Norwogonin, PC12 Hücrelerinde Hipoksiye Bağlı Oksidatif Stres ve Apoptozu Azaltır

Daha fazla bilgi için:ali.ma@wecistanche.com

Soyut

Arka plan: Norwogonin, iskelet yapısında üç fenolik hidroksil grubuna sahip doğal bir flavondur ve mükemmelantioksidanaktivite. Bununla birlikte, norwogonin'in nöroprotektif etkisi belirsizliğini koruyor. Burada, PC12 hücrelerinde hipoksinin neden olduğu oksidatif hasara karşı norwogonin koruyucu kapasitesini araştırdık. Yöntemler: Hücre canlılığı ve apoptoz sırasıyla MTT tahlili ve Annexin V-FITC/PI boyaması ile incelendi. Reaktif oksijen türleri (ROS) içeriği, DCFH-DA tahlili kullanılarak ölçüldü. Laktat dehidrojenaz (LDH), malondialdehit (MDA) veantioksidanenzim seviyeleri ticari kitler kullanılarak belirlendi. İlgili genlerin ve proteinlerin ekspresyonu, sırasıyla gerçek zamanlı kantitatif PCR ve Western blotlama ile ölçüldü. Sonuçlar: Norwogonin'in hücre canlılığını artırarak, LDH salınımını azaltarak ve hücre morfolojisindeki değişiklikleri iyileştirerek PC12 hücrelerinde hipoksi kaynaklı hasarı hafiflettiğini bulduk. Norwogonin ayrıcaantioksidanROS'u temizleyerek, MDA üretimini azaltarak, süperoksit dismutaz (SOD), katalaz (CAT) ve glutatyon peroksidaz (GPx) aktivitelerini sürdürerek ve HIF-1 ve VEGF'nin ekspresyon seviyelerini azaltarak. Ek olarak, wogonin kaspaz-3, sitokrom c ve Bax ekspresyon seviyelerini inhibe ederek hücre apoptozisini önlerken, Bcl-2 ekspresyon seviyelerini ve Bcl-2/Bax oranını arttırdı. Sonuçlar: Norwogonin, ROS'u söndürerek PC12 hücrelerinde hipoksiye bağlı hasarı hafifletir,antioksidanenzimler ve mitokondriyal apoptoz yolunun inhibe edilmesi.

Anahtar Kelimeler: Norwogonin,antioksidan aktivite, Hipoksi, Oksidatif stres, Apoptoz

Arka fon

Aerobik organizmalar enerji üretmek için oksijene (O2) ihtiyaç duyarlar. Hipoksi, dokudaki hücresel fonksiyonu sürdürmek için yetersiz O2 temini olarak tanımlanır ve sıklıkla yüksek irtifa [1] gibi bazı fizyolojik durumlarda ve inme [2] gibi birçok patolojik durumda ortaya çıkar. Beyin, yüksek oksijen tüketimi, doymamış yağ asitleri açısından zengin ve düşük olması nedeniyle hipoksiye bağlı yaralanmaya karşı özellikle hassastır.antioksidankapasite [3]. Artan kanıtlar, hipoksinin beyin üzerinde olumsuz etkilere neden olabileceğini göstermiştir [4-6].

Linlin Jing, Rongmin Gao, Jie Zhang, Dongmei Zhang, Jin Shao, Zhengping Jia ve Huiping Ma

Eczacılık Departmanı, PLA'nın 940. Ortak Lojistik Destek Gücü Hastanesi, Lanzhou 730050, Gansu, Çin

Oksidatif stres ve apoptoz, hipoksiye bağlı yaralanmada katkıda bulunan iki faktör olarak kabul edilir [7, 8]. Hipoksiye maruz kalmanın, oksidatif stresi kolaylaştıran hücre içi reaktif oksijen türlerinin (ROS) üretimini arttırdığı bildirilmiştir. Süperoksit anyonu (O2−˙), hidrojen peroksit (H2O2) ve hidroksil radikali (HO•) gibi aşırı ROS, lipidlere, membranlara, proteinlere ve DNA'ya saldırarak yapısal ve fonksiyonel hücresel değişikliklere yol açar ve ardından hücre hasarına neden olur [ 9].

Antioksidan için Cistanches için tıklayın

Aynı zamanda, aşırı üretilen ROS, mitokondriyal geçirgenlik geçiş gözeneklerinin (mPTP) [10] açılmasını ve pro-apoptozis proteinlerinin mitokondriyal membranların depolarizasyonunu ve sitokrom c salınımlarını indükleyen dış mitokondriyal membrana aktarılmasını kolaylaştırır [11]. Bu değişiklikler nihayetinde mitokondriyal bağımlı apoptoza neden olur [12]. Yani inanılır kiantioksidanlarAşırı ROS'u inhibe etme veya ortadan kaldırma yeteneği ile koruyucu etkilerini, oksidatif stresi ve hipoksi tarafından indüklenen apoptozu azaltarak gösterebilirler. Pek çok araştırma bunu kanıtladıantioksidanC vitamini [13], izoflavon [8] ve nitroksit radikalleri [14] gibi takviyeler, in vitro ve in vivo hipoksi kaynaklı hasarı sınırlayabilir. Flavonoidler, her yerde bulunan bitki sekonder metabolitlerinin geniş ve çeşitli bir sınıfıdır. Her zaman mükemmel bir doğal olarak kabul edilirler.antioksidanserbest radikalleri temizleme ve lipid peroksidasyonunu inhibe etme yeteneği ile.

Şu anda, insan sağlığı üzerindeki yararlı etkilerinden dolayı bu bileşik sınıfına giderek daha fazla ilgi gösterilmiştir. Flavonoidlerin, anti-inflamatuar, antinosiseptif ve nöroprotektif aktivite gibi çok çeşitli farmakolojik etkilere sahip olduğu gösterilmiştir ve bunların tümü antioksidan aktivitelerine atfedilebilir [15]. Birçok çalışma, flavonoidlerin hipoksi kaynaklı başarısızlık üzerinde mükemmel koruyucu etkiler sergilediğini göstermiştir. Örneğin rutin, hipoksinin neden olduğu retina ganglion hücre ölümüne karşı güçlü bir nöroprotektif etkiye sahiptir [16]. Yakın tarihli bir çalışma, rutinin, H9c2 hücrelerinde oksidatif stres ve apoptozu inhibe ederek kobalt klorür kaynaklı hipoksi hasarını hafifletebileceğini de göstermektedir [17]. Ayrıca, Liu ve arkadaşları, nobiletinin (3′,4′,5,6, 7,8-hekzametoksi flavon) H9c2 hücresinde Akt/GSK-3 yolunu aktive ederek miyokardiyal I/R hasarını azalttığını öne sürmektedir. [18]. Ek olarak, akasetin, sıçan kardiyomiyositlerini ve H9C2 kardiyomiyoblastlarını, Nrf2 sinyal yolunun AMPK aracılı aktivasyonu yoluyla hipoksi/reoksijenasyon kaynaklı hasara karşı koruyabilir [19].

Norwogonin (5,7,8-trihidroksi flavon, Şekil 1), grip ve kanseri tedavi etmek için kullanılan geleneksel bir Çin bitkisi olan Scutellaria baicalensis Georgi'nin (Çince "Huang Qin") kökünden ayrılmış farmakolojik olarak aktif bir flavondur. [20, 21]. Bununla birlikte, norwogonin'in doğal bitkilerdeki düşük seviyeleri nedeniyle biyolojik aktiviteleri hakkında sınırlı sayıda çalışma bildirilmiştir. Bu sorunu çözmek için norwogonin'in çeşitli sentez yöntemleri bildirilmiştir [22, 23].

Önceki çalışmamız ayrıca chrysin'den norwogonin elde etmek için dört adımda basit bir yöntem oluşturmuştur [24]. Bu araştırmalar, norwogonin'in biyolojik aktivitelerinin daha fazla değerlendirilmesini olumlu yönde etkilemiştir. Çalışmalar, norwogonin'in antioksidan [25], antikanser [26, 27], antiviral [28] ve antimikrobiyal aktivitelerin [29] yanı sıra siyanürle uyarılan ROS üretimini [30] engellediğini ortaya koymuştur. Bununla birlikte, norwogonin'in hipoksiye bağlı yaralanmaya karşı koruyucu kapasiteye sahip olup olmadığı bilinmemektedir. Bu çalışmanın amacı, norwogonin'in PC12 hücrelerinde hipoksi ile indüklenen oksidatif stres ve apoptoza karşı koruyucu etkilerini araştırmaktır.

yöntemler

Malzemeler ve reaktifler

Norwogonin (saflık yüzde 98'den büyük veya eşit) daha önce bildirdiğimiz yöntemimize göre sentezlendi [24]. Rutin (saflık yüzde 96'dan büyük veya eşit) Ci Yuan Biotechnology Co., Ltd.'den (Xian, Shannxi, Çin) satın alındı. Norwogonin ve rutin steril dimetil sülfoksit (DMSO) içinde çözüldü, -20 derecede saklandı ve kullanımdan hemen önce hücre kültürü ortamında seyreltildi. Dulbecco'nun modifiye edilmiş Eagle ortamı (DMEM), fetal sığır serumu (FBS), streptomisin ve penisilin Solarbio co., Ltd.'den (Pekin, Çin) satın alındı.

Malondialdehit (MDA), laktat dehidrojenaz (LDH), süperoksit dismutaz (SOD), katalaz (CAT) ve glutatyon peroksidaz (GPx) kitleri Nanjing Jiancheng Biyomühendislik Enstitüsü'nden (Jiangsu, Çin) elde edildi. 2′,7′-diklorür-hidrofloresein diasetat (DCFH-DA) ve (3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5- difeniltetrazolyum bromür) tetrazolyum (MTT), Sigma-Aldrich Co'dan (St. Louis, MO, ABD) elde edildi. Hipoksi ile indüklenebilir faktör-1 (HIF-1), vasküler endotelyal büyüme faktörü (VEGF), B hücreli lenfoma-2 (Bcl-2), Bcl{{17 için birincil antikorlar }} ilişkili X proteini (Bax), Kaspaz-3, Sitokrom C ve -aktin, Abcam'dan (Cambridge, İngiltere) satın alınmıştır. İkincil antikorlar ZsBio Company'den (Pekin, Çin) elde edildi.

Beyotime Biyoteknoloji Enstitüsü'nden (Jiangsu, Çin) bir apoptoz analiz kiti elde edildi. Tüm kimyasallar ve çözücüler analitik kalitedeydi ve Çin'deki ticari bir tedarikçiden temin edildi. Hücre kültürü PC12 hücreleri, Çin Bilimler Akademisi Hücre Bankasından (TCR 9, Şanghay, Çin) satın alındı ​​ve yüzde 10 (v/v) FBS, 100 U/mL penisilin ve 100 U/mL streptomisin ile DMEM'de tutuldu. yüzde 5 CO2 içeren nemlendirilmiş bir kuluçka makinesinde 37 derecede. Norwogonin sitotoksisitesini değerlendirmek için, PC12 hücreleri (pasaj 4 ~ 6) farklı konsantrasyonlarda (10− 8 , 10− 7, 10− 6, 10− 5, 10− 4 mol/L) nor wogonin ile önceden inkübe edildi. 1 saat ve daha sonra 24 saat kültüre edildi. Hipoksiye maruz kalma Hücre hipoksi yaralanma modelini indüklemek için PC12 hücreleri, nemlendirilmiş bir odada 24 saat boyunca 37 derecede bir hipoksi ortamına (yüzde O2, yüzde 5 CO2 ve yüzde 94 N2) tabi tutuldu. Normoksik kontrol hücreleri, 24 saat boyunca yüzde 5'lik bir CO2 inkübatöründe 37 derecede kültürlendi.

Norwogonin'in hipoksiye bağlı yaralanmaya karşı koruyucu etkisini değerlendirmek için, PC12 hücreleri farklı konsantrasyonlarda (10− 8, 10− 7, 10− 6, 10− 5 mol/) önceden inkübe edildi. L) norwogonin hipoksi tedavisinden 1 saat önce. Hücre canlılığı Hücre canlılığı, daha önce tarif edildiği gibi MTT tahlili ile ölçülmüştür [31]. Kısaca, PC12 hücreleri (1 x 105 hücre/ mL) 96 oyuklu kültür plakalarına ekildi. Daha sonra kuyulara farklı konsantrasyonlarda norwogonin eklendi. Kontrol oyuklarına eşit hacimde DMSO eklendi. Hücre kültürü ortamındaki DMSO'nun nihai konsantrasyonu yüzde 0.1'dir. Normoksik veya hipoksi koşullarında inkübasyondan sonra her kuyucuğa 10 μL MTT (5.0 mg/mL) eklendi, ardından 37 derecede 4 saat inkübasyon yapıldı. Daha sonra MTT'li süpernatan uzaklaştırıldı ve formazan ürünü 100 µL DMSO içinde çözüldü. Absorbans, bir SpectraMax i3 mikroplaka okuyucusunda (Molecular Devices, Sunnyvale, CA, ABD) 570 nm'de ölçüldü. Sonuçlar, kontrol grubunun nispi yüzdesi olarak ifade edildi. Cam lamellere ekilen hematoksilen ve eozin (HE) boyama PC12 hücreleri, yukarıda tarif edildiği gibi aynı şekilde norwogonin ile muamele edilmeden önce 24 saat inkübe edildi.

Ortam çıkarıldı ve cam lameller, soğuk PBS ile yıkandı, ardından oda sıcaklığında 10 dakika metanol ile sabitlendi ve daha sonra 5 dakika boyunca üç kez soğuk PBS ile yıkandı. Son olarak hücreler HE boyama protokolüne göre boyandı [32]. Hücre analizleri, hücre morfolojik değişikliklerini doğrulamak için bir OLYMPUS IX73 mikroskobu (100x) kullanılarak yapıldı. Mikroskop ile bağlantılı DXM 1200 C dijital kamera (Nikon) kullanılarak dijital görüntüler elde edildi. ROS içeriği PC12 hücrelerinde hücre içi ROS seviyesi, DCFH-DA tahlili [33] kullanılarak belirlendi. Kısaca, PC12 hücreleri (1 x 105 hücre/mL), 6-kuyulu plakalara ekildi. Hipoksi tedavisinden sonra PC12 hücreleri PBS ile yıkandı ve ardından 10 µM DCFH-DA içeren kültür ortamında karanlıkta 37 derecede 30 dakika inkübe edildi. Hücreler Olympus ters çevrilmiş floresan mikroskobu (Tokyo, Japonya) ile gözlemlendi ve 488 nm uyarma dalga boyuna ve 525 nm emisyon dalga boyuna sahip bir Bec ton Dickinson FACScan akış sitometresi (BD Biosciences, CA, ABD) ile analiz edildi. ROS seviyesi, kontrolün nispi yüzdesi olarak ifade edildi. LDH sızıntısı, MDA içeriği ve antioksidan enzim aktivitesi PC12 hücreleri (1 x 105 hücre/mL), 90 mm'lik bir tabağa ekildi. Yukarıda tarif edildiği gibi hipoksi tedavisinden sonra, her tabaktan 50 uL kültür süpernatanı toplandı ve ortamdaki LDH aktivitesi, ticari deney kitleri (Jiancheng Biyoteknoloji Enstitüsü, Nanjing, Çin) kullanılarak saptandı ve U/mL olarak ifade edildi. PC12 hücreleri, soğuk PBS ile iki kez yıkandıktan sonra hasat edildi ve homojenleştirildi. Toplam protein konsantrasyonu, BCA protein tahlil kiti ile ölçülmüştür. MDA içeriği ve antioksidan enzim aktivitesi, ticari deney kitleri (Jiancheng Biyoteknoloji Enstitüsü, Nanjing, Çin) kullanılarak belirlendi.

MDA içeriği nmol/mg protein olarak sunuldu. SOD, CAT ve GPx aktiviteleri U/mg protein olarak sunuldu. Hücre apoptozu (Annexin-V/PI boyaması) Hipoksi tedavisinden sonra PC12 hücreleri toplandı, iki kez soğuk PBS ile yıkandı ve sonra bağlama tamponu ile süspanse edildi. Hücreler, üreticinin (Beyotime, Şanghay, Çin) protokolü izlenerek Annexin V-FITC ve PI solüsyonu ile işlendi. Veri toplama, Becton Dickinson FACScan akış sitometresi (BD Biosciences, CA, ABD) kullanılarak yapıldı. Nicel gerçek zamanlı PCR analizi PC12 hücrelerinin toplam RNA'sı Trizol reaktifi (Takara, Dalian, Çin) kullanılarak ekstre edildi ve PrimeScript TM RT reaktif Kiti (AK4301,

Takara, Dalian, Çin). HIF-1 , VEGF, Bcl-2, Bax, kaspaz-3, sitokrom C ve gliseraldehit-3-fosfat dehidrojenaz (GAPDH) genini kodlayan cDNA, kantitatif real- 7300 gerçek zamanlı algılama Sistemi (Applied Biosystems, CA, ABD) kullanan zamanlı PCR. Kullanılan primerler Tablo 1'de gösterilmiştir. PCR döngü koşulları, 30 saniye boyunca 95 derece, ardından 5 saniye boyunca 95 derecelik 40 döngü ve 31 saniye için 60 derece idi. mRNA seviyeleri 2-ΔΔCt yöntemi kullanılarak hesaplandı ve referans gen olan GAPDH'ye normalleştirildi. Western blot PC12 hücreleri toplandı ve RIPA ajanlarında homojenleştirildi. Toplam protein konsantrasyonu, BCA protein tahlil kiti kullanılarak ölçülmüştür. 30 ug numune yüzde 12 SDS-PAGE elektroforezinde çözüldü ve daha sonra poliviniliden florür (PVDF) membranlarına (Millipore, Billerica, MA, ABD) aktarıldı.

Zarlar, oda sıcaklığında 1 saat boyunca TBST tamponu içinde yüzde 5 yağsız kuru süt ile bloke edildi ve birincil antikorlarla inkübe edildi: anti-HIF-1 (1:300, ab179483, Abcam, UK), anti-VEGF (1:1000, ab46154, Abcam, UK), anti-Bcl-2 (1:1000, ab59348, Abcam, UK), anti-Bax (1:500, ab32503, Abcam, UK), anti kaspaz-3 (1:300, ab44976, Abcam, UK), anti sitokrom C (1:1000, ab13575, Abcam, UK) ve anti- -aktin (1:2000, ab8227) , Abcam, UK) gece 4 derecede. Daha sonra membranlar yıkandı ve sekonder antikorlar (1:2000, ZsBio, Beijing, China;) ile oda sıcaklığında 1 saat inkübe edildi. İmmünoreaktif bantlar, geliştirilmiş kemilüminesans (ECL) reaktifleri kullanılarak görselleştirildi. Bantların nispi yoğunlukları -aktin dahili kontrolüne normalleştirildi ve Image-Pro Plus 6.0 (Media Cybernetics, Inc., Bethesda, MD, ABD) kullanılarak analiz edildi.

istatistiksel analiz

Sonuçlar, en az üç bağımsız deneyden elde edilen ortalama ± SD olarak ifade edildi. Gruplar arasındaki fark, tek yönlü varyans analizi (ANOVA) ve ardından Student-Newman-Keuls post hoc testi kullanılarak analiz edildi. < 0.05="" olan="" bir="" p="" değeri="" istatistiksel="" olarak="" anlamlı="" kabul="">

Sonuçlar

Norwogonin koruyucu PC12 hücreleri, hipoksiye bağlı yaralanmaya karşı

İlk olarak norwogonin'in proliferatif aktivitesini engellemek için normal PC12 hücreleri üzerindeki sitotoksisitesi bir MTT tahlili kullanılarak belirlendi. Şekil 2a'da görüldüğü gibi, 1 × 10− 8 -1 × 10− 5 mol/L (P > 0.05) konsantrasyonlarında norwogonin ile tedaviyi takiben hücresel proliferasyon önemli ölçüde değişmedi. ). Bununla birlikte, norwogonin konsantrasyonu 1 x 10− 4 mol/L'ye yükseltildiğinde hücre canlılığı önemli ölçüde azaldı (P < 0.05).="" sonuçlar,="" norwogonin'in="" 1="" ×="" 10−="" 8="" -1="" ×="" 10−="" 5="" mol/l="" konsantrasyonlarında="" pc12="" hücreleri="" üzerinde="" toksisite="" veya="" proliferatif="" aktivite="" sergilemediğini="">

Daha sonra norwogonin'in hipoksiye bağlı PC12 hücre hasarına karşı koruyucu etkisini inceledik. Şekil 2b'de gösterildiği gibi, kontrol grubuyla karşılaştırıldığında, hipoksi grubundaki hücre canlılığı yüzde 58.71'e düşmüştür (P < 0.01).="" hipoksi="" tedavisi="" ile="" karşılaştırıldığında,="" 1="" ×="" 10−="" 8="" ,="" 1="" ×="" 10−="" 7="" ve="" 1="" ×="" 10−="" 6="" mol/l="" norwogonin="" doza="" bağımlı="" korumalı="" pc12="" ile="" ön="" işleme="" tabi="" tutulmuştur.="" hücre="" canlılığını="" sırasıyla="" yüzde="" 58.71'den="" 62.79'a="" (p="">< 0.05),="" yüzde="" 66.68'e="" (p="">< 0.01)="" ve="" yüzde="" 69.88'e="" (p="">< 0.01)="" geri="" kazandıran="" hipoksi="" kaynaklı="" yaralanmaya="" karşı="" hücreler.="" 1="" ×="" 10−="" 6="" mol/l="" rutin="" ile="" ön="" tedavi="" de="" koruyucu="" bir="" etki="" göstererek="" hücre="" canlılığını="" hipoksi="" tedavisine="" kıyasla="" yüzde="" 63,78'e="" önemli="" ölçüde="" artırdı.="" 1="" x="" 10−="" 5="" mol/l="" norwogonin="" ile="" ön="" işleme="" tabi="" tutulan="" canlılık,="" yüzde="" 63.43'e="" düşürüldü,="" bu="" da="" hipoksi="" grubundan="" önemli="" ölçüde="" daha="" yüksektir="" (p="">< 0.05).="" bu="" sonuçlar,="" norwogonin'in="" 1="" ×="" 10−="" 8="" -1="" ×="" 10−="" 5="" mol/l="" konsantrasyonlarında="" önemli="" sitoproteksiyon="" gösterdiğini="" ve="" en="" etkili="" konsantrasyonun="" 1="" ×="" 10−="" 6="" mol/l="" olduğunu="" göstermiştir.="" daha="" sonra="" bu="" doz,="" sonraki="" deneylerde="" optimal="" doz="" olarak="">

Norwogonin'in koruyucu kapasitesi de morfolojik değişikliklerle doğrulandı. Şekil 2c'de gösterildiği gibi, hipoksi tedavisi olmayan PC12 hücreleri, düzenli şekiller (iğne biçimli), tek tip boyutlarla iyi büyüdü. Hipoksiye maruz kaldıktan sonra, PC12 hücreleri büzülme, yuvarlak şekil, soyulma ve hücre yoğunluğunda azalma sergiledi. Hipoksiye maruz kalmadan önce norwogonin veya rutin ile ön işleme tabi tutulan hücreler daha iyi büyüdü, deskuamasyon hücrelerinin sayısı azaldı ve hücre şekli normale döndü. Ayrıca, norwogonin'in koruyucu yeteneği, hücre zarı bütünlüğünün kaybı ile ilişkili olan LDH sızıntısı ile doğrulandı. Şekil 2d'de gösterildiği gibi, kültür ortamındaki LDH aktivitesi, hipoksiye maruz kalmanın ardından belirgin şekilde arttı (P <>

Norwogonin veya rutin ile ön tedavi, LDH sızıntısını önemli ölçüde azalttı, bu da norwogonin ve rutinin hücre zarı bütünlüğünü restore ettiğini gösterdi. Norwogonin, PC12 hücrelerinde hipoksi ile indüklenen oksidan stresi inhibe eder ROS ve MDA, hipoksi tarafından indüklenen hücresel oksidan stresin iki önemli göstergesidir. Şekil 3a ve b'de gösterildiği gibi, hipoksiye maruz kalmayı takiben PC12 hücrelerinde önemli ölçüde artan ROS ve MDA içeriği gözlemlendi. Norwogonin veya rutin ön işlemi, ROS ve MDA üretimini önemli ölçüde inhibe etti.

SOD, CAT ve GPx gibi antioksidan enzimler, hücrelerde oksidatif strese karşı ana savunma sistemi olarak kabul edilir. Şekil 3c-e'de gösterildiği gibi, hipoksiye maruz kalma, PC12 hücrelerinde SOD, CAT ve GPx aktivitelerini önemli ölçüde inhibe etti. Norwogonin veya rutin ile tedavi bu değişiklikleri tersine çevirdi ve antioksidan enzimlerin aktivitelerini eski haline getirdi. Tüm bu sonuçlar, norwogonin'in PC12 hücrelerini hipoksi tarafından indüklenen oksidatif strese karşı koruduğunu gösterdi.