Cistanche'den gelen ekinakozit, Parkinson hastalığı olan hastalara nasıl fayda sağlar?

İletişim: emily.li@wecistanche.com

Bölüm Ⅲ:Echinacoside Tarafından MTOR Sinyal Yolu Aracılığıyla MPTP ile İndüklenen PD Farelerde Otofaji Düzenleme Mekanizması

BURAYA TIKLAYINBÖLÜMⅠ & BÖLÜM Ⅱ

OluşumuParkinson hastalığı(PD) birçok faktörle ilişkilidir, ancak ana patolojik mekanizmalar oksidatif stres, mitokondriyal disfonksiyon ve anormal protein agregasyonuna odaklanıyor gibi görünmektedir. Tüm bu mekanizmalar otofaji ile yüksek oranda ilişkilidir.16 Canlı organizmalar için otofaji önemli bir rol oynar. Yanlış katlanmış proteinlerin, anormal şekilde kümelenmiş proteinlerin ve hasarlı organellerin çıkarılmasında önemli bir rol oynar. Otofajinin yukarı regülasyonunun PD'de hastalıkla ilgili bazı proteinleri ortadan kaldırabileceği bildirilmiştir. (Parkinson hastalığı)-synuclein, ubiquitin ve diğer yanlış katlanmış proteinler gibi, böylece PD insidansını azaltır (Parkinson hastalığı). Bu arada, çalışmalar ayrıca otofajinin aşağı regülasyonunun mitokondriyal işlev bozukluğuna, mitokondriyal yırtılmaya, çözünmeyen SNCA/-sinüklein ve ubikuitin proteinlerinin birikmesine yol açabileceğine işaret etmiştir.10 Bu nedenle, normal işlevi sürdürmek için otofajiyi düzenlemek önemlidir.

Cistanche Anti Parkinson Hastalığı hakkında daha fazla bilgi için buraya tıklayın

Araştırma grubumuzun ön çalışmaları da hem Vivo hem de Vitro çalışmalarında doğrulanmıştır.Ekinakozitbelirli bir nöroprotektif etkiye sahipti9,20-23 ve -sinüklein ekspresyonunu azaltabilir. Spesifik mekanizmayı daha fazla araştırmak içinEkinakozit-sinükleinin temizlenmesinde, MPTP'nin neden olduğu PD'de ECH'nin nöroprotektif mekanizması hakkında daha derinlemesine bir çalışma yaptık. (Parkinson hastalığı) otofaji açısından fareler. Bu çalışmada öncelikle her grubun farelerindeki nörodavranışları değerlendirildi. M grubu ile karşılaştırıldığında, EH grubundaki farelerin tırmanma süresinin önemli ölçüde daha kısa olduğu ve düşme gecikmesinin ve ön ve arka uzuvların adım uzunluğunun önemli ölçüde uzadığı bulundu. EH grubundaki farelerde otonom aktivite yeteneği de önemli ölçüde arttı. HPLC'nin sonuçları, EH grubunda, M grubuna kıyasla monoamin nörotransmitterlerinin içeriğinin, özellikle DA ve DOPAC ekspresyonunun önemli ölçüde arttığını gösterdi. Western blot sonuçları, aynı zamanda, substantia nigra'da TH ekspresyonunun, M grubuna kıyasla EH grubunda belirgin şekilde arttığını ortaya koydu. Yukarıdaki nörodavranışsal işlevler CQ grubunda ve WO grubunda önemli ölçüde kötüleşirken, DA ve TH içeriği de EH grubundan önemli ölçüde düşüktü ve ölüm oranı önemli ölçüde yüksekti. Bu çalışmanın sonuçlarına göre, otofaji inhibitörü gruplarındaki ölüm oranı diğer gruplara göre daha yüksekti. CQ grubunda ölüm oranı yüzde 28, WO grubunda yüzde 12 iken diğer gruplarda ölüm olmadı. Otofaji inhibitörlerinin etkisini doğrulamak içinEkinakozit, -sinükleinin protein immünoblotlaması ile birlikte TH'nin çift immünofloresansı ve -sinüklein boyaması, -sinükleinin ekspresyonunu gözlemlemek için benimsenmiştir. Sonuçlar doğruladıEkinakozitM grubu ile karşılaştırıldığında -sinüklein ekspresyonunu önemli ölçüde azalttı. Bununla birlikte, otofaji inhibitörlerinin uygulanmasıyla, -sinüklein ekspresyonu keskin bir şekilde arttı. Çalışmalar, MPTP'nin toksik etkilerinin, -sinüklein nakavt farelerinin MPTP'nin toksisitesine karşı yüksek derecede tolerans göstermesi nedeniyle, -sinükleinin görünümü ile yakından ilişkili olduğuna işaret etmiştir.24 Bu, dolaylı olarak MPTP ile indüklenen PD (Parkinson hastalığı) fare modellerinde, -sinüklein ifadesi ne kadar yüksekse, MPTP'nin fareler üzerindeki toksik etkisi o kadar güçlüdür. Bu çalışmada, otofaji inhibitörü grubundaki farelerin ölüm oranı, diğer gruplardakinden önemli ölçüde daha yüksekti; bu, artan -sinüklein ekspresyonu ve MPTP'nin toksik etkilerine karşı toleransın azalması ile ilişkili olabilir. Bu nedenle, nöroprotektif etkisinin olduğu sonucuna vardık.Ekinakozitotofajinin teşviki ile ilişkili olabilir ve otofaji inhibitörleri, farelerin ölümü ile ilişkili olabilecek a-sinüklein ekspresyonunu önemli ölçüde artırabilir.

Otofajinin anahtar bir belirteci olarak, mikrotübül ile ilişkili protein 1'in (LC3) hafif zinciri 3, immünofloresan veya Western blot ile otofaji oluşumunu tespit etmek için yaygın olarak kullanılır. SQSTM1 olarak da bilinen P62, bir hastalığın patogenezinde rol oynar. çeşitli nörodejeneratif hastalıklar. Ubiquitin proteinlerini LC3'e bağlayabilir ve otofaji yoluyla bozunabilir. P62'nin protein ekspresyon seviyesi, otofaji akışının tamamlandığını yansıtabilir.2EkinakozitMPTP ile indüklenen otofajidePD (Parkinson hastalığı) farelerde, Beclin 1, LC3 ve P62 gibi otofaji ile ilgili göstergelerin ifadesi, her gruptaki farelerde ölçülmüştür. Beclinl ve LC3-Ⅱ ifadelerinin, M grubunda, N grubuna kıyasla önemli ölçüde arttığı ve otofagozomların sayısında belirgin bir artış olduğu bulundu. Bunlar, M grubundaki farelerde otofaji seviyesinin arttığını gösterdi. Ancak otofajinin artmasıyla P62 düzeyi düşmedi. Bunun yerine, önemli ölçüde arttı ve tüm otofaji sürecinin normal şekilde tamamlanmadığını gösterdi. Bu, MPTP grubunda, literatürdeki raporlarla tutarlı olan bariz bir otofajik akış bozukluğu olduğu anlamına geliyordu.26,27 Rapamisin, lizozomların sentezini artırabilir ve otofagozomların temizlenmesini teşvik edebilir. Bu çalışmada, klasik otofaji indükleyici rapamisin pozitif kontrol olarak kabul edildi ve klasik otofaji inhibitörleri klorokin ve wortmannin kontrol olarak kullanıldı. LC3'ün ekspresyon seviyesini gözlemlemek için immünofloresan ve Western blot kullanıldı. Beclin I'in ifadesi Western blot ile ölçüldü ve her bir fare grubundaki otofagozomların ifadesi, bir transmisyon elektron mikroskobu ile gözlemlendi. Sonuçlar, M grubu ile karşılaştırıldığında, Beclinl ve LC3-II ifadelerinin M grubuna göre arttığını ortaya koydu.Ekinakozitgrubu ve RA grubu, P62 ve -sinüklein seviyeleri önemli ölçüde azalırken, bu iki grupta otofajik akış bozukluğunun MPTP ile indüklenenden önemli ölçüde iyileştiğini gösterir.PD (Parkinson hastalığı)fareler. Beclin 1, LC3-II'nin ifadeleri ve WO grubundaki otofagozomların sayısı, artan P62 ve a-sinüklein seviyeleri ile birlikte azaldı. Bu, otofaji inhibisyonu nedeniyle zaman içinde otofaji substratının ve patolojik ürünlerin temizlenmesindeki başarısızlıkla ilişkilidir. CQ grubundaki LC3-II ekspresyonu ve otofagozomların sayısı, otofaji akışı bozukluğu ile korele olan P62 ve a-sinüklein seviyelerindeki artışla birlikte önemli ölçüde arttı.

mTOR kinazın otofaji için önemli bir düzenleyici bölge olduğu ve hücrede farklı fonksiyonlara sahip iki kompleks, mTORCl ve mTORC2 olarak bulunduğu bilinmektedir. Rapamisine duyarlı olan mTORCl, otofajinin ana negatif geri besleme düzenleyicisidir, rapamisine duyarlı olmayan mTORC2 ise protein kinaz AKT aktivasyonunu düzenleyebilir. Aktive edilmiş AKT, mTORCl kompleksi üzerinde hareket edebilir; bu nedenle AKT, mTORC1 ve mTORC2.28 arasında bağlantı noktası görevi görebilir. Bu çalışma sayesinde, rapamisin gibi,EkinakozitmTOR ifadesini inhibe ederek otofajiyi yukarı doğru düzenleyebilir ve ayrıca p-AKT/AKT ifadesini yukarı doğru düzenleyebilir. tahmin ettik kiEkinakozitmTORC1 ekspresyonunu inhibe edebilir, böylece otofajiyi yukarı regüle edebilir, a-sinüklein ve P62'yi ortadan kaldırma etkisini elde edebilir ve ardından dopamin nöronlarının hayatta kalmasını teşvik etmek için mTORC2 aracılığıyla AKT'yi aktive edebilir. Bununla birlikte, klorokin, mTOR'a bağlı otofaji indüksiyonunun ve regülatörün fosforilasyonunun inhibitörü değildir, bu nedenle gelecekteki çalışmalarda mTOR'a bağlı otofaji inhibisyonu için deneysel araçlar olarak önlenecektir.

ekinakozit tedavisi PD (Parkinson hastalığı)

Özet

Kısacası, mTOR'u hedefleyen, hem klinik etkinliği artırabilecek hem de klinik toksisiteyi azaltabilecek ilaçların geliştirilmesi, gelecekteki araştırmaların yönü olabilir.Ekinakozitgüvenlik, toksik olmama, düşük yan etkiler ve düşük fiyat gibi birçok avantajı vardır. Ön hayvan deneylerimiz göstermiştir kiEkinakozitmTOR yolunu inhibe edebilir, otofajiyi artırabilir ve P62'nin azalmasını ve -sinüklein gibi patolojik ürünlerin ortadan kaldırılmasını teşvik edebilir. Bu, geleneksel Çin tıbbına müdahale etmesi için yeni tedavi stratejileri getirebilir.PD (Parkinson hastalığı). Ancak, yetersiz örneklem büyüklüğü ve doğrulama için ilgili hücre deneyi olmadığı düşünüldüğünde, bu, daha sonraki araştırmamızın yönü olacaktır.

Etik Onayı ve Katılım İzni: Tüm deneyler, Nanjing Çin Tıbbı Hastanesi Etik Kurulu tarafından değerlendirildi ve onaylandı ve Laboratuar Hayvanlarının Bakımı ve Kullanımı için Ulusal Sağlık Enstitüleri Rehberi'ne (KY2017102) uyuldu.

Teşekkür: Makalemizde bize yardım eden herkese özellikle minnettarız.

Finansman: Bu çalışma,:1 tarafından finanse edildi. Nanjing Sağlık Bilimi ve Teknoloji Geliştirme Özel Fonu Hibe (YKK18134);2. Jiangsu İl Geleneksel Çin Tıbbı Bürosu "Çin Tıbbı Beyin Hastalıkları" Temel Disiplin Yetiştirme Projesi (NBPY201704)3. Nanjing Çin Tıbbı Üniversitesi "Jiangsu Üniversitesi Hemşirelik Avantajlı Disiplin İnşaatı Projesi Finansman Projesi"(2019YSHL098);4. Nanjing "Onüçüncü Beş Yıllık Plan"Ünlü Çin Tıbbı Doktoru (Kong-Jiang Liu) Stüdyo İnşaatı Projesi (LKJ-2017-NJ).5. Nanjing "Onüçüncü Beş Yıllık Plan"Ünlü Çin Tıbbı Doktoru (Jing-Qing Wang)Stüdyo İnşaatı Projesi (WJQ-2019-NJ). Finansman kuruluşunun çalışmanın tasarımında ve verilerin toplanmasında, analizinde ve yorumlanmasında ve makalenin yazılmasında hiçbir rolü yoktu.

Açıklama: Yazarlar, rekabet eden çıkarları olmadığını beyan eder.

Referanslar

20. Zhao Q, Gao J, Li W, Cai D. Nörotrofik ve nöro-kurtarma etkileriEkinakozitsubakut MPTP fare modelindeParkinson hastalığı.Beyin Araş. 2010;1346:224–236.

21. Zhu M, Zhou M, Shi Y, Li WW. EtkileriekinakozitSH-SY5Y hücrelerinde MPP (artı) kaynaklı mitokondriyal parçalanma, mitofaji ve hücre apoptozisi üzerine. Zhong Xi Yi Jie He Xue Bao. 2012;10 (12):1427–1432.

22. Zhao Q, Yang X, Cai D, et al.EkinakozitROS/ATF3/CHOP yolu düzenlemesi yoluyla MPP (artı) kaynaklı nöronal apoptoza karşı korur. Neurosci Bull. 2016;32(4):349–362.

23. Chen C, Xia B, Tang L, et al.EkinakozitSirt1'in aracılık ettiği otofaji yolunu düzenleyerek MPTP/MPP artı kaynaklı nörotoksisiteye karşı korur. Metab Beyin Dis. 2019;34(1):203–212.

24. Dauer W, Kholodilov N, Vila M, et al. Alfa-sinüklein içermeyen farelerin parkinson nörotoksin MPTP'ye direnci. Proc Natl Acad Sci US A. 2002;99(22):14524–14529.

25. Kabeya Y, Mizushima N, Ueno T, et al. Apg8p mayasının bir memeli homologu olan LC3, işlendikten sonra otofagozom zarlarında lokalize olur [yayınlanmış düzeltme EMBO J. 2003 Eylül 1;22(17):4577'de görünür]. EMBO J. 2000;19(21):5720-5728.

26. Lamine-Ajili A, Fahmy AM, Létourneau M, et al. Hipofiz adenilat siklaz aktive edici polipeptidin Parkinson hastalığının in vitro ve in vivo modellerinde gözlemlenen otofajik aktivasyon üzerindeki etkisi. Biochim Biophys Acta. 2016;1862(4):688–695.

27. Lu M, Su C, Qiao C, Bian Y, Ding J, Hu G. Metformin, Parkinson hastalığının MPTP/P ile indüklenen fare modelinde otofaji ve mitokondriyal ROS klirensi yoluyla dopaminerjik nöron ölümünü önler. Int J Nöropsikofarmakol. 2016;19(9):pyw047. 28. Swiech L, Perycz M, Malik A, Jaworski J. Sinir sisteminin fizyolojisi ve patolojisinde mTOR'un rolü. Biochim Biophys Acta. 2008;1784(1):116–132.