A). TCA döngüsünün ve ETC genlerinin ifadesi, demir takviyesi ile geliştirildiğinden, bunun ATP sentezi üzerindeki etkisini test ettik. Mitokondriyal TCA döngüsünün ekspresyon profili ile uyumlu olarak, demir takviyeli hücrelerde ETC gen ekspresyonu ve ATP seviyeleri yüksekti (Şekil4A). Daha sonra demir takviyeli hücrelerin ömrünün uzatılması için ATP'nin gerekli olup olmadığını sorduk. ATP sentezini inhibe ettik ve mayanın CLS'sini ölçtük. Antimisin A (AMA), kompleks III'e bağlanan ve mitokondriyal ETC'de elektron transferini bloke eden bir ATP sentezi inhibitörüdür.51]. İlk önce ATP seviyesini inceledik ve AMA tedavisinin ATP sentezini inhibe ettiğini bulduk (Şekil4B). AMA'nın demir takviyeli hücrelerin hücresel ömrü üzerindeki etkisini daha da test ettik. Maya hücreleri, SD ortamında demir ve AMA ile inkübe edildi. Hücrelerin büyümesi 24 saat sonra doygunluğa ulaştı (Ek Şekil S5). Daha sonra sağkalımı ölçtük ve AMA tedavisinin demir takviyesi aracılı yaşam süresinin uzamasını engellediğini bulduk (Şekil4C). Birlikte, bu bulgular demir takviyesinin hücre ömrünün uzatılması için gerekli olan ATP seviyesini arttırdığını ortaya koymaktadır. Ayrıca AMA ile tedavi edilen hücrelerin ömrünün kontrolden daha düşük olduğunu gözlemledik (Şekil4c), ayrıca ATP'yi sentezleyememenin ömrü tehlikeye attığını doğrular.
3.5. Demir Takviyesi, AMPK Nakavt Mutantının Hızlandırılmış Yaşlanmasını Önler
AMPK, hücresel enerji homeostazının ana düzenleyicisidir [20,21]. AMPK'nın mayada yüksek oranda korunmuş insan analoğuS. cerevisiaeSnf1 proteinidir [52]. AMPK, enerji sınırlı koşullar altında ATP üretmek için mitokondriyal fonksiyonları aktive eder. Son raporlar, yaşla birlikte mitokondriyal fonksiyonlardaki düşüşün, farklı yaşlı organizmalarda kısmen AMPK'nin bozulmuş aktivitesi yoluyla meydana geldiğini göstermiştir.53,54]. Bu nedenle, AMPK aktivitesinin yokluğu mitokondriyal fonksiyonları etkiler ve yaşlanmanın ve yaşam süresinin en kritik belirleyicileri olan metabolizma, strese direnç ve hücre sağkalımını içeren çok sayıda hücresel fonksiyonu tehlikeye atar. Önceki çalışmalarla tutarlı olarak, bizbulundusnf1nakavt mutasyon ATP seviyesini, oksidatif strese direnci ve yaşam süresini tehlikeye attı (Şekil5a–c).
Şekil 5.Demir takviyesi, AMPK nakavt mutantının hızlandırılmış yaşlanmasını kurtarır. bumaya prototrofik vahşi tip ve AMPK nakavt mutant (snf1∆) suşlar durağan hale getirildi30°C'de 72 saat boyunca SD ortamda faz◦C. (a) Yabani tip ATP analizi vesnf1∆ suşlar. (b) Oksidatifvahşi tip stres analizi vesnf1∆ farklı H ile suşlar2O2 konsantrasyonlar. (c) Kronolojikyabanıl tip yaşam boyu (CLS) analizi vesnf1∆ suşlar. (d) Yabani tip ATP analizi vesnf1∆ suşlarFeSO farklı konsantrasyonlarda inkübe4. (e) Vahşi tipte oksidatif stres analizi vesnf1∆ farklı konsantrasyonlarda FeSO ile inkübe edilen suşlar4. (f) Yabani tip CLS analizi vesnf1∆ farklı konsantrasyonlarda FeSO ile inkübe edilen suşlar4. İstatistiksel anlamlılık (*p < 0.05) was determinedÖğrenci tarafındant-Ölçek.
Berisnf1mutant mitokondriyal fonksiyonlarda kusurluysa, demir takviyesinin hızlandırılmış yaşlanma fenotiplerini kurtarıp kurtaramayacağını test ettik. Bu nedenle demir takviyesi yaptık.snf1mutant ve ATP seviyesini, oksidatif stresi ve yaşam süresini analiz etti. Demir takviyesinin ATP seviyesini, oksidatif strese direnci ve yaşam süresini artırdığını bulduk (Şekil5d–f). Toplamda, bu bulgular demir takviyesinin yaşlanmayı geciktirdiğini ve mitokondri fonksiyonlarını artırarak hücresel ömrü uzattığını doğruladı.
4. Tartışma
Besinler, hücrelerin işlevsel durumunu belirler ve temel besin maddelerinin eksikliği insan sağlığını tehlikeye atar.55,56]. Ayrıca, besinler, aşağıdakiler de dahil olmak üzere çeşitli biyolojik süreçleri kontrol eden hücresel metabolizmanın ana düzenleyicileridir.yaşlanma, birkaç önemli risk faktörükronik hastalıklar. düşüşmetabolik aktiviteayırt edici özelliklerinden biridiryaşlanma [10]. Memeliler de dahil olmak üzere farklı organizmalarda yapılan son araştırmalar, rapamisin ve metformin ilaç uygulaması dahil olmak üzere yaşlanma karşıtı müdahalelerle yaşlanmayı geciktirmenin ve sağlık süresini artırmanın mümkün olduğunu göstermiştir.11,16]. Bu ilaçlar, hücrelerin önemli metabolik düzenleyicileri olan besin algılayan kompleksler TORC1 ve AMPK'yi hedefler.11,16].
Demir, hücrelerde birkaç önemli metabolik reaksiyonda yer alan temel bir besindir [10].23–26]. Demir eksikliği, metabolik aktiviteyi bozarak hücresel fonksiyonların bozulmasına neden olarak anemi, bilişsel bozukluk ve hafıza kaybı gibi birçok hastalığa yol açar.kas gücü [26,57–59]. Demir eksikliği yaşlı popülasyonlarda yaygındırBüyük veya eşittir65 yıl60–62].
Demir metabolik süreçleri düzenlediği için yaşlanmadaki rolünü araştırdık. Demirin kronolojik yaşlanmadaki rolünü incelemek için mayayı model organizma olarak kullandık. Demir takviyesinin mayanın CLS'si üzerindeki etkisini araştırdık. Hem FeSO'yu bulduk4 ve FeCl3 hücre ömrünü uzatmıştır. Farklı sülfat, klorür ve demir şelatör tuzları kullanarak, hücre ömrünün demir tarafından uzatıldığını doğruladık. Yaşlanma, hücresel fonksiyonlara zararlı olan ve hücre sağkalımını azaltan oksidatif stresin kademeli olarak birikmesiyle ilişkilidir.34]. Demir takviyesinin yaşlanmayı geciktirdiğini bulduğumuz için oksidatif strese karşı direnç sağlayıp sağlayamayacağını test ettik. Oksidatif stres fenotipini incelemek için hücrelere oksidatif indükleyici ajan H ile muamele ettik.2O2 ve hücre sağkalımını ölçtü. Demir takviyesinin kontrole kıyasla oksidatif stres direncini arttırdığını bulduk. Bu bulgular, yaşam süresinin uzatılmasında demir takviyesinin rolü ile ilişkilidir.
Demir takviyesinin yaşlanma karşıtı mekanizmasını daha da çözdük. Mitokondri, demir kullanımı ve metabolizmasının ana hücresel tüketicileridir.35–38]. İlk önce mitokondriyal TCA döngü genlerinin ifadesini analiz ettik. Neredeyse tüm TCA döngüsü genlerinin ifadesinin demir takviyesi ile yukarı doğru düzenlendiğini bulduk. Önemli olarak, demir takviyesi, mitokondriyal anaplerozun ekspresyonunu azalttı ve kataplerotik metabolik genleri yukarı doğru düzenledi. Bu sonuçlar, demir takviyesinin TCA döngüsü ara maddelerinin sentezini arttırdığını ve bunların hücresel kullanımını önlediğini ortaya koymaktadır. Bu bulgular, TCA döngüsü ara maddelerinin düzenli ihracatı mitokondriyal bütünlüğü etkilediğinden, demir takviyesinin yaşlanma karşıtı aktivitesini desteklemiştir.47]. Dahası, mitokondriyal karbon havuzunu yenilemek, hücresel yaşlanma sırasında hayatta kalmak için gerekli olan mitokondriyal fonksiyonları sürdürmek için esastır.
TCA döngüsü ara maddesi -ketoglutaratın farklı organizmaların ömrünü uzattığı gösterilmiştir [63]. Bununla birlikte, demir takviyesinin ifadeyi arttırdığını bulduk. -ketoglutarat dehidrogenaz (KGD1VeKGD2) hangi dönüştürür - süksinil-CoA oluşturmak için ketoglutarat. Ayrıca süksinat dehidrojenaz genlerinin (SDH1VeSDH2), TCA döngüsünün test edilen diğer genleri arasında oldukça yukarı regüle edildi. Daha da önemlisi, süksinat dehidrogenaz hem TCA döngüsüne hem de ETC kompleksi II'ye katılır. Bu sonuçlar, belirli bir TCA döngüsü ara ürününü biriktirmek yerine, demir takviyesinin yaşlanma karşıtı aktivitesinin ETC yolunu içerebileceğini öne sürdü.
TCA döngüsü fonksiyonel olarak ETC ile bağlantılı olduğundan, ETC genlerinin ekspresyonunu analiz ettik. Demir takviyesinin, ETC genlerinin ekspresyonunu oldukça yukarı doğru düzenlediğini bulduk. TCA döngüsü ürünleri NADH ve FADH2 ETC kompleksleri tarafından oksitlenir ve OXPHOS yoluyla ATP üretir. Demir takviyesinin, TCA döngüsü ve ETC genlerinin yukarı regülasyonu ile ilişkili olan hücresel ATP seviyesini arttırdığını bulduk. Daha sonra, hücre ömrünün uzatılması için demir takviyesi ile ATP seviyesindeki artışın gerekli olup olmadığını açıkladık. Demir takviyesi ile yaşam süresinin uzatılmasının, ATP sentezini inhibe ederek ortadan kaldırıldığını bulduk. Dolayısıyla bu bulgular, demir takviyesinin hücre ömrünü uzatmak için gerekli olan ATP seviyesini arttırdığını düşündürmektedir. Sonuçlarımız, ATP'nin hücresel yaşam süresindeki rolünü gösteren önceki raporlarla tutarlıdır [51,64,65]. Ayrıca, mitokondriyal fonksiyonları geliştirmek için demir takviyesi kullandık ve AMPK mutantının kısa ömrünü ve oksidatif strese duyarlı fenotipini kurtardık. Toplamda, bu sonuçlar demir takviyesinin yaşlanmayı geciktiren ve hücrelerin ömrünü uzatan mitokondriyal fonksiyonları güçlendirdiğini ortaya koydu.
Son araştırmalar, demir takviyesinin lizozom bozukluğu olan mutantların mitokondriyal kusurunu düzelttiğini ve yaşlanma sırasında mitokondriyal düşüşü önlediğini göstermiştir.66,67]. Bu nedenle, sonuçlarımız, demir takviyesinin mitokondriyal fonksiyonları iyileştirdiğine dair önceki bulguları desteklemektedir. İlginç bir şekilde, daha önceki çalışmalardan biri, demir takviyesinin lizozom bozukluğu olan mutantların hızlandırılmış replikatif yaşlanmasını kurtardığını gösterdi; Ancakvahşi tip hücreler üzerindeki etkisi rapora dahil edilmedi [67]. Bununla birlikte, sonuçlarımız önceki bulgularla ilişkilidir ve farklı yaşlanma modellerine (kronolojik yaşlanma) rağmen, demir takviyesinin yaşlanmayı geciktirdiğini ve hücresel ömrü artırdığını bulduk. Bu nedenle, toplu olarak, sonuçlarımız ve önceki raporlarımız, demir takviyesinin yaşlanmayı hedeflemek ve sağlık süresini uzatmak için potansiyel bir terapötik olabileceğini açıkça göstermektedir.
Tamamlayıcı Malzemeler:Şekil S1: Demir takviyeli maya hücrelerinin büyüme ve kronolojik ömür analizi; Şekil S2: Farklı demir, sülfat ve klorür içeren tuzlarla takviye edilmiş maya hücrelerinin büyüme analizi; Şekil S3: Demir takviyeli maya hücrelerinin oksidatif stres direnci analizi. Şekil S4: Demir takviyeli maya hücrelerinin mitokondriyal gen ekspresyonu, membran potansiyeli ve yapı analizi; Şekil S5: Demir ve antimisin A takviyeli maya hücrelerinin büyüme analizi; Tablo S1: Bu çalışmada RT-PCR için kullanılan primerlerin listesi.
Yazar Katkıları:JLJ: Metodoloji, Biçimsel analiz, Araştırma ve Gözden Geçirme; TCYN: Metodoloji, Biçimsel analiz, Araştırma ve İnceleme; FN: Doğrulama, Biçimsel analiz ve Gözden Geçirme; FE: İnceleme, Düzenleme ve Denetleme; MA: Kavramsallaştırma, Veri iyileştirme, Metodoloji, Yazma, İnceleme, Düzenleme ve Denetim. Tüm yazarlar makalenin yayınlanan versiyonunu okudu ve kabul etti.
Finansman:Bu çalışma Biyoinformatik Enstitüsü (BII), A*STAR Kariyer Geliştirme Fonu (C210112008) ve Küresel Sağlıklı Uzun Ömür Katalizörü Ödülleri hibesi (MOH-000758-00) tarafından desteklenmiştir.
Teşekkür:Bu araştırmayı destekledikleri için Maurer-Stroh Sebastian, Lee Hwee Kuan, Loo Lit Hsin, Chiam Keng Hwee ve Prakash Arumugam'a teşekkür ederiz.
Çıkar çatışmaları:Yazarlar, birbiriyle rekabet eden mali ve mali olmayan çıkarlar beyan etmemektedir.
Referanslar
1. Bloom, DE; Canning, D.; Lubet, A. Küresel Nüfus Yaşlanması: Gerçekler, Zorluklar, Çözümler ve Perspektifler.Chall. Çözücü. Perspektif. Daedalus2015, 144, 80–92.
2. Birleşmiş Milletler Ekonomik ve Sosyal İşler Departmanı, Nüfus Bölümü.Dünya Nüfus Beklentileri 2019; Öne Çıkanlar (ST/ESA/SERA/423); BM: New York, NY, ABD, 2019.
3. Robin, J.Yaşlanan Nüfuslar: Daha Uzun Yaşıyoruz, Ama Daha Sağlıklı mıyız?Birleşmiş Milletler, Ekonomi ve Sosyal İşler Departmanı, Nüfus Bölümü: New York, NY, ABD, 2021; UN DESA/POP/2021/TP/NO.
4. Nicoli, T.; Partridge, L. Hastalık için bir risk faktörü olarak yaşlanma.Curr. Biol.2012, 22, R741–R752. [çapraz referans] [PubMed]
5. Hou, Y.; Dan, X.; Babbar, M.; Wei, Y.; Hasselbalch, SG; Croteau, DL; Bohr, VA Nörodejeneratif hastalık için bir risk faktörü olarak yaşlanma.Nat. Rahip Neurol.2019, 15, 565–581. [çapraz referans] [PubMed]
6. Harman, D. Yaşlanma süreci: Hastalık ve ölüm için ana risk faktörü.İşlem Natl. Acad. bilim Amerika Birleşik Devletleri1991, 88, 5360–5363. [çapraz referans] [PubMed]
7. Partridge, L.; Deelen, J.; Slagboom, PE Yaşlanmanın küresel zorluklarıyla yüzleşmek.Doğa2018, 561, 45–56. [çapraz referans] [PubMed] 8. Fontana, L.; Kennedy,
Bk; Uzun, VD; Mühürler, D.; Melov, S. Tıbbi araştırma: Yaşlanmayı tedavi edin.Doğa2014, 511, 405–407. [çapraz referans] [PubMed]
9. Fontana, L.; Partridge, L.; Longo, VD Mayadan insanlara uzanan sağlıklı yaşam süresi.Bilim2010, 328, 321–326. [çapraz referans] [PubMed]
10. López-otín, C.; Blasco MA; Partridge, L.; Serrano, M.; Kroemer, G. Yaşlanmanın ayırt edici özellikleri.Hücre2013, 153, 1194–1217. [çapraz referans]
11. Partridge, L.; Fuentealba, M.; Kennedy, BK İlaç keşfi yoluyla yaşlanmayı yavaşlatma arayışı.Nat. Rev. Drug Discover.2020, 19, 513–532. [çapraz referans]
12. Zimmermann, A.; Hofer, S.; Pendl, T.; Kainz, K.; Madeo, F.; Carmona-Gutierrez, D. Yaşlanma karşıtı bileşikleri tanımlamak için bir araç olarak maya.FEMS Maya Çöz.2018, 18, foy020. [çapraz referans]
13. Kaeberlein, M.; Burtner, CR; Kennedy, BK Maya yaşlanmasında son gelişmeler.PLoS Genet.2007, 3, e84. [çapraz referans]
14. Longo, VD; Şadel, GS; Kaeberlein, M.; Kennedy, B. Replikatif ve kronolojik yaşlanmaSaccharomyces cerevisiae. Hücre Metab.2012, 16, 18–31. [çapraz referans] 15. Longo, VD; Fabrizio, Saccharomyces cerevisiae'de P. Kronolojik Yaşlanma.Yaşlanma Arş. Maya2011, 57, 101–121. [çapraz referans]
16. Kulkarni, AS; Gubi, S.; Barzilai, N. Yaşlanmanın Belirginliklerini Azaltmada Metforminin Faydaları.Hücre Metab.2020, 32, 15–30. [çapraz referans]
17. Alfatah, M.; Wong, JH; Krishnan, VG; Lee, YÇ; Günah, QF; Tanrım, CJH; Kong, KW; Lee, WT; Lewis, J.; Hoon, S.; et al. TORC1, Saccharomyces cerevisiae'de Tap42-Sit4-Rrd1/2 yolu aracılığıyla glukoza transkripsiyonel yanıtı ve gelişim döngüsünü düzenler.BMC Biol.2021, 19, 1–22. [çapraz referans]
18. Saxton, RA; Sabatini, büyüme, metabolizma ve hastalıkta DM mTOR sinyali.Hücre2017, 168, 960–976. [çapraz referans]
