Allorooming ile Bağışıklık Yetersizliğinin Üstesinden Gelmek

Basit Özet:

Yakından ilişkili iki termit türünün, hepsi aynı yerden toplanan iki patojenik mantar türüne karşı sosyal veya bireysel bağışıklık açısından farklılık gösterip göstermediğini araştırdık. Sonuçlarımız, karşılıklı bakımın (allogrooming), nispeten zayıf bireysel bağışıklık savunmasını telafi edebilecek ölçüde ölümcül enfeksiyonları sınırlamada oldukça etkili olduğunu göstermektedir. Patojenlerle karşılaştıktan sonra termitler, sosyal mesafeyi korumak ve bulaşıcı hastalıkların yayılmasını sınırlamak için alternatif bir strateji kullanıyor ve bunun yerine birbirlerini temizlemek için bir araya geliyorlar. Bu davranışsal tepkinin yoğunluğundaki değişiklik, tehdit seviyesine yönelik incelikli bir tepkiyi gösterir.

cistanche takviyesi faydaları-bağışıklığı artırır

Soyut:

Pek çok sosyal hayvanda parazitlere rutin olarak maruz kalmaktan korunmak için tüm odayı ayırmanın gerekli olduğu görülmektedir. Sosyal böceklerde, bulaşıcı bir döngüyü başlatmadan önce patojenik propagüllerin kütikülden uzaklaştırılmasının kritik olduğu görülmektedir. Yeraltı termitleri için bu, toprakta yaygın olarak karşılaşılan, hızlı bir şekilde çimlenip kütikülaya nüfuz edebilen Metarhizium conidia gibi mantar sporlarını içerir. Yerel olarak karşılaşılan iki Metarhizium türünün neden olduğu ölümcül enfeksiyonlardan korunmak için birbiriyle yakından ilişkili iki yeraltı termitinde sosyal ve doğuştan gelen bağışıklığa güvenme konusunda bir fark olup olmadığını araştırdık. Sonuçlarımız, bir termit türünde nispeten zayıf olan doğuştan gelen bağışıklığın, daha sürekli bir dağılımla telafi edildiğini göstermektedir. Bu, kütikülün daha rutin kontaminasyonunu yansıtan konidi konsantrasyonlarının yanı sıra ağ bağlantılı bir acil durum müdahalesini ortaya çıkaran ağır kütiküler kontaminasyonu yansıtan gelişmiş allogrooming'i içerir.

Anahtar Kelimeler:

sosyal bağışıklık; doğuştan bağışıklık; entomopatojenler; alarm davranışı; son nokta

cistanche tubulosa-bağışıklık sistemini iyileştirir

Cistanche Enhance Immunity ürünlerini görüntülemek için buraya tıklayın

【Daha fazlasını isteyin】 E-posta:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

1. Giriş

Sosyal savunma mekanizmaları, sosyalliğin yayılmasını kolaylaştırmasına rağmen, bulaşıcı hastalıklara yatkınlığı ortadan kaldırmada oldukça etkili olabilir [1,2]. Termitler ve karıncalarda, bağışıklık savunmasının etkili sosyal mekanizmalarının evrimi, bireysel doğuştan gelen bağışıklık mekanizmaları üzerindeki seçici baskıyı hafifletmiş gibi görünmektedir [3-6]. Patojenlerle karşılaşıldıktan sonra sosyal böceklerdeki hastalık tehdidi, enfeksiyona karşı fiziksel engelleri de içeren doğuştan gelen ön savunmaların etkinliğine bağlı olacaktır. Birçok mantar patojeni, böceğin kütikülüne doğrudan nüfuz edebilen aseksüel sporlar (conidia) üretir. Allogrooming ve salgılanan antifungaller de dahil olmak üzere kütikülün korunmasına yardımcı olan sosyal bağışıklık savunmalarının, Metarhizium türlerine karşı savunma için termitlerde özellikle önemli olduğu görülmektedir [7-9]. Metarhizium conidia, birçok termitin yiyecek ararken içinden geçtiği ve sürekli bir enfeksiyon tehdidini sürdüren konsantrasyonlara ulaştığı toprakta her yerde bulunur [10]. Reticulitermes cinsinin türleri gibi yiyecek arayan termitler, kolonilerinin menzilini genişletmek ve genellikle toprak yüzeyinde bulunan odun kaynakları olan birden fazla beslenme alanına erişmek için toprakta hareket eder [11]. Kolonilerinin yer altı ağları onlarca metreye kadar uzanabilir, yüz binin üzerinde bireyi barındırabilir ve hektar başına yüzün üzerinde koloni yoğunluğuna ulaşabilir [12]. Tek bir tahta parçasıyla sınırlı kolonilere sahip bir atadan evrimleştiler [13,14]. Bu geçiş, avcılarla, patojenlerle ve rakiplerle daha fazla karşılaşmayla sonuçlanacak ve genellikle doğrudan üremeden vazgeçen, kendini adamış gerçek bir işçi sınıfının evrimiyle aynı zamana denk gelecekti. İyileştirilmiş hijyen, bu geçiş ve ardından gelen radyasyon ve ahşabın çürümesine katkısı mikrobiyal ayrışmayı aşabilen [15,16] ve sıcaklıklar arttıkça küresel olarak hızla genişlemeye hazır görünen termitlerin mevcut ekolojik başarısı ve mevcut ekolojik başarısı için kritik öneme sahip olabilir [17] . Toplayıcılığa geçiş sırasında, doğuştan gelen bağışıklık genleri üzerindeki seçici baskının gevşemesi, salgılanan antifungal proteinleri üreten iki gen üzerindeki yoğunlaşmasıyla aynı zamana denk geldi [6]. Bu proteinler allogrooming ile mantar konidialarının uzaklaştırılması için gerekli gibi görünmektedir. Geçmişte bireysel doğuştan gelen ve sosyal savunma mekanizmalarının bileşenleri üzerindeki zıt seçici baskı, termitlerin mantar hastalıklarından korunmak için bireysel doğuştan gelen ve sosyal bağışıklığa güvenmeleri arasında uyarlanabilir bir değiş tokuşun devam ettiğini göstermektedir. Bu, doğuştan gelen bağışıklık gen ekspresyonunun, Metarhizium conidia'ya maruz kalan Reticulitermes çalışanlarına göre gruplarda daha düşük olduğu gözlemiyle desteklenmektedir [18]. Allorooming, iç bağışıklık sistemlerini etkinleştirme ihtiyacını azaltır. Bu çalışmada, birbiriyle doğal olarak karşılaşan iki yerel Metarhizium türüne karşı iki yeraltı termit türünün sosyal ve doğuştan bağışıklıktaki farklılıkları araştırıldı. Metarhizium türleri, termitlerin toplandığı kütüklerin altındaki veya yanındaki topraktan izole edildi. İki termit türü, Reticulitermes virginicus ve Reticulitermes flavipes, Maryland'deki aynı yerden toplanmıştır. Her ne kadar agonistik gibi görünseler de sıklıkla yan yana ve hatta ara sıra aynı kütükte yiyecek ararken bulunurlar. İşçiler arasındaki türler arası saldırganlık, Petri kutusu agonizm analizlerinde sıklıkla ölümcül yaralarla sonuçlanır [19]. R. virginicus işçilerinin kütiküler yıkamalarının antifungal aktivitesinin, Metarhizium conidia'yı inaktive etmede R. flavipes işçilerinin yıkamalarından daha etkili olduğu daha önce gösterilmiştir [20]. Bu, bu iki termitin yakından ilişkili olmasına ve aynı patojenlerle karşılaşmasına rağmen, bireysel doğuştan gelen veya sosyal bağışıklığa olan bağımlılıkları açısından farklı olabileceklerini göstermektedir. Sosyal ve doğuştan bağışıklığa güvenme ve bütünleşme arasında bir fark olup olmadığını ve ikisi arasında potansiyel bir değiş-tokuş olup olmadığını araştırmak için karşılaştırmalı bir yaklaşım kullandık. Artan sosyal bağışıklık, salgılanan antifungallerin potansiyelini içerebilen, daha az etkili doğuştan gelen bağışıklık mekanizmalarıyla ilişkili olabilir veya bunun tersi de geçerlidir. Daha zayıf bireysel bağışıklık, daha etkili sosyal bağışıklıkla telafi edilebilir. On iki, çift veya tekli gruplar halinde geç dönem termit işçilerinin hayatta kalma durumları, Metarhizium robertsii veya Metarhizium brunneum'dan gelen mantarlarla tehdit edildikten sonra araştırıldı. 12 işçiden oluşan gruplar kısa süreliğine yüksek dozda mantara maruz bırakıldı. Bu potansiyel olarak ölümcül konsantrasyon, termitler sporlu bir kadavrayla karşılaştığında gözlemlenene benzer davranışsal tepkilere neden olur, bazı durumlarda hızlı uzunlamasına salınım hareketleriyle (LOM'ler) sonuçlanan bir alarm yanıtında önemli bir artışa yol açar [21-23]. Termitlerin farklı suşların ve Metarhizium türlerinin conidia'larına maruz kalmasından sonraki ilk 12 dakikadaki LOM'lerin sıklığı, allogrooming nöbetlerinin sıklığı ile pozitif olarak ilişkilidir. Ölçülmesi allogrooming'e göre daha kolay olan LOM'ler bu nedenle allogrooming seviyelerinin dolaylı bir ölçümü olarak kullanılabilir. Mantarın tespiti, termitlerin yüzeyleri conidia ile kirlenene kadar gecikmiş gibi görünmektedir; bu, ağız parçalarıyla ilişkili tanıma reseptörlerinin, yüksek alarmın ve allogroomingin başlangıcı için kritik olduğunu göstermektedir. Çiftler ve tekler, sporlanan kadavralarla doğrudan karşılaşmanın aksine, termitlerin toprakta galeriler inşa ederken karşılaştıkları maruz kalma seviyelerini yansıtması daha muhtemel olan düşük dozda mantara maruz bırakıldı. Tek termitlerin aksine termit çiftleri, 10 gün boyunca bu dozda ölümcül enfeksiyonlara karşı neredeyse tamamen dirençlidir. Bu düşük dozda sosyal ve doğuştan gelen bağışıklığı parçalamak için termit çiftleri, mantar konidiaları ile mücadeleden kısa bir süre sonra farklı zaman noktalarında ayrıldı ve bu çiftlerin hayatta kalma oranı, mantar mücadelesinden sonra sosyal etkileşim fırsatı olmayan tekillerle karşılaştırıldı. Termit çiftlerinin ayrılma zaman noktalarından önce allorooming ve LOM'ler gözlemlendi. Ek olarak, bütün termitlerin ham ekstraktlarının antifungal aktivitesi, iki mantar türüne yanıt olarak iki termit türü arasındaki doğuştan gelen bağışıklıktaki farklılıkları daha fazla değerlendirmek için test edildi.

Cistanche tubulosa'nın faydaları-Bağışıklık sistemini güçlendirmek

2. Yöntemler

2.1. Organizmaları Çalışmak

R. flavipes ve R. virginicus termitleri ile M. brunneum ve M. Roberts mantarları, Maryland'in Baltimore İlçesindeki (Pleasant Hills ve Monkton) ikincil büyüyen yaprak döken ormanlardan toplandı. Termit türleri, tür içi ve türler arası agonizm analizleri [19] ve mitokondriyal rRNA dizileri [4] kullanılarak tanımlandı. Metarhizium türleri, termit toplama alanlarının yakınındaki toprak örneklerinden izole edildi (<30 cm) using a baiting technique with Tenebrio molitor larvae [24]. The conidia and mycelia of two clonal lines of the species were used for DNA purification with a QIAGEN DNeasy Blood and Tissue kit. The 50 regions of translation elongation factor 1-alpha were PCR-amplified using PCR primers EF1T and EF2T [25]. These regions were Sanger-sequenced (Psomagen, Rockville, MD) for species identification. Foraging groups of R. flavipes and R. virginicus (>1000) ve beslendikleri odunlar toplanıp plastik kaplarda karanlık, nemli koşullarda ve 25 ◦C'de saklandı. Aynı türe ait termitler, en az 60 m mesafeyle ayrılmış alanlardan toplanmıştır; bu genellikle koleksiyonların farklı kolonilerden olmasını sağlamak için yeterlidir [12]. Bu ayrı koleksiyonlara aşağıda koloniler adı verilmektedir. Termitler, 12 kişilik gruplarla yapılan deneyler ve termit ham ekstraktlarıyla yapılan in vitro deneyler için 2018 ve 2019 yazında, çift ve tekli deneyler için ise 2021 ve 2022 yıllarında toplandı. Termitler toplandıktan sonraki 4 ay içinde ilgili deneylerinde kullanıldı. İşçiler ahşap parçalardan nazikçe çıkarıldı ve deneylerimizde kullanılmadan önce, nemlendirilmiş filtre kağıdı (Whatman 1) ile kaplı 12 55 mm çaplı Petri kaplarından oluşan gruplar halinde 24 saat boyunca ortam ışığında tutuldu. Bu onların mantarlara maruz kalmadan önce ışığa alışmalarını ve kütiküler yüzeylerini parçacık döküntülerinden temizlemelerini sağladı. Yuva arkadaşlarını temizlemedikleri, koloninin %1-2'sini temsil ettikleri ve yiyecek arayan gruplarda tutarlı bir şekilde bulunmadıkları için askerleri dahil etmedik.

2.2. On İki Kişilik Gruplar için Hayatta Kalma ve Alarm Müdahalesi

12 R. flavipes veya R. virginicus işçisinden oluşan gruplar, yüksek dozda 10 6 conidia mL−1 of 0.05% Tween 80 (MilliporeSigma)'ye maruz bırakıldı , Burlington, MA, ABD) veya kontroller için %0,05 Tween 80. Süspansiyonları hazırlarken konidi yığınlarının parçalanmasına yardımcı olmak için Tween 80 dahil edildi. Bu tedavilerden bir gün önce, 12 termitin tamamı, bireysel olarak tanımlanabilmeleri için karınlarının sırt tarafında küçük bir nokta renkli emaye boya ile işaretlendi. Allorooming, birkaç kişinin boyasını kaldırdı, ancak bu bireyler, ölüm anında hayatta kalanlar incelenerek ve işçilerdeki karın bölgesindeki koyu renk derecesi gibi doğal bireysel farklılıklar yoluyla bireysel olarak tanımlanabildi. Tehdit edilen 12 termit ve kontrolün her bir kopyası için kullanılan termitler, farklı kolonilerdendi. Hem R. flavipes hem de R. virginicus (n=480 işçi) için beş koloni kullanıldı. M. Roberts kolonileri ile yapılan deneyler, hayatta kalma konusundaki tutarlılığı test etmek için üç ay sonra tekrarlandı. Toplamda 12 veya 11 termitin (n=709) 60 kopyası vardı. 11 kopyada bir termit, mantarlara maruz kalmadan önce öldü; bunun boya işaretlemesi sırasındaki muameleden kaynaklandığı anlaşıldı. Termitler, M. Roberts veya M. brunneum'un klonal kültüründen hazırlanan conidia'ya maruz bırakıldı. İşçiler, küçük bir plastik huni ile 500 uL konidi dilüsyonları veya kontroller için %0,05 Tween 80 içeren 1,5 mL tüplere eklendi ve tam daldırmayı sağlamak için 10 saniye boyunca hafifçe çalkalandı. İşçiler daha sonra fazla sıvıyı emmek için filtre kağıdı üzerine yerleştirildi, nemlendirilmiş filtre kağıdıyla (Whatman 1) kaplı 55 mm çapındaki Petri kaplarına aktarıldı ve 12 dakika boyunca video kaydedildi. Ölüm oranı iki hafta boyunca günlük olarak izlendi. Ölü bireyler çıkarıldı, %70 etanol ile yüzey sterilize edildi ve Metarhizium enfeksiyonunun doğrulanması için (3-4 gün sonra yeşil muskardin büyümesi) 24 °C'de ve %100 nemde tutulan Petri kapları (55 mm) içindeki nemli filtre kağıdına yerleştirildi. 12 dakikanın üzerindeki videolarda gözlemlenen toplam LOM sayısı, her termit için puanlandı. LOM'ler 2-7 saniye sürdü ve durdurulması ve ardından ayrı olaylar olarak puanlanmaya devam edilmesi gerekiyordu [23].

2.3. Çiftler ve Tekler için Hayatta Kalma ve Ayrı Ayrı Odalama

Termit çiftlerinin hayatta kalması, aşırı ölüme neden olmayan ve muhtemelen termitlerin toprakta hareket ederken karşılaştıkları konsantrasyonları yansıtan düşük dozda (104 conidia mL−1) konidiaya maruz kaldıktan sonra tekillerle karşılaştırıldı [10] . Çiftler ve tekler, sosyal savunma mekanizmalarının sağladığı hayatta kalma oranını ölçmek için karşılaştırıldı. 12 işçiden oluşan gruplar başlangıçta yukarıda açıklandığı gibi mantarlarla veya mantarsız olarak tehdit edildi; ancak yaklaşık 107 conidia mL-1'lik konidial süspansiyonlar %0,1 Tween 80'de hazırlandı ve steril su ile 104 conidia mL-1'e seyreltilmeden önce kuvvetli bir şekilde vortekslendi. Tween 80 seyreltmelere dahil edilmedi çünkü bireysel konidia süspansiyonları düşük konsantrasyonlarda muhafaza edilebiliyordu ve yüzey aktif madde konidiaların kütikülaya yapışmasına müdahale edebiliyordu. Bu kişiler boyayla işaretlenmemişti. Tedavilerden hemen sonra ve termitler etkileşime girme fırsatına sahip olmadan önce, bunlar 24-kuyucuklu plastik hücre kültürü plakalarının (CELLTREAT Scientific, Pepperell, MA) yuvalarında çiftlere veya teklilere bölündü. Her kuyucuk nemlendirilmiş filtre kağıdıyla (Whatman 1) kaplandı. Her termit/mantar kombinasyonu için (n=4), dört termit çifti, 15 dakika, 2 saat, 5,5 saat, 8 saat ve 27 saat (n=160) sonra tekli gruplara ayrıldı ve her biri için termit/mantar kombinasyonu Hiçbir zaman etkileşime girme fırsatı bulamayan 12 termit, mantarla tedavi edilen veya kontrol tekillerine (n=96) ayrıldı. Bu bireysel termitler aynı zamanda filtre kağıdıyla kaplı 24-kuyucuklu plakalara da bölündü. Termitlerin ölüm oranı daha sonra on gün boyunca izlendi ve ölü bireyler, Metarhizium enfeksiyonunun doğrulanması için uzaklaştırıldı. Hem M. robertsii veya M. brunneum ile tedavi edilen R. flavipes hem de M. robertsii veya M. brunneum (n=256) ile tedavi edilen R. virginicus için tek bir koloni kullanıldı. İşlem görmemiş altı çift de her tür için 10 gün boyunca 24-kuyucuklu plakalarda tutuldu. Aynı kolonilerle yapılan ayrı bir deney, çiftlerin 15 dakika, 2 saat, 5,5 saat, 8 saat ve 27 saatteki ayrılma zamanlarından önce allogrooming'in kaydedilmesine odaklandı. Her termit türünün altı farklı çifti, kontroller için her bir mantar veya su ile muamele edildi ve ayırma zaman noktalarından (n=180) 15 dakika önce allogrooming için skorlandı. İki termit arasındaki ağızdan vücuda temas, ağız parçalarının (palpler) hareketini içerdiğinde, allogoing olayları puanlandı ve her kesintisiz allogoing olayının süresi kaydedildi. Allorooming, termitlerin hangi tedaviyi aldığı konusunda kör olan tek bir gözlemci tarafından puanlandı. LOM'ler de puanlandı ancak ihmal edilebilir düzeydeydi ve analizde kullanılmadı. Kendi kendine bakım gözlenmedi.

Cistanche tubulosa'nın faydaları-Bağışıklık sistemini güçlendirmek

2.4. İn Vitro Antifungal Aktivite

5 R. flavipes veya R. virginicus kolonisinden on iki işçi, 1,5 mL Eppendorf tüplerinde soğukta hareketsizleştirildi ve her tüpe 120 uL soğuk, steril su eklendi. Bu çalışmada kullanılan her iki türden işçiler yaklaşık olarak aynı büyüklükteydi (uzunluk 4-5 mm). Termitler plastik bir havan tokmağı ile homojenleştirildi ve ekstrakt 16000 g'de 2 dakika süreyle santrifüjlendi. Süpernatan, 0,22 um Ultrafree filtreler (MilliporeSigma, Burlington, MA, ABD) ile filtreyle sterilize edildi. Bakteriyel kontaminasyonu daha da önlemek için filtratın on µL'si, 100 conidia M. robertsii veya M. brunneum ve 20 µL 100 µg mL-1 ampisilin içeren on µL ile 24 saat boyunca inkübe edildi. Kontroller ham ekstrakt yerine 10 µL steril su içeriyordu. İnkübe edilen her karışım için iki kopya, 50 µg mL-1 ampisilin (60 mm Petri kapları) ile desteklenmiş patates dekstroz agarına (PDA) yayıldı ve 4-5 gün boyunca karanlıkta oda sıcaklığında inkübe edildi. Antifungal aktivite, ham ekstrakt tedavilerindeki koloni oluşturan birimlerin (CFU'lar) kontrollerle karşılaştırılması yoluyla ölçüldü.

2.5. İstatistik

Hayatta kalmanın ikili karşılaştırmaları için ortalama hayatta kalma sürelerine ilişkin Kaplan-Meier tahminleri kullanıldı. Ölüm tehlike oranları (HR'ler) Cox regresyon analizi ile hesaplandı. Diğer kategorik değişkenleri (mantar tedavisi veya kontrolü, mantar türleri, termit türleri, menşe kolonisi) kontrol ederken LOM sergileyen veya LOM sergilemeyen bireyler arasındaki ölüm oranlarındaki farklılıkları araştırmak için Cox regresyonunu kullandık. LOM'ler, aykırı değerlerin sıklığı ve normallik eksikliği nedeniyle bireylerde yok veya mevcut olarak kategorize edildi. Termit çiftleri ve teklilerle yapılan hayatta kalma analizinde HR, konidia ile tedavi edilen çiftler (farklı zaman noktalarında ayrılmış) ve konidia ile tedavi edilen tekli türler arasındaki karşılaştırmaya dayanıyordu. Dolayısıyla bu İK'ler, bireysel savunma mekanizmalarını kontrol ederken, sosyal savunma mekanizmalarının sağladığı bir hayatta kalma ölçüsü sağlar. Çift olarak geçirilen zaman ile kalp atış hızındaki değişim arasındaki ilişki Pearson korelasyonlarıyla ölçüldü. LOM'lerin farklı tedaviler arasındaki dağılımı, ikili karşılaştırmalar için çoklu testler için Bonferroni düzeltmeleri içeren bir Kruskal-Wallis testiyle karşılaştırıldı. Ortalama CFU veya allorooming olaylarının süresi, ikili karşılaştırmalar için Bonferroni düzeltmelerine sahip bir ANOVA testiyle karşılaştırıldı. İstatistiksel testler için IBM SPSS İstatistiklerini (versiyon 28) kullandık.

3. Sonuçlar

3.1. Oniki Kişilik Zorlu Grupların Hayatta Kalması ve Alarmı

The Cox regression model of survivorship that included categorical variables for fungal treatment, LOMs, termite species, fungi species, and a colony of origin was significant (Chi-square = 246.29, df = 12, p < 0.001). Challenged termites were 9.28 times more likely to die than untreated termites (Wald = 143.05, p < 0.001) while controlling for the other variables. Termites that displayed LOMs (n = 422) were 1.52 times more likely to survive (Wald = 8.30, p = 0.004) than individuals that did not display LOMs (n = 286). R. virginicus workers were 2.08 times more likely to die than R. flavipes workers (Wald = 6.31, p = 0.012). Fungal species did not contribute significantly to the model (Wald = 0.841, p = 0.359). The colony of origin contributed significantly to the model (Wald = 50.16, p < 0.001), which is consistent with previously reported colony variation in Reticulitermes resistance to Metarhizium infections [24]. Survivorship did not differ between the same colony when the experiment was repeated 3 months later with workers that were exposed to M. Roberts (Breslow pairwise comparison, Chi-square = 0.342, p = 0.559). Most deaths in the challenged termites were attributable to Metarhizium infection (>%90 onay). M. Roberts ile tehdit edilen termitler için, 237 birey arasında 129 ölüm gözlemlendi ve R. virginicus'un ortalama hayatta kalma süresi (9,10 gün), R. flavipes'e (10) göre önemli ölçüde daha düşüktü. 98 gün)(Breslow=10.05, df=1, p=0.002) (Şekil 1). M. brunneum ile tehdit edilen termitler için, 120 birey arasında 79 ölüm gözlendi ve R. flavipes'in ortalama hayatta kalma süresi (9,70 gün), R. virginicus'tan (10,68 gün) daha düşüktü, ancak anlamlı değildi (Breslow=2 .74, df=1, p=0.098). LOM'lerin (Şekil 2) mantar ve kontrol tedavileri arasındaki dağılımı önemli ölçüde farklıydı (Kruskal–Wallis=176.897, df=5, p < 0.001). LOM'lerin sıklığı, M. brunneum tedavileri ve bunların R. flavipes (düzeltilmiş p=0.097) ve R. virginicus (düzeltilmiş p=1.000) için ilgili kontrolleri arasında önemli ölçüde farklı değildi. ). Bununla birlikte, LOM'lerin sıklığı M. Roberts tedavileri için, R. flavipes (düzeltilmiş p < 0,001) ve R. virginicus (düzeltilmiş p < 0,001) için ilgili kontrollerine kıyasla önemli ölçüde daha yüksekti (Şekil 2). M. Roberts tedavisi için R. flavipes LOM'lerin sıklığı, R. virginicus LOM'lerden önemli ölçüde daha yüksekti (düzeltilmiş p < 0,001). Bununla birlikte, M. brunneum tedavisi için R. flavipes LOM'lerinin sıklığı, R. virginicus LOM'larından önemli ölçüde farklı değildi (düzeltilmiş p=1.000). M. brunneum'un aksine, M. Roberts conidia ile tehdit edilen 12 termitten oluşan gruplar önemli bir davranışsal tepkiyle sonuçlandı.

3.2. Meydan Okunan Çiftlerin ve Tekillerin Hayatta Kalması

Patojen tehdidinden kısa bir süre sonra farklı zamanlarda ayrılan termit çiftlerinin hayatta kalması, ölüm tehlikesi oranları (HR'ler) ile tehdit edilen tekillerin hayatta kalmasıyla karşılaştırıldı. HR'nin 1 olması, ayrılmış çiftlerde ve tekillerde on gün boyunca eşit hayatta kalma oranına karşılık gelir. Birden küçük değerler, ayrılmış çiftlerde tekillere kıyasla ölüm oranının azaldığını gösterir. Çift olarak geçirilen zaman ile HR'deki azalma arasındaki korelasyon yalnızca M. Roberts (r=−0.978, p=0.{ ile tedavi edilen R. flavipes için anlamlıydı. {7}}04) veya M. brunneum (r=−0.983, p=0.003), ve bunlardan herhangi biriyle tedavi edilen R. virginicus için değil M. Roberts (r=−0,643, p=0,242) veya M. brunneum (r=−0,812, p=0,095). Bu aynı zamanda Şekil 3'te gösterilen doğrusal regresyonlardan elde edilen R2 değerlerine de yansımaktadır (Pearson korelasyonlarının ve R2 değerlerinin hesaplanması için zaman log-dönüştürülmüştür). Tedavi edilmeyen çiftlerde (her termit türü için 6 çift) hiçbir ölüm gözlenmedi ve 10 gün boyunca hiç ayrılmayan, tedavi edilen 16 çiftte (her termit/mantar kombinasyonu için 4 çift) bir ölüm gözlenmedi.

Şekil 1. 12 kişilik gruplar için hayatta kalma. Rf, R. flavipes'e, Rv, R. virginicus'a, Mr, M. robertsii'ye ve Mb, M. brunneum'a karşılık gelir. İkili karşılaştırmalar için anlamlı hayatta kalma farklılıkları Breslow testlerine (genelleştirilmiş Wilcoxon testleri) dayandırılmıştır. * Tedaviler arasında anlamlı fark var, NS tedaviler arasında anlamlı fark yok (p< 0.025 Bonferroni adjusted α). The distribution of LOMs (Figure 2) among fungal and control treatments was significantly different (Kruskal–Wallis = 176.897, df = 5, p < 0.001). The frequency of LOMs was not significantly different between M. brunneum treatments and their respective controls for R. flavipes (adjusted p = 0.097) and R. virginicus (adjusted p = 1.000). However, the frequency of LOMs was significantly greater for M. robertsii treatments compared to their respective controls for R. flavipes (adjusted p < 0.001) and R. virginicus (adjusted p < 0.001) (Figure 2). For the M. robertsii treatment, the frequency of R. flavipes LOMs was significantly greater than R. virginicus LOMs (adjusted p < 0.001). However, for the M. brunneum treatment, the frequency of R. flavipes LOMs was not significantly different from R. virginicus LOMs (adjusted p = 1.000). In contrast to M. brunneum, groups of 12 termites challenged with M. robertsii conidia resulted in a significant behavioral response. 

Şekil 1. 12 kişilik gruplar için hayatta kalma. Rf, R. flavipes'e, Rv, R. virginicus'a, Mr, M. robertsii'ye ve Mb, M. brunneum'a karşılık gelir. İkili karşılaştırmalar için anlamlı hayatta kalma farklılıkları Breslow testlerine (genelleştirilmiş Wilcoxon testleri) dayandırılmıştır. * Tedaviler arasında anlamlı fark var, NS tedaviler arasında anlamlı fark yok (p< 0.025 Bonferroni adjusted α). For the survivorship of pathogen-challenged single termites (Figure 4), 47 deaths were observed among 48 individuals, and the mean survival time for R. flavipes (4.21 days) was significantly lower than for R. virginicus (6.17 days)(Breslow, chi-square = 33.927, df = 1, p < 0.001). This relationship held for both species of fungi: For M. robertsii exposure, the mean survival time for R. flavipes (4.25 days) was significantly lower than for R. virginicus (5.83 days) (chi-square = 16.133, df = 1, p < 0.001); For M. brunneum exposure, the mean survival time for R. flavipes (4.17 days) was significantly lower than for R. virginicus (6.50 days) (chi-square = 20.994, df = 1, p < 0.001). 3.3. Antifungal Activity of Crude Extracts The two species of fungi were analyzed separately (the viability of conidia on PDA differs between the two species). For M. robertsii, mean colony-forming units (CFUs) among fungal and control treatments were significantly different (F = 18.08, df = 2, p < 0.001) (Figure 5a). Crude extracts of R. virginicus but not R. flavipes workers showed significant antifungal activity against M. robertsii compared to the control (adjusted p < 0.001 and p = 1.000, respectively). The antifungal activity of R. virginicus extracts against M. robertsii was significantly greater than the antifungal activity of R. flavipes extracts against M. robertsii (adjusted p < 0.001). For M. brunneum, mean CFUs (Figure 5b) among fungal and control treatments were significantly different (F = 27.26, df = 2, p < 0.001). Crude extracts of R. virginicus but not R. flavipes showed significant antifungal activity against M. brunneum compared to the control (adjusted p < 0.001 and p = 0.072, respectively). The antifungal activity of R. virginicus extracts against M. brunneum was significantly greater than the antifungal activity of R. flavipes against M. brunneum (adjusted p < 0.001).

3.3. Ham Ekstraktların Antifungal Etkinliği

İki mantar türü ayrı ayrı analiz edildi (PDA'daki conidia'nın yaşayabilirliği iki tür arasında farklılık gösterir). M. robertsii için mantar ve kontrol tedavileri arasında ortalama koloni oluşturan birimler (CFU'lar) önemli ölçüde farklıydı (F=18.08, df=2, p < 0 .001) (Şekil 5a). R. virginicus'un ham ekstraktları, ancak R. flavipes işçileri değil, kontrole kıyasla M. robertsii'ye karşı önemli antifungal aktivite gösterdi (düzeltilmiş p < 0.001 ve p=1.{{ 10}}, sırasıyla). R. virginicus ekstraktlarının M. robertsii'ye karşı antifungal aktivitesi, R. flavipes ekstraktlarının M. robertsii'ye karşı antifungal aktivitesinden önemli ölçüde daha yüksekti (düzeltilmiş p < 0,001). M. brunneum için mantar ve kontrol tedavileri arasında ortalama CFU'lar (Şekil 5b) önemli ölçüde farklıydı (F=27.26, df=2, p < 0.001). R. virginicus'un ham ekstraktları, ancak R. flavipes'in değil, kontrole kıyasla M. brunneum'a karşı anlamlı antifungal aktivite gösterdi (sırasıyla p < 0,001 ve p=0,072'ye ayarlandı). R. virginicus ekstraktlarının M. brunneum'a karşı antifungal aktivitesi, R. flavipes'in M. brunneum'a karşı antifungal aktivitesinden önemli ölçüde daha yüksekti (düzeltilmiş p < 0,001).

Şekil 2. Mantar tehdidine alarm yanıtı. Kutu grafikleri LOM'lerin dağılımını temsil eder (709 boya işaretli kişide puanlanan LOM'ler). Kutular, medyandan (IQR) üst ve alt çeyrekler arasındaki mesafeye karşılık gelir. Bıyıklar 1,5 × IQR'ye karşılık gelir. Daireler ve yıldız işaretleri sırasıyla 1,5 × IQR veya 3 × IQR'nin ötesindeki aykırı değerleri gösterir. Farklı harfler, mantar ve kontrol tedavilerine yönelik dağılımlar arasındaki önemli farklılıkları göstermektedir (Bonferroni ayarlı). Rf, R. flavipes'e, Rv, R. virginicus'a, Mr, M. robertsii'ye ve Mb, M. brunneum'a karşılık gelir.

3.4. Zorlu Çiftler Arasında Odaklama

Allorooming nöbetlerinin sıklığı mantar mücadeleleriyle önemli ölçüde azaldı (zorluk ortalaması {{{0}},55, kontrol ortalaması=8,80, t=−4,461, p < {{20}}.001). Bununla birlikte, ortalama allorooming süresi mantar tehditleriyle önemli ölçüde arttı (zorlama ortalaması=19,01 s, kontrol ortalaması=5,62 s, t=4,876, p < 0,001). Termit çiftleri arasındaki her etkileşim için allogrooming nöbetlerinin süresi, tedaviler ve kontroller arasında önemli ölçüde farklılık gösterdi (F=7.166, df=5, p < 0.001) (Şekil 6). Olay başına tahsis süresi, M. robertsii (düzeltilmiş p < 0,001) veya M. brunneum (düzeltilmiş p=0,037) ile tedavi edilen R. flavipes çiftlerinde kontrollere göre önemli ölçüde arttı, ancak tedavi edilen R. virginicus çiftlerinde bu durum söz konusu değildi kontrollere göre M. robertsii (düzeltilmiş p=1.000) veya M. brunneum (düzeltilmiş p=1.000) ile.

Şekil 3. İki termitin bir termite karşı hayatta kalması, ölüm tehlikesi oranlarıyla (n=80 çift, 96 tekil) karşılaştırıldı. Rf, R. flavipes'e, Rv, R. virginicus'a, Mr, M. robertsii'ye ve Mb, M. brunneum'a karşılık gelir. R2 değerlerinin hesaplanması için zaman logaritmik dönüşüme tabi tutuldu.

Şekil 4. Mantar tehdidi sonrasında tek termitlerin hayatta kalması (n=96). Rf, R. flavipes'e, Rv, R. virginicus'a, Mr, M. robertsii'ye ve Mb, M. brunneum'a karşılık gelir. Tedaviler arasındaki istatistiksel farklarla ilgili ayrıntılar için metne bakın. İkili karşılaştırmalar için anlamlı hayatta kalma farklılıkları Breslow testlerine (genelleştirilmiş Wilcoxon testleri) dayandırılmıştır. * Tedaviler arasında anlamlı fark (p < 0.025 Bonferroni düzeltildi).

Şekil 5. M. robertsii (a) ve M. brunneum'a (b) karşı ham ekstrakt antifungal aktivitesi. Çubukların üzerindeki değerler ortalama CFU'ları (±SD) temsil eder ve farklı harfler önemli farklılıkları gösterir (Bonferroni ayarlı). Rf, R. flavipes'e ve Rv, R. virginicus'a karşılık gelir. Analizde her termit türünden 5 koloniden iki kopya, Rf kontrolü için 6 kopya ve Rv kontrolü için 2 kopya kullanıldı.

Şekil 6. Etkileşim başına allogrooming süresi (n=161 allogrooming olayı). Çubukların üzerindeki değerler, allogrooming etkileşimlerinin ortalama süresini (±SD) temsil eder ve farklı harf kombinasyonları, önemli farklılıkları gösterir (Bonferroni ayarlı). Rf, R. flavipes'e, Rv, R. virginicus'a, Mr, M. robertsii'ye ve Mb, M. brunneum'a karşılık gelir.

4. Tartışma

R. flavipes, yerel mantar patojenlerine karşı sosyal savunma mekanizmalarına R. virginicus'tan daha fazla güvenir. Her iki Metarhizium türüyle tehdit edilen R. flavipes işçileri için, iki termitin birlikte geçirdiği süre ile tehdit edilen tek termitlere göre ölüm olasılıkları arasında güçlü bir negatif korelasyon vardı. Tehdit edilen tek termitlere göre ölümün tehlike oranı yaklaşık iki saat içinde yarıya indi (Şekil 3). Bu nedenle, R. flavipes işçileri düşük konsantrasyonlarda Metarhizium conidia ile karşılaştığında erken sosyal etkileşimler hayatta kalmak için kritik öneme sahip gibi görünmektedir. Buna karşılık, R. virginicus işçileri, iki termitin birlikte geçirdiği süre ile ölüm olasılıkları arasında zayıf bir korelasyon gösterdi. Ayrıca, R. virginicus'un aksine, R. flavipes işçi çiftleri, mantar tehdidi sonrasında allogrooming nöbetlerinin süresini önemli ölçüde artırdı (Şekil 6). Yuva arkadaşlarının kütikülünde konidi tespit edilmesi muhtemelen bu artışa yol açmıştır. Allogrooming nöbetlerinin süresini artırarak konidiaların kütiküler yüzeylerden daha etkili bir şekilde uzaklaştırılması, R. flavipes'in üstün sosyal bağışıklığını açıklıyor gibi görünüyor. Sonuçlarımız aynı zamanda R. virginicus'un yerel mantar patojenlerine karşı bireysel doğuştan gelen savunma mekanizmalarına R. flavipes'ten daha fazla dayandığını göstermektedir. Metarhizium türlerinden herhangi biriyle tehdit edilen tek R. flavipes işçilerinin ölüm oranı, R. virginicus işçilerinin ölüm oranından önemli ölçüde daha yüksekti (Şekil 4). R. virginicus işçisi kütiküler yıkamalarının Metarhizium conidia'ya karşı antifungal aktivitesinin, R. flavipes işçilerinin aktivitesinden önemli ölçüde daha güçlü olduğu daha önce gösterilmiştir [20]. Bütün termitlerin ham ekstraktlarının antifungal aktivitesi de R. virginicus'ta R. flavipes'e göre daha güçlüydü (Şekil 5). Bu ekstraktlar, termit antifungal bileşiklerle birlikte, yutulan konidiaların ortadan kaldırılmasına da katkıda bulunabilen bağırsak simbiyotiklerinden elde edilen bileşikleri içerir [26]. R. virginicus işçilerinde ölüm tehlike oranlarındaki değişiklik ve bunların ayrılma süreleriyle zayıf korelasyonu, sosyal bağışıklık mekanizmalarından ziyade bireyler arasında değişen doğuştan gelen bağışıklık savunma mekanizmalarına daha fazla bağımlılık ile tutarlıdır. R. flavipes ayrıca 12 işçiden oluşan gruplar kısa süreliğine yüksek konsantrasyonlarda M. robertsii conidia'ya maruz bırakıldığında sosyal bağışıklığa daha fazla bağımlılık gösterdi. M. robertsii conidia'ya maruz kaldıktan hemen sonra her iki termit türünde de yüksek LOM'ler görüldü. Bu alarm aktivitesi R. flavipes'te R. virginicus'a göre önemli ölçüde daha yüksekti (Şekil 2) ve ölümcül enfeksiyonlara karşı direnç de R. flavipes'te R. virginicus'a göre önemli ölçüde daha yüksekti (Şekil 1). Buna karşılık, M. brunneum conidia'ya karşı yüksek ancak zayıf bir alarm yanıtı mevcuttu. Bu sonuçla tutarlı olarak, farklı Metarhizium suşlarının ve türlerinin konidialarına yanıt olarak R. flavipes'te artan alarmın, yüksek allogrooming ve hayatta kalma ile ilişkili olduğu daha önce gösterilmiştir [23]. R. flavipes çalışanları, M. robertsii conidia ile kütiküler kontaminasyonu tanıma ve toplu ve etkili bir şekilde yanıt verme konusunda R. virginicus çalışanlarından daha düşük bir eşiğe sahip olabilir. Çalışma alanımızdaki en yaygın Metarhizium türü olan M. robertsii [24], güçlü bir sosyal bağışıklık tepkisi gerektiren R. flavipes için bir tehdit oluşturabilir çünkü bu termitin buna karşı doğuştan gelen bağışıklık savunması nispeten zayıftır. Tükürük bezi salgılarıyla ilişkili antifungal bileşiklerin etkinliği, bu çalışmada gözlemlenen bireysel savunmalar için muhtemelen gerekli olacaktır [20]. Bu bileşikler, yapısal olarak ifade edildikleri ve bu nedenle bireysel ve sosyal savunmaları bütünleştiren bazal allogrooming seviyeleri tarafından sürekli olarak yayıldıkları için, mantar saldırılarından önce işçilerin yüzeyinde mevcuttur. Bu gestalt muhtemelen tükürük bezine salgılanan ve Metarhizium'un neden olduğu ölümcül enfeksiyonlara karşı savunma için kritik önem taşıyan küçük defensin benzeri antifungal peptid termisini içermektedir [27]. Bu çalışmada kullanılan Maryland'deki aynı toplama bölgesinden R. flavipes ve R. virginicus üzerinde yapılan bir çalışma, termisinlerin yakın zamanda nükleotid polimorfizminde bir azalmaya yol açan seçici bir taramayla karşı karşıya kaldığını ve bu azalmanın R. flavipes'te R. flavipes'te R. flavipes'ten daha fazla olduğunu ortaya çıkardı. virginicus'tur [28].

cistanche tubulosa-bağışıklık sistemini iyileştirir

Bu tarama, R. flavipes için daha şiddetli olmuş olabilir ve muhtemelen de öyle olmaya devam edecektir, çünkü R. virginicus, yakın zamanda meydana gelen bir mantar salgınına karşı savunma için termisinlere olan bağımlılığını azaltan daha etkili doğuştan gelen bağışıklık mekanizmalarına sahiptir. Alternatif olarak, termit evrimi üzerindeki adaptif kısıtlamalar (genetik çeşitliliğin olmaması), yeni bir mantar salgını karşısında R. flavipes'i daha zayıf silahlarla bırakmış olabilir. Güçlü seçici baskı altında termisinlerdeki adaptif değişim üzerindeki kısıtlama, Avustralya Nasutitermes'te de belirgindir [29]. Gen kopyalamanın stokastik süreci, farklı nasute soylarında bu kısıtlamayı serbest bırakmış gibi görünüyor; bu da, farklı moleküler yüklere sahip iki termisinin tekrarlanan evrimiyle sonuçlandı. Bu, antifungal savunmaya fayda sağlamış olabilir çünkü farklı yük özelliklerine sahip iki terminal, onlara karşı mantar direncinin gelişmesi fırsatlarını kısıtlar. Yüksek dozda conidia'ya maruz kaldıktan sonra alarm (LOM'ler) sergileyen termitlerin, iki hafta içinde ölme olasılığı, alarm göstermeyen bireylere göre daha azdı. LOM'ler, R. flavipes işçi topluluğu ve allogrooming ile pozitif olarak ilişkilidir [23]; bu, bu çalışmada alarm sergileyen bireylerin yuva arkadaşlarından daha fazla tımar talep ettiklerini göstermektedir. LOM'ler, termitlerde Metarhizium enfeksiyonlarını araştıran araştırmalarda nadiren rapor edilmektedir ve patojen maruziyetinin sinyalini vermede rol oynadıkları dikkate alınmamıştır [30]. Bununla birlikte, izole bireylerde ortaya çıkmadıkları, Metarhizium'un belirli suşları ve türleri tarafından büyük ölçüde ortaya çıkarılmadıkları, bir uyarıdan sonra yükselmeleri yaklaşık 3 dakika sürdüğü ve yaklaşık 30 dakika sonra azaldığı için gözden kaçabilirler [22,23]. Sonuçlarımız, LOM'lerin, allorooming sırasında tespit edilen yüksek dozda conidia'ya maruz kaldıktan sonra acil durum uyarısı ilettiğini göstermektedir. Ancak LOM'ler, proaktif bir davranışsal yanıt için gerekli değildir, çünkü LOM'ler ihmal edilebilir düzeydeyken, düşük doza maruz kalma sonrasında allogrooming süresi arttı.

5. Sonuçlar

LOM'ler, yaklaşık 12 saat süren, sıkı bir şekilde bağlanma ve çimlenme şansına sahip olmadan önce çoğu konidianın çıkarılmasını ve yok edilmesini hızlı bir şekilde hızlandırmak için ağ bağlantılı iletişimi kullanan ağır kütiküler kontaminasyona karşı acil müdahalenin bir parçası gibi görünmektedir [31]. Bu acil müdahalenin enerji açısından pahalı olması muhtemeldir. M. robertsii'ye yanıt olarak R. flavipes'te artan sosyal bağışıklık, R. virginicus'un daha etkili doğuştan bağışıklık mekanizmalarına sahip olması nedeniyle aynı ölçüde yapmak zorunda olmadığı adaptif bir değiş-tokuş olabilir. Toplayıcı işçilerin rutin olarak dayanmak zorunda olduğu düşük düzeyde patojen maruziyetiyle karşı karşıya kalındığında, allogrooming aynı zamanda zayıf doğuştan gelen bağışıklık mekanizmalarını da telafi ediyor gibi görünüyor.

Referanslar

1. Cremer, S.; Çekme, CD; Fuerst, MA Sosyal bağışıklık: Koloni düzeyinde hastalık korumasının ortaya çıkışı ve evrimi. Annu. Rahip Entomol. 2018, 63, 105–123. [CrossRef] [PubMed] 2. Cremer, S.; Armitage, SA; Schmid-Hempel, P. Sosyal dokunulmazlık. Curr. Biyol. 2007, 17, R693–R702. [CrossRef] [PubMed]

3. Evans, JD; Aronstein, K.; Chen, YP; Hetru, C.; Imler, JL; Jiang, H.; Kanost, M.; Thompson, GJ; Zou, Z.; Hultmark, D. Bal arılarında bağışıklık yolları ve savunma mekanizmaları Apis mellifera. Böcek Mol. Biyol. 2006, 15, 645–656. [CrossRef] [PubMed]

4. Harpur, BA; Zayed, A. Sosyal böceklerde doğuştan gelen bağışıklık proteinlerinin hızlandırılmış evrimi: Adaptif evrim mi yoksa gevşetilmiş kısıtlama mı? Mol. Biyol. Evrim. 2013, 30, 1665–1674. [CrossRef] [PubMed]

5. O, S.; Sieksmeyer, T.; Che, Y.; Mora, MAE; Stiblik, P.; Banasiak, R.; Harrison, MC; Šobotník, J.; Wang, Z.; Johnston, Halkla İlişkiler; ve ark. Termitlerin evrimi sırasında bağışıklık gen çeşitliliğinin ve aktivitesinin azaldığına dair kanıt. Proc. R. Soc. Ser. B 2021, 288, 20203168. [CrossRef]

6. Bulmer, MS; Stefano, AM Termit tümsosyallik ve sosyal ve doğuştan gelen bağışıklık üzerindeki zıt seçici baskı. Davranış. Ekol. Sosyobiyol. 2022, 76, 1–12. [ÇaprazRef]

7. Yanagawa, A.; Shimizu, S. Termitin, Coptotermes formosanus Shiraki'nin bakım nedeniyle Metarhizium anisopliae'ye karşı direnci. BioControl 2007, 52, 75–85. [ÇaprazRef]

8. Rosengaus, RB; Traniello, JF; Bulmer, MS Ekolojisi, termitlerde hastalık direncinin davranışı ve evrimi. Termitlerin Biyolojisinde: Modern Bir Sentez; Bignell, DE, Roisin, Y., Lo, N., Eds.; Springer: Londra, Birleşik Krallık, 2011; s. 165–192.

9.Zhukovskaya, M.; Yanagawa, A.; Forschler, BT Böcek hastalıklarına karşı savunma mekanizması olarak bakım davranışı. Böcekler 2013, 4, 609–630. [ÇaprazRef]

10. Milner, RJ Avustralya'da toprak böceklerinin kontrolü için Metarhizium anisopliae türlerinin seçimi ve karakterizasyonu. Çekirge ve Çekirgelerin Biyolojik Mücadelesinde; Lomer, CJ, Prior, C., Eds.; CAB Uluslararası: Wallingford, Birleşik Krallık, 1991; s. 200–207.

11. Traniello, JF; Leuthold, RH Termitlerde yiyecek arama davranışı ve ekolojisi. Termitlerde: Evrim, Sosyallik, Ortakyaşamlar, Ekoloji; Abe, T., Bignell, DE, Higashi, M., Higashi, T., Abe, Y., Eds.; Springer: Dordrecht, Hollanda, 2000; s. 141–168.

12. Vargo, E.; Husseneder, C. Yeraltı termitlerinin biyolojisi: Reticulitermes ve Coptotermes'in moleküler çalışmalarından elde edilen bilgiler. Annu. Rahip Entomol. 2009, 54, 379–403. [ÇaprazRef]

13. Abe, T. Termitlerdeki yaşam türlerinin evrimi. Biyotik Topluluklarda Evrim ve Birlikte Adaptasyonda; Kowana, S., Connell, JH, Hidaka, T., Eds.; Tokyo Üniversitesi Yayınları: Tokyo, Japonya, 1987; s. 128–148.

14. Shellman-Reeve, JS Termitlerde tümtoplumsallığın spektrumu. Böceklerde ve Araknidlerde Sosyal Davranışın Evrimi kitabında; Choe, JC, Crespi, BJ, Eds.; Cambridge University Press: Cambridge, Birleşik Krallık, 1997; s. 52–93.

15. Griffiths, HM; Eggleton, P.; Hemming-Schroeder, N.; Swinfield, T.; Woon, JS; Allison, SD; Coomes, savcı; Ashton, Los Angeles; Parr, CL Karbon akışı ve orman dinamikleri: Tropikal yağmur ormanlarında ağaç düşmesi gölgelik boşluklarında artan ölü ağaç ayrışması. Küre. Chang. Biyol. 2001, 27, 1601–1613. [ÇaprazRef]

16. Guo, C.; Tuo, B.; Ci, H.; Yan, Acil Servis; Cornelissen, JH Ağaç işlevsel özellikleri, termit popülasyonları ve ölü ağaç devri arasında dinamik geri bildirimler. J. Ecol. 2021, 109, 578–1590. [ÇaprazRef]

17.Zanne, AE; Flores-Moreno, H.; Powell, JR; Cornwell, WK; Dalling, JW; Austin, AT; Classen, AT; Eggleton, P.; Okada, KI; Parr, CL; ve ark. Termitlerin sıcaklığa duyarlılığı küresel ahşap çürüme oranlarını etkiler. Bilim 2022, 377, 1440–1444. [CrossRef] [PubMed]

18. Liu, L.; Wang, W.; Liu, Y.; Güneş, P.; Lei, C.; Huang, Q. Yeraltı termiti Reticulitermes chinensis'te (Isoptera: Rhinotermitidae) allogrooming davranışının bireysel doğuştan gelen bağışıklık üzerindeki etkisi. J. Böcek Sci. 2019, 19, 6. [CrossRef] [PubMed]

19. Polizzi, JM; Forschler, BT Reticulitermes flavipes (Kollar) ve R. virginicus'ta (Banks) intra-ve türler arası agonizm ve laboratuvar analizlerinde arena ve grup büyüklüğünün etkileri. Böcekler Sociaux 1998, 45, 43–49. [ÇaprazRef]

20. Hamilton, C.; Lay, F.; Bulmer, MS Yeraltı termit profilaktik salgıları ve dış antifungal savunmalar. J. Böcek Physiol. 2011, 57, 1259–1266. [ÇaprazRef]

21. Rosengaus, RB; Ürdün, C.; Lefebvre, ML; Traniello, JFA Bir termitte patojen alarm davranışı: Sosyal böceklerde yeni bir iletişim biçimi. Bilim. Nat. 1999, 86, 544–548. [ÇaprazRef]

22. Myles, TG Doğal olarak oluşan Metarhizium anisopliae izolatına yanıt olarak Reticulitermes flavipes tarafından alarm, toplanma ve savunma. Sosyobiyoloji 2002, 40, 243–256.

23.Bulmer, MS; Franco, BA; Tarlalar, EG Yeraltı termitlerinin sosyal alarmı ve mantar patojenlerine karşı hijyenik tepkiler. Böcekler 2019, 10, 240. [CrossRef]

24. Denier, D.; Bulmer, MS Yerel Metarhizium toprak izolatlarının neden olduğu ölümcül enfeksiyonlara karşı yeraltı termit duyarlılığındaki değişiklik. Böcekler Sociaux 2015, 62, 219–226. [ÇaprazRef]

25. Bischoff, JF; Rehner, SA; Humber, RA Metarhizium anisopliae soyunun çok odaklı bir filogenisi. Mikoloji 2018, 101, 512–530. [ÇaprazRef]

26. Rosengaus, RB; Schultheis, KF; Yalonetskaya, A.; Bulmer, MS; DuComb, WS; Benson, RW; Thottam, JP; Godoy-Carter, V. Symbiont'tan türetilmiş -1, 3-sosyal bir böcekteki glukanazlar: Beslenmenin ötesinde karşılıklılık. Ön. Mikrobiyol. 2014, 5, 607. [CrossRef] [PubMed]

27.Hamilton, C.; Bulmer, MS Yeraltı termitlerinde moleküler antifungal savunmalar: RNA etkileşimi, doğal olarak karşılaşılan bir patojene karşı terminus ve GNBP'lerin in vivo rollerini ortaya çıkarır. Dev. Komp. İmmünol. 2012, 36, 372–377. [CrossRef] [PubMed]

28.Bulmer, MS; Lay, F.; Hamilton, C. Yeraltı termit antifungal peptidlerinde uyarlanabilir evrim. Böcek Mol. Biyol. 2010, 19, 669–674. [CrossRef] [PubMed]

29. Bulmer, MS; Crozier, RH Çoğaltma ve termit antifungal peptidler arasında seçimin çeşitlendirilmesi. Mol. Biyol. Evrim. 2004, 21, 2256–2264. [ÇaprazRef]

30. Moran, Minnesota; Aguero, CM; Eyer, Pensilvanya; Vargo, EL Bir termitte kurtarma stratejisi: Mantar patojenine maruz kalan işçiler koloniye yeniden entegre edilir. Ön. Ekol. Evrim. 2022, 10, 840223. [CrossRef]

31. Davis, HE; Meconcelli, S.; Radek, R.; McMahon, DP Termitler, kolektif davranışsal tepkilerini enfeksiyon aşamasına göre şekillendiriyor. Bilim. Temsilci 2018, 8, 14433. [CrossRef]