İntravenöz Glutaminin Sisplatine Maruz Kalmış Erkek Sıçanların Glomerüler Epitel Hücrelerinin Apoptozunda Kaspaz-12 Ekspresyonu Üzerine Etkisi

İletişim:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Tamara Aulia Fakhrinnisal, İmam Susilo, Arifa Mustika, Miyayu Soneta Sofyan

giriiş

Endonezya'da metabolik hastalıkların, özellikle böbrek hastalığının prevalansı yüksek bir eğilim göstermektedir. Sağlık Sigortası Yönetim Kurumu'nun (BPJS) 2017 verilerine göre, devlet, 3,657,691 kayıtlı kronik böbrek hastalığı diyaliz prosedürü vakasını toplam 3,1 trilyon IDR kapsama maliyetiyle karşılamıştır. Böbrek yetmezliğindeki etiyolojilerden biri de toksinlerin nefronlarda kalıcı hasar oluşturmasıdır.

Sisplatin, baş ve boyun, yemek borusu, mesane, testis, yumurtalık, meme ve küçük hücreli olmayan akciğer kanserleri dahil olmak üzere maligniteler için geniş spektrumlu tedavi için yaygın olarak kullanılan güçlü bir kemoterapi ilacıdır (Fillipski ve diğerleri, 2008; Reck , ve diğerleri, 2010). Ancak nefrotoksik, nörotoksik, ototoksik ve hepatotoksik etkiler gibi yüksek organ toksisitesi etkileri nedeniyle sisplatinin klinik uygulaması sınırlıdır (Karasawa ve Steyger, 2015; Guo ve ark., 2018). Sisplatin, daha düşük dozlarda (10-100uM) apoptoza ve daha yüksek dozlarda nekrotik hücre ölümüne neden olur （200-800 μM）（Hanigan ve Devarajan, 2003）Sisplatin alan pediyatrik hastaların yüzde 70'inden fazlası böbrek fonksiyon bozukluğu yaşar( Skinner ve ark.1998). Ayrıca, uygulanan tüm hastaların yüzde 20-30 oranında akut böbrek hasarı meydana gelir (Miller ve ark., 2010). Renal disfonksiyon genellikle standart sisplatin（50-120 mg/m²） dozundan birkaç gün sonra başlar ve artan serum kreatinin ve kan üre nitrojen seviyeleri ile ifade edilir (Akçay ve ark.2010), Cisplatin tedavisi indükler birkaç tübül lümeninde büyük bir tübüler genişleme ve döküm oluşumu. Fokal tübüler nekroz, böbrek tübüllerinde ve Bowman kapsülünde baz membran kalınlaşması ve fokal mononükleer hücre infiltrasyonu da bazen gözlenir. Epitel hücrelerinin vakuolizasyonu ve deskuamasyonu ile birlikte renal tübüler hasar da meydana gelir. Bazı glomerüllerde nekroz görülür ve normal rezidüel glomerüller sıklıkla genişlemiş periglomerüler boşluklar gösterir.

cistanche'deki acteoside böbrek üzerinde iyi etkilere sahiptir

Sisplatinin nefrotoksik mekanizmalarından biri, sisplatin tarafından bazı mekanizmalar yoluyla aktive edilen programlanmış bir hücre ölüm yolu olan apoptozdur. Cisplatin, proapoptotik moleküllerin gelişimini engellediği varsayılan mitokondriyal yolakta Bcl-2 ifadesini azaltır (Oltvai ve Korsmeyer, 1994). Ölüm reseptörü yollarında, sisplatin, ya in vivo (Noga ve diğerleri, 1998) ya da in vitro (Feldenberg ve diğerleri, 1999) Fas'a bağlı yolları ve apoptozu aktive eder. Sisplatin ayrıca kaspaz yollarını da aktive eder. Kaspaz-3'ın rolü ilk olarak, kaspaz-3 aktivitesini doza bağlı bir şekilde artırarak sisplatine yanıt veren kültürlenmiş tübüler proksimal hücrelerde karşılaşılır (Fukuoka ve diğerleri, 1998; Lau,1999) . Takip eden çalışmalar kaspaz-9 aktivasyonunu ve daha az ölçüde kaspaz-8 aktivasyonunu ortaya çıkarmıştır (Kaushal ve diğerleri.2001:Park ve diğerleri, 2001).

intravenözglutamin(Gln veya Q), protein biyosentezinde kullanılan bir amino asittir. Güçlü bir antioksidan olan glutatyon üreten bileşenlerden biridir. Tek dozintravenöz glutamin(0.15-0.75 g/kg) HSP ekspresyonunu artırabilir, son organ hasarını azaltabilir ve farelerde septik şoktan hayatta kalma oranını iyileştirebilir (Wischmeyer, 2002).intravenözglutaminayrıca LPS şok farelerinde HSP ekspresyonunu indükleyerek ve inflamatuar sitokinlerin salınımını ve peroksit biyosentezini inhibe ederek vasküler reaktiviteyi arttırdı (Jiang ve ark. 2017).intravenözglutamina2,4,6-trinitrobenzen sülfonik asit tarafından indüklenen kolitli farelerde yapılan deneylerin sonuçlarında gözlemlendiği gibi, oksidatif stresi inhibe ederek apoptozu da azaltabilir (Crespoet ark.2012)

Glomerüllere alınan toksine maruz kalma süresi yüksek olmasına ve önce epitel hücreleri sonra tübüllere maruz kalmasına rağmen glomerüler epiteldeki kaspaz-12 seviyeleri çalışılmamıştır. Bir çalışma, Bowman kapsüllerinin normal glomerulusun fizyolojik işlevinde bir rolü olduğunu göstermiştir. Podosit hasarı, glomerüler demete uzanan Bowman kapsülü parietal hücrelerinin aktivasyonunu uyarır ve daha fazla matris üreterek ve glomerulus kapiller lümenini yok ederek segmental ve global skleroz ile sonuçlanır (Al Hussain ve ark., 2017).

Bu çalışma nefroprotektif etkisini analiz etmeyi amaçlamaktadır.intravenöz glutaminendoplazmik retikulum stres yolunda apoptozun başlatıcısı olan kaspaz-12 ekspresyonunu inceleyerek glomerüler epitel hücrelerinin apoptozisi üzerine. Pro-kaspaz-12 endoplazmik retikulumda, özellikle böbreğin proksimal tübüllerinde bulunur. buintravenöz glutaminsisplatin kemoterapi modalitelerinin neden olduğu böbrek yetmezliğine alternatif bir çözüm olması beklenmektedir.

Gereç ve Yöntem Hayvanlar ve Tedavi

Bu araştırma, Universitas Airlangga Tıp Fakültesi Sağlık Araştırmaları Etik Kurulu tarafından onaylanmıştır (No.25/C/KEPKFKUA/2020). Bu araştırmada, Universitas Airlangga Veteriner Fakültesi'nin deney hayvanı ünitesinden, vücut ağırlığı 150-200 gram olan, yaşı 2-3 aylık 30 erkek beyaz sıçan(Rattus norvegicus) elde edildi. Her biri ayrı ayrı anaplastik bir kutuda tutuldu, altları kabuklarla kaplandı ve daha sonra üstleri dokuma tellerle kaplandı. Kabuklar her gün değiştirildi.

kimyasallar

buintravenözglutaminServa(Almanya) firmasından temin edilmiştir. buintravenözglutaminçözelti, 10 mL yüzde 0.9 NaCl içinde lg glutamin dozuyla, yüzde {{0}}%0.9 NaCl içinde hazırlandı. Glutamin dozu 100 mg/kg vücut ağırlığı (BW) enjekte edilir ve tek bir enjeksiyon maksimum 0.2 mL IV yapılır. buintravenözglutamin1 mL 27-ölçer şırıngası kullanılarak intravenöz olarak sıçanın kuyruğuna enjekte edildi.

Sisplatin materyali Kalbe Farma'dan (Endonezya) elde edildi, 20 mg/kg BW dozunda, 1 mL 27-ölçerli bir şırınga kullanılarak intraperitoneal enjeksiyon yoluyla uygulandı. Ayrıca Situ CellPOD'da(11684817910ROCHE) Birincil AntikorlarKaspaz-12 (Poliklonal Antikor PA5-27094 Thermo Scientific) ve Apoptoz Tespit Kiti kullandık.

Deneysel tasarım

Bu araştırmada, 30 Wistar erkek beyaz sıçan, çalışmanın başlangıcında rastgele üç gruba ayrıldı. Kontrol grubu (PO), eter ile anestezi sonrası servikal dislokasyon ile sakrifiye edildi ve daha sonra immünohistokimya hazırlığı için böbrekler alındı.

7. günde, P1 grubuna intraperitoneal enjeksiyon yoluyla tek doz 20 mg/kg vücut ağırlığı cisplatin uygulandı ve ardından 72 saat gözlemlendi. Sıçanlar 10. günde eter ile anestezi sonrası servikal dislokasyon ile sakrifiye edildikten sonra böbrekler immünohistokimya hazırlığı için alındı. Yürütme süresi, 10. günde sisplatin enjeksiyonundan sonra meydana gelen glomerüler epitel hücrelerinin apoptozundan kaynaklanmaktadır(Tsuruya ve ark..2003). P2 grubu ile uygulandıintravenözglutamin1. günden 7. güne kadar intravenöz enjeksiyon yoluyla günde bir kez 100 mg/kg VA dozunda (Zhang ve diğerleri. 2009). 7. günde, sıçanlara intraperitoneal enjeksiyon yoluyla 20 mg/kg'lık tek dozda sisplatin uygulandı. Daha sonra sıçanlar 72 saat boyunca gözlendi ve ardından 10. günde eter ile anestezi sonrası servikal dislokasyon yoluyla sakrifiye edildi. Daha sonra böbrekler de immünohistokimya hazırlığı için alındı.

Histopatolojik Hazırlık

Böbrek dokusu15-24 saat yüzde 10 formalin içinde sabitlendi. Doku morfolojisinde herhangi bir değişiklik olmaması için alkol serisi (yüzde 30, yüzde 50, yüzde 70, yüzde 80, yüzde 96 ve mutlak konsantrasyon) kullanılarak dehidrasyon 60 dakika boyunca gerçekleştirildi. Ardından, ksilol kullanılarak temizleme iki kez (her biri 60 dakika) gerçekleştirildi. Daha sonra hassas parafin ile infiltrasyon 48 derece sıcaklıkta 60 dakika boyunca gerçekleştirildi. Daha sonra sert parafin kalıpta bloke edildi ve 1 gün süreyle saklandı. Ertesi gün, sertleştirilmiş malzeme tutucuya yerleştirildi ve bir döner mikrotom kullanılarak 4-5-um kalınlığında kesitler halinde kesildi. Daha sonra poli-L-lizin kaplama ile obje camına montaj yapıldı. Monte edilen doku iki kez (her biri 5 dakika) ksilol içine daldırıldı. Daha sonra alkol serileri (mutlak, yüzde 96, yüzde 80, yüzde 70, yüzde 50 ve yüzde 30 konsantrasyon) kullanılarak 5 dakika süreyle rehidrasyon gerçekleştirilmiştir. Daha sonra dH, O ile 5 dakika yıkandı.

CSP12'nin İmmünohistokimyasal Testi

Slaytlar bir kez fosfat tamponlu tuzlu su (PBS)(Millipore 524650) ile pH 7.4'te 5 dakika boyunca üç kez yıkandı. Endojen peroksit blokajı, 20 dakika boyunca yüzde 3 H2O2 kullanılarak gerçekleştirildi. Daha sonra bloklama işleminden önce lamlar aynı prosedürle tekrar yıkandı. Spesifik olmayan protein blokajı, yüzde 0.25 TritonX-100 (Sigma-Aldrich T8787) içeren yüzde 5 PBS(Millipore 524650) kullanılarak yapıldı ve ardından yıkama prosedürü tekrarlandı. Birincil antikorlar kaspaz-12(Poliklonal Antikor PA5-27094 Thermo Scientific) inkübasyonu gece boyunca 40 derecede yapıldı. Bundan sonra, slaytlar, her biri 5 dakika olmak üzere üç kez PBS(Millipore 524650), pH 7.4 kullanılarak yıkandı. Anti-fare biotin-konjuge kullanılarak inkübasyon 1 saat oda sıcaklığında yapıldı ve ardından yıkama prosedürü tekrarlandı. Streptavidin-horse turp peroksidaz (Thermo Fisher Scientific NI00) kullanılarak inkübasyon 40 dakika yapıldı ve ardından bir kez daha yıkandı. Slaytlara daha sonra benzidin (DAB)(Thermo Fisher Scientific 3400) içinde diamlı damlalar eklendi ve 10 dakika inkübe edildi ve daha sonra benzer bir prosedürle yıkandı. Karşı boyama, 10 dakika boyunca Mayer hematoksilen solüsyonu (Sigma-Aldrich MHS32) kullanılarak yapıldı, ardından musluk suyuyla yıkandı, dH2O ile durulandı ve havayla kurutuldu. Hazırlanan lamlar monte edildikten ve bir cam örtü ile kapatıldıktan sonra ışık mikroskobunda 400x büyütmede gözlendi. Birincil antikorlarla pozitif moleküler ekspresyon, gözlemlendiğinde kahverengi görünecektir. Hesaplanan glomerüler epitel hücreleri, Bowman boşluğunun paryetal kısmında düz bir epitel hücre tabakası ile işaretlenmiş renal korpüskül alanında yer aldı.

Apoptoz İncelemesi

Doku deparafinizasyonu, doku üç kez ksilen (Supelco 108297) ile 5 dakika yıkanarak yapıldı. Doku, her biri 5 dakika boyunca iki kez mutlak etanol içinde ıslatıldı ve daha sonra her biri 3 dakika için yüzde 95 etanol ve yüzde 70 etanol içine aktarıldı. Doku, 5 dakika boyunca PBS (Millipore 524650) ile yıkandı.

Antijen alımı, numuneye 15 dakika boyunca proteinaz K (Sigma-Aldrich 70663) verilerek yapıldı. Daha sonra doku, 2 dakika boyunca bir Coplin tüpünde H202 ile iki kez yıkandı. Endojen peroksidaz, yüzde 3 H, O, PBS damlatılarak çıkarıldı ve 5 dakika oda sıcaklığında bırakıldı. Daha sonra doku bir Coplin tüpünde iki kez PBS(Millipore 524650) ile 2'şer dakika yıkandı. Fazla sıvı kağıt kullanılarak kurutuldu. Doku üzerine yaklaşık 75 ul dengeleme tamponu damlatıldı ve daha sonra oda sıcaklığında 10 dakika inkübe edildi. Doku çevresindeki sıvı daha sonra kağıt kullanılarak kurutuldu. TdT(Sigma-Aldrich SAB5600268) dokusunda enzim aktivitesi 55ul/5 cm azaldı. sonra doku 1 saat nemli bir kapta 37 derecede inkübe edildi. Preparatlar, güçlü bir tampon/temizleme işi içeren bir Coplin kavanozuna yerleştirildi ve ardından oda sıcaklığında 10 dakika inkübe edildi. Preparatlar, oda sıcaklığında bir Coplin kavanozunda 2 dakika boyunca PBS(Millipore 524650) ile dört kez yıkandı. Doku çevresindeki fazla sıvı kağıt kullanılarak kurutuldu. Daha önce depodan çıkarılan ve oda sıcaklığına ısıtılan anti-digoksigenin (Roche 11333089001) konjugatı 65 ul/5 cm²'lik doku yüzeyine damlatılarak oda sıcaklığında 30 dakika inkübe edildi. Preparasyon, bir Coplin kavanozunda PBS (Millipore 524650) ile dört kez oda sıcaklığında 2 dakika yıkandı. Daha sonra doku etrafındaki fazla sıvı kağıt kullanılarak kurutuldu. Peroksidaz substratından (Sigma-Aldrich CPS160）75ul/5cm2 damlalar) sonra doku yüzeyine maruz bırakıldı ve 10 dakika oda sıcaklığında bırakıldı. Preparatlar, Coplin kavanozlarında üç kez DH, O ile 1 dakika yıkandı ve daha sonra inkübe edildi. DH, Oin Coplin kavanozları ile oda sıcaklığında 5 dakika boyunca Metil yeşil karşı boyama (Sigma-Aldrich M8884) 30 saniye boyunca oda sıcaklığında yapıldı.Daha sonra preparasyon bir Coplin ar'da 1 dakika boyunca dH.O ile üç kez yıkandı. Preparatlar ksilen(Supelco 108297) ile temizlendi ve doku etrafındaki fazla sıvı kağıt kullanılarak kurutuldu Preparatlar ışık mikroskobunda 400x büyütmede gözlendi ve glomerüler böbrek epitelinden kahverengi epitel hücreleri sayıldı. her görüş alanında.

İstatistiksel analiz

Oran, kaspaz-12 ifade eden hücreler ve apoptotik hücreler için kullanılan veri ölçeğiydi, bu nedenle Shapiro-Wilk testi ( =0.05) kullanılarak bir normallik testi ve Leaven kullanılarak homojenlik testi yapılması gerekiyordu. testi ( =0.05). Sonuçlar normal dağılımda ve homojen ise tek yönlü ANOVA (=0.05) kullanılarak farklı bir test yapılmıştır. Sonuçlar normal ancak heterojen ise, o zaman yapılan test Kruskal-Wallis( =0.05) idi. Elde edilen verilerde farklılık varsa. ardından analizi Mann-Whitney U testi (=0.05) takip etti. Sonunda, kaspaz -12 eksprese eden hücreler ile apoptotik hücreler arasındaki korelasyonu bulmak için Pearson korelasyon testi yapıldı.

Sonuçlar

Glomerüler Epitel Hücreleri Morfolojisi

Kaspaz-12 eksprese eden hücreleri ve apoptotik hücreleri gözlemlemeden önce, Bowman kapsülü renal epitelinin morfolojisi ilk olarak 400x büyütmede hematoksilen-eozin (HE) boyamasıyla gözlemlendi. Gözlenen nesne, her grubun histolojik resmini temsil etmek için rastgele seçildi. Sisplatin bazen fokal tübüler nekrozda, böbrek tübüllerinde ve Bowman kapsüllerinde baz membranın kalınlaşmasında ve glomerülde fokal mononükleer hücrelerin infiltrasyonunda bulundu. Bazı glomerüllerde nekroz görülür ve normal kalıntı glomerüller sıklıkla genişlemiş periglomerüler boşluklar sergiler.

Glomerüler Epitel Hücrelerinde Kaspaz-12 Protein Ekspresyonu ve Apoptotik Hücreler

İmmünohistokimyasal lekeli böbrek dokusunun sonuçları, her grupta kaspaz-12 ifadesinde değişiklikler sergiledi. Grup P1'de sisplatin enjeksiyonunun uygulanması, kontrol grubu (P{{9}) ile karşılaştırıldığında 72 saat sonra(4.1±0.86) ​​daha yüksek bir kaspaz-12 ortalama ifadesi sergiledi. }). Glutamin enjeksiyonu ve sisplatin enjeksiyonu (P2) uygulaması, P1 ile karşılaştırıldığında 72 saat sonra (2.54± 0.72) daha düşük bir kaspaz-12 ortalama ifadesi sergiledi (Tablo 1).

Ayrıca, grup PI'de sisplatin enjeksiyonu, kontrol grubu (P0) ile karşılaştırıldığında 72 saat (52.7±17.06) sonra daha yüksek hücre apoptoz oranı sergiledi. P2'de glutamin enjeksiyonu ve sisplatin enjeksiyonunun uygulanması, PI ile karşılaştırıldığında 72 saat sonra (31.5±6.73) daha düşük bir kaspaz-12 ortalama ifadesi sergiledi(Tablo 1). Kruskal-Wallis testi, kaspaz-12 ifade eden glomerüler epitel hücrelerinin sayısındaki ve üç tedavi grubundaki apoptotik hücre sayısındaki farklılıkları gösterdi. Daha sonra, Mann-Whitney U testi, kaspaz-12 proteini eksprese eden parietal epitel hücrelerinin sayısında ve apoptotik hücre sayısında kontrol grubu ile P1 ve P2 grupları arasında ve Pl ve P2 grupları arasında farklılıklar olduğu sonucuna varmıştır. P2 grupları. Kaspaz-12 proteinini eksprese eden parietal epitel hücrelerinin sayısında ve hücre apoptozunun sayısında da farklılıklar vardı(Tablo 2).

Capase-12 Ekspresyon Hücreleri ile Apoptotik Hücreler Arasındaki İlişki

Pearson korelasyon testi sonuçları, kaspaz{{0}} eksprese eden glomerüler epitel hücreleri ile apoptoza giren hücre sayısı arasında, güçlü ve pozitif olan 0.707 korelasyon katsayısı ile anlamlı bir korelasyon olduğunu göstermiştir. Dolayısıyla, protein ekspresyon hücrelerinin sayısı azalırsa, apoptotik hücre sayısının da azaldığı ve bunun tersi olduğu sonucuna varılabilir.

Tablo 1. Kaspaz-12 Ekspresyonu ve Apoptotik Hücrelerin Tanımlayıcı İstatistikleri. P0: kontrol grubu. P1:sisplatin7. günde enjeksiyon. P2 ile tedavi edildidamardanglutaminenjeksiyondan 7 gün önce arka arkaya enjeksiyonsisplatin7. günde.	Tablo 2. Mann-Whitney U Testi Sonuçları

Tartışma

Bu çalışmada tedavi üç gruba ayrılan deney hayvanlarında yapılmıştır: kontrol grubu(PO); intraperitoneal sisplatin enjeksiyonu alan PI grubu; ve intraperitoneal sisplatin enjeksiyonu alan P2 grubu veintravenöz glutaminenjeksiyon. Tedavi yanıtı, 72 saat sisplatin enjeksiyonundan sonra apoptoz belirgin olduğu için tedaviden 72 saat sonra gözlendi (Tsuruya ve ark.2003). Bu çalışmada gözlenen site glomerüler epitel idi. Şimdiye kadar glomerüler epitelde sisplatin nefrotoksisitesi ile ilgili bir araştırma yapılmamıştır. Glomerulus, tübüllerden daha proksimaldir ve bu nedenle sisplatin nefrotoksisitesinden tübüllerden daha erken etkilendiği düşünülmektedir.

Kaspaz-12 ekspresyon seviyesindeki farklılıklar, her tedavide glutamin uygulamasının seviyesi ile doğru orantılıydı. Bu sonuçlar, glutaminin böbrekler de dahil olmak üzere tüm organlarda yüksek düzeyde HSP ekspresyonuna neden olabileceğini belirten bir çalışma tarafından desteklenmektedir (Zhang ve diğerleri, 2009). Tek dozintravenöz glutaminbütün farelerde HSP ekspresyonunu artırabilir, son organ hasarını azaltabilir ve septik şoktan sağkalımı iyileştirebilir (Wischmeyer, 2002). Glutaminin sitoprotektif ve antioksidan özellikleri, NF-kB'nin aracılık ettiği inflamatuar yolların aktivitesinin ve ekspresyonunun modüle edildiği yüksek katabolizma durumlarında çok önemli olabilir (Cruzat ve diğerleri, 2014). Plazma glutamin mevcudiyetinin azalmasının, lenfosit proliferasyonunun azalmasına neden olduğu, yüzey aktivasyon proteinlerinin ekspresyonunu ve sitokin üretimini bozduğu ve hücrelerde apoptozu indüklediği bildirilmiştir (Roth. 2008). Bu çalışmada glutaminin hücreleri apoptoza doğru önleyebilmesinin nedeni bu olabilir.

Sonuçlarda belirtildiği gibi, glutamin uygulaması, sisplatin ile tedavi edilen hücrelerin apoptozunu azalttı. Bunun aksi Kadri ve arkadaşları tarafından yapılan bir çalışmada kanıtlanmıştır. (2017).

Hücre ölümü mekanizmaları, nekroz veya apoptoz yoluyla sisplatin uygulama dozuna bağlıdır (Lieberthal ve diğerleri, 1996). In vitro deneylerde, düşük konsantrasyonlarda sisplatin, hücrelerin apoptoza uğramasına neden olurken, yüksek konsantrasyonlarda nekroz (Megyesi ve ark. 1998: Ramesh ve Reeves.2003). Bu araştırmada, doz epitel hücrelerinin apoptoza girmesine neden olmak için yeterliydi.

Bu çalışmada, P1'deki sisplatin enjeksiyonu, kontrole (PO) kıyasla 72 saat sonra daha yüksek hücre apoptoz oranı sergiledi. Ayrıca, P2'deki glutamin ve sisplatin enjeksiyonunun, P1'e kıyasla 72 saat sonra daha düşük kaspaz-12 ifadesi ifade ettiğini bulduk.

Sisplatin tedavisinden sonra apoptoz, ER-stres yolunu da içerebilir. ER yolundaki kaspaz başlatıcısı, ER'nin sitozolik yüzünde lokalize olan ve ER basıncı ile aktive olan kaspaz-12'dır (Boyce ve Yuan, 2006). Kaspaz-12, LLC-PK1 hücrelerinde sisplatinin tedavisi sırasında aktive edilir (Liu ve Baliga, 2005). İn vitro gözlemler, yakın zamanda, ER streslerinin ve bölünme gibi ilişkili sinyallemenin olduğu sisplatin nefrotoksisitesinin fare modellerine genişletildi. kaspaz-12 gözlendi (Peyrou ve ark.,2007).

Sisplatin uygulamasına bağlı apoptozun, renal glomerüler epitel hücrelerinde apoptozu indükleyen kaspaz-12 ekspresyonunun artması nedeniyle meydana geldiği sonucuna varılabilir. 72 saatlik gözlem sonrasındaintravenöz glutaminuygulama, renal glomerüler epitel hücrelerinde apoptoz insidansı önemli ölçüde inhibe edildi(p<0.0001)between the="" groups="" and="" was="" directly="" proportional="" to="" the="" effect="" of="" glutamine,="" which="" inhibited="" the="" expression="" of="">

Sonuç olarak, sonuçlara göre sisplatine maruz kalan erkek beyaz sıçanların glomerüler epitel hücrelerinde kaspaz-12 ve apoptotik hücre ekspresyonunda azalma olduğu görülmüştür.intravenöz glutaminyönetim. Kaspaz-/2'nin azalmış ifadesiintravenöz glutaminuygulamayı glomerüler epitelde apoptozda bir azalma izler. Bu nedenle renal glomerüler epitelde immünohistokimyasal incelemenin sisplatinin nefrotoksik etkisi için bir belirteç olarak kullanılabileceği varsayılmaktadır.

Bu çalışmanın sınırlılığı çeşitli değişkenlerin gözlemlenmemiş olmasıdır. Araştırmacı, başlatıcı kaspazda gerçekleştirilen tedavinin önemini görmek istediği için yürütücü kaspaz(kaspaz-3) için gözlem yapmamıştır. Bu çalışma ayrıca iki veya daha fazla yoldan apoptoz insidansını görmedi. Bu durumda araştırmacı önce bir yoldan gitmeyi denemek ister ve sonuçlar anlamlıysa birden fazla yol çalışmasına gerek yoktur. uygulanması konusunda daha fazla araştırma yapılması da önerilmektedir.intravenöz glutamincisplatin kemoterapisi alan insanlara intravenöz ve ayrıca kanserli hayvanda tedavi üzerinde glutamin'in kanser grubundaki ve olmayan kanserdeki etkisi gözlemlenebilir.

Şekil 1. CSP-12 Antikorundan Sonra Glomerüler Epitel Hücre Morfolojisi. P0:kontrol grubu. P1: 7" günde sisplatin enjeksiyonu. P2 ile tedavi edilenintravenöz glutamin7". günde sisplatin ile enfekte olmadan önce 7 gün arka arkaya enjeksiyon. Pozitif sonuç kahverengi sitoplazma ile gösterilir.	Şekil 2. Apoptoz Tespit Kitinden Sonra Glomerüler Epitel Hücrelerinin Morfolojisi. PO: kontrol grubu. P1:7" günde sisplatin enjeksiyonu. P2 ile tedaviintravenöz glutamin7. günde sisplatin enjekte edilmeden önce 7 gün üst üste enjeksiyon. Pozitif sonuç kahverengi sitoplazma ile gösterilir.

Referanslar

1. AkçayA, Türkmen K, Lee D, Edelstein CL(2010).Akut böbrek hasarının teşhisi ve yönetimine ilişkin güncelleme.Int J Nephrol Renovasc Dis, 3,129-40

2. Al Hussain T, Al Mana H, Hüseyin M, Akhtar M (2017). Sağlık ve hastalıkta podosit ve parietal epitel hücre etkileşimleri.Ady Anat Pathol,24,24-34.

3. Bovce M. Yuan J(2006). Endoplazmik retikulum stresine hücresel yanıt; bir ölüm kalım meselesi. CellDeathDiffer, 13,363-73

4. Crespo I, San-Miguel B, Prause C. ve diğerleri (2012).Glutamin tedavisi TNBS kaynaklı kolitte endoplazmik retikulum stresini ve apoptozu azaltır.PLoS One,7,50407 Cruzat VF,BittencourtA,Scomazzon SP, et al (2014) .Glutamin takviyesinin oral serbest ve dipeptit formları, endotokseminin neden olduğu oksidatif stresi ve inflamasyon iyonunu hafifletir. Beslenme, 30,602-11

5. Feldenberg LR, Thevananther S, Del Rio M, De Leon M, Devarajan P(1999). Kısmi ATP tükenmesi, MDCK hücrelerinde Fas ve kaspaz aracılı apoptozu indükler.Am.J/ Physiol (Renal Physiol),276.837-46.

6. Filipski KK, Loos WJ, Verweij J, Sparreboom A(2008). Sisplatinin insan organik katyon taşıyıcısı ile etkileşimi 2. Clin Cancer Res,15,3875-80

7. Fukuoka K, Takeda M, Kobayashi M ve diğerleri(1998). Farklı interlökin dönüştürücü enzim ailesi proteazları, fare proksimal tübül hücrelerinin sisplatin ve staurosporin kaynaklı apoptozuna aracılık eder. Hayat Sei,62.1125-38.

8. Guo Y, Wang M,MouJ,etal(2018).Huaiqihuang özütünün ön tedavisi, sisplatin kaynaklı nefrotoksisiteye karşı koruma sağlar. Bilim Temsilcisi,8, 7333

9. Hanigan MH. Devarajan P(2003). Sisplatin nefrotoksisitesi: Moleküler mekanizmalar. Kanser Ther,1,47-61

10. Jing L, Wu O, Wang F(2017). Glutamin, ısı şoku proteinini indükler ve Escherichia coli'ye karşı korur

Not:yukarıdakiler tam bir referans listesi değildir