TLR9 Aktivasyonu, IgA Nefropatisinde APRIL ve IL-6 aracılı Yollar Yoluyla Aberran IgA Glikosilasyonunu İndükler

İletişim:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Yuko Makita1, Hitoshi Suzuki1, Toshiki Kano1, Akiko Takahata1, Bruce A. Julian2,3, Jan Novak3 ve Yusuke Suzuki1

ANAHTAR KELİMELER: NİSAN; galaktoz eksikliği olan IgA1; IgA nefropatisi; IL-6; bağışıklık kompleksi

Galaktoz eksikliği olan IgA1 (Gd-IgA1) gelişiminde çok önemli bir rol oynar.IgA nefropatisi(IgAN). Bununla birlikte, Gd-IgA1 üretimini yönlendiren patojenik mekanizmalar tam olarak aydınlatılamamıştır. Toll benzeri reseptör 9 (TLR9) yoluyla doğuştan gelen bağışıklık aktivasyonunun Gd-IgA1 üretiminde yer aldığı bilinmektedir. Proliferasyona neden olan bir ligandın (APRIL) ve IL-6'ın da IgAN'da Gd-IgA1 sentezini arttırdığı bilinmektedir. Bunu arka plan olarak kullanarak, IgA salgılayan hücrelerde TLR9 aktivasyonunun, IgAN'a yatkın ddY farede ve insan IgA1-salgılayan hücrelerde nefritojenik IgA'nın aşırı üretimine nasıl yol açtığını araştırdık. TLR9 ligandı CpG-oligonükleotitlerinin enjeksiyonu, ddY farelerinde anormal şekilde glikosile edilmiş IgA ve IgG-IgA immün komplekslerinin üretimini arttırdı ve bu da daha da kötüleşti.böbrek hasarı. CpG-oligonükleotid ile uyarılan fareler, anormal şekilde glikosile edilmiş IgA ve IgG-IgA bağışıklık komplekslerininki ile korelasyon gösteren yüksek serum APRIL seviyelerine sahipti. Laboratuvar ortamında,TLR9 aktivasyonuddY farelerinin splenositlerinde ve insan IgA1-salgılayan hücrelerde nefritojenik IgA'nın yanı sıra APRIL ve IL-6 üretimini arttırdı. Ancak, APRIL'in siRNA yıkımı, IL-6 tarafından indüklenen Gd-IgA1'in aşırı üretimini tamamen bastırdı. IL'nin nötralizasyonu-6, Gd-IgA1'in CpG-oligonükleotid kaynaklı aşırı üretimini azalttı. Ayrıca, APRIL ve IL-6 yollarının her biri bağımsız olarak TLR'ye aracılık etti9-Gd-IgA1'in aşırı üretimini indükledi. Böylece, TLR9 aktivasyonu, anormal şekilde glikosile edilmiş IgA'nın sentezini arttırdı ve bu, bir IgAN fare modelinde böbrek hasarını daha da arttırdı. Bu nedenle, APRIL ve IL-6 sinerjistik olarak ve ayrıca bağımsız olarak Gd-IgA1 sentezini arttırır.

Çeviri Bildirimi

Galaktoz eksikliği olan IgA1'i hedefleyen hastalığa özgü tedavi, gelecekteki bir tedaviyi oluşturabilir.IgA nefropatisi. Proliferasyona neden olan bir ligandın (APRIL) ve interlökinin-6 (IL-6) anormal şekilde glikosile edilmiş IgA'nın aşırı üretimine dahil olduğunu gösteren bu çalışmadan elde edilen sonuçlar, APRIL ve IL'yi hedeflemenin gerekçesini desteklemektedir{ {3}} IgA nefropatisinde (IgAN). Aslında, yakın zamanda yapılan bir çalışma, murin IgAN1'de anti-APRIL monoklonal antikorunun olumlu etkilerini göstermiştir ve IgAN'lı hastalarda APRIL antikorunu nötralize eden bir klinik çalışma şu anda devam etmektedir.

En yaygın primer glomerülonefrit olan IgA nefropatisi (IgAN), bu hastalığın başlangıcından sonraki 20 yıl içinde hastaların yüzde 20 ila yüzde 40'ında son dönem böbrek hastalığına neden olur.3 IgAN'ın patogenezi tam olarak aydınlatılamamış olsa da, epizodik üst solunum yolu enfeksiyonu ile eşzamanlı makroskopik hematüri, mukozal bağışıklık sisteminin IgAN'ın klinik belirtilerinde önemli bir rol oynadığını düşündürmektedir.4

cistanchetübülozaengellerböbrekhastalık, numuneyi almak için buraya tıklayın

IgA'nın anormal glikozilasyonuIgAN patogenezinde merkezidir. IgAN'lı hastalarda glomerüler IgA, IgA1 alt sınıfı ile sınırlıdır ve galaktozdan yoksun (galaktoz eksikliği olan IgA1 [Gd-IgA1]) bazı menteşe bölgesi O-glikanlarına sahip moleküller için zenginleştirilmiştir.5,6 Ayrıca, serum Gd seviyeleri -IgA1 ve IgA1-içerenbağışıklık kompleksleriGd-IgA1'e özgü otoantikorlara sahip (IC'ler) IgAN'lı hastalarda yükselir.7-9 Bununla birlikte, Gd-IgA1 üretimi için mekanizmalar hala tam olarak anlaşılmamıştır.

Bu çalışmada IgAN eğilimli ddY fare modelini kullandık. ddY fareleri, IgAN'lı insanlarda görülenleri taklit eden glomerüler yaralanmalar geliştirir.10 Farelerde, insan IgA1'i için tipik olan O-glikanlara sahip IgA molekülleri olmamasına rağmen, insan IgAN'ı ve bu IgAN'a yatkın ddY fare modeli, serum yükselmesi gibi bazı hastalığa özgü özellikleri paylaşır. anormal şekilde glikozillenmiş IgA ve IgG-IgA IC.6,11 Aslında, N-glikanların β1,4-galaktosilasyonundan kaynaklanan anormal IgA glikozilasyonu, yüksek moleküler ağırlıklı serum seviyelerinin yükselmesi nedeniyle murin IgAN'ını indükler IgA ve IgA içeren IC, bunların ardından böbrek birikimi ve glomerüler hasar.12 ddY fareleri, glomerüllerde IgA ve C3'ün birlikte birikmesiyle proteinüri ve mesanjiyal proliferatif glomerülonefrit gösterir. Genom çapında bir ilişki çalışması, ddY farelerinde IgAN'ın ilerlemesi ile bağlantılı aday lokusları tanımladı.13 Lokuslar, insan IgAN ile ilişkili olanlara işlevsel olarak benzer genleri içerir.14,15 Bu bulgular, ddY farelerinde ve insanlarda IgAN'ın etkilenebileceğini düşündürmektedir. en azından kısmen aynı duyarlılık genleri tarafından. Sıçangil IgA ve insan IgA1'in moleküler özellikleri farklılık gösterse de, anormal şekilde glikosile edilmiş IgA, polimerik IgA ve IgG-IgA IC'leri oluşturma eğilimindedir ve bunlar daha sonra IgAN'ın ddY murin modelinde ve ayrıca insan IgAN'ında böbrek hasarının ilerlemesini sağlar. Bu nedenle, ddY fare modeli, insan IgAN'ı ile bazı ortak özelliklere sahiptir ve IgAN'ın çeşitli patojenetik özelliklerinin analizi için yararlı bir araç olabilir.

Toll-like reseptörler (TLR'ler) doğuştan gelen bağışıklık sistemindeki anahtar moleküllerdir ve IgAN'ın patogenezinde rol oynarlar.16–20 Patojenlerden türetilen eksojen antijenler, TLR9-MyD88 sinyal yolunu aktive eder.21 Bu süreç, tip 1 interferon ve interlökin-6 (IL-6) ​​gibi inflamatuar sitokinlerin sentezini önemli ölçüde arttırdı.22 Yakın zamanda TLR9 aktivasyonunun ağırlaştığını gösterdik.böbrek hasarıIgAN'a yatkın ddY farelerde, IgA ve IgG-IgA IC'lerinin serum seviyelerinde yükselme ile birlikte.16 Ayrıca, spesifik TLR9 polimorfizmleri, IgAN'lı hastalarda hastalığın ilerlemesi ile ilişkilidir.16 Serum tümör nekroz faktörü-a ve IL{{ 6}}, IgAN hastalarında yükselir.23 Ayrıca, IL-6 ve IL-4, IgA1 üretimini arttırır ve galaktoz eksikliğinin derecesini vurgulayarak, IgA ile Gd-IgA1 sentezini arttırır{{13} }IgAN'lı hastalardan hücre dizileri salgılıyor.24 Bu bulgular, IL'nin-6 bu sürecin anahtar bir aracısı olabileceğini düşündürmektedir.24,25.

Tümör nekroz faktörü ligandı üst aile üyesi 13'ün (TNFSF13) geni, B hücrelerinin olgunlaşması ve hayatta kalması için merkezi bir sitokin olan çoğalmayı indükleyen bir ligandı (APRIL) kodlar.26 APRIL, B hücresi gelişimi için önemli olan bazı sinyal reseptörlerini diğerleriyle paylaşır. TNF süper ailesi ligandı, B hücresi aktive edici faktör (BAFF). BAFF ayrıca B hücrelerinin afinite olgunlaşmasında da rol oynar. Genom çapında bir ilişki çalışması, TNFSF13'ü IgAN ile ilişkili aday genlerden biri olarak tanımladı.27 Gerçekten de, IgAN'li hastalarda serum APRIL seviyeleri yükselir28 ve seviyeler renal prognoz ile ilişkilidir28.

Ligand CpG oligodeoksinükleotitleri (ODN'ler) tarafından TLR9 aktivasyonu yoluyla anormal şekilde glikosile edilmiş IgA'nın aşırı üretiminde yer alan altta yatan mekanizmaları daha iyi anlamak için IgAN'a eğilimli ddY fareleri ve insan IgA1-salgılayan hücreler kullandık.

SONUÇLAR

TLR9'un aktivasyonu, artan nefritojenik IgA üretimi yoluyla ddY farelerinde böbrek hasarını şiddetlendirdi

TLR9, CpG-ODN gibi ilgili ligandlar tarafından aktive edilebilir. Bir murin IgAN modelinde TLR9 aktivasyonunun etkisini test etmek için, IgAN'a eğilimli ddY farelerinde ligandın bir enjeksiyonunu kullandık. CpG-ODN enjekte edilen fareler, mezanjiyal proliferasyon ve hücre dışı matris genişlemesi geliştirdi (Şekil 1a). CpG-ODN enjekte edilen farelerde mezanjiyal proliferasyon ve mezanjiyal matris genişlemesine dayalı renal histolojik skorlar, kontrol farelerindekilerden önemli ölçüde daha yüksekti (P ​​< 0.01;="" şekil="" 1a).="" cpg-odn="" enjekte="" edilen="" farelerdeki="" idrar="" albümin="" seviyeleri,="" kontrol="" farelerininkiyle="" karşılaştırıldığında="" önemli="" ölçüde="" yükselmiştir="" (p="">< 0.{{20}}1;="" şekil="" 1a).="" yalnızca="" cpg-odn="" enjekte="" edilen="" fareler,="" iga,="" igg="" ve="" tamamlayıcı="" c3'ün="" mesanjiyal="" birikintilerini="" geliştirdi="" (şekil="" 1b).="" cpg-odn="" enjekte="" edilen="" fareler,="" kontrol="" farelerinden="" (şekil="" 1c)="" önemli="" ölçüde="" daha="" yüksek="" serum="" iga="" (p="">< 0.01)="" ve="" igg="" (p="">< 0.01)="" seviyeleri="" gösterdi.="" cpg-odn="" farelerine="" enjekte="" edilen="" farelerden="" alınan="" serum="" iga,="" ricinus="" communis="" aglutinin-i="" (rca-i)="" ve="" sambucus="" nigra="" aglutinin="" lektinleri="" ile="" kontrol="" farelerine="" göre="" daha="" düşük="" reaktiviteye="" sahipti="" (şekil="" 1c),="" bu="" da="" n="" üzerinde="" daha="" düşük="" bir="" galaktoz="" ve="" sialik="" asit="" içeriğine="" işaret="" ediyor.="" -="" murin="" iga'nın="" glikanları.="" ayrıca,="" cpg-odn="" enjekte="" edilen="" farelerde="" serum="" igg-iga="" ic="" düzeyi,="" kontrol="" farelerindekinden="" önemli="" ölçüde="" yüksekti="" (p="">< 0.05;="" şekil="" 1c).="" bu="" bulgular="" göstermiştir="">TLR9 aktivasyonuCpG-ODN tarafından anormal şekilde glikosile edilmiş IgA ve IgG-IgA IC'nin aşırı üretimi ile sonuçlandı vebağışıklık kompleksibirikimi ve böbrek hasarı.

B hücreleri ve dendritik hücreler, CpG-ODN tepkilerinde yer aldı

CpG-ODN'ye tepki olarak anormal şekilde glikosile edilmiş IgA'nın aşırı üretiminin uyarılmasında hangi hücre tiplerinin rol oynadığını araştırdık. B hücreleri ve dendritik hücreler (DC'ler), sırasıyla anti-fare CD19 ve CD11c antikorları kullanılarak ddY farelerinin dalaklarından FL floresanla aktive olan hücre sınıflandırması ile izole edildi. İzole edilmiş B hücrelerinin CpG-ODN uyarımı aşırı IgA üretimine neden oldu. Ek olarak, CpG-ODN, B hücreleri DC'lerle birlikte kültürlendiğinde IgA üretimini önemli ölçüde arttırdı (Ek Şekil S1). Bu sonuçlar, CpG-ODN'nin doğrudan B hücrelerini aktive ettiğini ve DCS'nin TLR9 aktivasyonu üzerine IgA üretimini daha da arttırdığını gösterdi.

APRIL'in aşırı üretimi, anormal şekilde glikosile edilmiş IgA ve IgG-IgA IC'lerinin sentezini artırdı

APRIL ve/veya BAFF'ın TLR9 aktivasyonu ile indüklenen nefritojenik IgA sentezine dahil olup olmadığını değerlendirdik. ddY farelerine CpG-ODN enjeksiyonu, APRIL ve BAFF serum seviyelerini önemli ölçüde yükseltti (Şekil 2a). Splenositlerdeki APRIL ekspresyon seviyeleri, anormal şekilde glikosile edilmiş IgA üretimi ve IgG-IgA IC50 oluşumu ile koreledir (Şekil 2b). Splenositlerdeki BAFF ekspresyon seviyeleri, anormal şekilde glikosile edilmiş IgA üretimi ile koreleydi, ancak IgG-IgA IC50 oluşumu ile ilişkili değildi (Şekil 2b). Ayrıca, APRIL'in serum seviyeleri, ancak BAFF ile değil, CpG-ODN enjekte edilmiş farelerde anormal şekilde glikosile edilmiş IgA ve IgG-IgA IC'nin yüksek serum seviyeleri ile önemli ölçüde koreledir (Şekil 2c). Bu bulgular, APRIL'in IgG-IgA IC'nin üretiminde daha fazla yer almasına rağmen, hem APRIL hem de BAFF'ın anormal şekilde glikosile edilmiş IgA üretiminde rol oynayabileceğini düşündürmektedir.

Şekil 1|CpG-oligodeoksinükleotid (ODN) uyarımı ile indüklenen nefritojenik IgA üretimi. CpG-ODN ile enjeksiyon, anormal şekilde glikosile edilmiş IgA ve IgG-IgA immün kompleksinin (IC) kan seviyelerini arttırdı ve ddY farelerinde böbrek hasarını şiddetlendirdi. (a) gelişmeden önce ddY fareleriIgA nefropatisi(IgAN), 12 hafta boyunca haftada üç kez CpG-ODN ile ip enjekte edildi. Glomerüler lezyonların histolojik analizinde, CpG-ODN enjekte edilen farelere mezangial hücre proliferasyonu ve hücre dışı matris genişlemesi gösterildi. Sağ panel, yarı niceliksel puanlama ile böbrek yaralanmalarının değerlendirilmesini gösterir. Yukarıda bahsedilen lezyonlara sahip glomerül yüzdeleri ile değerlendirilen renal histolojik skorlar, CpG-ODN enjekte edilmiş farelerde böbrek hasarının şiddetlendiğini gösterdi. CpG-ODN enjekte edilen farelerde idrar albümin seviyeleri, kontrol farelerininkiyle karşılaştırıldığında önemli ölçüde yükselmiştir. Alt panellerdeki çubuklar ¼ ortalama ± SEM. (b) Glomerüler IgA, IgG ve C3 tortularının immünohistokimyasal analizi. Yalnızca CpG-ODN enjekte edilen farelerde, IgA, IgG ve C3'ün mezanjiyal birikintileri gelişti. (c) 12 hafta boyunca CpG-ODN tedavisinden sonra IgA, IgG ve IgG-IgA IC'lerinin serum seviyeleri önemli ölçüde arttı. CpG-ODN enjekte edilen farelerde serum IgA, Ricinus communis aglutinin-I (RCA-I) ve Sambucus nigra aglutinin (SNA) lektinleri ile kontrol farelerinde IgA'dan önemli ölçüde daha düşük reaktivite gösterdi. Bu sonuçlar, CpG-ODN enjeksiyonunun anormal şekilde glikosile edilmiş IgA'nın serum seviyelerini arttırdığını gösterir. Bireysel noktalar gösterilir. *P < 0.05,="" **p="">< 0.01.="" od,="" optik="" yoğunluk.="" bu="" resmin="" görüntülenmesini="" optimize="" etmek="" için="" lütfen="" bu="" makalenin="" çevrimiçi="" versiyonuna="" www.kidney-international.org="" adresinden="">

Şekil 2|CpG-oligodeoksinükleotit (ODN) enjekte edilmiş farelerde proliferasyona neden olan bir ligandın (APRIL) aşırı üretimi ile anormal şekilde glikosile edilmiş IgA arasındaki korelasyon. (a) ddY farelerinin CpG-ODN ile enjeksiyonu, B-hücresi aktive edici faktör (BAFF) ve APRIL'in serum seviyelerini arttırdı. (b) Bütün splenositlerdeki BAFF ekspresyon seviyeleri, Ricinus communis aglutinin-I (RCA-I) lektin ile azalmış reaktivite ile korelasyon gösterdi, ancak IgG-IgA immün kompleksinin (IC) oluşumu ile korelasyon göstermedi. Bu arada, APRIL'in ekspresyon seviyeleri, anormal şekilde glikosile edilmiş IgA'nın üretimi ve IgG-IgA IC'nin oluşumu ile ilişkilendirildi. (c) CpG-ODN enjekte edilmiş farelerde, serum APRIL seviyeleri, IgA'nın RCA-I lektin ile düşük reaktivitesi ve yüksek IgG-IgA IC seviyeleri ile ilişkilendirildi. BAFF'ın serum seviyeleri, glikosile edilmiş IgA üretimi ve IgG-IgA IC'nin oluşumu ile korele değildi. Barlar ¼ ortalama - SEM. *P < 0.05.="" od,="" optik="">

IL-6, anormal şekilde glikosile edilmiş IgA üretimini indükledi

CpG-ODN enjekte edilen farelerde serum IL{{0}} seviyeleri, kontrol farelerine kıyasla önemli ölçüde daha yüksekti (P ​​< 0.05;="" şekil="" 3a).="" igan'a="" yatkın="" ddy="" farelerinin="" splenositlerini="" kullanarak,="" tlr9-'nın="" hücresel="" aktivasyonu="" ve="" anormal="" şekilde="" glikosile="" edilmiş="" iga'nın="" aşırı="" üretimine="" il-6="" aracılık="" edip="" etmediğini="" inceledik.="" cpg-odn="" uyarımı,="" in="" vitro="" olarak="" splenositler="" tarafından="" il-6="" üretimini="" arttırdı.="" splenositlerin="" kültür="" ortamına="" il-6="" eklenmesi="" iga="" üretimini="" arttırdı.="" ayrıca,="" il-6,="" anormal="" şekilde="" glikosile="" edilmiş="" iga'nın="" sentezini="" ve="" igg-iga="" ic50="" oluşumunu="" arttırdı="" ve="" april="" üretimini="" arttırdı="" (şekil="" 3a).="" il-6–nötralize="" edici="" antikor,="" cpg-odn–="" kaynaklı="" toplam="" iga'yı,="" anormal="" şekilde="" glikosile="" edilmiş="" iga="" üretimini="" ve="" igg-iga="" ic="" oluşumunu="" azalttı="" (şekil="" 3b).="" bu="" bulgular,="" tlr9="" aktivasyonunun="" en="" azından="" kısmen="" il-="" 6="" tarafından="" aracılık="" edildiğini="" göstermektedir.="" ayrıca,="" anormal="" şekilde="" glikosile="" edilmiş="" iga'nın="" üretiminde="" tlr9-aracılı="" başka="" bir="" yol(lar)="" yer="">

cistanchegeliştirebilirböbrekişlev

APRIL ve IL-6 insan IgA1- salgılayan hücrelerinde Gd-IgA1 sentezini artırdı

APRIL ve IL-6'nin insan IgA1-salgılayan hücrelerde nefritojenik IgA üretimini artıran başlıca aracılar için ortak olup olmadığını da test ettik. CpG-ODN takviyesi, IL-6 artışını, APRIL ifadesini, APRIL proteini üretimini ve IgA ve Gd-IgA1 üretimini arttırdı (Şekil 4a). IL-6 ve APRIL ile stimülasyon, IgA ve Gd-IgA1 üretimini arttırdı (Şekil 4b, c). CpG-ODN uyarımının IgA ve Gd-IgA1 üretimi üzerindeki etkileri, IL-6-nötralize edici antikorlar tarafından kısmen azaltıldı (Şekil 4d). Ayrıca, APRIL küçük, enterferans yapan (si)RNA yıkımı, IL-6 stimülasyonu tarafından indüklenen IgA ve Gd-IgA1 üretimini de azalttı (Şekil 4b), bu, APRIL ve IL-6'nin sinerjistik olarak Gd oluşumunu desteklediğini gösterir. -IgA1.

TARTIŞMA

İnsan IgAN'ındaki mezangial IgA, anormal O-glikosilasyon sergileyen IgA1 alt sınıfının dışındadır. 29,30 İnsan IgA1, murin IgA'sında bulunmayan O-glikanlara sahip bir menteşe bölgesine sahiptir.6,31,32 Bununla birlikte, N-glikanların anormal glikozilasyonu, ddY farelerinde bir murin IgAN modelinin patogenezinde rol oynar. anormal şekilde glikosile edilmiş IgA ve IgA içeren IC50'nin yükselmesi.11,12 O- veya N-glikanlardaki IgA karbonhidratlarının anormal modifikasyonları, nefritojenik IgA içeren IC'nin karakteristik özellikleridir.

Birkaç çalışma, IgAN'nin ilerlemesinde TLR9 aktivasyonunu göstermiştir.17–19 Bu çalışmada, ddY farelerinde CpG-ODN'nin ip enjeksiyonu ile TLR9 aktivasyonunun, muhtemelen çünkü anormal şekilde glikosile edilmiş IgA ve IgG-IgA IC'nin artan serum seviyeleri. Ayrıca, TLR9 aktivasyonunun insan IgA1-salgılayan hücre dizilerinde Gd-IgA1 sentezinde yer aldığını gösterdik.

Şekil 3|CpG-oligodeoksinükleotid (ODN) ve interlökin (IL)-6'in ddY farelerinin kültürlenmiş splenositleri üzerindeki etkisi. (a) CpG-ODN enjekte edilen farelerde IL-6 serum seviyeleri, kontrol farelerine kıyasla önemli ölçüde daha yüksekti. CpG-ODN uyarımı, kültürde ddY farelerinin splenositlerinin IL-6 üretimini arttırdı. ddY farelerinin splenositlerinin rekombinant IL-6 ile inkübasyonu, toplam IgA ve anormal şekilde glikosile edilmiş IgA üretimini arttırdı, bu da IgG-IgA immün kompleksinin (IC) oluşumuyla sonuçlandı. Rekombinant IL-6, çoğalmayı indükleyen bir ligandın (APRIL) aşırı üretimini arttırdı. (b) Kültürdeki splenositler, IL-6-nötralize edici antikor varlığında veya yokluğunda CpG-ODN ile uyarıldı. Anti–IL-6 antikoru, toplam IgA ve anormal şekilde glikosile edilmiş IgA üretimini azalttı ve sonuç olarak, CpG-ODN tarafından indüklenen IgG-IgA IC oluşumunu azalttı. Çubuklar ¼ ortalama ± SEM. * P < 0.05,="" **p="">< 0.01.="" od,="" optik="" yoğunluk;="" pbs,="" fosfat="" tamponlu="" tuzlu="" su="" çözeltisi;="" rca-i,="" ricinus="" communis="" aglutinin-i;="" sna,="" sambucus="" nigra="">

Şekil 4|CpG-oligodeoksinükleotid (ODN) veya proliferasyon indükleyici ligand (APRIL) takviyesinin insan IgA1-salgılayan hücre hatları üzerindeki etkisi, IgA1, galaktoz eksikliği olan IgA1 (Gd-IgA1) ve interlökin (IL){{ 9}} üretim. (a) CpG-ODN takviyesi, IL-6 üretimini arttırdı. CpG-ODN, APRIL'in gen ekspresyonunu arttırdı. Western blot analizi, CpG-ODN'nin APRIL protein seviyelerini arttırdığını gösterdi. Sonuçlar dansitometrik olarak değerlendirildi. CpG-ODN ile stimülasyon, IgA ve Gd-IgA1 üretimini indükledi. (b) NİSAN küçük, enterferans yapan RNA (siRNA) yıkımı, IL-6 ile indüklenen IgA ve Gd-IgA1 aşırı üretimini azalttı. (c) rekombinant APRIL ile uyarılan IgA{{2{{30}}}}üreten hücreler daha fazla IgA ve Gd-IgA1 üretti. (d) IgA1-salgılayan hücreler, CpG-ODN stimülasyonundan sonra anti-IL-6 antikoru ile inkübe edildi. CpG-ODN tarafından indüklenen gelişmiş IgA ve Gd-IgA1 üretimi, anti-IL-6 antikoru ve APRIL'in siRNA yıkımı ile azaltıldı. Çubuklar ¼ ortalama ± SEM. *P < 0.05,="" **p="">< 0.01.="" gadph,="" gliseraldehit-3-fosfat="" dehidrojenaz;="" pbs,="" fosfat="" tamponlu="" tuzlu="" su="">

TLR9 aktivasyonunun anormal glikosile edilmiş IgA üretimine aracılık ettiği mekanizmayı değerlendirdik. BAFF ve APRIL, B hücresinin hayatta kalması ve farklılaşmasındaki rolleriyle bilinir. McCarthy ve ark.33, BAFF'ı aşırı eksprese eden transgenik farelerin, böbrek hasarı ve idrar anormallikleri ile birlikte mesanjiyal IgA birikintileri geliştirdiğini gösterdi.33 Yakın zamanda, IgAN'li hastaların tonsiller germinal merkezlerinde APRIL gen ekspresyonunun yükseldiğini gösterdik. Ayrıca, tonsiller germinal merkezlerde APRIL'in aşırı ekspresyonu, IgAN'lı hastalarda serum Gd-IgA1 seviyeleri ve hastalık şiddeti ile koreledir.34 Bu bulgular, hem BAFF hem de APRIL'in IgAN'ın patogenezinde rol oynayabileceğini düşündürmektedir. Ancak, BAFF/APRIL ve TLR9 aktivasyonu arasındaki ilişki belirsizdir. Bu çalışmada, TLR9 aktivasyonu, APRIL'in gen ekspresyonunu ve serum seviyelerini arttırdı. Anormal şekilde glikosile edilmiş IgA'nın serum seviyeleri, splenositlerdeki BAFF ve APRIL ekspresyon seviyeleri ile koreledir. Bununla birlikte, IgG-IgA IC'nin serum seviyeleri, APRIL'in ekspresyon seviyeleri ile ilişkiliydi ancak BAFF ile ilişkili değildi. Ayrıca, serum APRIL seviyeleri, TLR9- ile aktive edilmiş farelerde anormal şekilde glikosile edilmiş IgA ve IgG-IgA IC'nin aşırı üretimi ile ilişkilendirildi. IgA1-salgılayan hücrelerde, TLR9 aktivasyonu ayrıca APRIL yoluyla Gd-IgA1'in aşırı üretimini indükledi. Bu sonuçlar APRIL'in TLR9-nefritojenik IgA'nın aşırı üretiminde ve IgG-IgA IC'nin oluşumunda önemli bir rol oynadığını gösterdi.

B ve T hücrelerinin ve DC'lerin rolünü belirlemek için hücre tipine göre yanıt netleştirilmelidir. Bu çalışmada, B hücrelerinin ve plazmasitoid DC'lerin rolünü değerlendirdik. TLR9 DC'ler, B hücreleri ve makrofajlar tarafından eksprese edilir, ancak T hücreleri tarafından ifade edilmez.35-37 BAFF/APRIL'in T hücresinden bağımsız antikor yanıtına katkısı bilinmektedir.38,39 Burada TLR9 aktivasyonunun aşağıdakilerin sentezini artırıp artıramayacağını test ettik. anormal şekilde glikosile edilmiş IgA ve APRIL yoluyla T hücresinden bağımsız bir şekilde IgG-IgA IC oluşumu. Ayrıca klonlanmış insan IgA1- salgılayan hücre dizileri kullandık ve TLR9 aktivasyonunun APRIL ve IL-6 yoluyla Gd-IgA1 üretimini arttırdığını gösterdik, bu da sürecin T hücresinden bağımsız olduğunu düşündürdü. Ayrıca, B hücrelerinin ve DC'lerin rollerini değerlendirdik. B hücreleri ve DC'ler için spesifik CpG-ODN'nin, bütün splenositlerde anormal şekilde glikosile edilmiş IgA üretimini arttırdığını gösterdik. Ayrıca, in vitro olarak CpG-ODN stimülasyonunun IgA üretimini artırıp artıramayacağını araştırdık. İzole edilmiş B hücrelerinin CpG-ODN uyarımı aşırı IgA üretimine neden oldu. Ek olarak, CpG-ODN, B hücreleri DC'lerle birlikte kültürlendiğinde IgA üretimini önemli ölçüde arttırdı (Ek Şekil S1). Bu sonuçlar, CpG-ODN aktivasyonunun daha büyük sonuçlarla sonuçlandığını göstermektedir.IgA üretimi ve anormal glikozilasyonT hücresinden bağımsız bir şekilde TLR9 aracılık eder.

IL-6'nin immünoglobulin üreten hücrelerin proliferasyonunu ve plazma hücrelerinin terminal farklılaşmasını vurguladığı bilinmektedir.40–42 Ayrıca, IL-6 ayrıca T foliküler yardımcı hücre farklılaşması için birincil aday sitokin olabilir. .43,44 T foliküler yardımcı hücreler, B hücresi afinite olgunlaşması, sınıf değiştirme rekombinasyonu ve germinal merkezde bellek B hücresi ve plazma hücresi üretimi için gereklidir.43,44 Bir lupus fare modelinde, IL-6 eksikliği, T foliküler yardımcı hücre farklılaşmasını ve germinal merkez B hücresi genişlemesini önleyerek otoantikor üretiminin azalmasına neden oldu.45 Bu çalışma, CpG-ODN tarafından TLR9 aktivasyonunun murin IgAN splenositlerinde IL-6 üretimini arttırdığını açıkladı. IL-6, bir murin IgAN modelinde anormal şekilde glikosile edilmiş IgA ve IgG-IgA IC'nin aşırı üretimini indükledi. İnsan IgA1-salgılayan hücrelerinde, IL-6'nin Gd-IgA1.24 üretimini arttırdığını doğruladık. TLR9 aktivasyonunun aracılık ettiği.

APRIL, IgA sınıfı geçiş ve plazmasitoid farklılaşmasında önemli bir rol oynar.46,47 IL-6, B hücrelerinin IgA salgılayan plazma hücrelerine terminal farklılaşmasını destekler.41,42 Bu çalışma, IL{{7}'nin } uyarım, APRIL üretimini tetikledi. Sonra APRIL ve TLR9 aktivasyonunun aracılık ettiği IL-6 arasında anormal şekilde glikosile edilmiş IgA üretimini indükleyen bir ilişki olduğunu varsaydık. IL-6-nötralize edici antikorun, CpG-ODN ile indüklenen Gd-IgA1 aşırı üretimini tamamen bloke etmediğini ve APRIL'in siRNA yıkımının, IL-6 tarafından indüklenen Gd-IgA1 aşırı üretimini azalttığını bulduk. Bu veriler, APRIL ve IL-6'nin TLR9 aktivasyonunun aracılık ettiği Gd-IgA1 üretimini sinerjistik olarak desteklediğini ileri sürdü. Ayrıca, APRIL'in hem IL-6-nötralize edici antikoru hem de siRNA yıkımı, IgA ve Gd-IgA1 üretimini tek başına IL-6-nötralize edici antikordan daha fazla azalttı. Böylece TLR9 aktivasyon yolu, antikor üretimi ve glikozilasyon üzerinde IL-6 ve APRIL sinerjistik etkileri içerir (Şekil 5). Yakın zamanda yapılan çalışmalar ayrıca IL-6'in APRIL ile kombinasyon halinde plazma hücrelerinin oluşumunu ve hayatta kalmasını indüklediğini göstermiştir.48,49 Bununla birlikte, APRIL ve IL-6 arasındaki hücreler arası sinyal yollarını netleştirmek için gelecekte yapılacak çalışmalara ihtiyaç vardır. nefritojenik IgA üretimi.

cistancheiçinböbrekenfeksiyon

Sonuç olarak,TLR9 aktivasyonuanormal glikosile edilmiş IgA üretimini ve IgG-IgA IC oluşumunu artırarak bir murin IgAN modelinde böbrek hasarını şiddetlendirdi. Bu süreçte, TLR9 aktivasyonunun neden olduğu APRIL ve IL-6'nin aşırı üretimi, nefritojenik IgA üretimini arttırdı. Ek olarak, bu çalışma, APRIL ve IL-6'in, anormal şekilde glikosile edilmiş IgA üretmek için bağımsız olarak olduğu kadar sinerjistik olarak işlev gördüğünü açıklığa kavuşturmuştur. Bu bulgular, IgAN için yeni terapötik yaklaşımların gelecekteki gelişimi hakkında bilgi verebilir.

Şekil 5|IgA nefropatisinde (IgAN) IgA üreten hücrelerde çoğalmayı indükleyen bir ligand (APRIL) olan Toll benzeri reseptör 9 (TLR9) ve interlökin (IL)-6 arasındaki sinerjistik rol. TLR9 aktivasyonu, APRIL ve IL-6 üretimini indükledi ve sonuç olarak

anormal şekilde glikosile edilmiş IgA'nın aşırı üretimi. APRIL ve IL-6, anormal şekilde glikosile edilmiş IgA oluşumunu teşvik etmek için sinerjistik olarak işlev görür. APRIL'in IL-6 üretimini uyarmasına ek olarak, daha önce bildirildiği gibi IL-6, APRIL sentezini de geliştirebilir. Ayrıca, APRIL ve IL-6, anormal şekilde glikosile edilmiş IgA üretimini bağımsız olarak destekler. NF-kB, nükleer faktör-kB.

YÖNTEMLER

Hayvanlar ve deneysel protokoller

IgAN'a yatkın ddY faresi, insan IgAN'ı taklit eden değişken insidans ve glomerüler yaralanma kapsamına sahip bilinen bir spontan IgAN modelidir.böbrek hasarı: erken veya geç başlangıçlı ve hareketsiz farelere sahip fareler. ddY farelerinde erken başlangıçlı hastalık, 20 haftalıktan sonra proteinüri ve glomerüler IgA birikintileri ile kendini gösterir.13 Bu nedenle, bu modelde TLR9 aktivasyonunun IgAN'ı şiddetlendirip şiddetlendirmediğini değerlendirmek için 18 haftalıkken ddY fareleri kullandık. Toplam 30 dişi ddY faresi (SLC Japonya, Shizuoka, Japonya) Juntendo Üniversitesi, Tokyo, Japonya'nın hayvan tesisinde tutuldu. Fareler normal yem (Oriental Yeast Co., Tokyo, Japonya) ve su ad libitum ile beslendi ve patojen içermeyen belirli bir odaya yerleştirildi. Deney protokolü, Juntendo Üniversitesi Tıp Fakültesi Hayvan Deneyleri Etik İnceleme Komitesi tarafından onaylandı. 6 haftalıkken fareler rastgele 2 gruba ayrıldı. Bir grup, 12 hafta boyunca haftada 3 kez CpG-ODN enjekte edildi; ikinci gruba (kontrol) non-CpG-ODN enjekte edildi. CpG-ODN ve non-CpG-ODN kimyasal olarak sentezlendi (Invitrogen; Thermo Fisher Scientific, Kanagawa, Japonya). ODN dizileri sırasıyla CpG veya CpG olmayan ODN'ler için TCGTCGTT TTCGGCGCGCGCCG veya TGCTGCTTTTGGGGGGCCCCCC (50/30) şeklindedir.

Murin serumunda IgA, IgG, IgG-IgA IC ve anormal glikozile IgA'nın belirlenmesi

Bukkal venden kan örnekleri alındı. Serum IgA, IgG ve IgG-IgA IC50, sandviç enzim bağlantılı immünosorbent tahlili (ELISA; Bethyl Laboratories, Montgomery, TX) ile önceki raporumuza dayalı olarak değiştirilmiş yöntem kullanılarak ölçüldü.50 Lektin-bağlama tahlilleri IgA'nın glikoformuna erişmek için kullanılır. Sırasıyla galaktoza (ağırlıklı olarak a2,6 bağlantısında) bağlı galaktozu ve sialik asidi tanıyan biyotinlenmiş RCA-I (Vector Laboratories, Burlingame, CA) ve Sambucus nigra bark lektin (Vector Laboratories) bu tahlilde kullanıldı.51 Seyreltilmiş serum oyuk başına 100 ng IgA'da eklendi. Serum IgA miktarının belirlenmesi için 1 mg/ml keçi anti-fare IgA (100 ml/kuyu) ile kaplanmış mikrotitre plakaları bu numunelerle inkübe edildi ve ardından biyotinlenmiş Sambucus nigra aglütinin veya RCA-I ilave edildi. Avidin-yaban turpu peroksidaz konjugatı (ExtrAvidin; Sigma-Aldrich, St. Louis, MO) uygulandı. Anormal şekilde glikosile edilmiş bağlı IgA'nın serum seviyeleri, birimlerle ifade edildi (1 birim, 490 nm'de ölçülen optik yoğunluk 1.0 olarak). APRIL ve BAFF serum seviyeleri, üreticinin protokollerine göre bir fare APRIL ELISA kiti (MyBioSource, San Diego, CA) ve bir fare BAFF ELISA kiti (R&D Systems, Minneapolis, MN) kullanılarak ölçüldü.

İnsan IgA1-salgılayan hücreler tarafından üretilen Gd-IgA1 testi

Gd-IgA1'e özgü antikor (IBL, Japonya) kullanılarak Gd-IgA1 için bir sandviç ELISA oluşturuldu.52 Fosfat tamponlu salin solüsyonunda seyreltilmiş Gd-IgA1'e özgü antikor (7.5 mg/ml), 18 için bir ELISA plakasına kaplandı. saat oda sıcaklığında. Örnekler uygulandı ve 2 saat oda sıcaklığında inkübe edildi. Plakalar yıkandı ve 2 saat süreyle oda sıcaklığında 1:1000- seyreltilmiş yaban turpu peroksidazla konjuge fare anti-insan IgA1 a1-zincir spesifik monoklonal antikor (Southern Biotech, Birmingham, AL) ile inkübe edildi. Yıkamadan sonra plakalar SIG-MAFAST o-fenilendiamin solüsyonu (Sigma-Aldrich) ile geliştirildi ve reaksiyon 1 M sülfürik asit (Wako, Osaka, Japonya) ilave edilerek durduruldu. Gd-IgA1 seviyeleri, 490 nm'de optik yoğunluğun standart bir eğrisine (4-parametre lojistik eğri uydurma) atıfta bulunarak tahmin edildi ve birimlerle ifade edildi. İnsan plazması IgA152'den enzimatik olarak üretilen Gd-IgA1, standart bir eğri oluşturmak için seri olarak seyreltildi (1.37-1000 ng/ml). Bu çalışmada 1 ünite standart Gd-IgA1.52'nin 1 ng/mL'si olarak tanımlandı.

ddY farelerde böbrek hasarının değerlendirilmesi

böbreklerwere removed after perfusion with normal saline solution. Renal tissue specimens for microscopic examination were fixed in 20% formaldehyde, embedded in paraffin, cut into 3-mm-thick sections, and then stained with periodic acid–Schiff. Specimens were quantitatively analyzed to determine the percentage of glomeruli with segmental and global sclerosis and/or mesangial cell proliferation and/or increase in the mesangial matrix. Each section was scored semiquantitatively for percentages of glomeruli with aforementioned lesions (0, 0%; 1, 1% to 24%; 2, 25% to 49%; and 3, >20 glomerülün yüzde 50'si).13,53,54 Her bölüm için toplam maksimum puan 9'du. İmmünofloresan için böbrek numuneleri, optimal kesme sıcaklığı bileşiğine (Sakura Finetek Japan Co., Tokyo, Japonya) daldırıldı ve –80 derecede saklandı. Örnekler 3-mm kalınlığında kesitler halinde kesildi, aseton ile 5 dakika -20 derecede sabitlendi, fosfat tamponlu salin solüsyonu ile yıkandı, bir bloke edici ajanla bloke edildi (DS Pharma Biomedical Co., Osaka, Japonya) oda sıcaklığında 30 dakika ve ardından 2 saat boyunca aşağıdaki birincil antikorlarla oda sıcaklığında inkübe edildi: keçi anti-murin IgA, Alexa konjuge keçi anti-murin IgG ve sıçan anti-C3 (Betil Laboratuvarları). Fosfat tamponlu salin solüsyonuyla 3 kez daha yıkandıktan sonra, slaytlar montaj ortamıyla (Dako, Tokyo, Japonya) monte edildi. Örnekler, konfokal lazer mikroskopisi (Olympus Corporation, Tokyo, Japonya) kullanılarak analiz edildi ve görüntülendi.

Gerçek zamanlı kantitatif polimeraz zincir reaksiyonu

Dalak hücrelerinden RNA, Torizol solüsyonu (Invitrogen, Tokyo, Japonya) kullanılarak ekstre edildi ve RNeasy Mini Kit (74106; Qiagen, Valencia, CA) ile saflaştırıldı. Gerçek zamanlı kantitatif polimeraz zincir reaksiyonu, Applied Biosystems 7500 Real-Time polimeraz zincir reaksiyon sistemi kullanılarak SYBR Green PCR Master Mix (Applied Biosystems, Tokyo, Japonya) ve spesifik primerler kullanılarak gerçekleştirilmiştir: fare TLR9 ileri primer TCTCCCAACATGGTTCTCCGTCG, ters primer TGCAGTCCAGGCCATGA; fare MyD88 ileri primer GCACCTGTGTCTGGTCCATT, ters primer CTGTTGGA CACCTGGAGACA; ve temel gen gliseraldehit-3-fosfat dehidrojenaz ileri primeri CATTGTGGAAG GGCTCATGA, ters primer TCTTCTGGGTGGCAGTGATG. Amplifikasyon koşulları aşağıdaki gibidir: 20 saniye boyunca 95 derecede ön ısıtma ve ardından 95 derecede 3 saniye boyunca 40 döngü denatürasyon ve 30 saniye boyunca 60 derecede tavlama ve uzatma. APRIL, Hs00601664_g1, Mm03809849-s1 ve BAFF, Mm01168134-m1 primeri için homo sapiens'e özgü TaqMan gen ekspresyon deneyleri (Life Technologies, Carlsbad, CA) satın alındı. . TaqMan polimeraz zincir reaksiyonu döngü koşulları şu şekildeydi: 95 derecede 20 saniye ön ısıtma ve ardından 95 derecede 3 saniye 40 döngü denatürasyon ve 30 saniye boyunca 60 derecede tavlama ve uzatma

ddY farelerinin splenositleri ile in vitro çalışmalar

Splenositler, yüzde 20 fetal buzağı serumu, 100 mg/ml streptomisin ve 100 U/ml penisilin ile takviye edilmiş Roswell Park Memorial Institute-1640 ortamında kültürlendi. Kırmızı kan hücreleri, Kırmızı Kan Hücresi Parçalama Tamponunda (R7757; Sigma-Aldrich) oda sıcaklığında 1 dakika boyunca parçalandı, ardından Roswell Park Memorial Institute-1640 ortamında yıkandı.50 Hücre kültürleri, 37 derecede nemlendirilmiş bir inkübatörde tutuldu. yüzde 5 CO2. TLR9 ligandı olarak C sınıfı CpG-ODN (TCGTCGTTTTCGGCGCGCGCCG) kullanıldı. Rekombinant IL-6, anti–IL-6 antikoru ve sıçan IgG1 izotip kontrolü, R&D Systems'den elde edildi. Hücreler, ortam veya önerilen konsantrasyonlarda CpG-ODN, 10 ng/ml rekombinant IL-6 ve 100 ng/ml anti-IL6 antikoru ile kültürlendi. Splenositler tarafından üretilen IgA, anormal şekilde glikosile edilmiş IgA, IgG-IgA IC50 ve APRIL, in vitro 72-saat inkübasyondan sonra ELISA ile ölçüldü.

İnsan IgA1-salgılayan hücre dizileri ile in vitro çalışmalar

Sağlıklı bir kişinin kanından alınan B hücreleri, Epstein-Barr virüsü ile ölümsüzleştirildi, IgA salgılayan hücre dizileri verecek şekilde alt klonlandı ve tarif edildiği gibi kültürlendi.9 Ayrıca, APRIL/BAFF ve IL için reseptörlerin ekspresyonunu doğruladık. -6. Hücreler, yüzde 20 cenin buzağı serumu, streptomisin ve penisilin ile takviye edilmiş Roswell Park Memorial Institute-1640 ortamında, yüzde 5 CO2 ile 37 derecede nemlendirilmiş bir inkübatörde kültürlendi. TLR9 ligandı olarak Sınıf B CpG-ODN (TCGTCGTTTTGTCGTTTTGTCGTT) kullanıldı. Rekombinant IL-6, rekombinant APRIL, anti-IL-6 antikoru ve keçi IgG kontrol antikoru, R&D Systems'den elde edildi. Hücreler, 72 saat boyunca ortam veya önerilen konsantrasyonlarda CpG-ODN, 50 ng/ml rekombinant IL-6, 40 ng/ml rekombinant APRIL ve 100 ng/ml anti-IL-6 antikoru ile kültürlendi.

Western blotlama

IgA1- salgılayan hücrelerden gelen süpernatanlar, yüzde 5 ila yüzde 15 gradyan levha jelleri kullanılarak indirgeme koşulları altında sodyum dodesil sülfat-poliakrilamid jel elektroforezi ile ayrıldı. Jeller poliviniliden diflorür membranlara aktarıldı ve APRIL (Abcam Inc., Cambridge, MA) ve gliseraldehit-3-fosfat dehidrojenaz (Abcam Inc) için spesifik antikorlarla inkübe edildi. Lekeler, geliştirilmiş kemilüminesans (GE Healthcare, Tokyo, Japonya) ve ışıldama detektörü (Konica Minolta Healthcare, Tokyo, Japonya) kullanılarak kemilüminesans ile görselleştirildi. Sonuçlar dansitometrik olarak değerlendirildi.

NİSAN siRNA yıkımı

İnsan IgA1- salgılayan hücreler 24-kuyu kültür plakalarında kültürlendi ve üreticinin talimatlarına göre transfeksiyon protokolü kullanılarak APRIL'e özgü siRNA (GS8741, Qiagen) veya siRNA hedeflemeyen kontrol (GS10673, Qiagen) ile transfekte edildi. . 24 saat inkübasyondan sonra hücreler, 72 saat boyunca 50 ng/ml rekombinant IL-6 (R&D Systems) ile inkübe edildi. İnkübasyondan sonra, IgA ve Gd-IgA1 ölçümü için hücreler ve süpernatanlar toplandı.

istatistiksel analiz

Farklı parametreler arasındaki korelasyon, bir varyans analizi kullanılarak analiz edildi. Veriler, ortalama ± SD veya medyan değerler olarak ifade edildi. < {{0}}.05="" p="" değerleri="" istatistiksel="" olarak="" anlamlı="" kabul="" edildi.="" tüm="" istatistiksel="" analizler="" windows="" için="" graphpad="" prism="" sürüm="" 6.0="" (graphpad="" software,="" san="" diego,="" ca)="" kullanılarak="">

cistancheiçinböbrekhastalık belirtileri

AÇIKLAMA

Tüm yazarlar rakip çıkarlar beyan etmemiştir.

TEŞEKKÜRLER

Bu çalışma kısmen JSPS KAKENHI Hibe No. 18K08252 ve Japonya Tıbbi Araştırma ve Geliştirme Ajansı AMED'den Böbrek Hastalıkları için Pratik Araştırma Projesi tarafından desteklenmiştir. JN ve BAJ, Ulusal Sağlık Enstitüleri hibeleri DK078244 ve DK082753 tarafından kısmen desteklenmiştir. Mükemmel teknik yardımı için Bayan Terumi Shibata'ya teşekkür ederiz. Ayrıca Bayan Takako Ikegami ve Bayan Tomomi Ikeda'ya (Moleküler ve Biyokimyasal Araştırmalar Bölümü, Juntendo Üniversitesi Tıp Fakültesi) ve Bayan Tamami Sakanishi'ye (Juntendo Üniversitesi Tıp Enstitüsü, Juntendo Üniversitesi Tıp Enstitüsü) mükemmel teknik yardımları için teşekkür ederiz. .

EK MATERYAL

Ek Dosya (PDF)

Şekil S1. CpG-oligodeoksinükleotid (ODN) ile aktive olan B hücreleri ve dendritik hücreler (DC'ler), IgA üretimini daha da artırır. B hücreleri ve DC'ler, ddY farelerinin dalaklarından izole edildi. CpG-ODN uyarımı, izole edilmiş B hücrelerinde IgA üretimini arttırdı. Bu artış, B hücrelerinin DC'lerle birlikte kültürlenmesiyle daha da geliştirildi. *P < 0.05.="" ayrıntılı="" yöntemler="" ek="" yöntemlerde="" verilmiştir.="" ek="">

REFERANSLAR

1. Myette JR, Kano T, Suzuki H, et al. Proliferasyon İndükleyici Ligand (APRIL) hedefli antikor, murin IgA nefropatisinin güvenli ve etkili bir tedavisidir. Böbrek İnt. 2019;96:104–116.

2. Levy M, Berger J. IgA nefropatisinin dünya çapındaki perspektifi. J Böbrek Dis. 1988;12:340–347.

3. D'Amico G. Dünyadaki en yaygın glomerülonefrit: IgA nefropatisi. QJ Med. 1987;64:709–727.

4. Feehally J, Beattie TJ, Brenchley PE, et al. Tekrarlayan IgA nefropatisinde IgA sisteminin sıralı çalışması. Böbrek İnt. 1986;30:924-931.

5. Wyatt RJ, Julian BA. IgA nefropatisi. N Engl J Med. 2013;368:2402–2414.

6. Suzuki H, Yasutake J, Makita Y, et al. IgA nefropatisi ve nefritli IgA vasküliti, galaktoz eksikliği olan IgA1- yönelimli patogenezi içeren ortak bir özelliğe sahiptir. Böbrek İnt. 2018;93:700–705.

7. Glassock RJ. IgA nefropatisinde antikor aktivitesinin analizi. J Clin Invest. 2009;119:1450–1452.

8. Moldoveanu Z, Wyatt RJ, Lee JY, et al. IgA nefropatisi olan hastalarda serum galaktoz eksikliği olan IgA1 seviyeleri artmıştır. Böbrek İnt. 2007;71: 1148-1154.

9. Suzuki H, Moldoveanu Z, Salon S, et al. IgA nefropatisi olan hastalardan alınan IgA1-salgılayan hücre dizileri, anormal şekilde glikosile edilmiş IgA1 üretir. J Clin Invest. 2008;118:629–639.

10. Imai H, Nakamoto Y, Asakura K, et al. ddY farelerinde spontan glomerüler IgA birikimi: IgA nefritinin bir hayvan modeli. Böbrek İnt. 1985;27:756–761.

11. Okazaki K, Suzuki Y, Otsuji M, et al. Erken başlangıçlı IgA nefropatisi modelinin geliştirilmesi. J Am Soc Nephrol. 2012;23:1364-1374.

12. Nishie T, Miyaishi O, Azuma H, et al. Beta-1,4-galaktosiltransferaz-I eksikliği olan farelerde immünoglobulin A nefropatisi benzeri bir hastalık gelişimi. J Pathol'um. 2007;170:447–456.

13. Suzuki H, Suzuki Y, Yamanaka T, et al. Yeni bir IgA nefropati modelinde genom çapında tarama, 6q kromozomu üzerinde insan IGAN1'ine sentetik bir bölgede, murin kromozom 10 üzerinde bir duyarlılık lokusu tanımlar22-23. J Am Soc Nephrol. 2005;16:1289–1299.

14. Takei T, Iida A, Nitta K, et al. Selektin genlerindeki tek nükleotid polimorfizmleri ile immünoglobulin A nefropatisi arasındaki ilişki. J Hum Genet'im. 2002;70:781–786.

15. Gharavi AG, Yan Y, Scolari F, et al. Glomerülonefritin en yaygın nedeni olan IgA nefropatisi 6q22-23 ile bağlantılıdır. Nat Genet. 2000;26:354–357.

16. Suzuki H, Suzuki Y, Narita I, et al. Toll benzeri reseptör 9, IgA nefropatisinin şiddetini etkiler. J Am Soc Nephrol. 2008;19:2384–2395.

17. Nakata J, Suzuki Y, Suzuki H, et al. Tonsillektomi ve steroid tedavisini takiben IgA nefropatisinde nefritojenik serum galaktoz eksikliği olan IgA1'deki değişiklikler. PLoS Bir. 2014;9:e89707.

18. Sato D, Suzuki Y, Kano T, et al. Tonsil TLR9 ekspresyonu ve IgA nefropatili hastalarda steroid puls tedavisi ile tonsillektominin etkinliği. Nefrol Kadran Nakli. 2012;27:1090–1097.

19. Coppo R, Camilla R, Amore A, et al. Toll benzeri reseptör 4 ekspresyonları, immünoglobulin A nefropatisi olan hastaların dolaşımdaki mononükleer hücrelerinde artar. Clin Exp İmmünol. 2010;159:73–81.

20. Maiguma M, Suzuki Y, Suzuki H, et al. Diyet çinko, IgA nefropatisinin ilerlemesinde önemli bir çevresel değiştiricidir. PLoS Bir. 2014;9: e90558.

21. Kawai T, Akira S. Toll benzeri reseptörler tarafından NF-kappaB'ye sinyal verilmesi. Trendler Mol Med. 2007;13:460–469.

22. Kuwata H, Matsumoto M, Atarashi K, et al. IkappaBNS, Toll benzeri reseptöre bağımlı genlerin bir alt kümesinin indüklenmesini engeller ve iltihaplanmayı sınırlar. bağışıklık. 2006;24:41–51.

23. Rostoker G, Rymer JC, Barnard G, et al. Serum proinflamatuar sitokinler ve bunların çözünür reseptörlerindeki dengesizlikler: idiyopatik IgA nefropatisi (IgAN) ve Henoch Schönlein purpura nefritinin ilerlemesinde varsayılan bir rol ve potansiyel bir immünoglobulin tedavisi hedefi mi? Clin Exp İmmünol. 1998;114:468–476.

24. Suzuki H, Raska M, Yamada K, et al. Sitokinler, C1GalT1 ve ST6GalNAc-II enzimlerini düzenleyerek IgA1 O-glikosilasyonunu değiştirir. J Biol Chem. 2014;289:5330–5339.

25. Yamada K, Huang ZQ, Raska M, et al. STAT3 sinyalinin inhibisyonu, IgA nefropatisinde IgA1 otoantijen üretimini azaltır. Böbrek Uluslararası Temsilcisi 2017;2:1194–1207.

26. Schneider P, MacKay F, Steiner V, et al. Tümör nekroz faktör ailesinin yeni bir ligandı olan BAFF, B hücre büyümesini uyarır. J Exp Med. 1999;189: 1747-1756.

27. Kiryluk K, Li Y, Scolari F, et al. IgA nefropatisi için yeni risk lokuslarının keşfi, bağırsak patojenlerine karşı bağışıklıkta yer alan genleri içerir. Nat Genet. 2014;46:1187–1196.

28. Han SS, Yang SH, Choi M, et al. IgA nefropatisinin ilerlemesinde TNF süper ailesi üyesi 13'ün rolü. J Am Soc Nephrol. 2016;27:3430–3439.

29. Hiki Y, Odani H, Takahashi M, et al. Kütle spektrometrisi, IgA nefropatisinde glomerüler IgA1'in O altında glikosilasyonunu kanıtlar. Böbrek İnt. 2001;59: 1077-1085.

30. Allen AC, Bailey EM, Brenchley PE, et al. IgA nefropatisindeki mezangial IgA1, anormal O-glikosilasyon sergiler: üç hastada gözlemler. Böbrek İnt. 2001;60:969-973.

31. Hiki Y. IgA1 menteşe bölgesinin O-bağlı oligosakkaritleri: IgA nefropatisinin oluşumunda ve/veya ilerlemesinde anormal yapısının rolleri. Clin Exp Nefrol. 2009;13:415–423.

32. Mestecky J, Tomana M, Moldoveanu Z, et al. IgA nefropatisinin patogenezinde IgA1 moleküllerinin anormal glikozilasyonunun rolü. Böbrek Kan Basıncı Arş. 2008;31:29–37.

33. McCarthy DD, Kujawa J, Wilson C, et al. BAFF'ı aşırı eksprese eden fareler, kommensal bir flflora bağımlı, IgA ile ilişkili nefropati geliştirir. J Clin Invest. 2011;121:3991–4002.

34. Muto M, Manfroi B, Suzuki H, et al. Toll benzeri reseptör 9 stimülasyonu, IgA nefropatisinde tonsiller germinal merkez B hücreleri tarafından çoğalmayı indükleyen bir ligandın anormal ekspresyonunu indükler. J Am Soc Nephrol. 2017;28:1227–1238.

35. Latz E, Schoenemeyer A, Visintin A, et al. TLR9 sinyalleri, lizozomda ER'den CpG DNA'ya yer değiştirdikten sonra. Nat İmmünol. 2004;5:190–198.

36. Hornung V, Rothenfusser S, Britsch S, et al. İnsan periferik kan mononükleer hücrelerinin hücresel alt kümelerinde ücretli benzeri reseptör 1-10 mRNA'nın kantitatif ifadesi ve CpG oligodeoksinükleotitlerine duyarlılık. J İmmünol. 2002;168:4531–4537.

37. Kadowaki N, Ho S, Antonenko S, et al. İnsan dendritik hücre öncülerinin alt kümeleri, farklı ücret benzeri reseptörler ifade eder ve farklı mikrobiyal antijenlere yanıt verir. J Exp Med. 2001;194:863–869.

38. He B, Xu W, Santini PA, et al. Bağırsak bakterileri, sitokin APRIL'in epitelyal hücre salgılanmasını indükleyerek T hücresinden bağımsız immünoglobulin A(2) sınıfı geçişini tetikler. bağışıklık. 2007;26:812-826.

39. Mackay F, Schneider P. BAFF kodunu kırmak. Nat Rev İmmünol. 2009;9: 491-502.

40. Kunimoto DY, Nordan RP, Strober W. IL-6, IgM sentezinde IL-1 ve IgA sentezinde IL-5'nin güçlü bir kofaktörüdür. J İmmünol. 1989;143:2230–2235.

41. Beagley KW, Eldridge JH, Lee F, et al. İnterlökinler ve IgA sentezi. İnsan ve murin interlökin 6, IgA'ya bağlı B hücrelerinde yüksek oranlı IgA salgılanmasını indükler. J Exp Med. 1989;169:2133–2148.

42. Ramsay AJ, Koca AJ, Ramshaw IA, et al. İn vivo mukozal IgA antikor yanıtlarında interlökinin-6 rolü. Bilim. 1994;264:561-563.

43. Nurieva RI, Chung Y, Martinez GJ, et al. Bcl6, T foliküler yardımcı hücrelerin gelişimine aracılık eder. Bilim. 2009;325:1001–1005.

44. Poholek AC, Hansen K, Hernandez SG, et al. Bcl6 ve T foliküler yardımcı hücre gelişiminin in vivo düzenlenmesi. J İmmünol. 2010;185: 313–326.

45. Jain S, Park G, Sproule TJ, et al. Interleukin 6, BXSB.Yaa farelerinin sistemik lupus eritematozus benzeri hastalığının ilerlemesini teşvik ederek ölüm oranını hızlandırır. PLoS Bir. 2016;11:e0153059.

46. ​​Litinskiy MB, Nardelli B, Hilbert DM, et al. DC'ler, BLyS ve APRIL yoluyla CD40-bağımsız immünoglobulin sınıfı geçişini indükler. Nat İmmünol. 2002;3:822-829.

47. Castigli E, Wilson SA, Scott S, et al. TACI ve BAFF-R, B hücrelerinde izotip değişimine aracılık eder. J Exp Med. 2005;201:35–39.

48. Jourdan M, Chen M, Robert N, et al. IL-6, APRIL veya stromal hücrede çözünür faktörlerle kombinasyon halinde insan uzun ömürlü plazma hücrelerinin oluşumunu destekler. Lösemi. 2014;28:1647-1656.

49. Chu VT, Fröhlich A, Steinhauser G, et al. Kemik iliğindeki plazma hücrelerinin bakımı için eozinofiller gereklidir. Nat İmmünol. 2011;12: 151–159.

50. Suzuki H, Suzuki Y, Aizawa M, et al. Kemik iliği kaynaklı hücreler tarafından yönlendirilen murin IgA nefropatisinde Th1 polarizasyonu. Böbrek İnt. 2007;72: 319-327.

51. Chintalacharuvu SR, Özgürleştirici SN. Murin B hücreleri tarafından üretilen IgA'nın glikozilasyonu, Th2 sitokinleri tarafından değiştirilir. J İmmünol. 1997;159:2327– 2333.

52. Yasutake J, Suzuki Y, Suzuki H, et al. IgA nefropatisinde galaktoz eksikliği olan IgA1'i saptamak için lektin bağımsız yeni yaklaşım. Nefrol Kadran Nakli. 2015;30:1315-1321.

53. Katafuchi R, Kiyoshi Y, Oh Y, et al. IgA nefropatisinde prognostikatör olarak glomerüler skor: kullanışlılığı ve sınırlaması. Klinik Nefrol. 1998;49:1–8.

54. Ballardie FW, Roberts IS. Progresif IgA nefropatisinde kontrollü prospektif prednizolon ve sitotoksik denemesi. J Am Soc Nephrol. 2002;13: 142–148.