Crandell-Rees Kedi Böbrek Hücre Proliferasyonunun X-ışını ile İndüklenen Senesens ile İnhibisyonu

İletişim: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-posta:audrey.hu@wecistanche.com

Manabu KOİKE^1,2)*, Yasutomo YUTOKU¹⁾ve Aki KOIKE¹⁾

ÖZ.Kedigillerde kanser tedavilerini takiben radyorezistans ve radyotoksisite rapor edilmiştir. Radyasyon dozlarını, normal hücrelere değil, sadece kanser hücrelerine sitotoksik etkiler oluşturacak şekilde optimize etmek, etkili radyasyon tedavisine ulaşmak için kritik öneme sahiptir; bununla birlikte, kedi hücrelerinde radyasyon direnci, radyotoksisite ve DNA hasar yanıtı (DDR) mekanizmaları henüz açıklığa kavuşturulmamıştır. Bir DNA çift sarmal kopması (DSB) en zehirli türüdürDNAkanser tedavisinde kullanılan X-ışınları ve ağır iyon ışınlarının neden olduğu hasar. Crandell-Rees KedisiBöbrek(CRFK) hücreleri, yaşam bilimleri araştırmalarında en yaygın kullanılan kedi hücrelerinden biridir. İşte bunu bildiriyoruzDSB-X-ışınları tarafından indüklenen yaşlanmanın tetiklenmesi, hücrelerin çoğalmasını engellemede önemlidir.CRFKhücreler. 2 Gy ve 10 Gy dozlarında X-ışınlarının toksik olduğunu hücre proliferasyon deneyi ile gösterdik.CRFKCRFK hücrelerini ışınlayan hücreler çoğalmalarını engeller. X ışınlı CRFK hücrelerinde, DSB ile tetiklenen yaşlanmada doza bağlı bir artış, morfolojik değişikliklere göre ve bir yaşlanmayla ilişkili galaktosidaz boyama deneyi kullanılarak saptandı. Ayrıca, verilerimiz göstermiştir ki,CRFKhücrelerin fosforilasyonunu içeren ana DDR yoluH2AXSer139'da, normalde ATM kinazları tarafından aktive edildi. Bulgularımız, X ışınlarının neden olduğu hücresel yaşlanmanın anlaşılmasında ve kedi hücrelerinde radyasyonun biyolojik etkilerinin, örneğin toksisitenin aydınlatılmasında faydalıdır. Ayrıca bulgularımız, CRFK hücre hattının, kedi hücrelerinde radyorezistans ve radyotoksisiteyi aydınlatmak için mükemmel bir matris olduğunu göstermektedir.

ANAHTAR KELİMELER:kedi, refakatçi hayvan, DNA çift sarmal kopması, radyasyon, yaşlanma

Cistanche Deserticola özü: Bağışıklık sistemini iyileştirin

Yoldaş hayvanlar, insan toplumunda giderek daha önemli bir rol üstlenmektedir. Evcil hayvanların yaşam sürelerinin uzaması nedeniyle yaşlı köpek ve kedilerin sayısı artmakta ve her yıl birçok köpek ve kediye kanser teşhisi konulmaktadır [26, 27]. Kanser için üç ana tedaviden biri olan radyasyon tedavisi, veteriner hastanelerinde köpeklerde ve kedilerde kanser tedavisine alternatif olarak giderek daha fazla kullanılmaktadır [24, 26]. En etkili radyasyon tedavisini elde etmek için normal ve kanser hücreleri arasındaki toksisiteyi dengelemek önemlidir. Bu arada, kanser radyoterapisini takiben kedi ve kedi tümörlerinde radyorezistans görülmesine rağmen, bu direncin mekanizması henüz netlik kazanmamıştır [24].

Radyasyonun insan ve kemirgenlerden elde edilen hücreler üzerindeki etkileri üzerine çok sayıda çalışma yapılmıştır [6, 10, 23, 28]. Genomik DNA, X ışınları ve ağır iyon ışınları gibi radyasyon kullanan tedavilerin ana biyolojik hedefidir. Çift iplik kopması (DSB), radyasyona bağlı DNA hasarının en kritik türüdür. Bir DSB oluştuğunda, DNA hasar algılama, DDR sinyalleme ve DNA onarımı dahil olmak üzere çeşitli DNA hasar yanıtı (DDR) yolları etkinleştirilir. Sonuç olarak, hücreler radyasyon hasarından kurtulur ve etkilenen DNA doğru ve verimli bir şekilde onarılır [8, 25]. Köpek ve kedi hücrelerinde, DSB'ler esas olarak, Ku70 ve Ku80'den oluşan Ku heterodimerinin DSB uçlarının bağlanmasını indükleyen homolog olmayan bir uç birleştirme (NHEJ) onarım mekanizması ile tamir edilebilir [14-17]; ancak, bunu açıklığa kavuşturmak için daha fazla çalışmaya ihtiyaç vardır. Ek olarak, erken onarım aşamasında, DNA-PK ve ATM kinazlar gibi kinazlar aktive edilir ve bunlar DSB bölgelerine yakın histon H2AX'ın Ser139'unu fosforile eder [5, 6]. DSB'lerin, hücreler tamir edilemediğinde apoptoz ve yaşlanma dahil olmak üzere programlanmış hücre ölüm mekanizmalarını aktive etmesi muhtemeldir [9, 32]. Kedi hücrelerinde DNA onarımı gibi çeşitli DDR'lerin moleküler mekanizmaları yeterince çalışılmamıştır.

Ölümsüzleştirilmiş Crandell-Rees FelineBöbrek(CRFK) hücre dizisi en yaygın olarak kullanılan kedi hücre dizilerinden biridir. CRFK hücre hattı ilk olarak 1964 yılındaböbrek12-haftalık dişi yavru kedinin [3] korteksi. Crandell et al. [3], CRFK hücre hattının kedi virüsü araştırmalarında ve teşhis tıbbında faydalı olduğunu ve kanser araştırmalarında özellikle ilgi çekici hale geldiğini açıkladı. Şu anda, CRFK hücre dizisi, kanser ve virüs araştırmaları da dahil olmak üzere yaşam bilimleri araştırmalarında vazgeçilmezdir. Bu nedenle, kedilerde radyasyonun biyolojik etkilerinin moleküler mekanizmalarını aydınlatmak için birincil araştırma bilgilerini elde etmek için çeşitli moleküler yolakları analiz edilen CRFK hücrelerinin radyosensitivitesini anlamak önemlidir. Ancak şu anda radyasyonun CRFK hücrelerinin proliferasyonu üzerindeki etkileri ve mekanizmaları hakkında herhangi bir rapor bulunmamaktadır.

Bu çalışmada, X ışınlarının CRFK hücrelerinin proliferasyonu üzerindeki biyolojik etkilerini araştırdık. Bulgularımız, X ışınlarının CRFK hücrelerinin proliferasyonunu belirgin şekilde baskıladığını göstermektedir. Ek olarak, sonuçlarımız proliferasyonun baskılanmasının, DSB'ler tarafından tetiklenen artan hücresel yaşlanmadan kaynaklandığını ileri sürdü. Ayrıca, CRFK hücrelerinde, ana DDR yolunun ATM kinazları tarafından normal olarak aktive edildiğini doğruladık.

cistanche tubolosa özü: böbrek hastalığının tedavisi

MALZEMELER VE YÖNTEMLER

Hücre kültürleri, kimyasallar ve X ışınları

CRFK hücreleri (HSRRB, Osaka, Japonya), daha önce tarif edildiği gibi yüzde 10 fetal sığır serumu ile takviye edilmiş Dulbecco'nun modifiye Eagle ortamında kültürlendi [17]. Yapışkan hücreler, 1, 2 veya 10 Gy'de ve 0.71–0.77 Gy/dk (200 kV/20) doz hızında X-ışınları ile ışınlandı. Önceki çalışmalarda açıklandığı gibi oda sıcaklığında Pantak HF320S (Shimadzu, Kyoto, Japonya) kullanılarak 0.5-mm Al ve 0.5-mm Cu filtreler ile mA [17]. Bir ATM kinaz inhibitörü olan KU-55933, Wako Pure Chemical'dan (Osaka, Japonya) satın alındı. KU-55933, DMSO (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, ABD) içinde seyreltildi ve kullanımdan hemen önce bir kültür ortamında seyreltildi.

Canlı hücre sayısının belirlenmesi

Canlı hücre sayısını belirlemek için tripan mavisi dışlama testi kullanıldı. Hücreler, 60-mm tabaklarda tabak başına 2.2 x 104 hücre yoğunluğunda ekildi. Ertesi gün hücreler, X-ışınları ile ışınlandı ve ışınlamadan sonra 5 gün süreyle inkübe edildi. Daha sonra hücreler, fosfat tamponlu tuzlu su (PBS) ile yıkandı, Tripsin-EDTA solüsyonunda (T3924, Sigma-Aldrich) süspanse edildi, toplandı, santrifüjlendi, 0% a/h yüzde 4 Tripan Mavisi Solüsyonu ile boyandı ( Wako Pure Chemical) veya yüzde 0,4 Trypan Blue (Bio-Rad, Hercules, CA, ABD) ve TC10™ Otomatik Hücre Sayacı (Bio-Rad) kullanılarak sayıldı. Tüm ışınlamalar üç kopya halinde gerçekleştirildi.

immünoblotlama

Toplam protein ekstraksiyonu ve western blot analizi, aşağıdaki modifikasyonlarla daha önce tarif edilen yöntemlerimize [11, 17] göre yapıldı. Toplam proteinler, Extra PAGE One Precast Gel yüzde 5-20 (Nacalai Tesque, Kyoto, Japonya) veya yüzde 5-20 Super Sep ACE Jel (Wako Pure Chemical) üzerinde elektroforezlendi. Fraksiyonlanmış ürünler elektroforetik olarak Hybond-P membranlarına (GE Healthcare Bio-Sciences Corp., Piscataway, NJ, ABD) aktarıldı. Daha sonra membranlar oda sıcaklığında 60 dakika Blocking One'da (Nacalai Tesque) bloke edildi ve fare anti-H2AX monoklonal antikoru (JBW301) (Upstate Biotechnology Inc., Charlottesville, VA, ABD) veya fare -aktin monoklonal antikoru ( Sigma-Aldrich). Yıkandıktan sonra membranlar, anti-fare IgG HRP-Linked Whole Ab (koyunlardan) (NA931) (GE Healthcare Bio-Sciences Corp.) ile oda sıcaklığında 60 dakika süreyle inkübe edildi. İmmünoblotlama, Select Western Blotting Detection System (GE Healthcare Bio-Sciences Corp.) kullanılarak yapıldı. Protein bantları ChemiDoc XRS sistemi (Bio-Rad) kullanılarak görselleştirildi.

immünositokimya

İmmün boyama, aşağıdaki modifikasyonlarla daha önce tarif edildiği gibi [12, 17] yapıldı. Kısaca, kültürlenmiş hücreler 30 dakika yüzde 4 paraformaldehit içinde sabitlendi, 5 dakika boyunca PBS içinde 0%5 Triton X-100 ile geçirgenleştirildi, bir bloke edici solüsyon kullanılarak bloke edildi ve inkübe edildi. fare anti-H2AX monoklonal antikoru (JBW301) (Upstate Biotechnology Inc.) ile oda sıcaklığında 60 dakika süreyle. Hücreleri PBS ile yıkadıktan sonra saptama, bir Alexa Fluor 568-konjuge ikincil antikor (Molecular Probes, Eugene, OR, ABD) veya bir floresan izotiyosiyanat konjuge ikincil antikor (Cappel Laboratories, Durham, NC, ABD) kullanılarak yapıldı. ). Daha sonra çekirdekler 0.025 ug/ml 4,6-diamino-2-fenilindol (DAPI) floresan boyası (Boehringer Mannheim, Mannheim, Almanya) ile boyandı. Hücrelerin görüntüleri, bir dijital kamera (Olympus DP50, Olympus) ile donatılmış Olympus Floresan Mikroskobu BX51 (Olympus, Tokyo, Japonya) kullanılarak elde edildi.

Yaşlanma ile ilişkili galaktosidaz (SA- -gal) boyama testi

Bu tahlil için hücreler (5 x 1{5}}3) 35-mm plakalara kaplandı ve 5 gün sonra Senescence -Galactosidase Staining Kit (Cell Signaling Technology Inc., Danvers, MA, ABD) kullanılarak boyandı. Aşağıdaki modifikasyonlar ile üreticinin talimatlarına göre ışınlama. Çekirdekler 0.025 ug/ml DAPI floresan boya ile boyandı. 18 saat sonra lekeli hücrelerin görüntüleri, bir dijital kamera (Olympus DP12, Olympus) ile donatılmış Olympus CKX41 Mikroskop kullanılarak veya bir dijital kamera (Olympus DP50) ile donatılmış Olympus Floresan Mikroskobu BX51 kullanılarak elde edildi. Pozitif boyanmış hücrelerin yüzdesi, Image J yazılımı kullanılarak her biri en az 100 hücreden oluşan üç rastgele alan analiz edilerek belirlendi. Hücre çekirdeğinin boyutu, Image J yazılımı kullanılarak her biri 10 hücreden oluşan üç rastgele alan analiz edilerek belirlendi. Tüm ışınlamalar üç kopya halinde gerçekleştirildi.

Annexin V/propidium iyodür (PI) apoptoz tahlili

Hücreler (2.2 x 104), 60-mm plakalara kaplandı ve ertesi gün X-ışınları ile ışınlandı. Işınlamadan beş gün sonra hücreler toplandı ve üreticinin talimatlarına göre Annexin V Alexa Fluor 488-PI-solüsyonu (Tali™ Apoptosis Kit, Invitrogen, Carlsbad, CA, ABD) ile boyandı. Boyama için PI boyama solüsyonunun 200-kat seyreltisi kullanıldı. Ek olarak, Tali Image-based Cytometer (Invitrogen) kullanılarak Annexin V etiketli apoptotik hücreler tespit edildi. Tüm ışınlamalar üç kopya halinde gerçekleştirildi.

istatistiksel analiz

İstatistiksel sonuçlar, ortalama ± standart sapmalar (n{{0}}) olarak sunulmuştur. Nükleer boyut hariç istatistiksel analiz, ANOVA ve Ryan'ın çoklu karşılaştırma testleri (WEB'de ANOVA4, https://www.hju.ac.jp/~kiriki/anova4/) kullanılarak yapıldı. Nükleer boyut Student t-testi ile değerlendirildi. 0.05'ten küçük bir P değeri istatistiksel olarak anlamlı kabul edildi.

çölde yaşayan cistanche

SONUÇLAR

X-ışınları ile CRFK hücre proliferasyonunun inhibisyonu

X ışınlarının CRFK hücrelerinin proliferasyonu üzerindeki etkisini araştırmak için 2 ve 10 Gy'de ışınlama yapıldı. Şekil 1'de gösterildiği gibi, hücre proliferasyonu doza bağlı bir şekilde önemli ölçüde inhibe edildi (P<0.05). these="" findings="" indicate="" that="" the="" proliferation="" was="" inhibited="" by="" x-rays="" at="" both="">

X-ışınları ile CRFK hücrelerinde DSB'lerin uyarılması

H2AX'ın Ser139'daki fosforilasyonu, DSB'lere yönelik başlıca ve erken hücresel DDR'lerden biridir [8, 20, 28]. H2AX, DSB'ler için altın standart bir biyobelirteçtir [8, 20, 28]. Önceden, western blotlama kullanarak, 10 Gy'lik tek bir dozda X-ışınları ile ışınlamadan 1 saat ila 24 saat sonra CRFK hücrelerinde H2AX ekspresyonundaki değişikliği belirledik [17]. Sonuç olarak, H2AX'in ekspresyon seviyesi 1 saat sonra en yüksek seviyedeydi [17]. Işınlamadan 1 saat sonra CRFK hücrelerinden alınan toplam ekstraktlarda H2AX fosforilasyonunun doza bağımlı olarak indüklenip indüklenmediğini incelemek için anti-H2AX antikoru ile western blot analizi yapıldı. Şekil 2A'da gösterildiği gibi, western blot analizi, X-ışınlarının dozuna bağlı olarak H2AX ekspresyonunun arttığını gösterdi. Daha sonra, anti-H2AX antikoru kullanılarak immün boyama testi ile ışınlanmış hücrelerde H2AX odağının saptanıp saptanmadığını inceledik. Sonuçlarımız, ışınlamadan 1 saat sonra CRFK hücrelerinin çekirdeklerinde H2AX odaklarının oluştuğunu gösterdi (Şekil 2B).

CRFK hücreleri yan ışınlarında H2AXat Ser139'un ATMkinaz bağımlı fosforilasyonu

ATGM kinazın veya DNA-PK'nın, X-ışınları tarafından tetiklenen DDR'deki önemli rollerinden biri, çeşitli insan ve kemirgen hücrelerinde DSB bölgelerini çevreleyen H2AX'i fosforile etmektir [18, 29]; bununla birlikte, CRFK hücreleri de dahil olmak üzere kedi hücrelerinde böyle bir rol henüz araştırılmamıştır. ATM kinazın, CRFK hücrelerinde Ser139'da X-ışını ile indüklenen H2AX fosforilasyonundan sorumlu olup olmadığını doğrulamak için hücreler, ATM kinaz inhibitörü KU-55933 (10 uM) veya solvent (DMSO) içeren bir ortamda 1 için inkübe edildi. ışınlamadan bir saat önce (10 Gy). Şekil 3'te gösterildiği gibi, KU- 55933 varlığında ışınlanan hücrelerde H2AX odaklarının oluşumu engellenmiştir. Bu sonuçlar, ATM'nin, CRFK hücrelerinde ışınlama ile indüklenen Ser139'da H2AX fosforilasyonu için ana kinaz olduğunu göstermektedir.

X-ışınları ile CRFK hücrelerinde yaşlanmanın uyarılması

Işınlamaya yanıt olarak CRFK hücre proliferasyonunun inhibisyonunun yaşlanma ve apoptoz ile ilişkili olup olmadığını araştırmak için hücreler, 2 ve 10 Gy'de X-ışınları ile ışınlandı. İlk olarak, ışınlamadan 5 gün sonra hücreler, yaşlanma için altın standart bir deney olan SA- -gal boyaması kullanılarak analiz edildi. Işınlanmış hücrelerde büyük ve düz bir hücresel şekil (Şekil 4A) ve genişlemiş veya çok çekirdekli çekirdekler (Şekil 4B) dahil anormal çekirdekler gibi yaşlanmaya özgü morfolojiler gözlemledik. Ek olarak, ışınlanmış CRFK hücrelerinde, SA- -gal-pozitif hücreler doza bağlı bir şekilde belirgin şekilde arttı (Şekil 4A–C). Ayrıca, yaşlanan hücreler için başka bir belirteç olan hücre çekirdeğinin boyutundaki genişlemeyi nicel olarak analiz ettik. Şekil 4D'de gösterildiği gibi, ışınlanmış CRFK hücrelerinde hücre çekirdeğinin boyutu önemli ölçüde daha büyüktü (P<0.05). altogether,="" these="" findings="" indicate="" that="" x-rays="" highly="" induce="" senescence="" in="" crfk="" cells.="" next,="" to="" examine="" whether="" x-rays="" induced="" apoptosis="" in="" the="" irradiated="" crfk="" cells,="" apoptosis="" was="" quantified="" using="" tali™="" image-based="" cytometer.="" dual="" staining="" with="" fluorescent="" annexin="" v="" and="" pi="" was="" performed="" to="" detect="" apoptotic="" cells.="" cells="" stained="" positive="" for="" annexin="" v="" are="" considered="" apoptotic="" cells.="" as="" shown="" in="" fig.="" 5,="" the="" proportion="" of="" apoptotic="" cells="" was="" significantly="" higher="" in="" the="" 10-gy="" group="" than="" in="" the="" non-irradiated="" group="" and="" the="" 2-gy="" group="" but="" was="" lower="" (approximately="" 6%)="" in="" the="" 10-gy="" group.="" in="" addition,="" no="" significant="" increase="" in="" apoptosis="" was="" observed="" in="" the="" 2-gy="" group="" compared="" with="" the="" non-irradiated="">

cistanche sağlık yararları: anti-kanser

TARTIŞMA

Radyasyonun kedi hücreleri üzerindeki biyolojik etkisini anlamak, radyotoksisiteyi aydınlatmada ve kanser tedavisi için yeni terapötik protokoller geliştirmede önemlidir. Bu çalışmada, kedinin çoğalmasının olduğunu bulduk.böbrekhücre hattı CRFK, 2 ve 10 Gy dozlarında X-ışınları tarafından önemli ölçüde bastırılmıştır. Bu bulgular, X-ışınlarının bu çalışmada kullanılan koşullar altında CRFK hücrelerinin büyümesi için toksik olduğunu ortaya koymaktadır. Ayrıca, ışınlanmış CRFK hücrelerinde yaşlanan hücreler belirgin şekilde artmıştır. Bu arada, CRFK hücrelerinde ortaya çıkan bulgularımız, ATM kinaz, X-ışınları tarafından üretilen DSB'lerin ana DDR'lerinden biri olan Ser139'da H2AX'in fosforilasyonunu indükler. Radyasyona bağlı DSB'lerin insan ve kemirgen hücrelerinde yaşlanmayı ve apoptozu indükleyebildiği bildirilmektedir [4, 22]. Bulgularımız, DSB'ler tarafından aktive edilen yaşlanma mekanizmasının, CRFK hücrelerinin X-ışınları tarafından proliferasyonunu baskılamaya katkıda bulunduğunu göstermektedir.

İnsanlar, köpekler ve kediler arasındaki radyosensitivite farklılığının altında yatan mekanizma ve kedi hücrelerinin onarım mekanizması henüz aydınlatılamamıştır. Yukarıda bahsedildiği gibi, verilerimiz ATM kinaz bağımlı DDR'nin CRFK hücrelerinde X-ışınları tarafından aktive edildiğini göstermiştir. Ek olarak, bu çalışma ve önceki çalışmalar, CRFK hücrelerinde X-ışını ile indüklenen DSB'lerin, ticari olarak temin edilebilen anti-H2AX antikoru kullanılarak western blot analizi ve immünositokimya ile tespit edilebileceğini göstermektedir [17]. Bu bulgular, CRFK hücrelerinin, kedi hücrelerinde DDR'nin moleküler mekanizmalarını aydınlatmada faydalı olduğunu göstermektedir. Moor [24], kediler için radyasyon tedavisinin, tümör tepkileri ve normal doku toksisitesi açısından köpekler için olandan farklı olduğunu açıkladı. Fujii et al. [7], koloni oluşturan bir analizde kedilerdeki fibroblastların insanlarda olduğundan daha fazla radyo-dirençli olduğunu ve radyasyona bağlı H2AX odaklarının kedi fibroblastlarında daha hızlı ve daha etkili bir şekilde onarılabileceğini gösterdi. Ek olarak, X ışınlarının neden olduğu DNA ve kromozom hasarının kedi lenfositlerinde insan veya köpek lenfositlerinden daha etkili bir şekilde onarılma olasılığını öne sürdüler. Bu bulgular, insanlar, köpekler ve kediler arasındaki radyorezistans farklılıklarının DNA tamir edilebilirliğindeki farklılıkla ilişkili olabileceğini düşündürmektedir. Son zamanlarda, CRFK hücrelerini kullanarak çekirdek NHEJ onarım proteinlerinin, yani kedi Ku70, Ku80 ve XLF'nin 405-nm mikro lazer [17] tarafından indüklenen DSB bölgelerinde biriktiğini gösterdik. Kedi XLF, insan XLF veya köpek XLF alımının Ku'nun varlığına bağlı olduğunu da ortaya çıkardık [13, 14, 17]; bu bulgular, Ku70, Ku80 ve XLF dahil olmak üzere çekirdek NHEJ faktörlerinin uzaysal-zamansal düzenlenmesinin NHE onarımının düzenlenmesinde önemli olduğunu kuvvetle desteklemektedir [10, 19]. Toplu olarak, CRFK hücreleri, yalnızca kedi, köpek ve insan hücreleri arasındaki radyo-direnç farklılıklarının altında yatan moleküler mekanizmaların ortaya çıkarılmasında değil, aynı zamanda, içlerinde korunan Ku'ya bağlı NHEJ onarımı da dahil olmak üzere DDR'lerin ortaya çıkarılmasında faydalı olabilir.

Epitelyal-mezenkimal geçiş (EMT), örneğin kanser hücrelerinin radyasyona ve antikanser ilaçlara karşı direncinin değiştirilmesi gibi malign transformasyon için önemli bir mekanizmadır. Son zamanlarda, CRFK hücrelerinin bir epitel hücre hattı olarak kurulmasına rağmen, özellikle morfoloji, biyokimya ve moleküler biyoloji ile ilgili olarak CRFK hücrelerinin fibroblast özelliklerine sahip olduğu bildirilmiştir [21]. Ayrıca van Beusekom ve ark. [31] TGF- 1'nin CRFK hücrelerinin morfolojisini epitelyal fenotipten fibroblastik fenotipe değiştirdiğini ve CRFK hücrelerinde bazı EMT işaretleyici genlerin ekspresyonunu önemli ölçüde indüklediğini, CRFK hücrelerinin EMT'ye maruz kalabileceğini öne sürdüğünü bildirdi. Bu çalışmada, ışınlanmış CRFK hücrelerinde büyümenin baskılanması için yaşlanma apoptozdan daha önemli göründü. Toplamda, CRFK hücre çizgisi, yalnızca kedilerde X-ışını ile indüklenen yaşlanma, radyorezistans ve/veya radyotoksisite arasındaki veya bunlar arasındaki karşılıklı ilişkiyi aydınlatmakla kalmayıp mükemmel bir modalite olabilir.böbrekepitel hücreleri değil, aynı zamanda EMT'nin radyasyon ve kemoterapötiklere karşı etkilerini aydınlatmak için.

Pro-yaşlanma tedavisi, kanser hücresi yaşlanmasını indükleme temelinde yeni bir kanser karşıtı stratejidir. Bu stratejiyi kedilerin tedavisine uygulamak için kedi hücrelerinde yaşlanma indüksiyonunun moleküler mekanizmasını aydınlatmak gerekir. Öte yandan, Li ve ark. [22], yaşlanan hücreleri seçici olarak öldürebilen küçük moleküllerin bir sınıfı olan senolitik ajanların, makul bir şekilde karsinojenezden uzak dururken radyoterapinin neden olduğu yan etkileri önemli ölçüde azaltmak için büyük bir potansiyele sahip olduğunu tanımlamışlardır. Son zamanlarda, bir senolitik ajan ABT-737'nin, ışınlanmış farelerin akciğerlerinden iyonize edici radyasyona bağlı yaşlanan hücreleri ortadan kaldırdığı gösterilmiştir [35]. Yukarıda bahsedildiği gibi, verilerimiz, ışınlanmış CRFK hücrelerinde yaşlanan hücrelerin belirgin şekilde arttığını göstermiştir. Bulgularımız ve CRFK hücrelerini kullanan daha ileri çalışmalar, sadece kedi prosenesans tedavisinin değil, aynı zamanda radyoterapinin neden olduğu yan etkileri azaltmak için senolitik ajanların geliştirilmesine yönelik temel araştırmalar için mevcut olabilir.

CRFKen önemli memeli hücre dizilerinden biridir ve şiddetli akut solunum sendromu koronavirüsü (SARS-CoV) veya SARS-CoV-2 gibi virüsler üzerinde olanlar da dahil olmak üzere deneylerde yaygın olarak kullanılır; Kedilerde DNA onarımı ve kanser araştırmaları;kronikböbrek hastalık; ve aşıların üretimi [1, 2, 17, 30, 33, 34]. CRFK hücreleri, onkovirüsler de dahil olmak üzere çeşitli virüslerle enfekte olabilir [1–3,34]. Bunlara dayanarak, CRFK hücre hattının, viral bir enfeksiyonun neden olduğu radyosensitivitedeki değişiklikler ve radyoterapinin viral enfeksiyonun neden olduğu tümörler üzerindeki etkisi üzerine temel araştırmalar için uygun olabileceğini tahmin ediyoruz.CRFKhücreleri, kedi böbrek epitel hücrelerinde radyorezistans ve radyotoksisitenin altında yatan mekanizmaları ve viral enfeksiyonun radyosensitivite üzerindeki etkisini aydınlatmak için kullanılabilir. Sonuç olarak, CRFK hücreleri, kedilerde radyotoksisite üzerine araştırma yapmak ve yeni kanser tedavi yöntemleri geliştirmek için temel araştırmalar yapmak için mükemmel hücre hatları olabilir.

cistanche tubolosa'nın sağlığa faydaları

ÇIKAR ÇATIŞMASI.Yazarlar herhangi bir çıkar çatışması beyan etmemektedir.

TEŞEKKÜRLER.Bu çalışma, Ulusal Kuantum ve Radyolojik Bilim ve Teknoloji Enstitüleri ile Saitama Üniversitesi Fen Fakültesi Düzenleyici Biyoloji Bölümü'nün desteğiyle gerçekleştirilmiştir.

REFERANSLAR

1. Altamura, G., Power, K., Martano, M., Degli Uberti, B., Galiero, G., De Luca, G., Maiolino, P. ve Borzacchiello, G. 2018. Felis catus

papillomavirüs tipi-2 E6, E6AP'ye bağlanır, E6AP/p53 bağlanmasını destekler ve p53 proteasomal degradasyonunu geliştirir. bilim 8: 17529.

2. Chu, H., Chan, JF, Yuen, TT, Shuai, H., Yuan, S., Wang, Y., Hu, B., Yip, CC, Tsang, JO, Huang, X., Chai, Y., Yang, D., Hou, Y., Chik, KK,

Zhang, X., Fung, AY, Tsoi, HW, Cai, JP, Chan, WM, Ip, JD, Chu, AW, Zhou, J., Lung, DC, Kok, KH, To, KK, Tsang, OT, Chan, KH ve Yuen, KY 2020. SARS-CoV-2 ve SARS-CoV'nin karşılaştırmalı tropizm, replikasyon kinetiği ve hücre hasarı profili ile COVID'nin klinik belirtileri, bulaşıcılığı ve laboratuvar çalışmaları için çıkarımlar-19 : gözlemsel bir çalışma. Lancet Mikrop 1: e14–e23.

3. Crandell, RA, Fabricant, CG ve Nelson-Rees, WA 1973. Bir kedi (Felis catus) renal hücre hattının (CRFK) gelişimi, karakterizasyonu ve viral duyarlılığı. In Vitro 9: 176–185.

4. d'Adda di Fagagna, F. 2008. Bir molada yaşamak: DNA hasarı tepkisi olarak hücresel yaşlanma. Nat. Rev. Kanser 8: 512-522.

5. Durocher, D. ve Jackson, SP 2001. DNA hasarının sensörleri olarak DNA-PK, ATM ve ATR: bir temadaki varyasyonlar? Kör. Görüş. Hücre Biol. 13: 225–231.

6. Firsanov, DV, Solovjeva, LV ve Svetlova, MP 2011. Kültürlenmiş memeli hücreleri ve dokularında DNA çift sarmal kopmalarının yerlerinde H2AX fosforilasyonu. Klinik. Epigenetik 2: 283–297.

7. Fujii, Y., Yurkon, CR, Maeda, J., Genet, SC, Kubota, N., Fujimori, A., Mori, T., Maruo, K. ve Kato, TA 2013. kedi hücreleri ve insan hücreleri. Radyasyon. Araş. 180: 70-77.

8. Huang, RX ve Zhou, PK 2020. Kanserde radyoterapi duyarlılığı için DNA hasar tepkisi sinyal yolları ve hedefleri. Sinyal İletimi. Hedef. orada. 5: 60.

9. Jackson, SP 2002. DNA çift sarmal kopmalarının algılanması ve onarılması. Karsinojenez 23: 687-696.

10. Koike, M. 2002. Ku70 ve Ku80 proteinlerinin dimerizasyonu, translokasyonu ve lokalizasyonu. J. Radiat. Araş. (Tokyo) 43: 223–236.

11. Koike, M. ve Koike, A. 2008. Canlı hücrelerde DNA çift sarmal kopmalarında Ku80 proteinlerinin birikmesi. Tecrübe. Hücre Araş. 314: 1061-1070.

12. Koike, M., Shiomi, T. ve Koike, A. 2001. Ku proteinlerinin dimerizasyonu ve nükleer lokalizasyonu. J. Biol. Kimya 276: 11167-11173.

13. Koike, M., Yutoku, Y. ve Koike, A. 2011. Canlı epitel hücrelerinde DNA çift sarmal kopmalarında Ku70 birikimi. Tecrübe. Hücre Araş. 317: 2429–2437.

14. Koike, M., Yutoku, Y. ve Koike, A. 2017. Köpek XLF'nin DNA hasar bölgelerinde klonlama, lokalizasyon ve odak oluşumu. J. Veteriner Med. bilim 79: 22-28.

15. Koike, M., Yutoku, Y. ve Koike, A. 2017. Köpek Ku70'in DNA hasar bölgelerinde klonlama, lokalizasyon ve odak oluşumu. J. Veteriner Med. bilim 79: 554-561.

16. Koike, M., Yutoku, Y. ve Koike, A. 2017. Köpek Ku80'in klonlanması ve DNA hasar bölgelerinde lokalizasyonu ve birikmesi. FEBS Açık Biyo 7: 1854–1863.

17. Koike, M., Yutoku, Y. ve Koike, A. 2019. Feline XLF, DNA hasar bölgelerinde Ku'ya bağlı bir şekilde birikir. FEBS Açık Biyo 9: 1052–1062.

18. Koike, M., Sugasawa, J., Yasuda, M. ve Koike, A. 2008. Dokuya özgü DNA-PK-bağımlı H2AX fosforilasyonu ve in vivo X-ışınlamasından sonra gama-H2AX eliminasyonu. Biyokimya. Biyofiz. Araş. Komün. 376: 52-55. [Medline] [CrossRef]

19. Koike, M., Awaji, T., Kataoka, M., Tsujimoto, G., Kartasova, T., Koike, A. ve Shiomi, T. 1999. DNA'ya bağımlı protein kinaz bileşenleri Ku ve Mitoz sırasında DNA-PKcs. J. Hücre Bilimi. 112: 4031–4039. [Medline]

20. Kopp, B., Khoury, L. ve Audebert, M. 2019. H2AX biyobelirteçlerinin genotoksisite değerlendirmesi için validasyonu: bir inceleme. Kemer Toksikol. 93: 2103-2114. [Medline] [CrossRef]