Neem Ağacından Elde Edilen Anti-Melanojenik Gedunin'in Moleküler Mekanizmaları
Mar 28, 2022
İletişim: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-posta:audrey.hu@wecistanche.com
Hwang-Ju Jeon 1, Kyeongnam Kim 1, Chaeeun Kim 2, Myoung-Jin Kim 1, Tae-Oh Kim 3,4,5,† ve Sung-Eun Lee 1,2,*,†
Soyut:Melanogenez, koruyucu bir cilt pigmenti olan (ultraviyole ışınlarına karşı) melanin üreten ve insan ten rengini belirleyen bir dizi süreci temsil eder. Melanin üretimini azaltan kimyasallar, beyazlatma gibi cilt bakımı ilgi alanları nedeniyle kozmetik pazarında her zaman talep görmüştür. Melanin üretimini engellemenin ana mekanizması, melanogenez için anahtar bir enzim olan tirozinazın (TYR) inhibisyonudur. Burada, melanogenez karşıtı etkisi için temsili bir limonoid olan hakiki (Ged) değerlendirdik. Melanin üretimi in vitro olarak, B16F10 fare melanom hücrelerinde alfa-melanosit uyarıcı hormon (-MSH) tarafından uyarılmıştır. Ged azaltılmış -MSH ile uyarılan melanin üretimi, TYR aktivitesini ve protein miktarını inhibe eder. Bu sonucu in vivo olarak melanogenez için bir zebra balığı modelinde doğruladık. Tedavi edilen tüm konsantrasyonlarda geliştirme sırasında zebra balığı embriyolarının toksisitesi ve malformasyonu belirtisi yoktu. Ged, üretilen zebra balığı embriyo pigment noktalarının sayısını ve embriyoların melanin içeriğini azalttı. Yüksek derecede aktif Ged konsantrasyonu (100 uM), pozitif kontrol kojik asitten (8 mM) çok daha düşüktü. Bu nedenle, Ged, anti-melanogenez reaktifleri için büyüleyici bir aday olabilir.
Anahtar Kelimeler: MITF; mikroftalmi ile ilişkili transkripsiyon faktörü; TYR; tirozinaz; DQ; dopakinon;TRP-1; tirozinazla ilgili protein 1; TRP-2; tirozinazla ilgili protein 2; MC1R; melanokortin 1 reseptörü; -MSH; -melanosit uyarıcı hormon; ACTH; Adrenokortikotropik hormon; ASP; agutisinyal protein; kamp; siklik adenosin monofosfat; CREB; cAMP yanıt öğesi
1. Giriş
Melanin, melanositin lizozom benzeri organelleri olan melanozomda sentezlenir. Melanozomda melanin, sırasıyla kahverengi-siyah ve kırmızı-sarıyı temsil eden eumelanin ve feomelanin olmak üzere iki pigmentte üretilir [1]. Bu melaninpigmentlerin sentezi, L-tirozinin, dopakinon (DQ) ve L-DOPA olarak adlandırılan bir bileşiğe oksidasyon reaksiyonu ile öncü L-tirozinden başlar [2]. Bu oksidasyon adımında, tirozinaz(TYR), genel melanin biyosentez yolunun hız sınırlayıcı bir enzimi olarak görev yapar [2,3]. Melanogenez proteinleriyle yakından ilişkili olan TRP-1ve TRP-2, eumelanin biyosentez yolunu katalize eder ve TYR aktivitesini stabilize eder ve indükler [1]. Melanin pigmentleri üretme süreci (melanogenez olarak adlandırılır), melanin sentezi ve depolanması için bir bölge olan melanositlerin melanozomunda meydana gelir [4]. Melanogenez sinyal yolunda, melanokortin1 reseptörü (MC1R), G-protein-bağlı reseptörlerin bir üyesidir. MCIR, melanogenez sinyalizasyonu için bir başlangıç noktasıdır ve -melanosit uyarıcı hormon (-MSH), adrenokortikotropik hormon (ACTH) ve aguti sinyal proteini (ASP) gibi MC1R agonistleri tarafından aktive edilir [1,2]. -MSH-MC1R sinyal yolunun aktivasyonu, siklik adenosinemonofosfat (cAMP) konsantrasyonunu arttırır ve cAMP yanıt elementini (CREB) fosforile eder. Fosforillenmiş CREB, melanin senteziyle ilgili genleri, TYR'yi, tirozinazla ilişkili proteini -1 (TRP-1) ve tirozinazla ilişkili proteini düzenleyen bir transkripsiyon faktörü olan mikroftalmi ile ilişkili transkripsiyon faktörünün (MITF) protein seviyesini indükler -2 (TRP-2)bu genlerin M-kutusunu bağlayarak [1,5,6]. Beş melanokortin reseptörü arasında, MC1R en bol melanositlere sahiptir. Öncelikle bu reseptörün a-MSH ve ACTH gibi agonistleri bu reseptöre geçtiğinde MC1R'yi aktive ederek eumelanin (siyah-kahverengi pigment) üretimini düzenler [2,4,7].
Memeliler ve balıklar arasında farklılıklar olmasına rağmen, zebra balığı, kirpi balığının sahip olmadığı MC5R ve MC3R'nin bir ekstra kopyasına sahiptir [7] ve bu sinyal yolu zebra balıklarında hala mevcuttur ve tam olarak memeli melanositlerinde olduğu gibi çalışır [7]. Ayrıca, erken evre embriyolarda hızlı gelişme ve gözlem kolaylığı gibi araştırma avantajları nedeniyle melanin pigment oluşumunun inhibisyonu ile ilgili çalışmaların sayısı artmıştır [8-11]. Bu fenomenlerde, önceki birçok çalışma, bu sinyal yolunun inhibisyonunun melanin üretimini azalttığını ve bisabolol-Angelone, 4-hidroksi-3-metoksi sinnamaldehit ve difenil-metilen-hidrazin karbo tiamin dahil olmak üzere birkaç inhibitör bulduğunu bulmuştur [12]. –14].
İyi bilinen bir ısı şoku proteini 90 inhibitörü olan Gedunin (Ged), Meliaceae bitkisinin cinslerinde bulunan bir limonoiddir. Bu limonoid, öncelikle genç Hint neem ağacı (Azadirachta indica) meyvelerinin epikarpında bol miktarda bulunur ve antikanser, antimalaryal, anti-inflamasyon, antidiyabetik, antialerjik, böcek öldürücü, herbisit ve antifungal gibi çeşitli biyolojik aktivitelere sahiptir [15-18]. Ged'in anti-melanojenik etkisinin mekanizması hakkında bir rapor bulunmamaktadır.
Melanin ile ilgili hastalıkları veya cilt rengi değişikliklerini tedavi etmek için tıbbi bir ilaç veya kozmetik ajan adayı olarak Ged, güvenli, doğal olarak oluşan bitki özellikleri nedeniyle avantajlara sahip olabilir [19]. Ged'in anti-melanojenik etkisi, ticari kozmetik pazarının en büyük parçalarından biri olan uygun mezgit maddesi adayı bulmak için sırasıyla B16F10 fare melanom hücreleri ve zebra balığı embriyoları kullanılarak in vitro ve in vivo olarak değerlendirildi. Test ayrıca Ged'in hayvanları nasıl etkilediğini göstermek için yapıldı.
2. Gereç ve Yöntemler
2.1. Kimyasallar ve tepkimeler
Ged, Microsource Discovery Systems, Inc.'den (Gayloardville, CT, ABD) satın alındı. Melanogenez uyarıcısı, -MSH, anti-melanojenik bileşik ve kojik asit, Sigma-Aldrich'ten (St. Louis, MO, ABD) satın alındı. Diğer tüm reaktifler moleküler biyoloji derecesinden daha yüksekti.
2.2. Hücre kültürü
Fare melanom-karsinom hücre çizgisi B16F10, American TypeCulture Collection'dan (ATCC, Manassas, VA, ABD) elde edildi ve yüzde 10 fetal sığır serumu (h/h) ve penisilin tarafından sağlanan Dulbecco ile modifiye edilmiş Eagle's ortamı (GE) ile kültürlendi. Healthcare, Chicago,IL, USA) %5 CO2 içeren nemli bir atmosferde. Hücreler, birleşme yüzde 80'e ulaşana kadar kültürlendi ve 1:8 bölme oranıyla haftada üç kez bölündü. Hücreler her 12 saatte bir gözlendi ve morfolojik değişiklikler kontrol edildi. Kullanılan hücrelerin geçiş sayısı küçük tutuldu.
2.3. Hücre Canlılığı Testi
Ged'in B16F10 fare melanom hücre hattı üzerindeki proliferatif etkisini değerlendirmek için, CellTiter96 Aqueous One Solution Cell Proliferation Assay kiti (Promega, Madison, WI, ABD) kullanılarak MTS tahlili daha önce bildirilen protokole [20] göre yapıldı. Kısaca, 96-kuyulu plakanın her bir oyuğuna 1 x 103 hücre ekildi ve geri kazanım için 24 saat inkübe edildi. İnkübasyondan sonra Ged, çeşitli konsantrasyonlarla muamele edildi: 0, 3.12, 6.25,12.5 25, 50 ve 75 uM. 48 saat sonra, Ged'li ve Ged'siz 100-uL ortam içeren her kuyuya 20 uL MTS tahlil solüsyonu ilave edildi. 4 saat daha inkübasyondan sonra, bir Multiskan GO spektrofotometresi (ThermoScientific, Waltham, MA, ABD) kullanılarak 490 nm'de absorbans ölçüldü. Absorbans verileri kontrol ile normalleştirildi ve yüzde inhibisyon oranı olarak temsil edildi.
2.4. Melanin İçeriğinin Belirlenmesi
Hücre dışı ve hücre içi melanin içerikleri, daha önce bildirilen değiştirilmiş bir yöntem izlenerek belirlendi [21]. -MSH (200 nM) ile ön işleme tabi tutulmuş melanom hücreleri, 72 saat boyunca kojik asit (200 uM) ve Ged (25 ve 50 uM) ile ve bunlar olmadan inkübe edildi. İnkübasyondan sonra fenol kırmızısı içermeyen kültür ortamı toplandı ve kültürlenen hücreler RIPA lizis tamponu ile toplandı. Hasat edilen hücreler 4 ◦C, 13,{10}} rpm'de 15 dakika santrifüjlendi ve topaklar 1 M NaOH, yüzde 10 DMSO çözeltisi içinde 95 ◦C'de 2 saat eritildi. Toplanan ortamın ve çözünmüş melaninin absorbansı, bir spektrofotometre kullanılarak 470 nm'de ölçülmüştür. Tüm numuneler, BCA yöntemine göre belirlenen protein konsantrasyonları ile normalleştirildi.
2.5. Hücre İçi Tirozinaz Aktivite Deneyi
Hücresel tirozinaz aktivitesi, daha önce bildirildiği gibi hafif modifikasyonlarla [22] L-dihidroksifenilalanin (L-DOPA) oksidasyon hızı ölçülerek belirlendi. B16F10 fare melanom hücreleri, 1 saat boyunca 200 nM -MSH ile ön işleme tabi tutuldu, ardından 200 uM ile muamele edildi. kojik asit, Ged ile ve Ged olmadan (25 ve 50 uM) ve 72 saat süreyle inkübe edildi. İnkübasyondan sonra hücreler proteinaz inhibitörü içeren lizis tamponu ile toplandı ve numune 13,000xg, 4 ◦C'de 15 dakika santrifüjlendi. Süpernatant yeni bir tüpe aktarıldı. Her numune (20 uL) ve 80 uL 40 mM L-DOPA bir 96-kuyucuklu plakada karıştırıldı ve 2 saat 37 ◦C'de inkübe edildi. Oksitlenmiş L-DOPA ile 475 nm'de absorbans, bir mikroplaka okuyucu kullanılarak belirlendi. Absorbans değeri, her numunenin protein konsantrasyonu ile normalleştirildi.
Cistanche özü faydası: tirozinaz ekspresyonunu inhibe eder.
2.6. RNA İzolasyonu ve qRT-PCR
Toplam RNA izolasyonu ve qRT-PCR, daha önce [18] tarafından açıklanan bir yönteme göre yapıldı. Toplam RNA, Trizol reaktifi (Ambion, Austin, TX, ABD) kullanılarak her numuneden kısaca ekstre edildi. Ekstrakte edilen toplam RNA konsantrasyonu, 260 nm'de absorbans ile belirlendi ve toplam RNA'nın kalitesi, bir Multiskan GO mikroplaka okuyucusu (Thermo Scientific) kullanılarak 260:280 ve 260:230 nm'lik bir absorbans oranı ile kontrol edildi. TotalRNA (5 ug), Maxima birinci iplik cDNA sentez kiti (Thermo Scientific) ile cDNA'ya sentezlendi ve cDNA sentezlendi. Mitf, Tyr, Trp-1 ve Trp-2'nin mRNA ekspresyon seviyeleri Luna Universal qPCR Master Mix (New England Biolabs, Ipswich, MA, ABD) ve QuantStudio 3 Real-Time PCR cihazı ( Applied Biosystems, Foster City, CA, ABD) eğitmenin protokolüne göre. Genlerin ekspresyon seviyesi, gliseraldehit 3-fosfat dehidrojenaz (GAPDH) ile normalleştirildi.
2.7. İmmünoblot Analizi
İmmünoblot analizi, daha önce açıklanan yöntemlere göre yapıldı [23]. B16f10 hücrelerinin proteinleri, Ceti lizis tamponu (Translab, Daejeon, Kore) kullanılarak toplandı ve konsantrasyon, bir Pierce BCA protein tahlil kiti (Thermo Scientific) ile belirlendi. Her numuneden eşit miktarda protein (30 ug) bir sodyumdodesil sülfat-poliakrilamid jeli üzerine yüklendi ve elektroforezlendi. Ayrıldıktan sonra, proteinler bir nitroselüloz zara aktarıldı ve zar, 2 saat boyunca yüzde 10 yağsız süt çözeltisi içinde bloke edildi. Bloke membranlar 4 ◦C'de bir gece primer antikor ile inkübe edildi, ardından 26 ◦C'de 2 saat sekonder antikor ile inkübasyon yapıldı. Birincil ve ikincil antikorlar sırasıyla 1:1000 ve 1:3000 oranında seyreltildi. Son olarak, lekelenmiş membranlar, ECL reaktifi (SuperSignal, Thermo Scientific) ile ChemiDoc (Bio-Rad, Hercules, CA, ABD) kullanılarak belgelendi. Birincil ve ikincil antikorlar, Santa Cruz Biotechnology'den (Dallas, TX, ABD) satın alındı.
2.8. Zebra Balığı Embriyo Testi
Wild-type zebrafish were thankfully obtained from Professor Tae-Lin Huh, the School of Life Science and Biotechnology, Kyungpook National University, Daegu, Republic of Korea. The strain was kept for more than eight generations in a laboratory condition of 26 ◦C ± 1 ◦C, and a day-to-night ratio of 8:16. General fish care and breeding conditions, as previously described, were followed [24]. Ten groups of zebrafish were mated to obtain embryos with a mating ratio (male: female, 1:2), and among obtained embryos, healthy embryos had >%80 oranında döllenme oranı seçilmiş ve deney için kullanılmıştır. Tedavi edilen her gruptaki on iki sağlıklı embriyo, kalkan aşamasında E3 ortamında Ged (25, 50, 75 ve 100 uM) ve kojik asit (8 mM) içeren ve içermeyen bir 96-kuyulu plakanın her bir oyuğuna yerleştirildi. Döllenmeden 24 saat sonra (h/pf), embriyolar dekoryona edildi ve anormallik 72 h/pf'ye kadar her 24 saatte bir kontrol edildi. Embriyoların fenotipi, DP80CCD (Olympus Life Science Solutions, Waltham, MA, ABD) ile bir BX53 dik mikroskop kullanılarak gruplar arasındaki farklılıkları karşılaştırmak için lateral ve dorsal görünümde fotoğraflandı. Resimlemeden sonra embriyolar Ceti lizis tamponu (TransLab) ile homojenize edildi ve B16F10 hücre melanin içeriğinin belirlenmesine eşit olan melanin konsantrasyonunun belirlenmesi gerçekleştirildi.
2.9. İstatistiksel analiz
Bu çalışmada sunulan tüm istatistiksel analizler GraphPad Prismv.8.0 (GraphPad Software, San Diego, CA, ABD) kullanılarak yapılmıştır. Çoklu karşılaştırmalar için Tukey testi ile tek yönlü ANOVA kullanıldı. Tüm veriler ortalama ± standart sapmalar olarak temsil edilir. Önemli farklılıklar, p < 0.05'te="" istatistiksel="" olarak="" anlamlı="" kabul="">
3. Sonuçlar
3.1. Piperlonguminin B16F10 Hücrelerinde Sitotoksik Etkisi
Ged'in anti-melanojenik etkisini araştırmadan önce, bu çalışmada doz aralığını belirlemek için B16F10 hücre dizisinde bir canlılık testi gerçekleştirdik. 3.12 ila 50 uM arasındaki konsantrasyon aralığında, hücreler büyüme üzerinde herhangi bir engelleyici etki göstermedi ve bunların nispi çoğalmaları yüzde 91.0 ila yüzde 118.7 arasındaydı (Şekil 1). Buna karşılık, istatistiksel bir anlam olmamasına rağmen, 75 uM ile tedavi edilen grupların büyümeleri hafifçe inhibe edildi (yüzde 89.3; Şekil 1). Bu nedenle, kalan hücre çizgisi deneylerinde en yüksek konsantrasyon 50 uM'ye ayarlandı.
Şekil 1. B16F10 hücrelerinde gedunin (Ged) sitotoksisitesi
3.2. Gedunin, B16F10 FareMelanom Hücrelerinde Melanin Üretimini ve Hücre İçi Tirozinaz Aktivitesini Engeller
Ged'in B16F10 fare melanom hücrelerinde anti-melanojenik etkisini değerlendirdik. TheMC1R agonisti, -MSH, hücre içi ve hücre dışı melanin üretimini etkili bir şekilde indükledi(Şekil 2a–c). Toplanan ortamın rengi -MSH ile koyuydu (Şekil 2a). Ged ilavesiyle renk soldu ve etki doza bağlıydı (Şekil 2a). Toplam melanin içeriğinin sonuçlarında, -MSH, melanositlerde melanin üretimini kontrol grubuna göre yaklaşık yedi kat daha fazla arttırdı ve melanogenezde iyi bilinen bir pozitif kontrol olan kojik asit ekleyerek melanin azalmasını uyardı (Şekil 2d). Ged ayrıca bu çalışmada test edilen tüm konsantrasyonlarda melanositlerde uyarıcı indükleyen melanin üretimini kısalttı (Şekil 2d). Ayrıca, tirozinaz aktivite testinde Ged, melanogenezde hız sınırlayıcı enzim olan tirozinaz üzerinde güçlü bir inhibitör etki gösterdi (Şekil 2e). 50 uM Ged ile tedavi edilen grupta tirozinazın nispi aktivitesi, kontrol ve a-MSH ile uyarılan gruba kıyasla sırasıyla yüzde 20 ve yüzde 12.24 azaldı.
Şekil 2. Orijinal (Ged)'in B16F10 hücrelerinde alfa-melanosit uyarıcı hormon (-MSH) ile uyarılan melanin üretimi üzerindeki anti-melanojenik etkisi.
3.3. Gedunin -MSH İle İndüklenen Melanogenez ile İlgili Gen İfadesini Azaltır
-MSH (200nM) ile indüklenen Mitf mRNA seviyesi; bir melanogenez transkripsiyon faktörü ve Tyr, Trp-1 ve Trp-2 hedef genleri (Şekil 3). Ged tedavisi, 25 ve 50 µM konsantrasyonda tüm genlerin mRNA seviyesini doza bağımlı bir şekilde düşürdü (Şekil 3). Pozitif kontrol, kojik asit (200 µM) ile karşılaştırıldığında, Ged mRNA'yı azaltmada daha etkiliydi. B16F10 hücrelerinde melanogenez ile ilgili genlerin seviyesi. Ayrıca, Mitfand Tyr seviyesi, 50 uM'lik bir konsantrasyonda sırasıyla 0.10- ve 0.26--MSH ile indüklenen hücrelerden 26-kat daha düşük azaldı (Şekil 3a,b). Bu genlerin aşağı regüle edilmiş mRNA seviyeleri, Tyr seviyesini düşürdü ve TYR melanin üretim miktarını kontrol grubuna göre daha az azalttı.
Şekil 3. İndirgemenin melanogenez ile ilgili genler üzerindeki etkisi.
3.4. Gedunin TYR ve TYR-1 Miktarını Azalttı
TYR, melanogenezde çok önemli bir rol oynar ve bu enzimin protein seviyesi melanogenezi doğrudan etkiler. İmmünoblot analizi ile azalan mRNA seviyesinin neden olduğu protein miktarı TYR'nin değişimini doğrulamaya çalıştık. TYR, kontrol ile karşılaştırıldığında belirgin şekilde azaldı ve -MSH doza bağlı olarak tedavi edildi (Şekil 4a). Ayrıca, TYR'nin temel bir transkripsiyon faktörü olan TRP-1 biraz azaldı (Şekil 4a). Sonuçlar, her bir proteinin bandı, ev tutma proteini GAPDH tarafından normalleştirildiğinde daha belirgindi (Şekil 4b,c).
Şekil 4. Alfa-melanosit uyarıcı hormon (-MSH) kaynaklı B16F10 hücrelerinin gerçek tedavi ile Western lekelenmesi.
3.5. Erken Aşama Gelişiminde Gedunin'in Zebra Balığına Karşı Toksisitesi
Ged'in zebra balığı erken evre gelişimi üzerindeki toksikolojik değerlendirmesi, Ged'in bir anti-melanojenik testi in vivo olarak değerlendirilmeden önce yapıldı. Zebra balığı embriyolarının morfolojik anormalliği, işlenmiş herhangi bir Ged konsantrasyonunda gözlenmedi (Şekil 5a). Ged, 25, 50, 75 ve 100 uM'nin test edilen konsantrasyonları, Ged ile tedavi edilen grupların hayatta kalma oranları, kimyasal işlemden geçirilen sürenin 72 saatinde önemli farklılıklar göstermedi (Şekil 5b).
Şekil 5. Orijinalin (Ged) zebra balığı erken evre gelişimi üzerindeki toksisitesi.
3.6. Gedunin Zebra Balığı Embriyolarındaki Melanin İçeriğini Azalttı
Ged'in zebra balığı embriyolarında gelişimsel toksisitesi olmadığından, anti-melanojenik etkiyi Ged, 25, 50, 75 ve 100 uM'lik bir dizi konsantrasyonda inceledik. Teorik gözlemde, pigment zebra balığının noktalarını kontrol ettik; zebra balığı embriyolarının üstten yandan görünüşü Şekil 5a'da gösterilmektedir. Kojik asit, zebra balığı embriyolarının pigment üretimini inhibe edici etkiye sahiptir. Ged ile tedavi edilen zebra balığı embriyolarının kafasında da daha az pigment noktası vardı (Şekil 6a). Ek olarak, zebra balığı embriyolarının tümünden ekstrakte edilen toplam melanin içeriği, hem kojik asit, hem de apozitif kontrol ve Ged ile tedavi edilen gruplarda 72 saat boyunca Ged'e maruz kaldıktan sonra azaldı (Şekil 6b,c)
Şekil 6. Orijinalin in vivo melanin üretimi üzerindeki etkisi.
4. Tartışma
Bu çalışmada, Ged'in melanin üretimine karşı inhibisyon özellikleri değerlendirildi. Bulgularımıza göre, Ged'in inhibisyon yeteneği, kojik asitten (Şekil 2) yaklaşık 11.98-kat daha yüksekti ve Ged konsantrasyonu ( 50 uM), pozitif kontrol olan kojik asitten (200 uM) daha düşüktü. L-Dopa'yı eumelanin ve feomelanin'in birincil öncüsü olan DQ'ya dönüştüren bir enzim olan zayıflamış hücre içi tirozinaz aktivitesi ile eşleştirildi. Azalan Tyr aktivitesi, tüm melanin üretim süreçlerinin yavaşlamasına ve her iki son ürün olan eumelanin ve feomelanin kıtlığına neden olur [1–3]. Transkript ve TYR seviyeleri bir dizi transkripsiyon faktörü tarafından düzenlendi: Mitf, Trp-1 ve Trp-2 [1,2]. Azaltılmış miktarda protein ve mRNA seviyesi, -MSH tarafından -MSH–MC1R–PKA–CREB sinyalleme ekseni aracılığıyla aktive edilmiş MC1R anlamına gelir, Ged tedavisiyle 25 ve 50 uM'lik bir konsantrasyonda, hem kantitatif PCR hem de Western blotlamada doza bağlı olarak aşağı regüle edilmiştir. Daha önce açıklandığı gibi, MITF miktarının azaltılması, bu genlerin promotör bölgesine daha az bağlanma yoluyla Tyr, Trp-1 ve Trp-2 eksikliğine yol açar [25–27]. Bu transkripsiyon faktörlerinin azaltılması, TYR'yi daha düşük bir seviyeye getirir ve B16F10 hücrelerinde melanin pigment üretimini engeller. Ek olarak, mevcut sonuçlar, melanositte melanin üretiminin bir başka kritik noktası olan Ged'in TYR inhibitör etkisini göstermektedir. Ged ayrıca in vitro ve in vivo modellerde zebra balığı erken aşama gelişimi sırasında pigment üretimi üzerinde bir inhibisyon etkisi gösterdi. Sonuçlarımız, 72 saat boyunca Ged ile tedavinin zebra balığı embriyopigmentasyonunu belirgin şekilde azalttığını gösterdi. Toplam melanin içeriği ve ilgili genlerin mRNA seviyeleri, Ged'in varlığı ile azaldı ve bu sonuçların eğilimi, Ged'in in vitroanti-melanogenez özelliğini güçlü bir şekilde destekledi.
Ayrıca, Ged'in inhibisyon yeteneği, kozmetik endüstrisinde beyazlatma reaktifi olarak en yaygın olarak bilinen bileşiklerden biri olan kojik asitten çok daha güçlüydü [6,28]. Ged'in etki ettiği konsantrasyon, kojik asitten nispeten daha düşüktü. Ek olarak, önceki bir rapor, başka bir yaygın beyazlatma reaktifi olan arbutinin, kojik asit ile benzer bir anti melanojenik etkiye sahip olduğunu göstermiştir [2]. Bu nedenle, Ged, şu anda kullanılan arbutin veya kojik asidin yerine bir beyazlatıcı reaktif olarak ve umut verici özellikleri bakımından bir anti-melanoma ilaç olarak düşünülmelidir.
Ged'in anti-melanojenik özellikleri daha önce önerildi [29,30], ancak bu çalışmalar etkinin spesifik mekanizmalarına odaklanmadı ve sitotoksik etkilerin ve melanin üretim miktarının in vitro değişimini gözlemlediler. HSP 90 ifadesi vurgulanmıştır [31–33]. Ged'in bir anti-melanogenetik ajan olma olasılığı rapor edilmiştir; ancak bu çalışmalar etkinin spesifik mekanizmalarına odaklanmamış ve sitotoksik etkilerin ve melanin üretim miktarının in vitro değişimini gözlemlemişlerdir. Melanin üretimi ile ilgili genlerin mRNA seviyesini ve protein miktarını doğrulayarak hücresel seviye mekanizmasını belirlemeye çalıştık. Önceki raporlarla birlikte, bu çalışma, hem UV kaynaklı melanoma hem de özellikle aynı anda pigment birikimine uygulanabilen, olağanüstü antikanser ve anti-melanogenez olmak üzere iki fayda sağlayan kozmetik bileşenlerin bir bileşeni olan Gedas'ın yeni bir perspektifini gösterdi.
cistanche özü tozu: serbest radikalleri temizleyin
5. Sonuçlar
Sonuç olarak, tüm bu sonuçlar yeni bir bileşik olan Ged'in melanin biyosentezi için adepigmentasyon reaktifi olarak kullanılabileceğini gösterdi; bu, akış aşağı proteinleri TYR, TRP-1 ve TRP-2 master'a kıyasla daha düşük bir miktarda kısalttı zebra balığı modelinin hem in vitro hem de in vivo sistemlerinde düzenleme proteini, MITF.
cistanche tabletleri
