Cistanche Kemik Sağlığına Nasıl Yardımcı Olabilir?

Temas:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

[Özet]Nesnel:Böbrek tonlaştırıcı geleneksel Çin tıbbının neden olduğu kemik iliği mezenkimal kök hücrelerinin (MSC'ler) yönlü farklılaşmasını incelemek ve "böbrek kemik ve iliği yönetir" teorisini detaylandırmak. Yöntem: Geleneksel Çin Tıbbı Sıvısı

Cistanche (Sistanşe)ekikosidrahatlatabilirosteoporoz

SD sıçanlar 4 gün boyunca intragastrik olarak uygulandı ve daha sonra ilaçlı serum hazırlamak için abdominal aorttan kan toplandı. 4. nesil M SC'ler, her biri 6 kuyulu, boş gruplara ayrılmış, 5×106'da iki adet 6 kuyucuklu plakaya aşılandı.

Morinda officinalis grubu, eucommia ulmoides grubu, psoralen grubu,cistanchegrup, epimedium grubu. Hücreler% 80'e ulaştığında, her geleneksel Çin tıbbı grubuna ilaç içeren serum LD M EM ortamı eklenir ve boş grubun orijinal ortamı kültürlenmeye devam edilir; indüksiyonun 10. gününde, ALP boyama için 6 delikli bir plaka çıkarılır; diğeri ise 20. günde Alizarin Kırmızı ile lekelenmiş 6 kuyu. Bulgular: Morinda officinalis grubu, Eucommia ulmoides grubu,Cistanche (Sistanşe)grup, Epimedium grubu 10. günde pozitif ALP boyaması, 14. gün civarında beyaz kalsiyum nodülleri ve 20. gün Alizarin kırmızısı boyaması pozitif görüldü. Sonuç: "Böbrek

"Ana kemik ve ilik" teorisi tarafından yönlendirilen böbrek tonlandırıcı Çin tıbbıkemikkemik iliği mezenkimal kök hücreleri osteoblastlara farklılaşmak için.

Anahtar Kelimeler: kemik iliği mezenkimal kök hücreleri; osteoblastlar; yönlendirilmiş farklılaşma

Geleneksel Çin tıbbı, böbreklerin baskın olduğuna inanmaktadır.kemikler, özü depolar ve ilik üretir. Hem klinik hem de deneysel çalışmalar bu teorinin klinik yol gösterici önemini doğrulamıştır, ancak kemik iliği mezenkimal kök hücrelerinin (MSC'ler) farklılaşmasının indüksiyonu üzerine hiçbir araştırma yapılmamıştır. M SC'ler, esas olarak kemik iliğinde, aynı zamanda deri fibroblastları, yağ kök hücreleri, iskelet kası uydu hücreleri ve vasküler endotel hücreleri gibi embriyonik dönemde mezenkimal kökenli ekstraosseöz dokularda bulunan bir tür pluripotent yetişkin kök hücrelerdir. Kemik iliği M SC'ler (BM SC'ler) kemik iliği stromasının bileşenleridir. İn vitro olarak izole edildikten ve kültürlendikten sonra, belirli indüksiyon koşulları altında, osteoblastlara, kondrositlere, sinir hücrelerine, adipositlere, kardiyomiyositlere vb. birçok yönden farklılaşma yeteneğine sahiptirler. Kemik dokusu mühendisliğinde tohum hücrelerinin ana kaynakları osteoblastlar ve BMSC'lerdir. Osteoblastlar iyi osteojenik aktiviteye sahip olmalarına rağmen, kaynak olarak sınırlıdırlar, büyük miktarlarda izole edilmeleri ve elde edilmeleri zordur ve kemik dokusu mühendisliğindeki klinik uygulamaların ihtiyaçlarını karşılaması zor olan in vitro büyük ölçekli genişleme için yetersiz potansiyele sahiptirler; BM SC'ler sadece iyi osteoblast farklılaşma potansiyeline ve yüksek farklılaşma potansiyeline sahip değildir. Osteojenik aktivite, güçlü proliferasyon potansiyeli ve uygun kaynak otolog doku mühendisliğini tatmin edebilir.

Cistanche (Sistanşe)ekikosidtedavi edebilirosteoporoz

1 Gereç ve yöntemler

1.1 Malzeme

1.1.1 Deney hayvanları

120 g ~ 150 g ağırlığındaki on iki SPF SD sıçanı, Guangzhou Geleneksel Çin Tıbbı Üniversitesi Deney Merkezi tarafından sağlanan erkekler ve dişilerle sınırlı değildir.

1.1.2 Reaktifler ve ekipman Haiclone L-DM EM medium, Haiclone Güney Amerika Fetal Sığır Serumu (FBS), Morinda officinalis, Psoralen, Eucommia, Cistanche, Epimedium Çin tıbbi tozu, DM SO (sigma), Alizarin kırmızısı (Guangzhou Weijia), alkalen fosfataz lekesi (Nanjing Jiancheng Biological Co., Ltd.), 0.25% pankreatin (GI BCO şirketi). 0.22μm şırınga filtresi (M I LL Ipo re), 75cm2 kültür şişesi, 96 delikli plaka, 6 delikli plaka (korniş). Döner evaporatör, mikroplaka okuyucu (Termo), soğutmalı santrifüj (sigma 3K 15), CO2 inkübatörü (SH ELDO NA şirketi).

1.2 Yöntem

1.2.1 Geleneksel Çin tıbbı içeren serum hazırlanması

150 g ham Çin tıbbi tozu alın,% 70 etanol miktarının 10 katını ekleyin, iki kez reflü için ısı, her seferinde 1 saat, filtreleyin, filtradı birleştirin, filtradı 300 ml'ye düşürülmüş basınç altında yoğunlaştırın, oda sıcaklığında soğutun ve daha sonra kullanmak üzere 4 ° C'de bir buzdolabında saklayın. Geleneksel Çin tıbbı sıvısını 0.3 g ham ilaç / ml ve gavage, her seferinde 1 ml, günde iki kez, 4 gün boyunca sürekli uygulamadan sonra, abdominal aorttan kan toplanır, gece boyunca çökelttikten sonra, 20 dakika boyunca 2500r'de santrifüj edilir, süpernatan ve iğneyi toplayın Filtreden sterilize edin ve -20 ° C'de saklayın.

1.2.2 MSC'lerin ayrılması ve kültürü

SD sıçanlar karın boşluğundan anestezi yapıldıktan sonra, her iki alt ekstremitenin femuru ve tibiası aseptik koşullar altında çıkarıldı ve yumuşak dokular temizlendi, kemik uçları rongeurlarla kesildi, medüller boşluk açığa çıkarıldı ve 10 ml'lik şırınga, % 10 fetal sığır serumu içeren L-DM EM'i emmek için kullanıldı. Medüller boşluğu, kemik beyaz görünene ve ışık geçirgenliği artana kadar ortamla tekrar tekrar yıkayın. Medüller kavite yıkama sıvısını 75 cm2'lik bir kültür şişesinde toplayın ve 37 °C,% 5 CO 2 inkübatöre yerleştirin. Sıvıyı her 2 ila 3 günde bir değiştirin.

1.2.3 MSC'lerin geçişi

Hücreler% 90 şişenin dibinden dolu olduğunda,% 0.25 tripsin ile sindirilir, daha sonra bir hücre süspansiyonuna pipetlenir ve 1: 3 oranında geçirilir.

1.2.4 MSC'ler farklılaşmaya neden olur

P4 hücreleri% 90 büyüdüğünde, bir hücre süspansiyonu hazırlamak için% 0.25 tripsin ile sindirilirler. Hücreler, kuyu başına 5×106 hücre yoğunluğuna sahip 2 adet 6 kuyucuklu plaka halinde ve plaka başına 6 kuyucuk halinde tohumlanır. Boş gruba ayrılır, Morinda officinalis grubu, Psoralen grubu, Eucommia ulmoides grubu, Cistanche cistanche grubu, epimedium grubu. Hücreler% 80'i şişenin dibiyle dolu olduğunda, ortam değiştirildi. Boş grubun orijinal ortamı kültürlenmeye devam edildi ve Çin tıbbı grubuna% 10 Çin tıbbı içeren serum içeren L-DM EM ortamı eklendi.

1.2.5 Alkali fosfataz boyama

İndüksiyon kültürünün 10. gününde, 6 delikli bir plaka çıkarıldı ve alkali fosfataz boyama kitinin yöntemine göre boyandı. Sonuçları mikroskop altında gözlemleyin.

1.2.6 Alizarin kırmızısı boyama

İndüksiyon kültürünün 20. gününde, 6 delikli bir plaka çıkarın, osteoblast indüksiyon çözeltisini aspire edin, P BS ile 3 kez yıkayın, 10 dakika boyunca% 95 alkolle sabitleyin,% 0.1 Alizarin Red-Tr is-HCl (pH 8.3), 30 dakika boyunca 37 °C su banyosu ekleyin, sonuçları mikroskop altında gözlemleyin.

Cistanche (Sistanşe)ekikosidapoptoza karşı koyabilir ve teşvik edebilirkemikbüyüme

2 Sonuçlar

2.1 Hücre morfolojisi gözlemi

MSC'ler, duvara tutturulduktan sonra bir fusiform oluşturan fibroblast benzeri hücrelerdir (bkz. Şekil 1). İndüksiyon çözeltisini ekledikten sonra, boş gruptaki hücreler önemli ölçüde değişmedi; 3. günden itibaren, Morinda officinalis grubu, Eucommia ulmoides grubu, Cistanche deserticola grubu ve Epimedium grubundaki hücreler, hücrelerin toplu büyümesini ve hücre hacminin biraz arttığını gösterdi (bkz. Şekil 2), 14 gün sonra, arka mikroskop altında belirgin nodül oluşumu görüldü (bkz. Şekil 3). Psoralen grubunun hücrelerinde belirgin bir değişiklik yoktu.

2.2 Alkali fosfataz boyama

10. günde Morinda officinalis grubu, Eucommia ulmoides grubu, Cistanche cistanche grubu ve Epimedium grubu alkalen fosfataz ile boyandı. Hücre toplanma alanının mor ve siyah olduğu (bkz. Şekil 4) ve hücre dağılımının mavi olduğu görülmüştür (bkz. Şekil 5). ). Psoralen grubu ve boş grup negatifti.

2.3 Alizarin Kırmızı Boyama

21. günde, Morinda officinalis grubu, Eucommia ulmoides grubu, Cistanche grubu, Epimedium grubu Alizarin Kırmızısı, 6 delikli plakanın dibinde beyaz granüler maddeyi ve boyama sonrası koyu kırmızıyı boyadı. Jitian grubu, psoralen grubu, ökomi grubu, cistanche grubu, epimedium grubu. Mikroskop altında, hücre toplanma alanında kalsiyum nodülleri olan kırmızı parçacıklar vardır (Şekil 6). Psoralen grubu ve boş grup negatifti.

3 Tartışma

3.1 Geleneksel Çin tıbbı içeren serum hazırlanması

Geleneksel Çin tıbbının bileşimi karmaşıktır ve her bir bileşeni incelemek zordur. Serum farmakolojisi, geleneksel Çin tıbbı preparatlarının fiziksel ve kimyasal özellikleri gibi belirsiz faktörlerin deneysel sonuçlara müdahalesinin bir dereceye kadar üstesinden gelebilir ve ilacın vücuttaki gerçek biyotransformasyonuna nispeten yakındır.

Gerçek süreç. Yani, iki ana avantajı vardır: (1) Vücuttaki bileşiğin biyokimyasal dönüşüm etkisini yansıtır;

(2) İlacın kendisinin fiziksel ve kimyasal özelliklerinin deney üzerindeki doğrudan müdahalesinin üstesinden gelinir [1].

Hem serum preparatı hem de M SC türevi hayvanlar SD sıçanlardır ve homolog hayvanlar, tür farklılıklarının neden olduğu bağışıklık tepkisini azaltabilen ve hayvan metabolizmasını dikkate alarak deneysel sonuçların güvenilirliğini artırabilen serum hazırlamak için kullanılır [2]. Farklı, ağırlık almak, vücut yüzey alanı dönüştürme yöntemini uygulamak. Bazı insanlar, in vitro deneyler için kullanılan hücreler, virüsler, patojenler ve dokular ve organlar üzerinde doğrudan etkisi olabilecek birçok enzim, anti-vücut, kompleman, sitokinler ve diğer biyolojik olarak aktif maddeler olduğunu, bunların deneylerin sonuçlarına müdahale edebileceğini ve ilaç etkinliğinin objektif değerlendirmesini etkileyebileceğini düşünmektedir. Serum inaktivasyonu sonrası farmakolojik girişim [3]. Bununla birlikte, geleneksel Çin tıbbının bileşenleri karmaşıktır ve vücut üzerindeki farmakolojik etkiler karmaşıktır. İnaktive edilmemiş serum, ilacın vücuttaki etkilerini daha iyi yansıtabilir ve deney sırasında sitotoksik etki görülmemiştir.

3.2 Böbrek tonlayıcı Çin tıbbının MSC'lerin yönlendirilmiş farklılaşması üzerindeki indükleyici etkisi

Kemik iliği M SC'ler (BM SC'ler) kemik iliği stromasının bileşenleridir. İn vitro olarak izole edildikten ve kültürlendikten sonra, belirli indüksiyon koşulları altında, osteoblastlara, kondrositlere, nörositlere, adipositlere, kardiyomiyositlere vb. birçok yönden farklılaşma yeteneğine sahiptirler. Deneysel çalışmalar, hem ünite geleneksel Çin tıbbının [4] hem de bileşik böbrek tonlaştırıcı Çin tıbbının [5] MSC'leri osteoblastlara farklılaşmaya teşvik etme etkisine sahip olduğunu göstermiştir. Deneyde, psoralen'in dışında, "böbreği tonlama ve kemikleri ve kasları güçlendirme" etkilerine sahip beş ilaçtan hazırlanan beş Çin tıbbi serumu, M SC'lerin osteoblastlara farklılaşmasını indükleyebilir, ancak spesifik mekanizma daha fazla çalışılmaya devam etmektedir.

3.3 Böbrek tonlaştırıcı geleneksel Çin tıbbı içeren serumun MSC'leri osteoblastlara farklılaşmaya teşvik etmek için klinik önemi.

Kemik dokusu mühendisliği, klinik uygulamalar için geniş beklentilere sahiptir ve modern ortopedide bir araştırma noktası haline gelmiştir. BM SC'ler, şu anda kemik dokusu mühendisliği için en ideal tohumlar olarak, bu engelleyici faktörlerin deneysel sonuçlar üzerindeki etkisini ortadan kaldırabilir ve serumun hücresel olmayan içeriğini azaltmaya yardımcı olabilir. Etkisi üzerine yapılan araştırmaların merkezi görevi, mümkün olan en basit koşullar altında nasıl yapılacağıdır. Doğrudan osteoblastlara farklılaşır ve daha sonra olgun kemik hücrelerine dönüşür. Şu anda, M SC'lerin osteoblastlara farklılaşması için yaygın olarak kullanılan indükleyiciler deksametazon, C vitamini ve β-gliserofosfat sodyumdan oluşur. Klinik olarak, deksametazonun enfeksiyon, osteonekroz ve osteoporoz gibi yan etkileri vardır ve in vitro hücre proliferasyonu üzerinde önemli bir inhibitör etkiye sahiptir [6, 7], bu da MSC'lerin transplantasyondan sonra indükleyici olarak kullanımını sınırlayacaktır. Böbrek tonlaştırıcı Çin tıbbı, MSC'leri osteoblastlara farklılaşmaya teşvik etme etkisine sahiptir. Uzun süreli klinik uygulamada, böbrek tonlayıcı Çin tıbbının toksik ve yan etkileri görülmemiştir. Bu nedenle, in vivo bir indükleyici olarak kullanımı geniş bir klinik uygulama beklentisine sahiptir.

Kısacası, kemik dokusu mühendisliği için tohum hücreleri olarak M SC'ler üzerine yapılan mevcut araştırmaların çoğu hala deneysel aşamadadır. Kısa sürede yeterli M SC'lerin nasıl elde edileceği ve basit yöntemlerle osteoblastlara farklılaşmalarının nasıl sağlanacağı şu anda çalışılmaktadır. Odak. Böbreği canlandırma ve kemikleri ve kasları güçlendirme etkileri olan geleneksel Çin ilaçları, M SC'leri osteoblastlara farklılaşmaya teşvik edebilse de, gecikmiş birleşme, birleşmeme ve kırıkların osteoporozunun tedavisi için M SC'lerin farklılaşma indükleyicisi olarak parlak bir geleceğe sahiptir. Etki mekanizması daha fazla çalışılmaya devam etmektedir.

Cistanche echinacosideapoptoza karşı koyabilir ve teşvik edebilirkemik büyümesi