Yüksek Hızlı Karşı Akım Kromatografisi ile Cistanches Deserticola YC Ma'dan Dört Bileşiğin Hazırlayıcı İzolasyonu ve Saflaştırılması

İletişim: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-posta:audrey.hu@wecistanche.com

Soyut:

Bir silika jel kolonu üzerinde bir bileşen zenginleştirme aşamasının ardından, dörtfeniletanoid glikozitlerbaşarıyla izole edildicistanches çöl çiçeğive etil asetat-n-bütanol-etanol-sudan (40:6:6:50, v/v) oluşan iki fazlı bir solvent sistemi ile hazırlayıcı yüksek hızlı karşı akım kromatografisi (HSCCC) ile saflaştırılır. /v/v). HPLC-ELSD ile belirlendiği üzere saflığı yüzde 95'ten yüksek olan toplam 30,9 mg asteozit, 13,0 mg izoakteozit, 12,5 mg siringalid A 3'- -L-rhamnopiranosid ve 7,2 mg 2'-asetillakteozid, 297 mg'dan tek adımlı ayırmada elde edilirCistanche Deserticola özü, sırasıyla. Yapıları HR-MS, 1H-NMR ve 13C-NMR ile tanımlandı.

Anahtar Kelimeler: yüksek hızlı karşı akım kromatografisi;Cistanches Deserticola YC Ma;feniletanoid glikozitler; asteosit; izoakteosit; syringalide A 3'- -L-rhamnopiranoside; 2'-asetillaktosid.

giriiş

cistanches çöl çiçeğiYC Ma, bir türCistanchesOrobanchaceae familyasına ait olan, böbrek yetmezliği, kadın kısırlığı, morbid leucorrhea, neurapraxia ve senil kabızlık tedavisi için iyi bilinen bir Geleneksel Çin Tıbbıdır [1]. Çin'in kuzeybatısında yaygın olarak bulunan parazit bir bitkidir. Şimdiye kadar, feniletanoid glikozitler (PhG'ler), iridoidler ve lignanlar dahil olmak üzere birçok bileşik bu türden izole edilmiştir [2]. PhG'lerin bazılarının antioksidan, hepatoprotektif ve nöroprotektif aktivitelere sahip olduğu bildirilmiştir [3-6]. Bununla birlikte, PhG'lerin izolasyon ve saflaştırma prosedürü zor ve zaman alıcıdır. Ayrıca, klasik çoklu kromatografik yöntemler, yalnızca çok sayıda organik çözücü kullanmakla kalmaz, aynı zamanda daha düşük bir numune geri kazanımı sağlar. Desteksiz bir sıvı-sıvı bölme kromatografisi tekniği olan yüksek hızlı karşı akım kromatografisi (HSCCC), bazı geleneksel yöntemlere kıyasla mükemmel numune geri kazanımı sunar ve çeşitli doğal ürünlerin ayrılması ve saflaştırılması için yaygın olarak kullanılmaktadır [7-9] . Birkaç PhG saflaştırılmış olmasına rağmenCistanchescinsi ve diğerleri tarafından HSCCC [10–14] tarafından, hiçbir makale bir bifazik sistemde acteoside, isoacteoside, syringalide A 3'- -L-rhamnopyranoside ve 2'-acetylacteoside'ın saflaştırılmasını bildirmemiştir.

Bu yazıda, C. Deserticola'dan dört PhG'nin ayrılması ve saflaştırılması için basit bir yöntem sunuyoruz. Son olarak, tek adımda 30.9 mg asteozit, 13.0 mg izoakteozit, 12.5 mg syringalide A 3'- -L-rhamnopiranosid ve 7.2 mg 2'-asetillakteozit elde edildi. Sırasıyla yüzde 99, yüzde 95, yüzde 99 ve yüzde 98 saflıklarla 297 mg fraksiyondan ayırma. Yapıları, 1H- ve 13C-NMR spektral verilerine ve HR-MS spektrumlarına dayalı olarak karakterize edildi. Bu araştırmada tanımlanan dört PhG'nin yapıları Şekil 1'de gösterilmektedir.

Sonuçlar ve tartışma

Ham Ekstraktın HPLC Analizi

C. Deserticola'dan elde edilen n-butanoik ekstraktın zenginleştirilmiş fraksiyonu HPLC-UV ile analiz edildi. Kullanılan kolon bir Accurasil C18'di (250 mm x 4.6 mm, id 5 um) (Thermo-Fisher Scientific Instruments, şehir, eyalet kısaltması, ABD), mobil faz metanol-suydu (30:70, v/v). Akış hızı 1 mL/dk idi. Dedektör dalga boyu 254 nm'ye ayarlandı. HPLC kromatogramı Şekil 2'de gösterilmiştir. 1 ila 4 arasındaki zirveler, asteosit (1), izoakteosit (2), siringalid A 3'- -L-rhamnopiranosid (3) ve 2'-asetillaktosid (4)'e karşılık gelir, sırasıyla.

İki Fazlı Çözücü Sistem Seçimi

HSCCC ile başarılı ayırma, büyük ölçüde uygun bir iki fazlı solvent sisteminin seçimine bağlıdır, iki fazlı solvent sistemi, her bir hedef bileşenin bölme katsayısı değerlerine (K) göre seçilmiştir ve optimum bir K aralığı {{'den olmalıdır. 2}}.5 ila 2.

Deneyde, birkaç iki fazlı solvent sisteminin hedef bileşenleri için K değerleri Tablo 1'de gösterilmiştir (pik 4 için biraz daha yüksek olmasına rağmen, sonuçların kabul edilebilir olduğu gösterilmiştir). Bunların arasında, etil asetat-n-bütanol-etanol-su (40:6:6:50, v/v/v/v) hedef bileşikler için uygun bölme katsayıları verdi. Sonunda, etil asetat-n-bütanol-etanol-sudan (40:6:6:50, v/v/v/v) oluşan solvent sistemi C. Deserticola'nın dört bileşiğini izole etmek ve saflaştırmak için kullanıldı. Şekil 3. Şekil 2'de gösterildiği gibi, her HSCCC fraksiyonunun HPLC analizi, dört saf PhG'nin (akteosit, yüzde 99; izoakteosit, yüzde 95; syringalide A 3′- -L-rhamnopiranosid yüzde 99 ve 2′- asetillakteosit yüzde 98) ham fraksiyondan elde edilebilir.

Deneysel

aparat

Bu çalışmada kullanılan HSCCC ekipmanı, seri olarak bağlanmış üç hazırlayıcı çok katmanlı bobin ayırma kolonuna (tüp çapı) sahip bir TBE-300B yüksek hızlı karşı akım kromatografi sistemidir (Shanghai Tauto Biotech Co., Şanghay, Çin).=20,6 mm, toplam hacim=300 mL) ve 20 mL'lik bir numune halkası. Dönüş yarıçapı veya tutucu ekseni ile merkez arasındaki mesafesantrifüj ekseni (santrifüjün ekseni (R) 5 cm idi ve değer dahili terminalde 0.5 ile harici terminalde 0.8 arasında değişiyordu (=r/R, burada r, bobinden tutucu şafta olan mesafedir). Deneyde sıcaklığı kontrol etmek için bir HX 105 sabit sıcaklık sirkülasyon aleti (Beijing Changliu Lab Instrument Company, Pekin, Çin) kullanıldı. HSCCC sistemi, bir model TBP-5002 orta basınçlı sabit akışlı pompa, 254 nm'de çalışan bir model TBP-2000 UV dedektörü ve bir model V4.0 iş istasyonu (Jinda Biochemistry Instrument Company, Şangay, Çin).

Kullanılan yüksek performanslı sıvı kromatografisi (HPLC) ekipmanı, bir G1312A ikili pompa, bir G1329A otomatik örnekleyici, bir G1314A değişken dalga boyu detektörü (VWD), bir G1316A termostatlı kolon bölmesi, bir G1379B gaz giderici ve Agilent LC'den oluşan bir Agilent 1200 sistemiydi. iş istasyonu. Saflıkların tespiti için bir Alltech 3300 ELSD kullanıldı. Agilent 6520 Q-TOF ve Bruker AVANCE III 500-NMR spektrometreleri, bileşiklerin yapısal tanımlaması için kullanıldı. lH ve 13C-NMR spektrumları (sırasıyla 500 ve 125 MHz'de) oda sıcaklığında (22 derece /295.1 K) ölçüldü.

Reaktifler ve Malzemeler

Etil asetat, n-bütanol ve etanol analitik derecelerdeydi ve metanol HPLC derecesindeydi. Tüm solventler Tianjin Concord Technology Company'den (Tianjin, Çin) satın alındı. Tüm çözeltiler ve seyreltmeler için Milli-Q su (18.2 MΩ) (Millipore, Bedford, MA, ABD) kullanıldı. C. Deserticola'nın köksapı Çin Halk Cumhuriyeti, İç Moğolistan Eyaletinden 2009 yılı Haziran ayında toplanmıştır. Bitki, Prof. Lijuan Zhang tarafından teşhis edilmiş ve bir kupon örneği (No. 20091001) laboratuvarımıza bırakılmıştır.

Ham Numunenin Hazırlanması

C. Deserticola'nın (1 Kg) toz halinde havayla kurutulmuş etli gövdeleri, her seferinde 2 saat boyunca sulu etanol (8 L, yüzde 60 h/h) ile iki kez geri akıtıldı. Ekstrakt, indirgenmiş basınç altında ve etanolün toplam buharlaşmasına kadar 60 derecelik bir sıcaklıkta buharlaştırıldı. Tortu, su içinde süspanse edildi ve arka arkaya üç kez kloroform, etil asetat ve n-butanol ile özümlendi, bu da azaltılmış basınç altında kuruyana kadar buharlaştırıldıktan sonra 5.16 g n-bütanoik özü verdi. n-bütanoik ekstrakt daha sonra sekiz fraksiyon verecek şekilde aşamalı gradyan elüsyonu (CHCl3-MeOH, 10:1→1:1) kullanılarak bir silika jel kolonu (200-300 ağ) üzerinde ayrıldı. Fraksiyon 6 (297 mg), daha fazla HSCCC izolasyonu ve ayrımı için kullanıldı.

İki Fazlı Solvent Sistemlerinin Seçimi

İki fazlı solvent sistemleri, C. Deserticola fraksiyonundaki hedef bileşenlerin bölme katsayısına (K) göre seçildi. K değerleri, aşağıdaki gibi LC analizi ile belirlendi: Uygun miktarda ham özüt tozu (fraksiyon 6) solvent sisteminin alt fazında çözündürüldü ve HPLC ile analiz edildi. Piklerin alanları A1 olarak kaydedildi. Daha sonra çözeltiye eşit hacimde üst faz ilave edildi ve bölme dengesine ulaşmak için iyice karıştırıldı. Alt faz daha sonra tekrar HPLC ile analiz edildi. Son pik alanları A2 olarak kaydedildi. K değerleri aşağıdaki denkleme göre hesaplanmıştır: K=(A1 − A2)/A2 [15,16].

İki Fazlı Solvent Sisteminin Hazırlanması ve Örnek Çözelti

Bu çalışmada, HSCCC ayrımı için etil asetat-n-bütanol-etanol-sudan (40:6:6:50, v/v/v/v) oluşan iki fazlı solvent sistemi kullanılmıştır. Her çözücü bir ayırma hunisine eklendi ve oda sıcaklığında iyice dengelendi. Üst faz ve alt faz ayrıldı ve kullanımdan kısa bir süre önce 30 dakika sonikasyon ile gazı alındı. Örnek çözelti, 297 mg Fraksiyon 6'nın 15 ml alt faz etil asetat-n-bütanol-etanol-su (40:6:6:50, v/v/v/v) içinde çözülmesiyle hazırlandı.

HSCCC Ayırma Prosedürü

HSCCC aşağıdaki gibi yapıldı. Çok katmanlı sarmal sütun ilk önce üst organik durağan faz ile dolduruldu. Alttaki sulu mobil faz daha sonra 1.5 mL/dakikalık bir akış hızında kolonun baş ucuna pompalandı ve aynı zamanda HSCCC cihazı 900 rpm devir hızında çalıştırıldı. Kuyruk çıkışında (yaklaşık iki saat sonra) yıkanan berrak bir mobil faz ile gösterildiği gibi hidrodinamik denge oluşturulduktan sonra, enjeksiyon valfinden 297 mg ham özü (fraksiyon 6) içeren 15 mL'lik bir numune solüsyonu enjekte edildi. Kolonun çıkışı, 254 nm altında sürekli olarak izlendi. Kromatograma göre dört pik fraksiyon toplandı ve daha sonra indirgenmiş basınç altında buharlaştırıldı. Cihazın sıcaklığı 25 dereceye ayarlandı.

HPLC Analizi ve HSCCC Tepe Fraksiyonlarının Tanımlanması

HSCCC'den elde edilen tepe fraksiyonları, HPLC-ELSD ile analiz edildi. Kullanılan kolon bir Accurasil C18'di (250 mm x 4.6 mm, id 5 um), mobil faz metanol-suydu (30:70, v/v). Akış hızı 1 mL/dk idi. ELSD, aşağıdaki koşullar altında çalıştırıldı: Sıcaklık 45 derece, gaz 1,6 L/dak. Dört HSCCC tepe fraksiyonunun yapısal tanımlaması HR-ESI-MS, 1H ve 13C-NMR spektroskopisi ile gerçekleştirilmiştir.

Yapısal Tanımlama

Fraksiyon I: m/z 623.2001 (M−H)−'de gözlemlenen HR-ESI-MS, C29H35O15, 623.1981 için hesaplanmıştır. 1H-NMR (500 MHz, CD30D) 8 ppm: 1.09 (3H, d, J=6 Hz, ramnozun CH3'ü), 2.79 (2H, t, J=7.5 Hz, Ar-CH 2-), 4.37 (1H, d, J=8 Hz, H-1 glikoz), 5.18 (1H, d, J=1 Hz, H{{34} } ramnoz), 6.27 (1H, d, J=15.5 Hz, Ar-CH=CH-), 7.59 (1H, d, J=15.5 Hz, Ar -CH=CH-), 6.5–7.1 (6H, aromatik H).13C-NMR (125 MHz, CD30D) δ ppm: 131.5 (C-1), 117.2 (C{{65} }), 146.2 (C-3), 144.7 (C-4), 116.4 (C-5), 121.3 (C-6), 72.4 (C- ), 36.6 (C- ), 127.7 (Caf-1), 115.3 (Caf-2), 146.9 (Caf-3), 149.8 (Caf-4), 116.6 (Caf{{{ 98}}), 123.2 (Caf-6), 168,3 (Caf- ), 114.8 (Caf- ), 148.1 (Caf- ), 104.3 (G-1), 76.1 (Glc{{116} }), 81.7 (Glc-3), 70.5 (Glc-4), 76.3 (Glc-5), 62.4 (Glc-6), 103.1 (Rha{{131} }), 72.3 (Rha-2), 72.1 (Rha-3), 73.9 (Rha-4), 70.7 (Rha-5), 18.5 (Rha{{146} }). Literatürde [17] verilen verilerle karşılaştırıldığında, fraksiyon I acteoside karşılık geldi.

Fraksiyon II: HR-ESI-MS m/z 623.1987 (M−H)−'de gözlendi, C29H35O15, 623.1981 için hesaplandı. 1H-NMR (500 MHz, CD3OD) δ ppm: 1.25 (3H, d, J=6.5 Hz, ramnozun CH3'ü), 2.78 (2H, t, J=7 Hz, Ar-CH2-), 4.33 (1H, d, J=8 Hz, H-1 glikoz), 5.17 (1H, d, J {{ 33}} Hz, H-1 ramnoz), 6.28 (1H, d, J=15.5 Hz, Ar-CH=CH-), 7.56 (1H, d, J=15.5 Hz, Ar-CH=CH-), 6.5–7.0 (6H, aromatik H). 13C-NMR (125 MHz, CD30D) δ ppm: 131.5 (C-1), 117.2 (C-2), 146.2 (C-3), 144.7 (C-4 ), 116.5 (C-5), 121.3 (C-6), 72.4 (C- ), 36.7 (C- ), 127.8 (Caf-1), 115.2 (Caf{{89) }}), 146.8 (Caf-3), 149.7 (Caf-4), 116.6 (Caf-5), 123.2 (Caf-6), 169.2 (Caf- ), 115.0 (Caf- ), 147.3 (Caf- ), 104.5 (G-1), 75.5 (Glc-2), 84.2 (Glc-3), 70.1 (Glc-4 ), 75.7 (Glc-5), 64.7 (Glc-6), 102.8 (Rha-1), 72.4 (Rha-2), 72.4 (Rha-3 ), 74.1 (Rha-4), 70.5 (Rha-5), 17.9 (Rha-6). 1H-NMR ve 13C-NMR spektral verileri, literatürde [18] bildirildiği gibi izoakteositinkilerle uyumluydu.

Fraksiyon III: m/z 6{{108}}7.2032 (M−H)−'de gözlenen HR-ESI-MS, C29H35O14, 607.2032 için hesaplanmıştır. 1H-NMR (500 MHz, CD30D) 8 ppm: 1.09 (3H, d, J=6 Hz, ramnozun CH3'ü), 2.84 (2H, t, J=7.5 Hz, Ar-CH 2-), 4.37 (1H, d, J=8 Hz, H-1 glikoz), 5.19 (1H, d, J=1.5 Hz, H{{ 35}} ramnoz), 6.27 (1H, d, J=16 Hz, Ar-CH=CH-), 7.59 (1H, d, J=16 Hz, Ar-CH =CH-), 6.6–7.1 (7H, aromatik H). 13C-NMR (125 MHz, CD30D) δ ppm: 130.8 (C-1), 116.2 (C-2), 130.9 (C-3), 156.8 (C-4 ), 130.8 (C-5), 116.2 (C-6), 72.4 (C- ), 36.4 (C- ), 127.8 (Caf-1), 114.8 (Caf{{88 }}), 149.8 (Caf-3), 146.9 (Caf-4), 116.6 (Caf-5), 123.2 (Caf-6), 168,3 (Caf- ), 115.4 (Caf- ), 148.0 (Caf- ), 104.3 (G-1), 76.3 (Glc-2), 81.7 (Glc-3), 70.4 (Glc-4 ), 76.1 (Glc-5), 62.5 (Glc-6), 103.0 (Rha-1), 72.3 (Rha-2), 72.2 (Rha-3 ), 73.9 (Rha-4), 70.7 (Rha-5), 18.4 (Rha-6). Literatüre göre [18], fraksiyon III, syringalide A 3'- -L-rhamnopyranoside'a karşılık geldi.

Fraksiyon IV: m/z 665.21{{20}} (M−H)−'de gözlenen HR-ESI-MS, C31H37O16, 665.2087 için hesaplanmıştır. 1H-NMR (500 MHz, CD30D) 8 ppm: 1.09 (3H, d, J=6.5 Hz, ramnozun CH3'ü), 2.00 (3H, s, OAc), 2.72 (2H, t, J { {25}}.5 Hz, Ar-CH2-), 4.55 (1H, d, J=8 Hz, H-1 glikoz), 4.90 (1H, d, J { {37}} Hz, H-1 ramnoz), 6.29 (1H, d, J=15.5 Hz, Ar-CH=CH-), 7.62 (1H, d, J=15.5 Hz, Ar-CH=CH-), 6.5–7.0 (6H, aromatik H). 13C-NMR (125 MHz, CD30D) δ ppm: 131.9 (C-1), 117.3 (C-2), 146.1 (C-3), 144.7 (C-4 ), 116.4(C-5), 121.4 (C-6), 72.7 (C- ), 36.4 (C- ), 127.7 (Caf-1), 115.4 (Caf{{93) }}), 146.9 (Caf-3), 149.9 (Caf-4), 116.6 (Caf-5), 123.2 (Caf-6), 168.1 (Caf- ), 114.7 (Caf- ), 148.2 (Caf- ), 101.8 (G-1), 75.3 (Glc-2), 80.3 (Glc-3), 70.8 (Glc-4 ), 76.2 (Glc-5), 62.3 (Glc-6), 103.3 (Rha-1), 72.0 (Rha-2), 71.8 (Rha-3 ), 73.7 (Rha-4), 70,8 (Rha-5), 18.5 (Rha-6), 171.5 (C=O), 20.9 (OAC). 1H-NMR ve 13C-NMR spektral verileri, 2'-asetillakteositinkilerle uyumluydu [17].

Sonuçlar

Acteoside, isoacteoside, syringalide A 3'- -L-rhamnopyranoside ve 2'-acetylacteoside'ın hazırlayıcı olarak ayrılması ve saflaştırılması için bir HSCCC yöntemiCistanches Deserticola YC Makurulmuş. Bu çalışma, HSCCC'nin bitki materyallerinden biyoaktif bileşenlerin hazırlayıcı olarak ayrılması ve saflaştırılması için çok güçlü bir teknik olduğunu göstermektedir. Ayrıca bileşikler, yüksek saflıklarla yeterince büyük bir ölçekte izole edilebilir ve daha sonra kromatografi veya biyoaktivite çalışmaları için referans maddeler olarak kullanılabilir. Yöntem, karmaşık doğal ürünlerin hızlı hazırlayıcı izolasyonu için uygulanabilir, ekonomik ve verimli bir tekniktir.

Teşekkür

Bu çalışma, Üniversitedeki Changjiang Bursluları ve Yenilikçi Araştırma Ekibi Programı (PCSIRT), Çin Bilim ve Teknoloji Bakanlığı'ndan Uluslararası İşbirliği Planı Projesi (2008DFB30070) ve Alashan'ın Sol Bayrağı Bilimsel Programı ({{2) tarafından desteklenmiştir. }}).

Referanslar

1. Çin Farmakopesi Komisyonu. Çin Halk Cumhuriyeti Farmakopesi; Halk Medikal Yayınevi: Pekin, Çin, 2010; Cilt 1, s. 126.

2. Jiang, Y.; Tu, PF Cistanche türlerinde kimyasal bileşenlerin analizi. J. Kromatogr. 2009, 1216, 1970–1979.

3. Morikawa, T.; Pan, Y.; Ninomiya, K.; İmura, K.; Matsuda, H.; Yoshikawa, M.; Yuan, D.; Muraoka, çöl bitkisi Cistanche tubulosa'dan hepatoprotektif aktiviteye sahip O. Asillenmiş feniletanoid aminoglikozitler. Bioorg. Med. Kimya 2010, 18, 1882–1890.

4. Chen, H.; Jing, FC; Li, CL; Tu, PF; Zhang, QS; Wang, ZH Echinacoside, hidroksidopamin lezyonlu sıçanlarda monoamin nörotransmitterlerinin striatal hücre dışı seviyelerinin azalmasını önler. J. Etnofarmakol. 2007, 114, 285-289.

5. Muraoka, Ö.; Ninomiya, K.; Morikawa, T.; Wakayama, H.; Matsuda, H.; Yoshikawa, Cistanche tubulosa'nın gövdelerinden M. Hepatoprotektif bileşenler. Yakugaku Zashi 2007, 127, 49-51.

6. Koo, KA; Sung, SH; Park, OH; Kim, SH; Lee, KY; Kim, YC Callicarpa dikotoma kaynaklı feniletanoid glikozitlerin in vitro nöroprotektif aktiviteleri. Bitki Med. 2005, 71, 778–780.

7. Li, M.; Liu, RM; Güneş, AL; Wu, SJ; Liu, NN Büyük Gözenekli Adsorpsiyon Reçinesi ve Yüksek Hızlı Karşı Akım Kromatografisinin Kombinasyonu ile Çin Şifalı Bitki Herba Cirsii'den Rutin ve Acaciin'in Ayrılması ve Saflaştırılması. J. Kromatogr. bilim 2009, 47, 329-332.

8. Yin, H.; Zhang, S.; Luo, XM; Liu, YH Acanthus ilicifolius L.'den iki benzoksazinoid glukozitin yüksek hızlı karşı akım kromatografisi ile hazırlık izolasyonu ve saflaştırılması. J. Kromatogr. 2008, 1205, 177-181.

9. Peng, AH; Li, R.; Hu, J.; Chen, LJ; Zhao, X.; Luo, HD; Evet, HY; Yuan, Y.; Wei, YQ Triperygium wilfordii'den beş diterpenoidin akış hızı gradyanı yüksek hızlı karşı akım kromatografisi ayrımı ve ölçek büyütme. J. Kromatogr. 2008, 1200, 129-135.

10. Xie, J.; Deng, J.; Tan, F.; Su, J. Ekinakozitin Penstemon barbatus (Can.) Roth'dan yüksek hızlı karşı akım kromatografisinin geri dönüştürülmesiyle ayrılması ve saflaştırılması. J. Kromatogr. B2010, 878, 2665-2668.

11. Li, L.; Tsao, R.; Yang, R.; Liu, C.; Genç, JC; Zhu, H. Feniletanoid glikozitlerin izolasyonu ve saflaştırılmasıcistanche çöl çiçeğiyüksek hızlı karşı akım kromatografisi ile. Gıda Kimyası 2008, 108, 702–710.

12. Li, L.; Tsao, R.; Liu, ZQ; Liu, SY; Yang, R.; Genç, JC; Zhu, HH; Deng, ZY; Xie, BENİM; Fu, ZH Yüksek hızlı karşı akım kromatografisi ile Plantago psyllium L.'den ateozit ve izoakteozitin izolasyonu ve saflaştırılması. J. Kromatogr. 2005, 1063, 161–169. Moleküller 2012, 17 8284

13. Lei, L.; Yang, FQ; Zhang, TY; Tu, PF; Wu, LJ; Ito, Y. Acteoside ve 2'-acetyl acteoside'ın Cistanches salsa'dan (CA Mey.) G. Beck'ten yüksek hızlı karşı akım kromatografisi ile hazırlayıcı izolasyonu ve saflaştırılması. J. Kromatogr. 2001, 912, 181–185.

14. Lei, L.; Yang, FQ; Zhang, TY; Tu, PF; Wu, LJ; Chen, FK; Ito, Y. Beagle köpeklerinin dışkı ekstraktlarından feniletanoid glikozitlerin yüksek hızlı ters akım kromatografisi ile hazırlayıcı izolasyonu ve saflaştırılması. J. Liq. kromatogr. ilişki. Teknoloji. 2001, 24, 2187-2195.

15. Gao, SY; Feng, B.; Zhu, RN; anne, JK; Wang, W. Yüksek Hızlı Karşı Akım Kromatografisi ile Rumex japonicus'tan Üç Antrakinonun Hazırlayıcı İzolasyonu. Moleküller 2011, 16, 1201–1210.

16. O, F.; Bai, YH; Wang, J.; Wei, J.; Yu, CY; Li, S.; Yang, WL; Han, CH İzolasyonu ve Oridonin'in Tüm Isodon rubescens Fabrikasından Yüksek Hızlı Karşı Akım Kromatografisi ile Saflaştırılması. Moleküller 2011, 16, 7949-7957.

17. Kobayashi, H.; Oguchi, H.; Takizawa, N.; Miyase, T.; Ueno, A.; Usmangani, K.; Ahmed, M. Cistanche tubulosa (Schrenk) Hook'tan yeni feniletanoid glikozitler. f. I. Kimya. Eczacılık Boğa. 1987, 35, 3309-3314.

18. Yoshizawa, F.; Deyama, T.; Takizawa, N.; Usmangani, K.; Ahmed, M. Cistanche tubulosa (Schrenk) Hook'un bileşenleri. f. II. Yeni bir feniletanoid glikozit ve yeni bir neolignan glikozitin izolasyonu ve yapıları. Kimya Eczacılık Boğa. 1990, 38, 1927–1930.