Perimenopozal Sendrom Hayvan Modelinde Feniletil Alkol Glikozitlerin Cistanche'nin Müdahale Araştırması Ⅱ

Deney 1 Cistanche feniletanoid glikozitin hazırlanması 1 Tıbbi malzemelerin kaynağı

Cistanche tubulosa, Chengdu Wecistanche biotech Ltd.d, parti numarası: 20130501.

2 reaktif

%95 etanol (tıbbi kalitede); AB-8 makro gözenekli adsorpsiyon reçinesi, Tianjin Guangfu İnce Kimyasal Araştırma Enstitüsü, parti numarası: 20130618.

Çin Farmasötik ve Biyolojik Ürünlerin Kontrolü Enstitüsü tarafından sağlanan Ekinakozit referans maddesi, parti numarası: 111670-200503.3

CISTANCHE'IN ÇALIŞMASI NE KADAR SÜRER?

Hazırlık metodu

Literatür yöntemine atıfta bulunuldu [19] ve Henan Geleneksel Çin Tıbbı Koleji İlaç Analizi Bölümü'nden Profesör Feng Suxiang'ın rehberliğinde yürütüldü.Cistanche'yi öğütkaba bir toz haline getirin, %70'lik etanol miktarının 10 katı kadarını geri akışa ekleyin ve her biri 1,5 saat olmak üzere iki kez ekstrakte edin, iki alkol ekstraktını birleştirin, alkol kokusu kalmayana kadar düşük basınç altında konsantre edin ve dağıtın numune çözeltisi olarak damıtılmış su (konsantrasyon 0,5 g tıbbi malzeme/ml) ile. AB-8 reçinesinden (kolon ilacı: reçine 1:10'dur) geçirin, numuneyi bir akış halinde yükleyin ve tamamen emilene kadar 5 saat bekletin. İlk olarak kolon hacminin 10 katı distile su ile yıkayın, suyu atın ve ardından kolon hacminin 10 katı kadarını kullanın. Safsızlıkları gidermek için %10 etanol kullanın ve son olarak kolon hacminin 7 katı %60 etanol ile elute edin. Eluatı toplayın ve bir toz elde etmek için kuruyana kadar buharlaştırın. 4 Ölçüm dalga boyu seçimi

Referans solüsyonunun {{0}},5 mL'sini tam olarak ölçün, 1 mL %5 sodyum nitrit solüsyonu ekleyin, iyice çalkalayın ve 6 dakika bekletin; 1 mL %10 alüminyum nitrat çözeltisi ekleyin, iyice çalkalayın ve 6 dakika bekletin; %10 sodyum hidroksit çözeltisi 10 mL ekleyin, suyla 25 mL'ye seyreltin, iyice çalkalayın ve referans çözeltisi olarak hizmet etmesi için 18 dakika bekletin. 0.5mlCistanche feniletanol glikozitÇözelti, test çözeltisiyle aynı şekilde hazırlandı. Paralel numuneyi referans maddesi eklemeden kullanın ve çözeltiyi kör olarak test edin ve kör çözeltiyi aynı şekilde hazırlayın. UV spektrofotometresinde yukarıdaki üç çözelti üzerinde 200-800nm dalga boyu aralığında tam dalga boyu taraması gerçekleştirin. Hem referans madde hem de test çözeltisi 507 nm'de maksimum absorpsiyon tepe noktalarına sahiptir, dolayısıyla absorpsiyon dalga boyu olarak 507 nm belirlenir.

Cistanche feniletanol glikozit örneğinin renk gelişimi + Ekinezya mandalina referans maddesinin renk gelişimi (üst üste bindirilmiş karşılaştırma) sonrasında, bkz. Şekil 1.

Şekil 1 Cistanche feniletanoid glikozit numunesinin renk gelişmesinden sonra + Ekinezya mandalina referans maddesinin renk gelişmesinden sonra Şekil 5 İçerik tespit yöntemi

Test edilecek çözeltinin 1 mL'sini hassas bir şekilde ölçün, 1 mL %5 sodyum nitrit çözeltisi ekleyin, iyice çalkalayın ve 6 dakika bekletin; 1 mL %10 alüminyum nitrat çözeltisi ekleyin, iyice çalkalayın ve 6 dakika bekletin; %10 sodyum hidroksit ekleyin Çözelti 10 mL'dir, suyla 25 mL'ye seyreltin, iyice çalkalayın ve 18 dakika bekletin. Numune solüsyonunu kör olarak eklemeden paralel numuneyi kullanın ve aynı şekilde boş bir solüsyon hazırlayın. 507 nm'de UV spektrofotometre kullanılarak ölçülmüştür. 6 Metodolojik inceleme

6.1 Referans solüsyonunun ve numune solüsyonunun hazırlanması

Referans solüsyonunun hazırlanması: Sabit ağırlığa kadar kurutulmuş 3.06 mg ekinekosid referans standardını doğru bir şekilde tartın, 25 mL'lik balon jojeye koyun, çözünene kadar %70 solüsyon ekleyin ve işarete kadar seyreltin, iyice çalkalayın ve bir kenara koyun. Standart konsantrasyon 0,1224 mg/ml'dir.

Numune çözeltisinin hazırlanması: 5 mg'ı tam olarak tartın.Cistanche feniletanoid glikozit çıkarmak10 ml'lik ölçülü bir şişeye koyun, %70 etanol ile çözün ve hacme kadar seyreltin.

6.2 Standart eğrinin hazırlanması

{{0}}, 1.0, 2.0, 3.0, 4.{{10}}, 5.0'ı doğru şekilde çizin , 6,0 mL referans solüsyonu, renk geliştirin ve 4.2'deki yönteme göre hacme kadar seyreltin ve absorbans değerini 507 nm'de ölçün. Bir regresyon eğrisi oluşturmak için konsantrasyona karşı absorbansı kullandığımızda regresyon denklemi şöyle olur: Y=20.296X-0.0015 (r=0.9994) ve doğrusal aralık 4'tür.{{ 23}}.4ug/ml.

6.3 Hassasiyet testi

Örnek çözümü alın ve "İçerik Belirleme Yöntemi" maddesine göre paralel olarak altı kez ölçün. Absorbansın bağıl standart sapmasını hesaplayın. Absorbanslar sırasıyla {{0}}.299, 0.299, 0.298, 0.297, 0.297, 0.297'dir. Ortalama absorbans=0.298, RSD=0.330% (n =6).

6.4 Stabilite testi

Uygun miktarda örnek çözelti alın ve "İçerik Belirleme Yöntemi" maddesine göre {{0}}, 15, 30, 50'deki absorbans değerlerini ölçün. ve çözüm tamamen renklendikten 60 dakika sonra, bağıl standart sapmayı hesaplayın. Absorbanslar sırasıyla 0,304, 0,303, 0,300 ve 0,296'dır. , 0,295, 0,295, ortalama absorbans=0,299, RSD=1,362% (n=5).

6.5 Tekrarlanabilirlik testi

Bir numune alın, "Numune Solüsyonun Hazırlanması" maddesine göre 6 adet numune solüsyonu hazırlayın ve "İçerik Belirleme Yöntemi" maddesine göre absorbans değerini ölçerek içeriği hesaplayın. İçerikler sırasıyla %65,2, %65,6, %66,7, %67,2 ve %66,5'tir. , %65,8, ortalama içerik %66,2, RSD=1,142% (n=6).

6.6 Numune geri kazanım testi

Bilinen içeriğe sahip toplam 9 parçadan oluşan örnek çözeltinin 0,5 mL'sini tam olarak çekin ve sırasıyla 200, 250 ve 300 ul standart çözelti ekleyin. Cistanche feniletanol glikozidin geri kazanım oranını ve bağıl standart sapmasını ölçün ve hesaplayın. İyileşme oranları sırasıyla %101,45 ve %99,26'dır. , %98,94, %101,83, %99,05, %99,47, %98,72, %99,17, %100,64, ortalama iyileşme oranı %99,84, RSD=1,164% (n=9).

7 Örnek içerik belirleme

Tablo 1 Cistanche'deki feniletanoid glikozit içeriğinin tespit sonuçları