Bölüm 1: Ephedra Fragilis'ten Biyoaktif Bileşikler: Ekstraksiyon Optimizasyonu, Kimyasal Karakterizasyon, Antioksidan ve AntiGlikasyon Aktiviteleri

Daha fazla bilgi için. İletişimtina.xiang@wecistanche.com

Soyut: Ephedra fragilis'ten biyoaktif bileşiklerin ekstraksiyonunu optimize etmek için Box-Behnken tasarımına (BBD) sahip yanıt yüzeyi metodolojisi (RSM) kullanıldı. Sonuçlar, 15.84 saat boyunca 44.43 derecede yüzde 61.93 etanol ile ekstraksiyonun bu değişken kombinasyonu için en iyi çözüm olduğunu gösterdi. Optimum ekstraksiyon koşulları altında elde edilen ham etanol ekstraktı (CEE), artan polariteye sahip solventler ile sırayla fraksiyonlandı. Toplam fenolik (TP) ve toplam flavonoid (TF) içeriğinin yanı sıraantioksidanve antiglikasyon aktiviteleri ölçüldü. En yüksek aktiviteye sahip fraksiyonun fitokimyasal parmak izi profili, RP-HPLC kullanılarak karakterize edildi. Etil asetat fraksiyonu (EAF), en yüksek TP ve TF içeriğine sahipti ve en güçlü antioksidan ve antiglikasyon aktivitelerini sergiledi. Pearson korelasyon analizi sonuçları, TP ve TF içeriklerinin antioksidan ve antiglikasyon aktiviteleri ile yüksek düzeyde anlamlı korelasyona sahip olduğunu göstermiştir. Toplamda, E. fragilis'in EAF'sinde dört fenolik asit ve iki flavonoid dahil olmak üzere altı bileşik tanımlandı. Ek olarak, moleküler yerleştirme analizi, tanımlanan biyoaktif bileşikler ile bunların etki mekanizmaları arasındaki olası bağlantıyı da göstermiştir. Sonuçlarımız, yaşlanmanın ve glikasyonla ilişkili komplikasyonların tedavisinde ve önlenmesinde uygulanabilecek E. fragilis biyoaktif bileşiklerinin antioksidan ve antiglikasyon aktiviteleri hakkında yeni kanıtlar önermektedir.

anahtar kelimeler: Efedra fragilis; tepki yüzeyi metodolojisi; Box-Behnken tasarımı; biyoaktif bileşikler; RP-HPLC; antioksidan ve antiglikasyon aktiviteleri

Daha fazla ürün öğrenmek için buraya tıklayın

1. Giriş

Çeşitli kaynaklardan saldırganlara sürekli maruz kalmak, saldırganlığın artmasına neden olabilir.serbest radikallerinsan vücudundaki üretim, onları düzenleme kapasitesini aşan ve zamanla yaşlanma ve diyabet dahil olmak üzere oksidatif stresle ilişkili çeşitli hastalıkların gelişimine katkıda bulunur[1]. Buradan,antioksidanlartakviye, aşırı serbest radikal konsantrasyonlarını ortadan kaldırarak optimal bir biyolojik sistemin korunmasına yardımcı olabilir [2]. Serbest radikallerin glikasyon sürecine katıldığı gösterilmiştir. Proteinlerdeki amino asit kalıntılarının mevcut amino grupları ile indirgen şekerler arasındaki spontan enzimatik olmayan bir reaksiyon olan glikasyon, yaşlanma ve hiperglisemi altında daha yüksek oranda meydana gelir ve ileri glikasyon son ürünleri (AGE'ler) üretimi ve birikimi ile sonuçlanır 3]. AGE'ler, proteinlere müdahale etmesi ve fonksiyonelliğini değiştirmesinin yanı sıra, aynı zamanda

İmmünoglobulin süper ailesine [4] ait bir 45 KDa çoklu ligand hücre yüzey reseptörü olan AGE'ler (RAGE) reseptörü ile etkileşime girer ve ilişkili patolojik komplikasyonlara katkıda bulunan serbest radikal üretimindeki bir artışın eşlik ettiği birkaç hücre içi sinyal yolunu aktive eder. diyabet [5].

Antioksidanların ve radikal süpürücü moleküllerin bu süreçlere karşı iyi koruyucular olduğu iyi bilinmektedir [6]. Oksidatif strese bağlı hastalıkların önlenmesinde ve dengelenmesinde şifalı bitkilerin kullanımı eski bir tıp geleneğidir. Son zamanlarda birçok çalışma, ikili antioksidan ve antiglikasyon potansiyeline sahip tanenler, fenolik asitler ve flavonoidler gibi sekonder metabolitlerin diabetes mellitus tedavisinde daha etkili olduğunu göstermiştir [7]. Bu nedenle, serbest radikalleri etkili bir şekilde temizleyen ve enzimatik olmayan glikasyonu azaltan yeni fitokimyasal kaynaklarının belirlenmesi büyük ilgi görmektedir.

Ephedra fragilis, altı kıtada her iki yarım kürede çöl ve yarı kurak koşullarda yetişen 60'tan fazla türü içeren Ephedra cinsinin (Ephedracea ailesi) bir üyesidir [8]. 5000 yıldan fazla bir süredir, Ephedra cinsindeki birçok tür, çeşitli hastalıkların tedavisi için geleneksel Çin tıbbında (TCM) yaygın olarak kullanılmaktadır; anti-inflamatuar [9, anti-invaziv, anti-anjiyojenik, [10], antimikrobiyal, antiproliferatif, pro-apoptotik[11], nöroprotektif [12], hepatoprotektif ve anti-inflamatuar gibi çoklu sağlık yararlarını bildiren birkaç çalışma vardır. -oksidan özellikler [13]. Efedra bitkilerindeki flavonoidler, alkaloidler, fenolik asitler ve diğer bileşikler, bu farmakolojik özellikler için ana fitokimyasal bileşenler olarak kabul edilmiştir [14]. Farmasötik endüstrisinde, ters fazlı yüksek performanslı sıvı kromatografisi (RP-HPLC), farklı hidrofobik özelliklerine dayalı olarak kimyasal bileşikleri tespit etmek ve tanımlamak için analitik bir yöntem olarak yaygın olarak kullanılmaktadır, ancak literatürde kimyasal analiz için çok az çalışma tanımlanmıştır. Efedra türleri.

Bu biyoaktif bileşiklerin farklı bitki kaynaklarından ekstraksiyonu, kalitatif ve kantitatif analizlerinde yer alan ilk önemli adımdır [15]. Farklı faktörler örn. ekstraksiyon yöntemi, solvent tipi ve konsantrasyonu, sıcaklık, süre ve diğerleri, bu bileşiklerin kompozisyonunu ve ekstraksiyon hızını önemli ölçüde etkileyebilir [16]. Bu nedenle, yüksek miktarda bitkisel aktif bileşik elde etmek için ekstraksiyon proseslerinin optimizasyonu gereklidir. İlk olarak 1950'lerde Box ve Wilson tarafından geliştirilen yanıt yüzeyi metodolojisi (RSM), günümüzde bağımsız faktörlerin istenen yanıt üzerinde birleşik bir etkiye sahip olduğu bu tür süreçleri gerçekleştirmek, geliştirmek ve optimize etmek için en yaygın olarak kullanılan araçtır. RSM'de araştırmacılar tarafından en sık seçilen tasarımlardan biri Box-Behnken tasarımıdır (BBD)çünkü sınırlı bir denemeye ihtiyaç duyar ve bu nedenle uzun süreli deneylerden kaçınan ve masrafları azaltan bir alternatifi temsil eder [17-19].

Literatürde bugüne kadar E. fragilis biyoaktif bileşiklerinin ekstraksiyon optimizasyonu ile ilgili herhangi bir çalışma bulunmamaktadır. Bu nedenle, bu çalışma, bir BBD uygulayarak toplam fenolik (TP) ve flavonoid (TF) içeriğinin E.fragilis'ten ekstraksiyonunu optimize etmeyi amaçlamıştır. Optimum ekstraksiyon koşulları altında elde edilen ham etanol ekstraktı (CEE), artan polariteye sahip solventler ile ardışık olarak fraksiyonlandı ve farklı in vitro testler kullanılarak antioksidan ve antiglikasyon aktiviteleri araştırıldı. Son olarak, ters fazlı yüksek performanslı sıvı kromatografisi (RP-HPLC) ile tanımlanan EAE'deki biyoaktif bileşiklerin hedef proteinler olarak BSA ve RAGE'ye bağlanma mekanizmalarını daha iyi anlamak için in silico analizi gerçekleştirdik.

2. Sonuçlar ve Tartışma

2.1. Modellerin Takılması

RSM with a BBD was applied to investigate the effect of ethanol concentration (%, Xj), temperature(°C, X2), and time (h, X3)on the extraction yield of TP and TF from E. fragilis. The results of 15 trials after the BBD are given in Table 1. Analysis of variance(ANOVA)(Table 2) indicates that the models were significant as evidenced by F and p-values. The coefficient of multiple determinations (R')of the models were 0.9935 and 0.9939 for TP and TF, respectively, suggesting that only 0.65 and 0.61%of the total variations are not explained by the models. A comparable value of adjusted R2 to R2 represents an excellent statistical model. As given in Table 2, the adjusted R2(0.9818 and 0.983 for TP and TF contents, respectively) is close to R2, which means that the insignificant terms were not included in the models. Moreover, predicted R2(0.9012 and 0.9338 for TP and TF contents, respectively) is in reasonable agreement with adjusted R2 and confirms that the models are highly significant. The"fitness" of the models was also confirmed using the lack of fit test The insignificant p-value for lack of fit (p >{{0}}.05) iki yanıt için, sonuçlardaki varyasyonun doğru bir şekilde tahmin edilmesi için modellerin uygunluğunu gösterir [20]. İyi bir kesinlik, istenen olarak kabul edilen 4'ten büyük bir sinyal-gürültü oranı olarak tanımlanır [21]. TP ve TF içerikleri için yeterli kesinlik değerleri sırasıyla 29.4772 ve 28.729'dur ve yeterli bir sinyal olduğunu gösterir. Aynı zamanda, varyasyon katsayısının (CV yüzdesi) daha küçük değerleri (sırasıyla TP ve TF içerikleri için yüzde 1.52 ve 0.4246), deneysel değerlerin daha iyi kesinliğini ve güvenilirliğini gösterir. Her tepki faktörü için, XI(etanol konsantrasyonu), X2 (ekstraksiyon sıcaklığı) ve X3 (ekstraksiyon süresi) ekstraksiyon faktörlerinin etkisi dikkatlice incelendi (Tablo 2). Daha büyük bir F-değeri ve daha küçük bir p-değerinin her zaman çeşitli bağımsız değişkenler arasında daha anlamlı yazışmalara yol açtığı göz önünde bulundurularak, her katsayının önemi F ve p-değerleri kullanılarak test edildi [22]. Toplu olarak, bu sonuçlar modellerin tekrarlanabilir olduğunu ve optimizasyon için uygun olduğunu gösterdi.

2.2. Çıkarım Değişkenlerinin TP İçeriğine Etkileri

Tablo 2'de verildiği gibi, ANOVA sonuçları, TP içeriği üzerinde önemli doğrusal (X ve X2), ikinci dereceden (Xj, X5 ve X) ve etkileşimli (X1X ve X2X3) etkiler göstermiştir. Bunlar arasında, TP içeriği esas olarak X'e bağlıdır, p'de X3<0.001 followed="" by="" x1="" and="" x1x,="" at=""><0.01. the="" following="" second-order="" polynomial="" equation="" could="" be="" used="" to="" express="" the="" relationship="" between="" tp="" content="" and="">

Uyum eksikliği değeri anlamlı değildi (F-değeri =11.02, p-değeri=0.0843), bu da modelin iyi bir tahminle (R{ {9}}.9935; Adj R2=0.9818)(Tablo 2).

Etanol konsantrasyonu ve ekstraksiyon sıcaklığı (XjX2) arasındaki etkileşimler, oldukça önemli bir(p) üretir.<0.01)effect on="" tp="" content="" (table2).="" as="" ethanol="" concentration="" (x1)="" and="" extraction="" temperature="" (x)increase="" in="" the="" range="" of="" 40-61.80%="" and="" 25-44.30°c="" respectively,="" the="" tp="" content="" increases="" rapidly.="" however,="" beyond="" 61.80%and="" 44.30°c,="" tp="" content="" decreases="" slightly(figure="" 1a).="" however,="" the="" interaction="" of="" the="" extraction="" temperature="" and="" extraction="" time="" (x2x3)showed="" a="" highly=""><0.001) effect="" on="" tp="" content="" (table="" 2).="" as="" shown="" in="" figure="" 1b,="" tp="" content="" slightly="" improved="" with="" increasing="" extraction="" temperature="" (x2)and="" extraction="" time="" (x3)up="" to="" 44.37℃c="" and="" 15.77="" h,="" respectively,="" but="" diminished="" slowly="">

Bu etkiler, fenolik bileşiklerin, glikozitlerle doğal olarak oluşan ve onları suda daha fazla çözünür hale getiren polar moleküller olmasından kaynaklanabilir [23]. Fenolik bileşiklerin ekstraksiyonu çözücü polaritesine güçlü bir şekilde bağlı olduğundan, bir su-alkol karışımı ekstraksiyonunda tek başına alkolden daha etkilidir [20]. "Benzer-çözünür-benzeri" ilkesine göre, etanol konsantrasyonundaki bir azalma, çözücünün polaritesinde bir artışa yol açar, bu da TP'nin çözülmesine yardımcı olur[15]. Bununla birlikte, yüksek etanol konsantrasyonu fenolik bileşiklerin çözünmesini önleyerek ekstraksiyon hızını etkileyebilir. Benzer şekilde, ekstraksiyon sıcaklığındaki bir artış, dokuları yumuşatarak hedef fenolik bileşiklerin geri kazanımını arttırdı, hücre duvarı bütünlüğünü zayıflattı, kütle transferini ve çözücünün bitki matrisine nüfuzunu arttırdı ve hem çözünürlüğü hem de difüzyon oranını arttırdı; bununla birlikte, uzun bir ekstraksiyon süresi için çok yüksek sıcaklıklar, bozunma şanslarını artırabilir [23]. Ayrıca, uzun bir ekstraksiyon periyodunun, oksijen ve ışığa maruz kalmayı potansiyel olarak uzattığı ve sonuçta fenolik bileşikler tarafından temizlenebilen serbest radikal oluşumu riskini arttırdığı bulunmuştur [23]. Bu nedenle, ekstraksiyon verimini en üst düzeye çıkarmak için uzun bir ekstraksiyon süresi yardımcı olmadı [24].

2.3.Çıkarma Değişkenlerinin TF İçeriğine Etkileri

Tablo 2'den de anlaşılacağı gibi, X ve X3'ün doğrusal etkileri; X ve X'in ikinci dereceden etkileri; ve X1X2 ve XjXg'nin etkileşim etkisi, TF içeriği üzerinde önemli etkiler göstermiştir. Tüm önemli faktörler arasında, TF esas olarak p'de X3,X,X,X ve X1X2'ye bağlıdır.<0.001 followed="" by="" x="" andx1x3="" at=""><0.01. the="" fitted="" second-order="" polynomial="" of="" tf="" content="" is="" as="">

Uyum eksikliğinin anlamlı olmayan değeri(F-değeri=1.13; p-değeri=0.5024), önerilen modelin, değişkenlerin uzamsal etkisine iyi yanıta uyduğunu ileri sürdü. tahmin (R2=0.9939; Adj R2= 0.9830) (Tablo 2).

TF içeriği için çeşitli 3B yanıt yüzey grafikleri oluşturulmuş ve Şekil 1D-F'de gösterilmiştir. Etanol konsantrasyonunun ve ekstraksiyon sıcaklığının (X1X2) etkileşim etkisi, önemli bir(p) gösterdi.<0.001) effect="" on="" tf="" content.="" from="" figure="" 1d,="" tf="" content="" increased="" at="" first="" and="" then="" decreased="" quickly="" with="" the="" rise="" of="" the="" two="" parameters,="" and="" a="" maximum="" tf="" content="" was="" achieved="" when="" ethanol="" concentration="" (xj)="" and="" extraction="" temperature="" (xo)were="" 61.89%="" and="" 44.23°c,="" respectively.="" this="" phenomenon="" is="" similar="" to="" tp,="" which="" might="" also="" be="" attributed="" to="" the="" fact="" that="" a="" rise="" in="" the="" extraction="" temperature,="" the="" solubility,="" extraction="" rate,="" and="" diffusion="" rate="" increase,="" which="" ultimately="" helps="" tf="" to="" dissolve="" insolvent="">

Benzer şekilde, etanol konsantrasyonu ve ekstraksiyon süresi (XIX3) arasındaki etkileşim de benzer bir korelasyon gösterdi (Şekil 1F). TF'nin ekstraksiyon verimi, hem etanol konsantrasyonunun (Xj) hem de ekstraksiyon süresinin (X3) artmasıyla kademeli olarak arttı. Yanıt grafiğinin orta noktasına yakın (sırasıyla X ve X3 için yüzde 61.89 ve 15.81 saat), TF verimi en yüksek değerine ulaştı ancak daha sonra yavaş yavaş azaldı. Bu fenomen büyük olasılıkla Fick'in katı matristeki çözelti konsantrasyonu ile çözücü arasındaki nihai dengenin belirli bir süre sonra elde edileceğini ve hedef bileşiklerin ekstraksiyon veriminde bir yavaşlamaya yol açacağını ortaya koyan ikinci difüzyon ilkesi kanunundan kaynaklanmaktadır [26]. .

2.4. Optimize Koşulların Doğrulanması

Optimizasyonun amacı, aynı anda en yüksek TP ve TF içeriğini sağlayacak ekstraksiyon koşullarını belirlemekti. Optimizasyonu gerçekleştirmek için tasarım uzmanı yazılımı kullanılmıştır. BBD, E. fragilis biyoaktif bileşiklerinin ekstraksiyonu için optimal etanol konsantrasyonunun, ekstraksiyon sıcaklığının ve süresinin sırasıyla yüzde 61.93, 44.43 derece ve 15.84 saat olmasını önerdi. Bu optimal noktada, öngörülen TP ve TF içerikleri sırasıyla 15.335 mg GAE/g dw ve 2.972 mg OE/g dw idi(Tablo3). Modellerin tahmin kapasitesinin doğrulaması, RSM'den elde edilen optimal koşullar altında deneysel olarak gerçekleştirilmiştir. Deneyler, elde edilen koşullar altında üç kopya halinde gerçekleştirildi ve ortalama TP ve TF içerikleri sırasıyla 14.98±0.29GAE/g DW ve 2.92±0.09 QE/g dw idi. Araştırılan yanıtların deneysel değerleri karşılaştırılabilir ve modellerin beklenen optimizasyonu yansıtmak için yeterli olduğunu doğrulayan tahmin edilen değerlerle uyumludur.

2.5. Ekstraksiyon Verimi ve Fitokimyasal Analiz

Tablo 4, E.fragilis CEE ve fraksiyonlarının ekstraksiyon verimini gösterdi. Sonuçlarımız, farklı fraksiyonlardaki ekstraksiyon veriminin yüzde 0,78 ile 10,6 (a/iki) arasında önemli ölçüde farklılık gösterdiğini gösterdi. Tablo 4'te gösterildiği gibi, CEE(1{{14}) },6 yüzde )en yüksek verim yüzdesine sahipti, bunu WF (yüzde 2,73), WBF (yüzde 2,04), DMF(yüzde 0,64) ve EAF(yüzde 0,93), HF(yüzde 0,78) izledi. ) en düşük yüzde verimine sahipti.

E. fragilis CEE'nin TP içeriği ve fraksiyonları, kalibrasyon eğrisinin (y {{0}}) bir regresyon denklemi ile belirlendi.009x-0.{{ 25}}154; R2=0.9973) ve kuru ağırlığın gramı başına miligram gallik asit eşdeğeri (GAE) olarak ifade edilir (Tablo 4). Genel olarak, EAF en yüksek TP içeriğine (32.78±0.49 mg GAE/g DW) sahipti ve bunu sırasıyla WBF, DMF ve CEE (25.02±1.01,19.21±0.22 ve 14.98±0.29 mg GAE/g) izledi. DW), oysa WF ve HF en düşük içerikleri sundu (sırasıyla 10.47±0.71 ve 8.14±0.17 mg GAE/g DW). E. fragilis CEE'nin TF içeriği ve fraksiyonları, alüminyum klorür kolorimetrik deneyi kullanılarak değerlendirildi.kuersetinas a standard (y=0.0295x+0.0361; R2=0.9986)(Table 4). Similar to the TP content, the same results were observed in the TF content with the highest and lowest content being detected in the EAF(10.50 ± 0.11 mg OE/g of DW)and HF(1.65± 0.13 mg OE/g of DW), respectively. The TF content is arranged as the following sequence: EAF>WBF>DMF> CEE>WF>HF. İlginç bir şekilde, EAF'deki TP ve TF içerikleri, CEE'ninkinden 2.18 ve 3.59-kat daha yüksekti; bu, etil asetatın, CEE fraksiyonasyonu sırasında daha fazla mevcut fenolik ve flavonoid bileşiklerini konsantre etmek için uygun çözücü olabileceğini düşündürdü. TP ve TF içerikleri ile ilgili verilerimiz Yao ve ark. [27], tıbbi bitki Pyrola asarifolia'dan elde edilen EAF'nin diğer fraksiyonlara (petrol eteri, n-butanol ve su) kıyasla en yüksek fenolik ve flavonoid seviyelerine sahip olduğunu bildirmiştir. Çalışmalarında, Bhardwaj ve ark. [28] ayrıca, bir tıbbi bitki Codonopsis clematidea'nın parçalanmasında artan polariteye sahip çeşitli çözücüler (n-heksan, kloroform, etil asetat ve n-butanol) kullanıldığında da benzer sonuçlar bildirmiştir. Bu yazarlara göre, EAF en yüksek TP ve TF içeriğine sahiptir ve onu uzaktan n-butanol, kloroform ve heksan izlemektedir. Fraksiyonlar arasında fenolik bileşiklerin ekstraksiyon verimi, bileşimi ve saflığındaki bu önemli farklılık, muhtemelen bitki materyallerinde bulunan bileşenlerin polaritesindeki farklılıklar, kimyasal yapıları, polimerizasyon dereceleri ve birbirleriyle etkileşimlerinden kaynaklanmaktadır [29]. ].

2.6. In Vitro Antioksidan Aktivite

2.6.1.DPPH"Temizleme Faaliyeti

DPPH", bitki özlerinin antioksidan potansiyelini araştırmak için yaygın olarak kullanılan birkaç kararlı serbest radikalden biridir. .

DPPH*serbest radikal üzerinde farklı dozlarda CEE/fraksiyonların ve ayrıca VC'nin süpürme kapasitesi incelenmiştir. Şekil 2A, tüm fraksiyonların doza bağlı bir şekilde 0.1 ila 1 mg/mL aralığında bariz DPPH.süpürme aktivitesi sergilediğini göstermektedir.1 mg/mL'lik bir dozda,64.32,44.1{{22} },67.24,86.63,80.95,51.37 ve DPPH" radikalinin yüzde 99.62'si sırasıyla CEE, HE, DMF, EAF, WBF, WF ve VC tarafından söndürüldü. Tüm fraksiyonlar arasında "DPPH'yi taramak için en düşük IC50 EAF(0.116±{{30}}) ile gösterildi.015 mg/mL )WBF (0.175 ± 0.03 mg/mL), CEE (0.23 ± 0.065 mg/mL) ve DMF (0,297) ile devam edildi ±0.044 mg/mL).WF ve HF, sırasıyla (0.964±0.178 ve 1.245±0.105 mg/mL) nispeten daha yüksek IC50 değerleri gösterdi.

Observed differentials in the scavenging activities of the fractions against the DPPH*radical may be assigned to the structural characteristics and the number of phenolic compounds present in each fraction. Similar results were observed in the medicinal plant Liquidambar formosana Hance leaf since the EAF was more effective than the other fractions (dichloromethane, n-butanol, and water fractions)[31]. As a standard molecule, ascorbic acid (VC) displayed the lowest IC50 value (0.039 ±0.009 mg/mL) in comparison to all fractions. The scavenging potential is in decreasing order of VC>EAF> WBF>DMF >CEE>WF>HF.

DPPH radikal süpürme için IC50 değeri, her iki TP içeriğiyle (r=0.963;p) ilişkili olarak önemli ölçüde pozitifti<0.01) and="" tf="" content(r=""><0.01)as presented="" in="" table="" 5.="" therefore,="" the="" discovered="" antioxidant="" activity="" suggested="" that="" eaf="" can="" be="" a="" source="" of="" numerous="" natural="" compounds="" with="" antioxidant="" properties="" that="" can="" act="" as="" hydrogen="" donors="" to="" terminate="" the="" process="" of="" oxidation="" by="" converting="" the="" free="" radicals="" to="" their="" stable="">

2.6.2.ABTS· artı Atma Etkinliği

ABTS süpürme tahlili, doğal özütlerin yanı sıra saf bileşiklerin antioksidan kapasitesini bilgilendirmek ve araştırmak için bir indeks olarak yaygın olarak kullanılmaktadır [32,33]. ABTS* kromoforunun mavi/yeşil renginin 734'te bitki özü varlığında solması, bir antioksidan aktiviteyi gösterebilir.

Şekil 2B'de gösterildiği gibi, ABTS* plus üzerindeki CEE/fraksiyonların süpürme eğrisi, konsantrasyon arttıkça yukarı yönlü bir eğilim sergiledi. 1 mg/mL'de, CEE, HF,DMF,WBF,EAF, WF ve VC'nin süpürme oranları 80.31,40.54,88.76, 9{{2{ idi. sırasıyla yüzde {22}}}}.11,82.97, 67.36 ve 94,90. Tüm kesirler arasında minimum ICs0 değeri EAF(0.11{{30}}±0) ile gösterildi.014 mg/ mL) ile devam edildi DMF(0.196±0.023 mg/mL),WBF (0.277±0.031 mg/mL), CEE(0.429 ± 0.039 mg/mL) ve WF(0.654± 0.043 mg/mL), HF ise en yüksek ICs0 değerini (1.314± 0.104 mg/mL) sergiledi. Toplu olarak, bu bulgu Kaewseejan ve Siriamornpun'un [29] bulgularıyla uyumluydu. VC'nin (0.025±0.005 mg/mL) inhibe edici kapasitesi ile karşılaştırma, CEE ve fraksiyonlarının süpürme aktivitesinin biraz zayıf olduğunu gösterdi.

Tablo 5'te gösterildiği gibi, ABTS radikal süpürme ile TP içeriği arasında oldukça önemli bir korelasyon (r=0.921;p<0.01), and="" a="" significant="" correlation="" with="" tf="" content="" (r=""><0.05), were="" shown.="" this="" finding="" confirms="" the="" results="" obtained="" for="" the="" dpph*scavenging="" assay,="" proving="" the="" capacity="" of="" eaf="" to="" scavenge="" free="">

2.6.3. H2O2 Temizleme Aktivitesi

Oksidatif strese başlıca katkıda bulunan H2O2, bir haberci molekül olarak zar boyunca hücrelerden kolayca yayılır [34]. Birlikte ele alındığında, H2O2'nin kendisi tehlikeli değildir [35], ancak Fenton reaksiyonu yoluyla Fe2 ile reaksiyona girebilir ve oldukça reaktif hidroksil radikaline (OH*)[36] yol açar. Bu nedenle, ROS'un biyomoleküllere en çok zarar verenidir. Bu nedenle, CCE'nin ve onun çeşitli fraksiyonlarının H2O2'yi temizleme yeteneğini değerlendirmek gereklidir.

Scavenging activities of CEE/fractions, as well as standard antioxidants, were presented in Figure 2C. Notably, all extracts showed a strong scavenging activity on HO, which increased with the increase of sample doses ranging from 0.1 to 1 mg/mL. Moreover, the H2O2 scavenging potential decreased in the order of EAF> WBF>DMF>CEE>WF>HF ve 1.0 mg/mL'de karşılık gelen süpürme yetenekleri sırasıyla yüzde 84.56,75.24, 67.17.56.18, 50.19 ve 34.95 idi ve bunlar VC'den çok daha düşüktü (yüzde 98.03).

Tüm fraksiyonlar arasında EAF, en düşük IC50 değerini (ICs0= 0.098±0.013 mg/mL) gösterdi ve bu değer, VC (0,024±0,006 mg/mL). Bunun nedeni, biyolojik sistemlerde antioksidanlar olarak çok önemli bir rol oynadığı yaygın olarak bilinen EAF'deki yüksek fenolik ve flavonoid bileşiklerin varlığı olabilir. Son çalışmamızda, E.fragilis kaynaklı EAF'nin Tetrahymena pyriformis'i H2O2-indüklediği oksidatif hasara karşı koruma kapasitesini gösterdik [37].

Veri analizimiz, DPPH" ve ABTS* artı sonuçlarında olduğu gibi, her iki TP içeriğiyle de H2O2 süpürme için ICs0 değerinin güçlü bir pozitif korelasyonunun kaydedildiğini gösterdi (r=0.926; p<0.01) and="" tf="" content="" (r=""><0.01)(table 5).="" in="" their="" study,="" sroka="" and="" cisowski="" [38]="" reported="" also="" a="" positive="" correlation="" between="" phenolic="" compounds="" with="" ho2-scavenging="" ability.="" according="" to="" these="" authors,="" the="" ho2-scavenging="" depended="" strongly="" on="" the="" number,="" positions,="" and="" the="" model="" of="" substitution="" of="" oh="" bonded="" to="" the="" aromatic="" ring="" of="" phenolic="">

2.6.4. Gücü azaltmak

Bir özütün indirgeme gücü, potansiyel antioksidan aktivitesinin bir göstergesi olarak işlev görür [39, A40]. Antioksidan potansiyeli, antioksidanların demir klorürdeki demiri(Fe3) demiri (Fe2 plus ) demire indirgeme kapasitesi ile tahmin edilir. Genel olarak, indirgeme özellikleri, bir hidrojen atomu bağışlayarak serbest radikal zincirini kırarak eylemlerini gerçekleştirdikleri kabul edilen redüktonların bitki özütlerindeki varlığına atfedilir [41].

Şekil 2D, E. fragilis ekstraktlarının indirgeme gücü için doz-tepki eğrisini göstermektedir. 700 nm'de absorbans ne kadar yüksekse, indirgeme kabiliyetinin o kadar büyük olduğu bilinmektedir. Mevcut çalışmada, CEE ve onun beş fraksiyonu, konsantrasyona bağlı bir şekilde önemli ölçüde indirgeme gücü sergiledi.

EAF, VC(EC{{4) ile karşılaştırıldığında maksimum antioksidan aktivite (EC{{0}}.136± 0.{{10}}13 mg/mL) gösterdi. }}.083± 0.005 mg/mL). Bunu yakından takip eden WBF (EC50=0.180 ± 0.028 mg/mL), DMF (EC50=0.319 ± 0.031 mg/mL), CEE (EC50=0.334±0.029mg/mL) ve WF(EC50=0.398±0.064 mg/mL) .HF, diğer fraksiyonlara kıyasla minimum indirgeme gücü etkinliği (EC5s0 =00,626±0,068 mg/mL) göstererek geride kaldı. Bu bulgular, EAF'nin etkili ve güçlü bir indirgeme gücü aktivitesine sahip çeşitli bireysel bileşikler içerebileceğini düşündürmektedir. Bilim adamları, etil asetat özlerinin güçlü antioksidanlar olarak hizmet edebileceğini bulmuşlardır [42].

İndirgeme gücü ile hem TP hem de TF içerikleri arasında pozitif korelasyon gözlemlendi (r=0.975; p<0.01 and="" r="0.987;"><0.01; respectively).these="" correlations="" confirmed="" the="" contribution="" of="" phenolic="" compounds="" in="" the="" reducing="" power="">

2.6.5. Fosfomolibden Testi

CEE ve fraksiyonlarının yanı sıra VC'nin TAC'si, fosfo-molibden tahlili kullanılarak değerlendirildi ve 0.5 absorbans sağlayan konsantrasyon olan ECs0 olarak ifade edildi. Yöntem, 695 nm'de maksimum absorpsiyon ile asidik pH'da yeşil bir fosfat/Mo (V) kompleksi oluşturmak için özütler tarafından Mo(VI)'nın Mo(V)'ye indirgenmesine dayanıyordu [43].

As shown in Figure 2E, the total antioxidant capacity of CCE/fractions and VC correlated well with increasing concentrations in the range of 0.1 to 1 mg/mL.Of the CEE fractions, the ECs0 values ranged from 0.159±0.019 to 0.604±0.073 mg/mL, with a descending order of EAF>WBF> DMF> CEE >WF>HF(p<0.05), which="" indicates="" that="" eaf="" and="" hf="" had="" the="" highest="" and="" lowest="" antioxidant="" activity,="" respectively.="" this="" activity="" could="" be="" due="" to="" the="" presence="" in="" eaf="" of="" various="" phenolic="" compounds="" that="" might="" possess="" antioxidant="" activity.="" vc,="" which="" is="" the="" positive="" control,="" displayed="" the="" lowest="" ec5o="" value="" (0.095±="" 0.008="" mg/ml)="" in="" comparison="" to="" all="">

Toplam antioksidan aktivite ile hem TP içeriği hem de TF içeriği arasında oldukça anlamlı bir korelasyon gözlemlendi (her ikisi için r=0.978;p<0.01) and="" is="" shown="" as="" presented="" in="">

2.6.6. -Karoten-Linoleat Model Sistemi

-karoten-linoleik asit modelinde, yüksek oranda doymamış-karoten molekülleri, linoleik asidin oksidasyonu ile üretilen linoleat serbest radikalleri nedeniyle hızlı renk değişimine uğrar [44]. Antioksidanlarla takviye, linoleat serbest radikallerini nötralize ederek ve böylece -karoten ağartmasını önleyerek -karoten oksidasyonunu en aza indirebilir [45].

Antioxidant activity of CCE/fractions and BHT, as measured by the β-carotene-linoleate model, are shown in Figure 2F. All tested extracts showed concentration-dependent scavenging activity. The EAF, which contained the highest amount of phenolics and flavonoids contents, showed a significant effect in inhibiting β-carotene bleaching, reaching 74.75%at a concentration of 1mg/mL. WBF, CCE, DMF, HF, and WF inhibited the oxidation of β-carotene by 51.61,58.12,50.09,41.39, and 31.66% respectively, at the same concentration. Overall, decreasing antioxidant activity was depicted as EAF> WBF> CEE>DMF>HF>WF.

EAF, BHT'ye (IC'ler { {5}}.049 ± 0.001 mg/mL). WBF. CCE. DME. BİZ. ve HF, 0.5±0.111 mg/mL, 0.998 ± 0.101 mg/mL, 1.073± 0.084 mg/mL, 1.402±0.058 mg/mL gibi nispeten daha yüksek ICs0 değerleri gösterdi ve Sırasıyla 2.209±0.081 mg/mL.

-karoten oksidasyon süpürme ile hem TP içeriği (r= 0.850;p) arasında pozitif yönde anlamlı bir korelasyon gözlemlendi.<0.05) and="" tf="" content="" (r=""><0.05)(table 5).="" this="" result="" suggests="" that="" eaf="" may="" contain="" some="" antioxidants="" that="" can="" inhibit="" the="" formation="" of="" hydroperoxide="" and="" stop="" the="" radical-chain="" reaction="">

The involvement of reactive oxygen species (ROS) in several pathological situations has been growing recently. Bioactive compounds are gaining interest thanks to their potent antioxidant activity, but their complexity imposes the development of many methods to evaluate the antioxidant activity and the effectiveness of these chemical compounds. Thus, in this study, CEE and its fractions have been investigated for their antioxidant potential using six assays: DPPH, ABTS, H>O, RP, TAC ve -karoten. Bu nedenle, CEE'nin ve fraksiyonlarının güçlü antioksidan aktivitelerinin daha yüksek temizleme aktiviteleri sergilediğini ve bunun güçlü bir şekilde fenolik asit ve gallik asit, rutin ve kersetin gibi flavonoidlerden oluşan bileşimlerinden kaynaklanabileceğini gösterdik.