Cistanche Tubulosa'dan Monoterpen Bileşenleri—Kankanosides A—E ve Kankanol'ün Kimyasal Yapıları—

İletişim: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-posta:audrey.hu@wecistanche.com

Haihui XIE, Toshio MORIKAWA, Hisashi MATSUDA, Seikou NAKAMURA, Osamu MURAOKA ve Masayuki YOSHIKAWA

Soyut

Dört yeni iridoid glikozit, kankanosid A (1), B (2), C (3) ve D (4), bir klorlu iridoid, kankanol (5) ve bir asiklik monoterpen glikozit, kankanosid E (6) izole edildi. Cistanche tubulosa (SCHRENK) R. WIGHT'ın (Orobanchaceae) kurutulmuş gövdelerinin metanolik ekstraktından ve bilinen 16 bileşikten elde edilir. Bu yeni bileşiklerin (1-6) yapıları, kimyasal ve fizikokimyasal kanıtlara dayalı olarak belirlendi.

Anahtar kelimeler:Cistanche tübüloza; kankanosit; kankanol; iridoid; monoterpen; Orobanchaceae

Cistanche tübüloza(SCHRENK) R. WIGHT (Orobanchaceae)Salvadora veya Calotropis türlerinin kökleri üzerinde büyüyen ve Kuzey Afrika, Arabistan ve Asya ülkelerinde bulunan çok yıllık bir parazit bitkidir.1) Bu bitkinin gövdeleri (Japonca Kanka-nikujuyou) geleneksel olarak iktidarsızlık, kısırlık tedavisinde kullanılmıştır. , lumbago ve vücut zayıflığı.2) Daha önce, birkaç iridoid, monoterpenoid, feniletanoid ve lignan, Çin ve Pakistan C. tubulosa'dan izole edildi. 1,3–7) Çin doğal ilaçlarındaki biyoaktif bileşenler üzerine seri çalışmalarımız sırasında,8–18) dört yeni iridoid glikozit, kankanosid A (1), B (2), C (3) ve D (4 ), bir klorlu iridoid, kankanol (5) ve bir asiklik monoterpen glikozit, kankanoside E (6), 12 monoterpen (7-18) dahil olmak üzere 16 bilinen bileşikle birlikte bu bitkisel ilacın metanolik özünden izole edildi. Bu makale, yeni monoterpen bileşenlerinin (1-6) izolasyonu ve yapısının aydınlatılması ile ilgilidir.

Cistanche tübüloza

Kurutulmuş köklerinden metanolik ekstraktCistanche tübüloza(bu bitkisel ilaçtan yüzde 26,8) kankanosidler A (1, 0) vermek üzere normal faz ve ters fazlı silika jel kolon kromatografisine ve tekrarlanan HPLC'ye tabi tutuldu (1, 0.0{{10) }}yüzde 54 ), B(2, 0.030 yüzde ), C (3, 0.00 yüzde 27 ), ve D (4, {{40}}.00yüzde 15 ), kankanol (5, 0.000Yüzde 15 ) {66}}yüzde 34 ) ve kankanoside E (6, 0.0yüzde 27 ) ile birlikte mussaenosidik asit19) (7, 0.0yüzde 20 ) , geniposidik asit19) (yüzde 8, 0,030 ), 8-epiloganik asit7) (yüzde 0,033 ), gluroside19) (yüzde 10,14 ), antirrhide20) (yüzde 11, 0,0079 ), ajugol19) (12, 0,011 yüzde ), bartsioside19) (13, 0,21 yüzde ), 6-deoxycatalpol19) (yüzde 14, 0,11), argyol21) (15, 0,0030 yüzde ), cistanin22,23) (16, 0,0040 yüzde ), cis taklorin22) ( 17, yüzde 0,0035 ), (2E,6Z)-8-bD-glukopiranoziloksi-2,6-dimetil-2,6-oktadienoik asit24) (18, yüzde 0,0028 ), D mannitol25) (4.19 p ercent ), üridin25) (yüzde 0,0069 ), (3R)-3-hidroksi-2- pirolidinon26,27) (yüzde 0,0020) ve (3R)-3-hidroksi-1-metil{ {97}}pirolidinon27) (yüzde 0,0059).

Kankanosit A'nın Yapısı (1) Kankanosid A (1), amorf bir toz olarak elde edildi ve negatif bir optik rotasyon sergiledi ([a]D 25 10MeOH içinde 7.4 derece). 1'in IR spektrumu, bir glikozit parçasını düşündüren 3410 ve 1076 cm1'de güçlü absorpsiyon bantlarına ek olarak 1647 cm1'de olefin fonksiyonuna atanabilir bir absorpsiyon bandı gösterdi. 1'in pozitif ve negatif iyon hızlı atom bombardımanı (FAB)-MS'sinde, m/z 369 (M Na) ve 345'te (MH) kusimoleküler iyon tepe noktaları gözlendi ve yüksek çözünürlüklü FAB-MS analizi, moleküler 1'in formülü C16H26O8 olur. 1'in 1.0 M hidroklorik asit (HCl) ile asit hidrolizi, bir optik rotasyon detektörü kullanılarak HPLC analizi ile tanımlanan, serbest bırakılan D-glukoz.8,10—12,15—18) 1H- (CD3OD, Tablo 1) ve Çeşitli NMR deneyleri ile tayin edilen 1'in 13C-NMR (Tablo 2) spektrumu,28) iki metile [d 1.31 (s, 10-H3), 1.51 (br s, {{47}) atanabilir sinyaller gösterdi. }H3)], iki metilen [d 1.49, 2.02 (hem m, 6a- hem de 6b-H), 1.64 1.67 (hem m, 7b- ve 7a-H)], iki metin [d 2.21 (dd, J 2.7) , 9.5 Hz, 9-H), 2.71 (m, 5-H)] ve bir a,b-doymamış asetal grubu [d 5.33 (d, J 2.7 Hz, 1-H) ), 5.95 (br s, 3-H)] bir b-glukopiranozil kısmı ile birlikte [d 4.62 (d, J 7.9 Hz, 1-H)]. Şekil 1'de gösterildiği gibi, 1'deki 1H–1H korelasyon spektroskopisi (1H–1H COSY) deneyi, kalın çizgilerle yazılmış kısmi yapıların varlığını göstermiştir. 1'deki heteronükleer çoklu bağ korelasyonları (HMBC) deneyinde, aşağıdaki protonlar ve karbonlar (3-H, 1-H ve 1-C; 11-) arasında uzun menzilli korelasyonlar gözlemlendi. H3 ve 3-C; 3-H, 5-H, 6-H2, 9-H, 11-H3 ve 4- C ; 11-H3 ve 5-C; 10-H3 ve 7-C; 1-H, 7-H2, 9-H, 10-H3 ve 8-C; 10-H3 ve 9-C; 7-H2 ve 10-C) Şekil 1'de gösterildiği gibidir. 1'in b-glukosidaz ile enzimatik hidrolizi, Şekil 3'te gösterildiği gibi bir aglikon, kankagenin a (1a) verdi. 1 için 13C NMR spektrumunun 1a için olanlarla karşılaştırılması, 1'deki 1-konumu etrafında glikosilasyon kaymasını ortaya çıkardı. [1: dC 94.1 (1-C), 134.6 (3-C), 53.3 (9-C); 1a: dC 92.9 (1-C), 135.3 (3-C), 54.7 (9-C)]. Böylece, 1'deki bD-glukopiranozil parçasının bağlanabilirliğinin de 1a'nın 1-konumunda olduğu açıklığa kavuşturulmuştur. Daha sonra, 1'in göreceli stereo yapısı, aşağıdaki proton çiftleri (1-H ve 10-H3; 3-H ve 3-H) arasındaki NOE korelasyonlarını gösteren nükleer Overhauser geliştirme spektroskopisi (NOESY) deneyi ile karakterize edildi 11-H3; 5-H ve 6b-H, 9-H; 6b-H ve 7b-H; 7a-H ve 10-H3; 7b-H ve {{ 190}}H) Şekil 2'de gösterildiği gibi. Son olarak, 1'deki 1-pozisyonun mutlak konfigürasyonu, bulunan 1,1-disakarit,29'un 13C NMR glikosilasyon kaydırma kuralının uygulanmasıyla belirlendi. 30,31) 1'deki 1-pozisyonun stereo yapısının, NOESY deneyini içeren 1H-NMR analizinin karşılaştırılmasıyla 1a'da muhafaza edildiği doğrulandı. Piridin-d5] içindeki glikosilasyon kayma değerlerinin [Dd 1.2 ppm (1 -C) ve 0.9 ppm (1- C), 1'in mutlak stereo yapısına karşılık gelen R, Rhemiacetal kombinasyonunun karakteristiği olduğu bulundu. Şekil 3'te gösterildiği gibi. Sonuç olarak, 1'in 1-konumundaki mutlak konfigürasyon S konfigürasyonu olarak belirlendi ve 1'in mutlak stereo yapısı gösterildiği gibi açıklandı.

Kankanosit B (2) ve C (3)'ün Yapıları Kankanosid B (2) de negatif optik rotasyonlu ([a]D 26 118.7 derece MeOH) amorf bir toz olarak izole edildi. 2'nin IR spektrumu, hidroksil, olefin ve eter fonksiyonlarına atfedilebilen 3410, 1647 ve 1{{5{{80}}}85 cm1'de absorpsiyon bantları gösterdi. 2'nin moleküler formülü C15H24O10, pozitif iyon FAB-MS'deki yarı moleküler iyon tepe noktaları ve yüksek çözünürlüklü FAB-MS ile belirlendi. 2'nin, bir optik rotasyon detektörü kullanılarak HPLC analizi ile tanımlanan 1.0 M HC1 ile serbest bırakılan D-glukoz ile asit hidrolizi.8,10—12,15—18) 1H- (CD3OD, Tablo 1) ve 13C-NMR ( 2'nin Tablo 2) spektrumları, iki metilene [d 1.40 (DDD, J 5.2, 7.3, 13.5 Hz, 6a-H), 2.52 (DDD, J 7.0, 9.2, 13.5 Hz, 6b-H), 3.85 atanabilir sinyalleri gösterdi. , 3.99 (her ikisi de d, J 11.9 Hz, 10-H2)], dört metin [d 2.21 (dd, J 6.4, 8.6 Hz, 9-H), 2.83 (m, 5- H), 4.02 (dd, J 5.2, 7.0 Hz, 7-H), 5.49 (d, J 6.4 Hz, 1-H)] ve bir sisolefifin çifti [d 4.95 (dd, J 4.0) , 6.1 Hz, 4-H), 6.22 (dd, J 1.8, 6.1 Hz, 3-H)], bir b-glukopiranozil kısmı ile birlikte [d 4.72 (d, J 7.9 Hz, 1 - H)]. 2'nin 1H- ve 13C-NMR verilerindeki proton ve karbon sinyalleri, 7- ve 8- kaynaklı sinyaller dışında 6-deoxycatalpol'ün (14)kine benzerdi. pozisyonlar. Şekil 1'de gösterildiği gibi, 2'deki 1H–1H COSY deneyi, kalın çizgilerle yazılmış kısmi yapıların varlığını gösterdi ve HMBC deneyinde, aşağıdaki proton ve karbon çiftleri arasında uzun menzilli korelasyonlar gözlemlendi ({{ 122}}H, 1 -H ve 1-C; 1-H ve 3-C; 10-H2 ve 7- C; 1-H , 7-H, 9-H, 10-H2 ve 8-C; 7-H, 10-H2 ve 9-C ; 7-H ve 10-C). 2'nin göreli stereo yapısı, aşağıdaki proton çiftleri (1-H ve 10-H2; 3- H ve 4-H); 5-H ve 6b-H, 9-H; 6b-H ve 7-H; 7-H ve 9-H) Şekil 2'de gösterildiği gibidir. Son olarak, 14'ün yüzde 5 sulu potasyum hidroksit (KOH) ile alkali muamelesi 2 ve 19, 32'yi verdi, böylece 2'nin stereo yapısı netleştirildi.

Kankanosid C (3), negatif optik rotasyonlu ([a]D 26 34.0 derece MeOH) amorf bir toz halinde izole edildi. 3'ün negatif iyon FAB-MS'sinde, m/z 399 ve 401 (MH)'de bir çift izotop quasimoleküler iyon tepe noktası gözlendi. 3'ün moleküler formülü, yüksek çözünürlüklü FAB-MS ölçümü ile C15H25ClO10 olarak belirlendi. Bir optik rotasyon detektörü kullanılarak HPLC analizi ile tanımlanan 1.0 M HCl ile serbest bırakılan D-glukoz ile 3'ün asit hidrolizi.8,10—12,15—18) 1H- (CD3OD, Tablo 1) ve 13C-NMR ( 3'ün Tablo 2) spektrumu, üç metilene [d 1.70 (br dd, Jca. 3, 13 Hz, 4a-H), 2.70 (br dd, Jca. 6, 13 Hz, 4b-H) atanabilir sinyalleri gösterdi. , 1.68 (br d, J ca. 13 Hz, 6a H), 2.44 (m, 6b-H), 4.01, 4.04 (her ikisi de d, J 11.3 Hz, 10-H2)], beş metin [d 2.47 (dd, J 2.5, 7.9 Hz, 9-H), 2.61 (m, 5- H), 3.94 (br s, 7-H), 5.10 (br d, J ca. 3 Hz, 3-H), 5.48 (d, J 2.5 Hz, 1-H)] ve bir b-glukopiranozil kısmı [d 4.60 (d, J 8.0 Hz, 1-H)]. 3'ün 1H- ve 13C-NMR spektrumlarındaki proton ve karbon sinyalleri, 3- ve 4-konumlarından kaynaklanan sinyaller dışında, 2'ninkiler üzerine bindirilebilirdi. 3'teki bD-glukopiranozil ve klor fonksiyonunun pozisyonları, Şekil 1'de gösterildiği gibi H–H COSY ve HMBC deneylerinden açıklanmıştır. Sonuç olarak, 3'ün düzlemsel yapısı gösterildiği gibi olacak şekilde yapılandırıldı. 3'ün göreceli stereo yapısı, aşağıdaki proton çiftleri (1-H ve 3-H, 10-H2; 3-) arasında NOE korelasyonlarının gözlemlendiği bir NOESY deneyi ile belirlendi. H ve 4a-H; 4b-H ve 5- H; 5-H ve 6b-H, 9-H; 6b-H ve 7-H; {{121} }H ve 9-H) Şekil 2'de gösterildiği gibidir.

Kankanosid D (4) ve Kankanol (5) Yapıları Kankanoside D (4), negatif optik rotasyonlu ([a]D 25 30.6 derece MeOH) amorf bir toz olarak izole edildi. 4'lük IR spektrumu, 1655 cm1'de olefin fonksiyonuna atfedilebilen bir absorpsiyon bandı ve 3410 ve 1078 cm1'de güçlü absorpsiyon bantları gösterdi ve bunun glikozidik yapısını düşündürdü. 4'lük pozitif iyon FAB-MS'de, m/z 341'de (M Na) yarı moleküler bir iyon zirvesi gözlemlendi. 4'ün moleküler formülü C15H26O7, yüksek çözünürlüklü FAB-MS ölçümü ile belirlendi. 4'ün 1.0 M HC1 ile asit hidrolizi, D-glukoz,8,10-12,15-18) açığa çıkarırken, (R)-yuvarlaklık (4a) 33,34), 4'ün b-glukozidaz ile enzimatik hidrolizi ile elde edildi. 4'ün 1H-NMR'si (Tablo 3, CD30D) ve 13C-NMR (Tablo 4) spektrumları28), bir metile [d 1.69 (s, 10-H3)], üç metilene [d 1.41, 2.06 (her ikisi m, 4-H2), 1.51, 2.01 (hem m, 6a- hem de 6b-H), 2.23 (br dd, J ca. 8, 15 Hz, 7a-H), 2.37 (br dd , J yaklaşık 8, 15 Hz, 7b-H)], bir metin [d 2.90 (m, 5-H)] ve oksijen fonksiyonu taşıyan iki metilen {d [3.56 (DDD, J 2.8, 7.4) , 13.2 Hz), 3.97 (DDD, J 4.9, 8.0, 13,2 Hz), 3-H2], 4.04, 4.18 (her ikisi de d, J 12.2 Hz, 1-H2)} b- ile birlikte glukopiranozil kısmı [d 4.25 (d, J 7.7 Hz, 1-H)]. 4'teki bD-glukopiranozil kısmının konumu, HMBC deneyi ile 3-konum olarak netleştirildi (Şekil 1). Bu kanıtlara dayanarak, 4'ün mutlak stereo yapısının gösterildiği gibi olduğu belirlendi.

Kankanol (5), pozitif optik rotasyonlu ([a]D 25 11.1 derece) amorf bir toz olarak elde edildi. 5'in kimyasal iyonizasyon (CI)-MS'si, bir kuasimoleküler iyona (MH) bağlı olarak m/z 221 ve 223'te bir çift izotop iyon tepe noktası gösterdi. 5'in yüksek çözünürlüklü CI-MS ölçümü, moleküler formülün C9H13Cl04 olduğunu ortaya çıkardı. 5'in 1H-NMR (Tablo 1, CD30D) ve 13C-NMR (Tablo 2) spektrumları28) aşağıdaki fonksiyonların varlığını gösterdi: üç metilen [d 1.60 (DDD, J 2.5, 5.5, 13.1) Hz, 4a-H), 1,80 (br dd, J yaklaşık 3, 13 Hz, 4b H), 1,83 (br d, J yaklaşık 12 Hz, 6a-H), 2,57 (m, 6b-H), 3,75 , 3.88 (her ikisi de d, J 9.2 Hz, 10-H2)], beş metin [d 2.76 (dd, J 4.3, 8.0 Hz, 9-H), 2.50 (m, 5- H), 3,80 (br s, 7-H), 5,17 (br d, J yaklaşık 3 Hz, 3-H), 5,26 (d, J 4,3 Hz, 1-H) ]. 5'in düzlemsel yapısı, 1H–1H COSY ve HMBC deneyleriyle doğrulandı. Yani, 5'teki 1H–1H COSY deneyi, kalın çizgilerle yazılmış kısmi yapıların varlığını gösterdi ve HMBC deneyinde, Şekil 1'de gösterildiği gibi uzun menzilli korelasyonlar gözlemlendi. 5'in göreli stereo yapısı aşağıdaki proton çiftleri (1-H ve 9-H; 3-H ve 4a-H; 4b-H ve {{) arasında NOE korelasyonlarının gözlemlendiği NOESY deneyi ile belirlendi. 93}} H; 5-H ve 6b-H, 9-H; 6b-H ve 7-H; 7-H ve 9-H) gösterildiği gibi Şekil 2'de. 14'ün Tablo 1,35'te gösterildiği gibi yüzde 5 sulu HC1 ile işlenmesiyle elde edilen, 5 için 1H- ve 13C-NMR verilerinin 14a için olanlarla karşılaştırılmasıyla, klorun konumu 5'teki grup 3-konum olarak desteklendi. Ayrıca, 5'in asetik anhidrit (Ac2O) ve piridin ile asetilasyonu 3,7-oksidi (5a) verirken, 14a aynı asetilasyon koşulu altında diasetatı (14b) verdi. Bu kanıt aynı zamanda klor fonksiyonunun konumunun 3b pozisyonu olduğunu doğrulamamıza da yol açtı (Çizelge 3). Sonuç olarak, 5'in stereo yapısının gösterildiği gibi olduğu belirlendi.

Kankanoside E'nin (6) Yapısı Kankanoside E (6), negatif optik rotasyonlu ([a]D 25 20.0 derece MeOH) amorf bir toz olarak izole edildi. 6'lık IR spektrumu, 3410, 1647, 1085 cm1'de glikozidik ve karbonil fonksiyonlarına atfedilebilen absorpsiyon bantları gösterirken, UV spektrumu 211 nm'de (log e 4.63) maksimum absorpsiyon gösterdi ve bu da bir b-doymamış karboksilik asidin varlığını gösterir. 6'nın moleküler formülü C16H2808, pozitif ve negatif iyon FAB-MS ve yüksek çözünürlüklü MS ölçümü ile karakterize edildi. 6 serbest bırakılan D-glukoz,8,10—12,15-18) asit hidrolizi, oysa (2E,6R)-8-hidroksi-2,6-dimetil- 2-oktanoik asit (6a) 36), 6'nın b-glukozidaz ile enzimatik hidrolizi ile elde edildi. 6'nın 'H-NMR (Tablo 3, CD30D) ve 13C-NMR (Tablo 4) spektrumları28), bir (2E,6R)-8-hidroksi-2,6- varlığını gösterdi dimetil-2-oktanoik asit kısmı [d 0.95 (d, J 6.4 Hz, 10-H3), 1.30, 1.48 (her ikisi de m, 5-H2), 1.45, 1.70 (her ikisi de m, { {70}}H2), 1,65 (m, 6-Y), 1,81 (s, 9-H3), 2,22 (2H, m, 4-H2), 3,61, 3,94 (her ikisi de m, 8-H2), 6.78 (dd, J 1.2, 7.3 Hz, 3-H)] bir bD-glukopiranozil parçası ile birlikte [d 4.26 (d, J 7.6 Hz, 1-H)] . 6'nın 13C-NMR spektrumundaki karbon sinyallerinin 6a'nınkilerle karşılaştırılmasıyla, 6'nın 8-konumu etrafında glikosilasyon kayması gözlemlendi. Şekil 1. Sonuç olarak, 6'nın mutlak stereo yapısının (2E,6R)-8-b-D-glukopiranoziloksi-2,6-dimetil-2-oktanoik asit olduğu açıklandı.

cistanche özü faydası

Deneysel

Fiziksel verileri elde etmek için aşağıdaki araçlar kullanıldı: belirli rotasyonlar, Horiba SEPA-300 dijital polarimetre (l 5 cm); UV spektrumları, Shimadzu UV-1600 spektrometresi; IR spektrumları, Shimadzu FTIR-8100 spektrometresi; EI-MS, CI-MS ve yüksek çözünürlüklü CI-MS, JEOL JMS-GCMATE kütle spektrometresi; FAB-MS ve yüksek çözünürlüklü MS, JEOL JMS-SX 102A kütle spektrometresi; 1H-NMR spektrumu, JEOL EX-270 (270 MHz) ve JNM-LA500 (500 MHz) spektrometreleri; 13C-NMR spektrumları, JEOL EX-270 (68 MHz) ve JNM-LA500 (125 MHz) dahili standart olarak tetrametilsilanlı spektrometreler; ve HPLC dedektörü, Shimadzu RID-6A kırılma indeksi ve SPD- 10Avp UV-VIS dedektörleri. HPLC kolonu, YMC-Pack ODS-A (250 4.6 mm id) ve (250 20 mm id) kolonları sırasıyla analitik ve hazırlayıcı amaçlar için kullanıldı.

Kromatografi için aşağıdaki deneysel koşullar kullanıldı: sıradan fazlı silika jel kolon kromatografisi, Silika jel BW-200 (Fuji Silysia Chemical, Ltd., Aichi, Japonya, 15{{10}}—35 0 ağ); ters fazlı silika jel kolon kromatografisi, Chromatorex ODS DM1020T (Fuji Silysia Chemical, Ltd., Aichi, Japonya, 100-200 meş); TLC, Silika jel 60F254 (Merck, 0.25 mm) (sıradan faz) ve Silika jel RP- 18 F254S (Merck, 0.25 mm) (ters faz) ile önceden kaplanmış TLC plakaları; ters fazlı HPTLC, Silika jel RP-18 WF254S (Merck, 0.25 mm) ile önceden kaplanmış TLC plakaları; ve algılama, yüzde 1 Ce(SO4)2– yüzde 10 sulu H2SO4 püskürtülerek ve ardından ısıtılarak sağlandı.

Bitki Malzemesi

Kurutulmuş Cistanche tubulosa (SCHRENK) R. WIGHT gövdeleri Ocak 2005'te Eishin Trading Co., Ltd. Osaka, Japonya aracılığıyla Urumqi, Xinjiang Eyaleti, Çin'den satın alındı ​​ve botanik tanımlama, Xinjiang Geleneksel Çin Enstitüsü'nde profesör Jia Xiaoguang tarafından yapıldı. ve Etnolojik İlaçlar. Bu tesisin bir makbuz örneği (2005.01. Sincan-01) laboratuvarımızda dosyada bulunmaktadır.

Ekstraksiyon ve İzolasyon

Kurutulmuş C. tubulosa gövdeleri (5.0 kg) toz haline getirildi ve üç kez metanol ile geri akış altında 3 saat özümlendi. Çözücünün indirgenmiş basınç altında buharlaştırılması, metanolik özü (1340 g, bu bitkisel ilaçtan yüzde 26.8) sağladı. Metanolik ekstrakt (160 g) normal fazlı silika jel kolon kromatografisine [3.2 kg, CHCl3–MeOH–H2O (10 : 3: 1→7 : 3 : 1, daha düşük) tabi tutuldu. katman→6 : 4 : 1)MeOH] altı fraksiyon [Fr. 1 (5.04 gr), Fr. 2 (9.84 gr), Fr. 3 (7,80 g), Fr. 4 (13.28 gr), Fr. 5 (113.6{{104}}) ve Fr. 6 (7.61 g)]. Fraksiyon 1 (5.00 g), ters fazlı silika jel kolon kromatografisi [150 g, MeOH–H2O (40 6: 60→ 5{{) ile ayrıldı. 162}} : 50→60 : 40, v/v)→MeOH] beş fraksiyon [Fr. {{50}} (83{{201}} mg), Fr. 1-2 (590 mg), Fr. 1-3 (180 mg), Fr. 1-4 (124 mg) ve Fr. 1-5 (3200 mg)]. Fr. {{60}} (830 mg), kankanol (5, 20) vermek üzere HPLC [MeOH–H2O (10 : 90, v/v)] ile ayrıca ayrıldı mg, yüzde 0,0034 ), argyol (15, 18 mg, yüzde 0,0030 ), cistanin (16, 24 mg, yüzde 0,0040 ) ve Fr. 1-1-2 (62 mg), ayrıca HPLC [MeOH–H2O (2 : 98, v/v)] ile ayrılmış ve (3R)-3-hidroksi-2-pirolidinon (yüzde 0,0020) elde edilmiştir. ) ve (3R)-3-hidroksi-1-metil-2-pirolidinon (yüzde 0,0059). Fr. 1-2 (590 mg), cistanklorin (17, 21 mg, 0.0035) verecek şekilde HPLC [MeOH–H2O (35 : 65, v/v) ve CH3CN–H2O (20 : 80, v/v)] ile saflaştırıldı. yüzde ). Fraksiyon 2 (9.72 g) ters fazlı silika jel kolon kromatografisine [290 g, MeOH–H2O (20 : 80→30 : 70→40 : 60→60 : 40, v/v)→MeOH] af ford'a tabi tutulmuştur. yedi kesir [Fr. 2-1 (1986 mg), Fr. 2-2 (1563 mg), Fr. 2-3 (3931 mg), Fr. 2-4 (375 mg), Fr. 2-5 (486 mg), Fr. 2-6 (460 mg) ve Fr. 2-7 (336 mg)]. Fr. 2-1 (466 mg), üridin (yüzde 0,0069) verecek şekilde HPLC [MeOH–H20 (5 : 95, v/v)] ile ayrıldı. Fr. 2-2 (535 mg), antirrhide (11, 15 mg, yüzde 0,0079) ve 6-deoksikatalpol (14, 214) verecek şekilde HPLC [MeOH–H2O (10 : 90, v/v)] ile ayrıldı. mg, yüzde 0.11). Fr. 2-3 (535 mg), glurosid (10, 110 mg, yüzde 0.14) ve bartsioside (13, 164 mg, yüzde 0.21) sağlamak için HPLC [MeOH–H2O (20 : 80, v/v)] ile ayrıldı. . Fr. 2-4 (375 mg), kankanosidler A (1, 32 mg, yüzde 0,0054) ve D (4, 9 mg, yüzde 0,0015) verecek şekilde HPLC [MeOH–H2O (30 : 70, v/v)] ile ayrıldı ). Fr. 2-6 (460 mg), kankanosid E (6,161 mg, yüzde 0.027) ve (2E,6Z){{192 sağlamak üzere HPLC [MeOH–H2O (45 : 55, v/v)] ile ayrıca ayrıldı. }}bD-glukopiranoziloksi-2,6-dimetil-2,6-oktadienoik asit (18, 17 mg, yüzde 0,0028 ). Fraksiyon 3 (7.60 g), ters fazlı silika jel kolon kromatografisine [230 g, MeOH–H2O (20 : 80→40 : 60→50 : 50→ 60 : 40, v/v)→MeOH] tabi tutuldu ve elde edildi. beş kesir [Fr. 3-1 (2652 mg), Fr. 3-2 (593 mg), Fr. 3-3 (3610 mg), Fr. 3-4 (190 mg) ve Fr. 3-5 (336 mg)]. Fr. 3-1 (480 mg), kankanosid B (2, 19 mg, yüzde 0,018 ), geniposidik asit (8, 32 mg, 0,030) vermek üzere HPLC [MeOH–H2O (10 : 90, v/v)] ile saflaştırıldı yüzde ) ve ajugol (12, 12 mg, yüzde 0.011). Fraksiyon 4 (13.10 g) ters fazlı silika jel kolon kromatografisine [390 g, MeOH–H2O (10 : 90→20 : 80→30 : 70→40 : 60→50 : 50, v/v)→) tabi tutulmuştur. MeOH] yedi fraksiyon [Fr. 4-1 (6114 mg), Fr. 4-2 (430 mg), Fr. 4-3 (1058 mg), Fr. 4-4 (170 mg), Fr. 4-5 (2595 mg), Fr. 4-6 (1635 mg) ve Fr. 4-7 (1064 mg)]. Fr. 4-2 (430 mg), 2 (70 mg, yüzde 0,012) ve kankanosid C (3, 16 mg, yüzde 0,0027) verecek şekilde HPLC [MeOH–H2O (5 : 95, v/v)] ile ayrıca ayrıldı. . Fr. 4-6 (1058 mg) ayrıca mussaenosidik asit (7, 116 mg, yüzde 0.020) ve 8-epiloganik asit vermek üzere HPLC [MeOH–H2O (15 : 85, v/v)] ile ayrıldı (9, 193 mg, yüzde 0.033). Fraksiyon 5 (15.15 g) ters fazlı silika jel kolon kromatografisine [455 g, MeOH–H2O (0 : 100→10 : 90→ 20 : 80→40 : 60→50 : 50, v/v)→MeOH) tabi tutulmuştur. ] yedi kesir vermek [Fr. 5-1 (9311 mg), Fr. 5-2 (1114 mg), Fr. 5-3 (306 mg), Fr. 5-4 (347 mg), Fr. 5-5 (1620 mg), Fr. 5-6 (1453 mg) ve Fr. 5-7 (1106 mg)]. Fr. 5-1 (9311 mg), D-mannitol (3337 mg, yüzde 4.19) verecek şekilde MeOH'den kristalleştirildi.

Bilinen bileşikler (7-18), fiziksel verilerinin ([a]D, IR, 1H-NMR, 13C-NMR, MS) bildirilen değerlerle 1,7,19-24,26,27) karşılaştırılmasıyla veya ticari numunelerinki.25) Kankanoside A (1): Şekilsiz bir toz, [a]D 25 107.4 derece (c 1.50, MeOH). Yüksek çözünürlüklü pozitif iyon FAB-MS: C16H2608Na (M Na) 369.1525 için Calcd; 369.1522 bulundu. IR (KBr): 3410, 2940, 1647, 1076 cm1. 1H-NMR (500 MHz, CD30D ve piridin-d5) d: Tablo 1'de verilmiştir. 13C-NMR (125 MHz, CD30D ve piridin-d5) d C: Tablo 2'de verilmiştir. Pozitif iyon FAB-MS: m /z 369 (M Na) . Negatif iyon FAB-MS: m/z 345 (MH) .

Kankanosit B (2): Şekilsiz bir toz, [a]D 26 118.7 derece (c 0.10, MeOH). Yüksek çözünürlüklü pozitif iyon FAB-MS: C15H24O10Na (M Na) 387.1267 için Calcd; 387.1261 bulundu. IR (KBr): 3410, 2940, 1647, 1085 cm1. 'H-NMR (500 MHz, CD30D) d: Tablo l'de verilmiştir. 13C-NMR (125 MHz, CD30D) d C: Tablo 2'de verilmiştir. Pozitif iyon FAB-MS: m/z 387 (M Na) . Negatif iyon FAB-MS: m/z 363 (MH) .

Kankanosit C (3): Amorf bir toz, [a]D 26 34.0 derece (c 1.00, MeOH). Yüksek çözünürlüklü negatif iyon FAB-MS: C15H24ClO10 (MH) 399.1058 için Calcd; 399.1077 bulundu. IR (KBr): 3410, 2964, 1159, 1078, 1048, 949 cm1. 'H-NMR (500 MHz, CD30D) d: Tablo 1'de verilmiştir. 13C NMR (125 MHz, CD30D) d C: Tablo 2'de verilmiştir. Negatif iyon FAB-MS: m/z 399, 401 (MH) .

Kankanosid D (4): Şekilsiz bir toz, [a]D 25 30.6 derece (c 0.50, MeOH). Yüksek çözünürlüklü pozitif iyon FAB-MS: C15H26O7Na (M Na) 341.1204 için Calcd; 341.1210 bulundu. IR (KBr): 3410, 2940, 1655, 1078, 1040 cm1. 'H-NMR (500 MHz, CD30D) d: Tablo 3'te verilmiştir. 13C-NMR (125 MHz, CD30D) d C: Tablo 4'te verilmiştir. Pozitif iyon FAB-MS: m/z 341 (M Na) . Negatif iyon FAB-MS: m/z 317 (MH) .

Kankanol (5): Şekilsiz bir toz, [a]D 25 11.1 derece (c 1.40, MeOH). Yüksek çözünürlüklü CI-MS: C9H14Cl04 (MH) 221.0580 için hesaplanan; 221.0582 bulundu. IR (KBr): 3399, 3004, 1165, 1096, 1059, 1048, 955 cm1. 1H-NMR (500 MHz, CD30D) d: Tablo 1'de verilmiştir. 13C-NMR (125 MHz, CD30D) d C: Tablo 2'de verilmiştir. CI-MS m/z (yüzde): 221 (MH) (5 ), 223 (MH) (2), 185 (88), 167 (100), 149 (71) ve 57 (49).

Kankanoside E (6): Şekilsiz bir toz, [a]D 25 20.0 derece (c 2.00, MeOH). Yüksek çözünürlüklü pozitif iyon FAB-MS: C16H28O8Na (M Na) 371.1682 için hesaplanan; 371.1690 bulundu. UV [MeOH, nm (log e)]: 215 (4.16). IR (KBr): 3410, 2940, 1647, 1085, 1043 cm1. 'H-NMR (500 MHz, CD30D) d: Tablo 3'te verilmiştir. 13C-NMR (125 MHz, CD30D) d C: Tablo 4'te verilmiştir. Pozitif iyon FAB-MS: m/z 371 (M Na) . Negatif iyon FAB-MS: m/z 347 (MH).

cistanche özü faydası

1 M HCl ile 1-4 ve 6'nın Asit Hidrolizi

1 M HC1 (0.5 mi) içindeki 1-4 veya 6 (her biri 1.5 mg) solüsyonu geri akış altında 3 saat ısıtıldı. Soğutulduktan sonra reaksiyon karışımı buzlu su içine döküldü ve Amberlite IRA-400 (OH formu) ile nötralize edildi ve reçine süzülerek çıkarıldı. Daha sonra süzüntü, EtOAc ile özümlendi. Sulu katman, aşağıdaki koşullar altında HPLC analizine tabi tutuldu: HPLC kolonu, Ka sensörü LC NH{{10}}, 4.6 mm id 250 mm (Tokyo Kasei Co., Ltd., Tokyo, Japonya); algılama, optik döndürme [Shodex VEYA-2 (Showa Denko Co., Ltd., Tokyo, Japonya)]; mobil faz, CH3CN–H2O (75: 25, v/v); diğer hız 0.8 ml/dak; kolon sıcaklığı, oda sıcaklığı. Sulu katmanda bulunan D-glukozun tanımlanması, tutma süresi ve optik rotasyonun gerçek bir numuneninkiyle karşılaştırılmasıyla gerçekleştirilmiştir: tR 12.3 dk (pozitif optik rotasyon)

1, 4 ve 6'nın b-Glukozidaz ile Enzimatik Hidrolizi

H2O (1.5 mi) içindeki 1 (7.7 mg) solüsyonu b-glukosidaz (5.0 mg, badem, Oriental Yeast Co., Tokyo, Japonya) ile işlendi ve solüsyon 37 derecede karıştırıldı. 3 gün için Reaksiyon karışımına EtOH eklendikten sonra solvent, indirgenmiş basınç altında çıkarıldı ve tortu, kankagenin a'yı (1a, 2.3 mg, yüzde 56) vermek üzere HPLC [MeOH–H2O (55:45, v/v)] ile saflaştırıldı. . Benzer bir prosedürle, (R)-rotundiol33,34) (4a, 1.2 mg, yüzde 69 ) ve (2E,6R)-8-hidroksi-2,6-dimetil{{30} }oktanoik asit36) (6a, 6.8 mg, yüzde 62), sırasıyla 4 (3.5 mg) ve 6'dan (20,4 mg) elde edildi.

Kankagenin a (1a): Beyaz bir toz, [a]D 25 18.4 derece (c 0.20, MeOH). Yüksek çözünürlüklü EI-MS: C10H16O3 (M ) 184.1099 için Calcd; 184.1106 bulundu. IR (KBr): 3410, 2940, 1684 cm1. 1H-NMR (500 MHz, CD30D) d: Tablo 1'de verilmiştir. 13C-NMR (125 MHz, CD30D) d C: Tablo 2'de verilmiştir. EI MS: m/z (yüzde): 184 (M, 37) , 95 (100).

Yüzde 5 sulu KOH ile 14'ün Alkali Tedavisi

Yüzde 5 sulu KOH (1.0 mi) içinde 14 (23.0 mg) solüsyonu 80 derecede 2 saat karıştırıldı. Reaksiyon karışımı, Amberlite HCR-W2 (H formu) ile nötralize edildi. Çözücünün indirgenmiş basınç altında filtrattan çıkarılması, HPLC [MeOH–H2O (5:95, v/v)] ile saflaştırılan bir tortu verdi ve 2 (4.0 mg, yüzde 16) ve 1932) (10.5 mg) verdi. , yüzde 43 ).

Yüzde 5 sulu HCl ile 14'ün Asit Tedavisi

Yüzde 5 sulu HC1 (2.{5}} mi) içindeki 14 (25.0 mg) solüsyonu oda sıcaklığında 3 saat karıştırıldı. Reaksiyon karışımı, buzlu suya döküldü ve tüm reaksiyon karışımı, EtOAc ile özümlendi. EtOAc özü, art arda doymuş sulu NaHC03 ve tuzlu su ile yıkandı, daha sonra susuz MgS04 tozu üzerinde kurutuldu ve süzüldü. Çözücünün indirgenmiş basınç altında filtrattan çıkarılması, HPLC [MeOH–H2O (20: 80, v/v)] ile ayrılan bir tortu verdi ve 14a (4.0 mg, yüzde 25) verdi.

14a

Beyaz bir toz, [a]D 20 21.5 derece (c 0.30, MeOH). Yüksek çözünürlüklü CI-MS: C9H14Cl04 (MH) 221.0580 için hesaplanan; 221.0587 bulundu. IR (KBr): 3410, 2962, 1365, 1152, 1055, 945 cm1 . 'H-NMR (500 MHz, CD30D) d: Tablo 1'de verilmiştir. 13C-NMR (125 MHz, CD30D) d C: Tablo 2'de verilmiştir. CI-MS: m/z (yüzde): 221 (MH) ( 7), 223 (MH) (3), 203 (M H2O) (97), 205 (M H2O) (33), 185 (7), 167 (12), 159 (32), 121(27), 110 (48), 95 (64), 85 (100), 67 (56) ve 57 (65).

5 ve 14a'nın asetilasyonu

Piridin (0.5 mi) içindeki bir 5 (2.5 mg) çözeltisi, asetik anhidrit (Ac20, 0.4 mi) ile işlendi ve karışım, oda sıcaklığında 12 saat karıştırıldı. Reaksiyon karışımı, buzlu suya döküldü ve tüm reaksiyon karışımı, EtOAc ile özümlendi. EtOAc özü arka arkaya yüzde 5 sulu HC1, doymuş sulu NaHC03 ve tuzlu su ile yıkandı, daha sonra susuz MgS04 tozu üzerinde kurutuldu ve süzüldü. Çözücünün indirgenmiş basınç altında filtrattan çıkarılması, 5a (2.3 mg, yüzde 77) verecek şekilde HPLC [MeOH–H20 (35:65, v/v)] ile saflaştırılan bir tortu verdi. Benzer bir prosedürle 14b (2.7 mg, yüzde 87) de hazırlandı ve HPLC [MeOH–H2O (55:45, v/v)] ile 14a'dan (2.1 mg) saflaştırıldı.

5a

Beyaz bir toz, [a]D 20 1.8 derece (c 0.18, MeOH). Yüksek çözünürlüklü CI MS: C11H15O5 (MH) 227.0919 için Calcd; 227.0925 bulundu. IR (KBr): 2962, 1734, 1374, 1258, 1237, 1169, 1103, 1053, 947 cm1. 1H-NMR (500 MHz, CD30D) d: Tablo 1'de verilmiştir. 13C-NMR (125 MHz, CD30D) d C: Tablo 2'de verilmiştir. CI-MS m/z (yüzde): 227 (MH) (28 ), 209 (M H2O) (4), 184 (3), 166 (45), 149 (22), 138 (38), 122 (44), 94 (31), 85 (100) ve 57 (34) ).

14b

Beyaz bir toz, [a]D 20 23.7 derece (c 0.06, MeOH). Yüksek çözünürlüklü CI-MS: C13H18Cl06 (MH) 305.0792 için hesaplanan; 305.0790 bulundu. IR (KBr): 1744, 1376, 1243, 1231, 1001, 941 cm1. 'H-NMR (500 MHz, CD30D) d: Tablo 1'de verilmiştir. 13C-NMR (125 MHz, CD30D) d C: Tablo 2'de verilmiştir. CI-MS: m/z (yüzde): 305 (MH) ( 2), 307 (MH) (1), 263 (MH C2H3O) (6), 265 (MH C2H3O) (3), 245 (30), 203 (8), 185 (100), 167 (7), 149 (33), 121 (26), 95 (15), 85 (37) ve 57 (93).

Teşekkür

Bu araştırma, Japonya Eğitim, Kültür, Spor, Bilim ve Teknoloji Bakanlığı'ndan 21. COE Programı, Akademik Sınır Projesi ve Bilimsel Araştırmalar için Yardım Hibesi tarafından desteklenmiştir. Yazarlar, bitki materyalinin tanımlanması için Çin, Urumçi'deki Xinjiang Geleneksel Çin ve Etnolojik İlaçlar Enstitüsü'nden Profesör Xiaoguang Jia'ya teşekkür ediyor.

cistanche faydası

Referanslar ve Notlar

1) Kobayashi H., Oguchi H., Takizawa N., Miyase T., Ueno A., Usmanghani K., Ahmad M., Chem. Eczacılık Bull., 35, 3309-3314 (1987).

2) Xinjiang Science and Technology Press, "Sincan Temel Tıbbi Bitkilerinin Kültür Teknikleri", Xinjiang Geleneksel Çin ve Etnolojik İlaçlar Enstitüsü Ed., 2004, s. 84-88.

3) Du N., Zhou P., Wang J., Liu C., Li W., Zhongguo Yaoke Daxue Xue bao, 24, 46-48 (1993).

4) Xue D., Zhongguo Zhongyao Zazhi, 22, 170-171 (1997).

5) Song Z., Mo S., Chen Y., Tu P., Li W., Zhao Y., Zheng J., Zhongguo Zhongyao Zazhi, 25, 728-730 (2000).

6) Song Z., Tu P., Zhao Y., Zheng J., Zhongcaoyao, 31, 808-810 (2000).

7) Yoshizawa F., Deyama T., Takizawa N., Usmanghani K., Ahmad M., Chem. Eczacılık Bull., 38, 1927-1930 (1990).

8) Matsuda H., Morikawa T., Tao J., Ueda K., Yoshikawa M., Chem. Eczacılık Bull., 50, 208-215 (2002).

9) Morikawa T., Matsuda H., Toguchida I., Ueda K., Yoshikawa M., J. Nat. Prod., 65, 1468-1474 (2002).

10) Tao J., Morikawa T., Toguchida I., Ando S., Matsuda H., Yoshikawa M., Bioorg. Med. Chem., 10, 4005-4012 (2002).

11) Morikawa T., Tao J., Ando S., Matsuda H., Yoshikawa M., J. Nat. Prod., 66, 638-645 (2003).

12) Tao J., Morikawa T., Ando S., Matsuda H., Yoshikawa M., Chem. Eczacılık Bull., 51, 654-662 (2003).

13) Matsuda H., Morikawa T., Xie H., Yoshikawa M., Planta Med., 70, 847-855 (2004).

14) Sun B., Morikawa T., Matsuda H., Tewtrakul S., Harima S., Yoshikawa M., J. Nat. Prod., 67, 1464-1469 (2004).

15) Morikawa T., Sun B., Matsuda H., Wu LJ, Harima S., Yoshikawa M., Chem. Eczacılık Bull., 52, 1194-1199 (2004).

16) Xie H., Wang T., Matsuda H., Morikawa T., Yoshikawa M., Tani T., Chem. Eczacılık Bull., 53, 1416-1422 (2005).

17) Morikawa T., Xie H., Matsuda H., Yoshikawa M., J. Nat. Prod., 69 (2006) baskısında.

18) Morikawa T., Xie H., Matsuda H., Wang T., Yoshikawa M., Chem. Eczacılık Bull., 54, 506-513 (2006).

19) Kobayashi H., Karasawa H., Miyase T., Fukushima S., Chem. Eczacılık Bull., 33, 3645-3650 (1985).

20) Otsuka H., Phytochemistry, 33, 617-622 (1993).

21) Zhao W., Yang G., Xu R., Qin G., Phytochemistry, 41, 1553-1555 (1996).

22) Kobayashi H., Karasawa H., Miyase T., Fukushima S., Chem. Eczacılık Bull., 32, 1729-1734 (1984).

23) Xu Z., Yang S., Yang J., Lu R., Zhongcaoyao, 30, 244-246 (1999).

24) Wang SJ, Pei YH, Hua HM, Çene. Kimya Lett., 12, 343-344 (2001).

25) Bilinen bu bileşikler, fiziksel verilerinin ticari olarak elde edilen numunelerle karşılaştırılmasıyla tanımlandı.

26) Pires R., Burger K., Tetrahedron, 53, 9213-9218 (1997).

27) Kamal A., Ramana KV, Ramana AV, Babu AH, Tetrahedron: Asymmetry, 14, 2587-2594 (2003).

28) 1-6 ve ilgili bileşiklerin (19, 1a, 5a, 14a, 14b) 1H- ve 13C-NMR spektrumları, polarizasyon transferi (DEPT), çift kuantum filtre korelasyon spektroskopisi ( DQF COSY), heteronükleer çoklu kuantum tutarlılık (HMQC) ve heteronükleer çoklu bağ bağlantısı (HMBC) deneyleri.

29) Nishizawa M., Kodama S., Yamase Y., Kayano K., Hatakeyama S., Ya mada H., Chem. Eczacılık Bull., 42, 982-984 (1994).

30) Yoshikawa M., Ueda T., Matsuda H., Yamahara J., Murakami N., Chem. Eczacılık Bull., 42, 1691-1693 (1994).

31) Matsuda H., Shimoda H., Uemura T., Ueda T., Yamahara J., Yoshikawa M., Chem. Eczacılık Bull., 47, 1753-1758 (1999).

32) Damtoft S., Jensen SR, Nielsen BJ, Phytochemistry, 24, 2281- 2283 (1985).

33) Watanabe K., Takada Y., Matsuo N., Nishimura H., Biosci. Biyoteknoloji. Biochem., 59, 1979-1980 (1995).

34) Takikawa H., Yamazaki Y., Mori K., Eur. J. Org. Chem., 229-232 (1998).

35) Kitagawa I., Fukuda Y., Taniyama T., Yoshikawa M., Chem. Eczacılık Bull., 39, 1171-1176 (1991).

36) Yamaguchi K., Shinohara C., Kojima S., Sodeoka M., Tsuji T., Biosci. Biyoteknoloji. Biochem., 63, 731-735 (1999).